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Concentration Determination of Nucleic Acids and Proteins Using the Micro-volume Bio-spec Nano Spectrophotometer

Nucleic Acid quantitation procedures have advanced significantly in the last three decades.  More and more, molecular biologists require consistent ...

Scientific Instruments

Les interactions entre prot&#xE9;ines lipides jouent un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la stabilit&#xE9; et la fonction des prot&#xE9;ines membranaires diff&#xE9;rentes. Pr&#xE9;c&#xE9;demment, nous avons signal&#xE9; l&#x26;#39;extr&#xEA;me stabilit&#xE9; thermique de la porine de Paracoccus denitrificans reconstitu&#xE9; dans des liposomes. Ici, nous avons utilis&#xE9; la transform&#xE9;e de Fourier spectroscopie infrarouge pour une analyse &#xE9;tiquette libre des mondiaux secondaires des changements structurels et les changements locaux dans le microenvironnement tyrosine. Nos r&#xE9;sultats montrent qu&#x26;#39;un syst&#xE8;me de lipides mixtes (non uniforme bicouche) optimise la stabilit&#xE9; thermique de la porine par rapport &#xE0; la porine dans les lipides purs (bicouche uniforme) ou des micelles de d&#xE9;tergent. Ceci est en ligne avec le fait que la membrane externe bact&#xE9;rienne est un syst&#xE8;me dynamique compose de lipides de longueurs de cha&#xEE;ne variables, des groupes de t&#xEA;te et la hauteur paroi du cylindre communiquant avec la membrane est in&#xE9;gale.

Stabilit&#xE9; thermique des prot&#xE9;ines membranaires Porin extra-atmosph&#xE9;rique &#xE0; partir de Paracoccus denitrificans: FT-IR comme outil spectroscopique pour &#xE9;tudier interactions lipide-prot&#xE9;ine

Die thermische Stabilit&#xE4;t von Protein der &#xE4;u&#xDF;eren Membran von Porin Paracoccus denitrificans: FT-IR-spektroskopische als Werkzeug zur Lipid-Protein-Wechselwirkung zu studieren.

Le interazioni della proteina di lipidi svolgono un ruolo chiave nella stabilit&agrave; e funzione delle varie proteine di membrana. Precedentemente abbiamo segnalato l&#39;estrema stabilit&agrave; termica di porin da Paracoccus denitrificans ricostituito in liposomi. Qui, abbiamo utilizzato la spettroscopia infrarossa di Fourier transform per un&#39;analisi gratuita etichetta dei cambiamenti strutturali secondari globali e locali cambiamenti nel microambiente della tirosina. I nostri risultati mostrano che un sistema misto di lipidi (doppio strato non uniforme) ottimizza la stabilit&agrave; termica di porin rispetto il montenegrino in puri lipidi (doppio strato uniforme) o detergenti micelle. Questo &egrave; in linea con il fatto che la membrana esterna batterica &egrave; un sistema dinamico costituito da lipidi di varia lunghezza di catena, gruppi di testa e l&#39;altezza della parete canna contattando la membrana &egrave; irregolare.

Stabilit&agrave; termica della membrana esterna della proteina porin da Paracoccus denitrificans: FT-IR come strumento spettroscopico per lo studio di interazioni lipido-proteina.

&#x8102;&#x8CEA;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;Paracoccus&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x200B;&#x200B;&#x5883;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x5C40;&#x6240;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30A8;&#x5909;&#x63DB;&#x8D64;&#x5916;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#xFF09;&#x3084;&#x754C;&#x200B;&#x200B;&#x9762;&#x6D3B;&#x6027;&#x5264;&#x30DF;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x6DF7;&#x5408;&#x8102;&#x8CEA;&#x7CFB;&#xFF08;&#x975E;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#xFF09;&#x304C;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3001;&#x30D8;&#x30C3;&#x30C9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x819C;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x30D0;&#x30EC;&#x30EB;&#x58C1;&#x306E;&#x9AD8;&#x3055;&#x304C;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x52D5;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

Paracoccus&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF1A;&#x8102;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5206;&#x5149;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;FT-IR

&#xC9C0;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC55E;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; porin &#xB9AC;&#xB85C; &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; Paracoccus denitrificans&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; microenvironment &#xB85C;&#xCEEC; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xBB34;&#xB8CC; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD478;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD658; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (&#xBE44;&#xADE0;&#xC77C; bilayer)&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC21C;&#xC218; &#xC9C0;&#xC9C8; (&#xC720;&#xB2C8;&#xD3FC; bilayer) &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xC81C; micelles porin porin&#xC758; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC2E4; &#xC138;&#xADE0; &#xC678;&#xBD80; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xCCB4;&#xC778; &#xAE38;&#xC774;, &#xBA38;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC9C0;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xB3D9;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB9C9; &#xC5F0;&#xB77D; &#xBC30;&#xB7F4; &#xBCBD; &#xB192;&#xC774; &#xC2EC;&#xC9C0;&#xC5B4; &#xB77C;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; porin Paracoccus denitrificans&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;: FT-&#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xBD84; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;.

Interacciones de l&#xED;pidos prote&#xED;nas juegan un papel clave en la estabilidad y funci&#xF3;n de prote&#xED;nas de membrana diferentes. Anteriormente hemos informado de la extrema estabilidad t&#xE9;rmica de la porina de Paracoccus denitrificans reconstituido en liposomas. En este caso, se utiliz&#xF3; espectroscopia infrarroja transformada de Fourier para un an&#xE1;lisis de la etiqueta libre de los cambios globales y los cambios estructurales secundarios locales en el microambiente tirosina. Nuestros resultados muestran que un sistema de l&#xED;pidos mezclados (no uniforme bicapa) optimiza la estabilidad t&#xE9;rmica de porina en comparaci&#xF3;n con la porina en l&#xED;pidos puros (bicapa uniforme) o micelas detergentes. Esto est&#xE1; en consonancia con el hecho de que la membrana externa bacteriana es un sistema din&#xE1;mico compuesto de l&#xED;pidos de diferentes longitudes de cadena, grupos de cabeza y la altura de la pared barril contacto con la membrana es desigual.

Estabilidad t&#xE9;rmica de Porin prote&#xED;na de membrana exterior de Paracoccus denitrificans: FT-IR como una herramienta espectrosc&#xF3;pica para el Estudio de los l&#xED;pidos de interacci&#xF3;n de prote&#xED;nas

Lipid protein interactions play a key role in the stability and function of various membrane proteins. Earlier we have reported the extreme thermal stability of porin from Paracoccus denitrificans reconstituted into liposomes. Here, we used Fourier transform infrared spectroscopy for a label free analysis of the global secondary structural changes and local changes in the tyrosine microenvironment. Our results show that a mixed lipid system (non-uniform bilayer) optimizes the thermal stability of porin as compared to the porin in pure lipids (uniform bilayer) or detergent micelles. This is in line with the fact that the bacterial outer membrane is a dynamic system made up of lipids of varying chain lengths, head groups and the barrel wall height contacting the membrane is uneven.

Thermal stability of outer membrane protein porin from Paracoccus denitrificans: FT-IR as a spectroscopic tool to study lipid-protein interaction.

&#x8102;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x5404;&#x79CD;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x65E9;&#x4E9B;&#x65F6;&#x5019;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x62A5;&#x9053;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECE; Paracoccus &#x8131;&#x6C2E;&#x786B;&#x6746;&#x83CC;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5230;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x7684;&#x6781;&#x7AEF;&#x70ED;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5085;&#x91CC;&#x53F6;&#x53D8;&#x6362;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x7B7E;&#x514D;&#x8D39;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5168;&#x7403;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x66F4;&#x6539;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; (&#x975E;&#x5747;&#x5300;&#x53CC;&#x5C42;&#xFF09; &#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F18;&#x5316;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x7EAF;&#x8840;&#x8102; (&#x7EDF;&#x4E00;&#x53CC;&#x5C42;&#xFF09; &#x6216;&#x6D17;&#x6D01;&#x7CBE;&#x80F6;&#x675F;&#x4E2D;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x5916;&#x819C;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x52A8;&#x6001;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x94FE;&#x957F;&#x5EA6;&#x53EF;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5934;&#x7EC4;&#x7684;&#x8840;&#x8102;&#x548C;&#x63A5;&#x89E6;&#x819C;&#x7684;&#x6876;&#x58C1;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x662F;&#x4E0D;&#x5E73;&#x8861;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x3002;

&#x4ECE; Paracoccus &#x8131;&#x6C2E;&#x786B;&#x6746;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF1A; &#x7EA2;&#x5916;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x8102;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P-450 isozymes &#xC790;&#xC5F0;&#xC758; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC758; bioremediation&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC545;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD574;&#xB3C5; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P-450 2E1 &#xC5ED;&#xD560; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C4; &#xD575; P-450 &#xC138;&#xADE0; P-450 &#xCEA0; dehalogenation &#xBC0F; &#xD658;&#xACBD; &#xC624;&#xC5FC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xD574;&#xB3C5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC644; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC18C;&#xC124; chimeric P 450s &#xAC74;&#xC124; &#xD0D0;&#xD5D8; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P-450 camC 2E1 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xAC74;&#xC124; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; 1 (478 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;, 55.14 kDa)&#xC758; (493 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;, 56.84 kDa) P-450 2E1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; N-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; 145 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; (415 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;, 46.66 kDa) P-450 camC &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; N-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; 130 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; (525 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;, 60.24 kDa) 2 &#xC804;&#xB7B5; 28 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; 1&#xC758; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; P-450 camC &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; C &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; 75 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xAD50;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. Homology &#xBAA8;&#xB378; chimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC2A4;&#xC704;&#xC2A4;-&#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P-450 camC, BM-3, 1DT6A, &#xBC0F; 2c17a&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB378; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; heme &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P 450s&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xBD88;&#xAC00;&#xD53C; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; dh5alpha&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; 1&#xACFC; 2 &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xC815;&#xC744; &#xBE5B; &#xD551;&#xD06C; &#xC140; &#xD3A0; &#xB9BF;, &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xB77C;&#xC6B0;&#xB9B4; &#xD669;&#xC0B0; polyacrylamide &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xC77C;&#xC0B0;&#xD654; &#xD0C4;&#xC18C; &#xCC28;&#xC774; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC34;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; P-450 superfamily chimeric biocatalysts &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xC9C4;&#xD654; &#xC758;&#xBB34;&#xAC00; &#xC0C8; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xC131;&#xC758; &#xC790;&#xC5F0;&#xC801;&#xC778; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xC545;&#xC6A9; &#xD558;&#xB824;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P 450s: chimeric &#xD6A8;&#xC18C;.

&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P 450 &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x4EE3;&#x8868;&#x6027;&#x8D28;&#x7684;&#x9891;&#x8C31;&#x7684;&#x89E3;&#x6BD2;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5229;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x4E59;&#x9187;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P 450 2E1 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#x8865;&#x5145;&#x8131;&#x5364;&#x548C;&#x89E3;&#x6BD2;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x6C61;&#x67D3;&#x7269;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC; P 450 &#x51F8;&#x8F6E;&#x7684;&#x771F;&#x6838; P 450&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x4E86;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x5D4C;&#x5408; P 450s &#x4F7F;&#x7528; p-450 camC &#x548C; 2E1 &#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x65BD;&#x5DE5;&#x7684;&#x671B;&#x6708; 1 55.14 kDa 478 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#xFF09;&#xFF0C;145 &#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7531; P 450 2E1 &#x86CB;&#x767D; (493 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x3001; 56.84 kDa&#xFF09; &#x7684; N &#x603B;&#x7AD9;&#x5F00;&#x51FA;&#x88AB;&#x66FF;&#x6362; 130 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4ECE; P 450 camC &#x86CB;&#x767D; (415 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#xFF0C;46.66 kDa) N-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x3002;&#x671B;&#x6708; 2 (525 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#xFF0C;60.24 kDa) &#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x6218;&#x7565;&#x6D89;&#x53CA; 75 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4ECE; P 450 camC &#x57FA;&#x56E0; C-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x4E2D;&#x671B;&#x6708; 1 C-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9; 28 &#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5D4C;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5236;&#x4F5C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E86;&#x745E;&#x58EB;&#x6A21;&#x578B;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P 450 camC&#x3001; BM 3&#x3001; 1DT6A&#x3001; 2C17A&#x3002;&#x6A21;&#x578B;&#x6307;&#x51FA;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0D;&#x53D8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x65E0;&#x6CD5;&#x907F;&#x514D;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P 450s&#x3002;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; DH5alpha &#x671B;&#x6708; 1 &#x548C; 2 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4ECE;&#x5149;&#x7C89;&#x7EA2;&#x8272;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5FAE;&#x4E38;&#x3001; &#x94A0;&#x5341;&#x4E8C;&#x70F7;&#x57FA;&#x786B;&#x9178;&#x76D0;&#x805A;&#x4E19;&#x70EF;&#x9170;&#x80FA;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x548C;&#x8BCA;&#x65AD;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x78B3;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5149;&#x8C31;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5E26;&#x660E;&#x663E;&#x770B;&#x51FA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5236;&#x5B9A;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x8981;&#x5229;&#x7528;&#x81EA;&#x7136;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x7684; P 450 &#x5BB6;&#x65CF;&#x6765;&#x751F;&#x6210;&#x5D4C;&#x5408;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x50AC;&#x5316;&#x5242;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9002;&#x5408;&#x8FDB;&#x884C;&#x5B9A;&#x5411;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x65B0;&#x6A21;&#x677F;&#x3002;

&#x5DE5;&#x7A0B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; P 450s&#xFF1A; &#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x7684;&#x9176;&#x3002;

Del citocromo P-450 isoenzimas representan un componente cr&#xED;tico del espectro de la naturaleza de los catalizadores de desintoxicaci&#xF3;n que podr&#xED;an ser explotados para la biorremediaci&#xF3;n. El etanol inducible humana citocromo P-450 2E1 sirve como modelo eucariota P-450, que complementa la P-450 bacterias de levas en la deshalogenaci&#xF3;n y la desintoxicaci&#xF3;n de los contaminantes ambientales. Se explor&#xF3; la construcci&#xF3;n de la novela de quim&#xE9;rico P-450s mediante el citocromo P-450 2E1 CAMC y los genes. Para la construcci&#xF3;n de quimera 1 (478 amino&#xE1;cidos, 55.14 kDa), 145 amino&#xE1;cidos del extremo N-terminal de P-450 2E1 prote&#xED;na (493 amino&#xE1;cidos, 56.84 kDa) fueron sustituidos por 130 amino&#xE1;cidos del extremo N-terminal de la P- 450 Camc prote&#xED;na (415 amino&#xE1;cidos, 46,66 kDa). En quimera 2 (525 amino&#xE1;cidos, 60.24 kDa) la estrategia implica la sustituci&#xF3;n de 28 amino&#xE1;cidos en el C-terminal de quimera 1 con 75 amino&#xE1;cidos del extremo C-terminal de P-450 gen CAMC. Modelos de homolog&#xED;a de las dos prote&#xED;nas quim&#xE9;ricas fueron desarrollados usando SWISS-modelo basado en la estructura cristalina conocida del citocromo P-450 CAMC, BM-3, 1DT6A y 2C17A. Los modelos indicaron que la propuesta de hemo-sitio de uni&#xF3;n estaba intacta, que es inevitable para la actividad catal&#xED;tica del citocromo P-450s. La expresi&#xF3;n de la quimera 1 y 2 genes en E. coli DH5alpha fue evidente a partir de gr&#xE1;nulos de las c&#xE9;lulas de color rosa claro, la banda de prote&#xED;nas en la electroforesis en gel de sodio dodecil sulfato de poliacrilamida, y los espectros de diagn&#xF3;stico por mon&#xF3;xido de carbono de diferencia. Nuestros estudios muestran que se pueden desarrollar estrategias para aprovechar la diversidad natural de la P-450 superfamilia de biocatalizadores para generar quim&#xE9;ricos que proporcionan las nuevas plantillas susceptibles de evoluci&#xF3;n dirigida.

Ingenier&#xED;a del citocromo P-450s: Las enzimas quim&#xE9;ricas

Cytochrome P-450 isozymes represent a critical component of nature's spectrum of detoxification catalysts that could be exploited for bioremediation. The ethanol-inducible human cytochrome P-450 2E1 serves as a model eukaryotic P-450 that complements the bacterial P-450 cam in dehalogenation and detoxification of environmental pollutants. We explored the construction of novel chimeric P-450s using cytochrome P-450 camC and 2E1 genes. For construction of chimera 1 (478 amino acids, 55.14 kDa), 145 amino acids from the N-terminus of P-450 2E1 protein (493 amino acids, 56.84 kDa) were replaced with 130 amino acids from the N-terminus of P-450 camC protein (415 amino acids, 46.66 kDa). In chimera 2 (525 amino acids, 60.24 kDa) the strategy involves replacement of 28 amino acids in the C-terminus of chimera 1 with 75 amino acids from the C-terminus of P-450 camC gene. Homology models of both the chimeric proteins were developed using SWISS-MODEL based on the known crystal structure of cytochrome P-450 camC, BM-3, 1DT6A, and 2C17A. The models indicated that the proposed heme-binding site was intact, which is inevitable for catalytic activity of cytochrome P-450s. The expression of chimera 1 and 2 genes in Escherichia coli DH5alpha was evident from light-pink cell pellets, protein band in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, and diagnostic carbon monoxide-difference spectra. Our studies show that strategies can be developed to exploit the natural diversity of the P-450 superfamily to generate chimeric biocatalysts that would provide new templates amenable to directed evolution.

Engineering cytochrome P-450s: chimeric enzymes.

Cytochrome P-450 isozymes repr&#xE9;sentent un &#xE9;l&#xE9;ment essentiel du spectre de la nature des catalyseurs de d&#xE9;sintoxication qui pourraient &#xEA;tre exploit&#xE9;es pour la biorestauration. L&#x26;#39;&#xE9;thanol-inductible humaine cytochrome P-450 2E1 sert de mod&#xE8;le eucaryote P-450 qui compl&#xE8;te le P-450 bact&#xE9;rienne came dans d&#xE9;shalog&#xE9;nation et la d&#xE9;toxification des polluants environnementaux. Nous avons explor&#xE9; la construction du roman chim&#xE9;rique P-450s en utilisant le cytochrome P-450 du CCEA et les g&#xE8;nes 2E1. Pour la construction d&#x26;#39;une chim&#xE8;re (478 acides amin&#xE9;s, 55.14 kDa), 145 acides amin&#xE9;s &#xE0; partir de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale de P-450 2E1 prot&#xE9;ine (493 acides amin&#xE9;s, 56.84 kDa) ont &#xE9;t&#xE9; remplac&#xE9;s par 130 acides amin&#xE9;s de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale de la P- 450 prot&#xE9;ines du CCEA (415 acides amin&#xE9;s, 46.66 kDa). Dans deux chim&#xE8;re (525 acides amin&#xE9;s, 60,24 kDa) de la strat&#xE9;gie de remplacement comprend de 28 acides amin&#xE9;s dans l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale de 1 &#xE0; 75 chim&#xE8;re acides amin&#xE9;s &#xE0; partir de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale de P-450 du g&#xE8;ne CAMC. Mod&#xE8;les d&#x26;#39;homologie des deux prot&#xE9;ines chim&#xE8;res ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9;s les &#xE0; l&#x26;#39;aide SUISSE-mod&#xE8;le bas&#xE9; sur la structure cristalline connue du cytochrome P-450 du CCEA, BM-3, 1DT6A, et 2C17A. Les mod&#xE8;les ont indiqu&#xE9; que le projet de l&#x26;#39;h&#xE8;me-site de liaison &#xE9;tait intact, ce qui est in&#xE9;vitable pour l&#x26;#39;activit&#xE9; catalytique du cytochrome P-450s. L&#x26;#39;expression de la chim&#xE8;re 1 et 2 g&#xE8;nes dans Escherichia coli DH5alpha &#xE9;tait &#xE9;vident &#xE0; partir de pastilles de cellules rose clair, la bande de prot&#xE9;ines dans du sulfate de sodium &#xE9;lectrophor&#xE8;se sur gel polyacrylamide avec dod&#xE9;cyl et de diagnostic du monoxyde de carbone diff&#xE9;rence des spectres. Nos &#xE9;tudes montrent que les strat&#xE9;gies peuvent &#xEA;tre d&#xE9;velopp&#xE9;es pour exploiter la diversit&#xE9; naturelle de la P-450 superfamille de g&#xE9;n&#xE9;rer biocatalyseurs chim&#xE9;riques qui fournissent de nouveaux mod&#xE8;les qui se pr&#xEA;tent &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;volution dirig&#xE9;e.

Ing&#xE9;nierie du cytochrome P-450s: enzymes chim&#xE9;riques

Technische Cytochrom-P-450S: chim&#xE4;re Enzyme.

Isoenzimi di citocromo P-450 rappresentano una componente fondamentale dello spettro della natura dei catalizzatori di disintossicazione che potrebbe essere sfruttata per bioremediation. L&#39;etanolo-inducible umano citocromo P-450 2E1 serve come un modello P-450 eucariotico che complementa la cam P-450 batterica in Dealogenazione e disintossicazione di inquinanti ambientali. Abbiamo esplorato la costruzione del romanzo chimerico P-450s usando geni camC e 2E1 citocromo P-450. Per la costruzione di chimera 1 (478 amminoacidi, 55.14 kDa), 145 amminoacidi da N-terminale della proteina di P-450 2E1 (493 aminoacidi, 56.84 kDa) sono stati sostituiti con 130 amminoacidi da N-terminale della proteina di camC P-450 (415 aminoacidi, 46.66 kDa). In chimera 2 (525 aminoacidi, 60,24 kDa) la strategia comporta la sostituzione di 28 aminoacidi nel C-terminale della chimera 1 con 75 amminoacidi da C-terminale del gene camC P-450. Modelli di omologia delle proteine chimeric sono state sviluppate utilizzando il modello svizzero basato sulla struttura di cristallo conosciuto del citocromo P-450 camC, BM-3, 1DT6A e 2C17A. I modelli ha indicato che il sito proposto eme-associazione era intatto, che &egrave; inevitabile per l&#39;attivit&agrave; catalitica del citocromo P-450s. L&#39;espressione dei geni chimera 1 e 2 in Escherichia coli DH5alpha era evidente dalla rosa-luce cella pellet, proteina banda in elettroforesi del gel di poliacrilammide di sodio dodecil solfato e spettri di monossido di carbonio-differenza diagnostica. I nostri studi dimostrano che possono essere sviluppate strategie per sfruttare la naturale diversit&agrave; della superfamiglia P-450 per generare chimerici biocatalizzatori che fornirebbero nuovi modelli suscettibili di evoluzione diretta.

Citocromo P-450s di ingegneria: enzimi chimerici.

&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0;P-450&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EC;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x60AA;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x89E3;&#x6BD2;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;P-450 2E1&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;P-450&#x8131;&#x30CF;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x5316;&#x3068;&#x74B0;&#x5883;&#x6C5A;&#x67D3;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x89E3;&#x6BD2;&#x306B;&#x30AB;&#x30E0;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3059;&#x308B;P-450&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;P-450 CAMC&#x3068;2E1&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x65B0;&#x898F;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;P-450S&#x306E;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;1&#x306E;&#x69CB;&#x6210;&#xFF08;478&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;55.14&#xFF09;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;P-450 2E1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;493&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3001;56.84 kDa&#xFF09;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;145&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306F;&#x3001;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;130&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3067;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;P- 450 CAMC&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;415&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3001;46.66 kDa&#xFF09;&#x3092;&#x3002;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;2&#xFF08;525&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;60.24&#xFF09;&#x3067;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306F;&#x3001;P-450 CAMC&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;75&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;1&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;28&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;P-450 CAMC&#x3001;BM-3&#x3001;1DT6A&#x3001;&#x3068;2C17A&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30B9;&#x30A4;&#x30B9;-MODEL&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D8;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;P-450&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x907F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;DH5alpha&#x306E;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;1&#x3068;2&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30AF;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x3001;&#x30C9;&#x30C7;&#x30B7;&#x30EB;&#x786B;&#x9178;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9;&#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x3067;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8A3A;&#x65AD;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x70AD;&#x7D20;&#x5DEE;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x6226;&#x7565;&#x304C;&#x5B9A;&#x65B9;&#x5411;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x751F;&#x4F53;&#x89E6;&#x5A92;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;P-450&#x30B9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CB;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C1;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E0;P-450&#xFF1A;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x9175;&#x7D20;

&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x4EB2;&#x6C34;&#x6027;&#x6EB6;&#x8D28;&#x4EA4;&#x6362;&#x8DE8;&#x5916;&#x819C; (OM) &#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x5B83;&#x662F; octameric &#x5B54; 9.6 &#x5355;&#x4E2D;&#x592E;&#x901A;&#x9053;&#x4E0E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x539F;&#x578B; nm &#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x4E2A;&#x758F;&#x6C34;&#x6027; &beta;-&#x6876; 3.7 nm &#x957F;&#x5EA6;&#x548C;&#x66F4;&#x4EB2;&#x6C34;&#x6027;&#x7684;&#x7403;&#x72B6; rim &#x57DF;&#x4E2D;&#x3002;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x7684;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x57DF;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x539A;&#x5EA6;&#x7684; 5-12 nm &#x7684;&#x5206;&#x679D; OMs &#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#xFF0C;&#x5982;&#x6765;&#x81EA;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x7167;&#x7247;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x819C;&#x62D3;&#x6251;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x6B63;&#x5982;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5176;&#x4ED6;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684; OM &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7EDF;&#x6CBB;&#x8005;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684; OM &#x8FB9;&#x754C;&#x7531;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x8868;&#x9762;&#x8D34;&#x6807;&#x3002;&#x5341;&#x4E03;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x8986;&#x76D6;&#x8868;&#x9762;&#x7684; rim &#x57DF;&#x548C;&#x7D20;&#x819C;&#x9632;&#x6E17;&#x7684;&#x8BD5;&#x5242;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x6807;&#x7B7E;&#x6548;&#x7387;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x53EF;&#x8BBF;&#x95EE;&#x6027;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x53CD;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x516D;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x62A4;&#x514D;&#x53D7; M.&#x803B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x3002;&#x8272;&#x6C28;&#x9178; 21 &#x5B9A;&#x4E49;&#x4E00;&#x4E2A;&#x89E3;&#x5256;&#x4E0E;&#x819C;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x9762;&#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x9762;&#x3002;8 Phenylalanines &#x4F4D;&#x7F6E; 99 &#x5904;&#x5F62;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x73AF;&#x8DEF;&#x5468;&#x8D28;&#x672B;&#x5C3E;&#x7684;&#x758F;&#x6C34; beta &#x6876;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790; (i) &#x819C;&#x8FB9;&#x754C;&#x7531;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x6536;&#x8179;&#x5065;&#x7F8E;&#x88E4;&#x4E0E;&#x5B54;&#x7684;&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#x548C; (ii) &#x5FAA;&#x73AF;&#x5B9A;&#x4E49;&#x548C; 3.4 nm &#x957F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x4EB2;&#x6C34;&#x6027; rim &#x57DF;&#x5D4C;&#x5165;&#x5230;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684; OM&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x6697;&#x793A;&#x758F;&#x6C34; &alpha; &#x87BA;&#x65CB;&#x6216; beta &#x8868;&#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x5143;&#x7D20;&#x88AB;&#x7EB3;&#x5165;&#x4E00;&#x79CD;&#x8102;&#x8D28;&#x819C;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;

&#x62D3;&#x6251;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5916;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x7684;&#x5B54;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

MspA is the major porin of Mycobacterium smegmatis mediating the exchange of hydrophilic solutes across the outer membrane (OM). It is the prototype of a new family of octameric porins with a single central channel of 9.6 nm in length and consists of two hydrophobic beta-barrels of 3.7 nm in length and a more hydrophilic, globular rim domain. The length of the hydrophobic domain of MspA does not match the thicknesses of mycobacterial OMs of 5-12 nm as derived from electron micrographs. Further, the membrane topology of MspA is unknown as it is for any other mycobacterial OM protein. We used MspA as a molecular ruler to define the boundaries of the OM of M. smegmatis by surface labeling of single cysteine mutants. Seventeen mutants covered the surface of the rim domain and were biotinylated with a membrane-impermeable reagent. The label efficiencies in vitro were remarkably similar to the predicted accessibilities of the cysteines. By contrast, six of these mutants were protected from biotinylation in M. smegmatis cells. Tryptophan 21 defines a horizontal plane that dissects the surface-exposed versus the membrane-protected residues of MspA. The 8 phenylalanines at position 99 form a ring at the periplasmic end of the hydrophobic beta-barrel domain. These results indicated that (i) the membrane boundaries of MspA are defined by aromatic girdles as in porins of Gram-negative bacteria and (ii) loops and a 3.4-nm long part of the hydrophilic rim domain are embedded into the OM of M. smegmatis. This is the first report suggesting that elements other than hydrophobic alpha-helices or beta-sheets are integrated into a lipid membrane.

Topology of the porin MspA in the outer membrane of Mycobacterium smegmatis.

MSPA est le porine majeure de Mycobacterium smegmatis m&#xE9;diatrices l&#x26;#39;&#xE9;change de solut&#xE9;s hydrophiles &#xE0; travers la membrane externe (OM). Il est le prototype d&#x26;#39;une nouvelle famille de porines octam&#xE9;riques avec un seul canal central de 9,6 nm de longueur et se compose de deux b&#xEA;ta-hydrophobes de barils de 3,7 nm de longueur et d&#x26;#39;une plus hydrophile, la jante de domaine globulaire. La longueur du domaine hydrophobe de la MSPA ne correspond pas &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;paisseur des mycobact&#xE9;ries OMs de 5-12 nm comme provenant de microscopie &#xE9;lectronique. En outre, la topologie membranaire de la MSPA est inconnu car il est pour aucune prot&#xE9;ine OM autre mycobact&#xE9;rienne. Nous avons utilis&#xE9; MSPA comme un souverain mol&#xE9;culaire pour d&#xE9;finir les limites de l&#x26;#39;OM de M. smegmatis par marquage de surface de mutants cyst&#xE9;ine simples. Dix-sept mutants port&#xE9; sur la surface de la jante et de domaine sont biotinyl&#xE9; avec un r&#xE9;actif de membrane imperm&#xE9;able &#xE0; l&#x26;#39;. Les rendements d&#x26;#39;&#xE9;tiquettes in vitro &#xE9;taient remarquablement similaires aux accessibilit&#xE9;s pr&#xE9;dites des cyst&#xE9;ines. En revanche, six de ces mutants ont &#xE9;t&#xE9; prot&#xE9;g&#xE9;s contre biotinylation dans les cellules M.smegmatis. Tryptophane 21 d&#xE9;finit un plan horizontal qui d&#xE9;cortique la surface-expos&#xE9;e par rapport aux r&#xE9;sidus membrane prot&#xE9;g&#xE9;es de MSPA. Les 8 ph&#xE9;nylalanines &#xE0; la position 99 sous forme d&#x26;#39;un anneau &#xE0; la fin p&#xE9;riplasmique de la b&#xEA;ta-hydrophobe baril de domaine. Ces r&#xE9;sultats indiquent que: (i) les limites de la membrane MSPA sont d&#xE9;finies par des ceintures aromatiques selon la porines de bact&#xE9;ries Gram-n&#xE9;gatives et (ii) les boucles et une partie 3,4-nm de longueur du domaine hydrophile jante sont noy&#xE9;es dans le OM de M. smegmatis. Ce rapport est le premier sugg&#xE9;rant que des &#xE9;l&#xE9;ments autres que les h&#xE9;lices alpha hydrophobe ou b&#xEA;ta-feuilles sont int&#xE9;gr&#xE9;s dans une membrane lipidique.

Topologie de la MSPA Porin dans la membrane externe de Mycobacterium smegmatis

MspA ist die gro&szlig;e porin von Mycobacterium Smegmatis vermitteln den Austausch von hydrophilen Analyten durch die &auml;u&szlig;ere Membran (OM). Es ist der Prototyp einer neuen Familie von Octameric Porins mit einem einzigen zentralen Kanal von 9,6 nm lang und besteht aus zwei hydrophobe Beta-Barrel 3,7 nm L&auml;nge und einer Dom&auml;ne mehr hydrophile, kugelige Felge. Die L&auml;nge der hydrophoben Dom&auml;ne der MspA entspricht nicht die dicken mykobakterieller OMs von 5 bis 12 nm aus Elektron-Aufnahmen. Dar&uuml;ber hinaus ist die Membran-Topologie der MspA unbekannt, wie f&uuml;r jede andere mykobakterieller OM-Protein. Wir verwendeten MspA als molekulare Herrscher die Grenzen der OM M. Smegmatis definieren, indem Oberfl&auml;che Kennzeichnung der einzelnen Cystein-Mutanten. Siebzehn Mutanten bedeckte die Oberfl&auml;che der Felge Dom&auml;ne und waren biotinylierten mit einer undurchl&auml;ssigen Membran Reagenz. Die Bezeichnung Wirksamkeit, die in-vitro-waren die vorhergesagten Zugriffen der Cysteine bemerkenswert &auml;hnlich. Im Gegensatz dazu wurden sechs von diesen Mutanten vor Biotinylierung in M. Smegmatis Zellen gesch&uuml;tzt. Tryptophan 21 definiert eine horizontale Ebene, die die Oberfl&auml;che exponierten gegen&uuml;ber Membran-gesch&uuml;tzte R&uuml;ckst&auml;nde von MspA seziert. Die 8 Phenylalanines an Position 99 bilden einen Ring periplasmatischen Ende der hydrophoben Beta-Fass-Dom&auml;ne. Diese Ergebnisse zeigten, dass (i) die Membran-Grenzen der MspA werden durch aromatische H&uuml;ftg&uuml;rtel wie Porins von Gram-negativen Bakterien und (Ii) Loops und 3.4-nm langer Teil der hydrophilen Felge-Dom&auml;ne eingebettet sind, in der OM von M. Smegmatis. Dies ist der erste Bericht, die darauf hindeutet, dass eine Lipidmembran Elemente als hydrophobe Alpha-Helices oder Beta-Bogen integriert sind.

Topologie der porin MspA in der &auml;u&szlig;eren Membran von Mycobacterium Smegmatis.

MspA &egrave; il porin principali di Mycobacterium smegmatis mediando lo scambio di soluti idrofili attraverso la membrana esterna (OM). &Egrave; il prototipo di una nuova famiglia di porine octameric con un singolo canale centrale di 9,6 nm di lunghezza e si compone di due beta-botti idrofobici di 3,7 nm di lunghezza e un dominio pi&ugrave; idrofilo, globulare rim. La lunghezza del dominio idrofobo di MspA non corrispondano gli spessori dei micobatteri OMs di 5-12 nm derivato dal microscopio. Ulteriormente, la topologia della membrana di MspA &egrave; sconosciuta come lo &egrave; per qualsiasi altra proteina OM micobatterica. Abbiamo usato MspA come un righello molecolare per definire i confini dell&#39;OM di M. smegmatis etichettando superficiale dei mutanti singolo cisteina. Diciassette mutanti coperto la superficie del dominio rim e sono stati biotinilati con un reagente membrana impermeabile. Le efficienze di etichetta in vitro erano notevolmente simili all&#39;accessibilit&agrave; previsto delle cisteine. Al contrario, sei di questi mutanti erano protetti da biotinylation in cellule di M. smegmatis. Triptofano 21 definisce un piano orizzontale che analizza la superficie esposta contro i residui di membrana protetta di MspA. Il 8 phenylalanines posizione 99 formano un anello alla fine periplasmico del dominio idrofobico beta-barrel. Questi risultati hanno indicato che (i) i confini di membrana di MspA sono definiti da guaine aromatici come porine di batteri Gram-negativi e (ii) loop e una parte lunga 3,4 nm del dominio idrofilo rim sono incorporati in OM di M. smegmatis. Questo &egrave; il primo rapporto che suggerisce che gli elementi diversi da alfa-eliche idrofobe o beta-fogli sono integrati in una membrana lipidica.

Topologia del porin MspA nella membrana esterna del Mycobacterium smegmatis.

MSPA&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x819C;&#xFF08;OM&#xFF09;&#x9593;&#x306E;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x306E;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#xB7;&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x9577;&#x3055;&#x304C;9.6 nm&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x516B;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x539F;&#x578B;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306F;3.7 nm&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x3B2;-&#x30D0;&#x30EC;&#x30EB;&#x3068;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x3001;&#x7403;&#x72B6;&#x30EA;&#x30E0;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MSPA&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306F;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5199;&#x771F;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;5&#x6708;12&#x65E5;&#x30CA;&#x30CE;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;OMS&#x306E;&#x539A;&#x3055;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;OM&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;MSPA&#x306E;&#x819C;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x6A19;&#x8B58;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;M.&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x306E;OM&#x306E;&#x5883;&#x754C;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x5B9A;&#x898F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;MSPA&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BB;&#x30D6;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30E0;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x8986;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x819C;&#x4E0D;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x8A66;&#x85AC;&#x3067;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;6&#x4EBA;&#x306F;M.&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;21 MSPA&#x306E;&#x819C;&#x3067;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6B8B;&#x57FA;&#x5BFE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3092;&#x9732;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x89E3;&#x5256;&#x6C34;&#x5E73;&#x9762;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F4D;&#x7F6E;99&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x3B2;-&#x30D0;&#x30EC;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;8&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;i&#xFF09;MSPA&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x5883;&#x754C;&#x306F;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x83CC;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x30AC;&#x30FC;&#x30C9;&#x30EB;&#x3067;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#xFF08;ii&#xFF09;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x30EA;&#x30E0;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;3.4 nm&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x90E8;&#x5206;&#x304C;M.&#x306E;OM&#x306B;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3B1;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3084;&#x3B2;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x304C;&#x8102;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x7D50;&#x6838;&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x306E;&#x5916;&#x819C;&#x306B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;MSPA&#x306E;&#x30C8;&#x30DD;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;

MspA Mycobacterium smegmatis exchange &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; solutes&#xC758; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; (OM)&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; porin &#xC774;&#xB2E4;. 9.6&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC911;&#xC559; &#xCC44;&#xB110; octameric porins&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785;&#xC740; nm &#xAE38;&#xC774;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC30;&#xB7F4; 3.7&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; nm &#xAE38;&#xC774; &#xB354; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131;, &#xAD6C;&#xD615; &#xB9BC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;. Mspa&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xAE38;&#xC774; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; mycobacterial OMs 5-12 nm&#xC758; &#xB450;&#xAED8; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E4;&#xB978; mycobacterial OM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; Mspa&#xC758; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB77C;&#xBCA8; M. smegmatis OM&#xC758; &#xACBD;&#xACC4;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xD1B5;&#xCE58;&#xC790;&#xB85C; Mspa&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 17 &#xBA85;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9BC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC744; &#xCEE4;&#xBC84; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C9; &#xC2A4;&#xBA70;&#xB4E4; &#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; biotinylated &#xD588;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xBCA8; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xCCB4; &#xC678;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC758; &#xC608;&#xCE21;&#xB41C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; 6 M. smegmatis &#xC140;&#xC5D0; biotinylation&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD2B8;&#xB9BD;&#xD1A0;&#xD310; 21 Mspa&#xC758; &#xB9C9; &#xBCF4;&#xD638; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB300; &#xD45C;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C; dissects &#xC218;&#xD3C9; &#xD3C9;&#xBA74;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC704;&#xCE58;&#xC758; 99 8 phenylalanines &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC30;&#xB7F4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; periplasmic &#xB05D;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD615;&#xC131;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; Mspa&#xC758; &#xB9C9; &#xACBD;&#xACC4; (i) porins &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xBC0F; (ii) &#xB8E8;&#xD504; &#xCC98;&#xB7FC; &#xD5A5;&#xAE30;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC70; &#xB4E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xC758; &#xB41C; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xB9BC; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; 3.4 nm &#xAE34; &#xBD80;&#xBD84;&#xC758; M. smegmatis &#xC634;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC54C;&#xD30C; &#xD3EC;&#xD568; &#xB610;&#xB294; &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xC2DC;&#xD2B8; &#xC774;&#xC678;&#xC758; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xC774;&#xB2E4;.

Mycobacterium smegmatis &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9;&#xC758; porin Mspa&#xC758; &#xD1A0;&#xD3F4;&#xB85C;&#xC9C0;.

MSPA es la porina principal de Mycobacterium smegmatis mediadores en el intercambio de solutos hidrof&#xED;licos a trav&#xE9;s de la membrana externa (OM). Es el prototipo de una nueva familia de porinas octam&#xE9;rico con un solo canal central de 9.6 nm de longitud y consta de dos hidrof&#xF3;bicos beta de barriles de 3,7 nm de longitud y una m&#xE1;s hidr&#xF3;filo, el dominio de la llanta globular. La longitud del dominio hidrof&#xF3;bico de MSPA no est&#xE1; de acuerdo con los espesores de micobacterias OM de 5-12 nm, como derivados de micrograf&#xED;as electr&#xF3;nicas. Adem&#xE1;s, la topolog&#xED;a de la membrana de la MSPA es desconocido como lo es para cualquier otra prote&#xED;na micobacteriana OM. Se utiliz&#xF3; MSPA como una regla molecular para definir los l&#xED;mites de la OM de M. smegmatis, mediante el etiquetado de superficie de los mutantes de ciste&#xED;na individuales. Diecisiete mutantes cubri&#xF3; la superficie de la llanta de dominio y se biotinil&#xF3; con un reactivo de membrana impermeable. Las eficiencias de la etiqueta in vitro fueron muy similares a los previstos accesibilidad de las ciste&#xED;nas. Por el contrario, seis de estos mutantes fueron protegidos de la biotinilaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas de M. smegmatis. El tript&#xF3;fano 21 define un plano horizontal que disecciona la superficie expuesta frente a los residuos protegidas membrana de MSPA. Los 8 fenilalaninas en la posici&#xF3;n 99 forma un anillo en el extremo peripl&#xE1;smico de la hidr&#xF3;fobo barril beta dominio. Estos resultados indican que (i) los l&#xED;mites de membrana de MSPA se definen por las fajas arom&#xE1;ticos como en porinas de bacterias Gram-negativas y (ii) los bucles y una parte 3,4-nm de largo del borde de dominio hidr&#xF3;filo se incrustan en la OM de M. smegmatis. Este es el primer informe que sugiere que otros elementos que hidr&#xF3;fobo h&#xE9;lices alfa o beta de hojas se integran en una membrana lip&#xED;dica.

Topolog&#xED;a de la MSPA Porin en la membrana externa de Mycobacterium smegmatis

&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECE; Paracoccus &#x8131;&#x6C2E;&#x786B;&#x6746;&#x83CC;&#x53CA;&#x5176;&#x5BF9;&#x70ED;&#x548C; ph &#x503C;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x5C55;&#x5F00;&#x548C;&#x6298;&#x53E0;&#x9014;&#x5F84;&#x5DF2;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x3002;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x5B75;&#x5316; pH 12.5 &#x53CA;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7ECF;&#x5386;&#x7F13;&#x6162;&#x5C55;&#x5F00;&#x6210;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x82F1;&#x96C4;&#x597D;&#x6C49;&#x6210; nativelike &#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0E;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x660E;&#x663E;&#x504F;&#x79BB;&#x3002;&#x6B64; nativelike &#x7ED3;&#x6784;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x805A;&#x5408;&#x901A;&#x5E38;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x7ED3;&#x6784;&quot;&#x6B7B;&#x89D2;&quot;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x662F;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5206;&#x6790;&#x6253;&#x5F00;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5F62;&#x6210;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x5B54;&#x96C6;&#x6599;&#x5728;&#x52A0;&#x70ED; 86.2 &#x5EA6;&#x4EE5;&#x4E0A; C.Incubating &#x70ED;&#x805A;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x9AD8; ph &#x503C; &#xFF08;&gt; &#x6216; = 12.5) &#x5BFC;&#x81F4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7F13;&#x6162;&#x5F00;&#x542F;&#x6210;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x8981;&#x5230;&#x4E09;&#x8054;&#x7684; nativelike &#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x5F62;&#x6210;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x6BDB;&#x5B54; refold &#x8FD9;&#x79CD;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x4E0D;&#x662F;&#x50CF;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x80CC;&#x540E;&#x7684;&#x5C55;&#x5F00;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x906D;&#x5230;&#x5728;&#x5404;&#x79CD; pH &#x503C;&#x7684;&#x52A0;&#x70ED;&#x3002;&#x6709;&#x4EBA;&#x6307;&#x51FA;&#xFF0C;&#x5728; ph &#x503C; &gt; = &#x7684; 12.5 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0D;&#x805A;&#x5408;&#x540E;&#x52A0;&#x70ED; &#xFF1B; &#x6216;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x6253;&#x5F00;&#x5230;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x5728;&#x9AD8; pH &#x503C;&#xFF0C;&#x5404;&#x79CD;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7684;&#x9759;&#x7535;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6444;&#x52A8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6F14;&#x53D8;&#x6210;&#x4E00;&#x79CD;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x9996;&#x6B21;&#x663E;&#x793A;&#x4E86;&#x5168;&#x65B0;&#x5C55;&#x73B0;&#x548C;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x6027;&#x3002;

&#x8DDF;&#x8E2A;&#x4ECE; Paracoccus &#x8131;&#x6C2E;&#x786B;&#x6746;&#x83CC;&#x5916;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5C55;&#x5F00;&#x548C;&#x590D;&#x6027;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;

We have investigated outer membrane protein porin from Paracoccus denitrificans for its stability against heat and pH. Pathways of unfolding and refolding have been analyzed. Porin incubated at pH 12.5 and above undergoes a slow unfolding into an unordered structure. The unfolded protein could be refolded into a nativelike structure that is functionally active but with distinct deviation from the native protein. This nativelike structure exhibited an entirely different thermal stability. Although aggregation is normally considered a structural "dead-end", the possibility of opening an aggregated porin and forming a functionally active structure was analyzed here. Porin aggregates on heating above 86.2 degrees C. Incubating the heat-aggregated protein at high pH (> or = 12.5) leads to a slow opening of the protein into an unordered structure. It was possible to refold this unordered protein into a trimeric nativelike structure which was capable of forming active pores. However, the thermal stability of the refolded porin was unlike that of the native porin. To understand the basic mechanism behind the unfolding processes, the protein was subjected to heating at various pH values. It was observed that at pH > or = 12.5 the protein does not aggregate upon heating; instead, it opens into an unordered structure. We conclude that at high pH values, the electrostatic interactions of various amino acid residues are perturbed which leads to unfolding into an unordered structure. This study shows for the first time an entirely new unfolding and refolding pathway for porin.

Tracking the unfolding and refolding pathways of outer membrane protein porin from Paracoccus denitrificans.

Nous avons &#xE9;tudi&#xE9; ext&#xE9;rieure porine prot&#xE9;ine de la membrane de Paracoccus denitrificans pour sa stabilit&#xE9; contre la chaleur et le pH. Chemins de d&#xE9;pliage et de repliage ont &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;s. Porin incub&#xE9;es &#xE0; pH 12,5 et subit-dessus d&#x26;#39;un lent d&#xE9;roulement dans une structure non ordonn&#xE9;e. La prot&#xE9;ine d&#xE9;pli&#xE9;e peut &#xEA;tre repli&#xE9;e dans une structure qui est fonctionnellement nativelike actif mais avec un &#xE9;cart distinct de la prot&#xE9;ine native. Cette structure nativelike montr&#xE9; une stabilit&#xE9; thermique tout &#xE0; fait diff&#xE9;rent. Bien que l&#x26;#39;agr&#xE9;gation est normalement consid&#xE9;r&#xE9; comme un structurelle &#x26;quot;dead-end&#x26;quot;, la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;ouvrir une porine agr&#xE9;g&#xE9; et formant une structure fonctionnellement actif a &#xE9;t&#xE9; analys&#xE9;e ici. Agr&#xE9;gats porines chauff&#xE9; au-dessus 86.2 &#xB0; C. incubation de la prot&#xE9;ine agr&#xE9;g&#xE9;e chaleur &#xE0; un pH &#xE9;lev&#xE9; (&#x26;gt; ou = 12,5) conduit &#xE0; une ouverture lente de la prot&#xE9;ine dans une structure de non ordonn&#xE9;e. Il &#xE9;tait possible de replier cette non-ordonn&#xE9;e des prot&#xE9;ines dans une structure trim&#xE9;rique nativelike qui &#xE9;tait capable de former des pores actifs. Cependant, la stabilit&#xE9; thermique de la porine &#xE9;tait repli&#xE9; contrairement &#xE0; celle de la porine natif. Pour comprendre le m&#xE9;canisme de base derri&#xE8;re les processus qui se d&#xE9;roulent, la prot&#xE9;ine a &#xE9;t&#xE9; soumis &#xE0; un chauffage &#xE0; diverses valeurs de pH. Il a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; que, &#xE0; pH&#x26;gt; ou = 12,5 la prot&#xE9;ine ne s&#x26;#39;agr&#xE8;ge pas au chauffage, au lieu, il ouvre dans une structure non ordonn&#xE9;e. On en conclut que, &#xE0; un pH &#xE9;lev&#xE9;, des interactions &#xE9;lectrostatiques de diff&#xE9;rents r&#xE9;sidus d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s sont perturb&#xE9;s qui conduit &#xE0; d&#xE9;plier en une structure non ordonn&#xE9;e. Cette &#xE9;tude montre pour la premi&#xE8;re fois une voie enti&#xE8;rement nouvelle de repliage et d&#xE9;pliage de la porine.

Suivi des Chemins de repliage et d&#xE9;pliage de Porin prot&#xE9;ines membranaires extra-atmosph&#xE9;rique &#xE0; partir de Paracoccus denitrificans

Wir haben die &auml;u&szlig;ere Membrane Protein porin von Paracoccus Denitrificans f&uuml;r seine Stabilit&auml;t gegen Hitze und pH-Wert untersucht. Wege der Entfaltung und R&uuml;ckfaltung wurden analysiert. Porin bei pH 12,5 und oben erf&auml;hrt eine langsame Entfaltung in eine ungeordnete Struktur. Das entfaltete Protein konnte refaltet werden, in eine nativelike Struktur, die funktionell aktiv ist, aber mit deutlichen Abweichung vom nativen Protein. Diese nativelike Struktur stellte eine ganz andere thermische Stabilit&auml;t. Obwohl Aggregation normalerweise eine strukturellen &quot;Sackgasse&quot; gilt, wurde hier die M&ouml;glichkeit der Er&ouml;ffnung einer aggregierten porin und bilden eine funktionell aktive Struktur analysiert. Porin Aggregate auf Heizung &uuml;ber 86.2 Grad C. Incubating die Hitze aggregierte Protein bei hohen pH (&gt; oder = 12,5) f&uuml;hrt zu eine langsame &Ouml;ffnung des Proteins in eine ungeordnete Struktur. Es war m&ouml;glich, dieses ungeordnete Protein in einer Trimere nativelike Struktur einspritzen, die aktive Poren bilden f&auml;hig war. Die thermische Stabilit&auml;t der refaltetes porin war jedoch im Gegensatz zu den nativen porin. Um den grundlegenden Mechanismus hinter die sich entfaltende Prozesse zu verstehen, wurde das Protein Heizung bei verschiedenen pH-Werten unterzogen. Es wurde beobachtet, dass bei pH &gt; oder = 12,5 das Protein nicht, beim Erhitzen aggregiert; Stattdessen &ouml;ffnet es in eine ungeordnete Struktur. Wir schlie&szlig;en, dass bei hohen pH-Werten, die elektrostatischen Wechselwirkungen der verschiedenen Aminos&auml;urereste um umwerfen sind zu Entfaltung in eine ungeordnete Struktur f&uuml;hrt. Diese Studie zeigt zum ersten Mal eine v&ouml;llig neue Entfaltung und R&uuml;ckfaltung Wegbereiter f&uuml;r porin.

Verfolgen die Entfaltung und Refalten Bahnen der &auml;u&szlig;eren Membrane Protein porin von Paracoccus Denitrificans.

Abbiamo studiato outer membrane porin proteina da Paracoccus denitrificans per la sua stabilit&agrave; contro il calore e il pH. Sono stati analizzati i percorsi di dispiegamento e ripiegamento. Porin incubati a pH 12,5 e soprattutto subisce un lento dispiegarsi in una struttura non ordinata. La spiegata della proteina potrebbe essere ripiegata in una struttura nativelike che &egrave; funzionalmente attiva ma con deviazione distinti dalla proteina nativa. Questa struttura nativelike esposto una stabilit&agrave; termica interamente differenti. Anche se l&#39;aggregazione &egrave; normalmente considerata una strutturale &quot;vicolo cieco&quot;, la possibilit&agrave; di aprire un porin aggregati e formando una struttura funzionalmente attiva &egrave; stata analizzata qui. Porin aggregati su riscaldamento sopra 86,2 gradi C. Incubating il calore-aggregati di proteina a pH elevato (&amp;gt; o = 12.5) conduce ad una lenta apertura della proteina in una struttura non ordinata. Era possibile ripiegare questa proteina non ordinata in una struttura nativelike trimeric che era in grado di formare pori attivi. Tuttavia, la stabilit&agrave; termica del porin ripiegate era a differenza di quella del nativo porin. Per comprendere il meccanismo di base dietro i dispiegarsi dei processi, la proteina &egrave; stato sottoposto a riscaldamento a vari valori di pH. E &#39; stato osservato che a pH &amp;gt; o = 12.5 la proteina non aggregate a riscaldamento; invece, si apre in una struttura non ordinata. Concludiamo che a valori di pH elevato, le interazioni elettrostatiche di vari residui dell&#39;amminoacido sono perturbate che conduce a svolgersi in una struttura non ordinata. Questo studio dimostra per la prima volta un nuovo dispiegamento e ripiegamento pathway per porin.

Rilevamento delle vie unfolding e refolding di membrana esterna della proteina porin da Paracoccus denitrificans.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x71B1;&#x3084;pH&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;Paracoccus&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C55;&#x958B;&#x3068;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x5206;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;pH 12.5&#x3067;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x4E0A;&#x8A18;&#x306E;&#x9806;&#x4E0D;&#x540C;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3078;&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x304C;&#x9045;&#x3044;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x3067;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5929;&#x7136;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x504F;&#x5DEE;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x5168;&#x304F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96C6;&#x7D04;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x69CB;&#x9020; &#x26;quot;&#x30C7;&#x30C3;&#x30C9;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x26;quot;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x96C6;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 86.2&#x2103;&#x3067;&#x306E;&#x9AD8;pH&#xFF08;&#x26;gt;&#x307E;&#x305F;&#x306F;= 12.5&#xFF09;&#x3067;&#x306E;&#x71B1;&#x51DD;&#x96C6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30C8;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306B;&#x52A0;&#x71B1;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x3086;&#x3063;&#x304F;&#x308A;&#x3068;&#x53E3;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x7D30;&#x5B54;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x4E09;&#x91CF;&#x4F53;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x9806;&#x4E0D;&#x540C;&#x306E;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x71B1;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x306F;&#x9055;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5C55;&#x958B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x80CC;&#x5F8C;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x7A2E;&#x3005;&#x306E;pH&#x3067;&#x52A0;&#x71B1;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;pH&#x3067;&#x26;gt;&#x307E;&#x305F;&#x306F;= 12.5&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x52A0;&#x71B1;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x96C6;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x3001;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x958B;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;pH&#x5024;&#x3067;&#x3001;&#x7A2E;&#x3005;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x9759;&#x96FB;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x9806;&#x5E8F;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5C55;&#x958B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x6442;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5168;&#x304F;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5C55;&#x958B;&#x3068;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x793A;&#x3059;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

Paracoccus&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5916;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC5F4; &#xBC0F; pH &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Paracoccus denitrificans&#xC5D0;&#xC11C; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; porin &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xAC1C; &#xBC0F; refolding &#xACBD;&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC0F; &#xC704;&#xC758; pH 12.5&#xC5D0;&#xC11C; incubated porin &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xB290;&#xB9B0; &#xC804;&#xAC1C;&#xB97C; &#xACAA; &#xC2B5;. &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; nativelike &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCC9C;&#xC5F0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xD3B8;&#xCC28;&#xC640; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; refolded &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; nativelike &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC9D1;&#xACC4;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB418;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAD6C;&#xC870; &quot;&#xB9C9;&#xB2E4;&#xB978;&quot;, &#xC9D1;&#xACC4; porin &#xC5F4;&#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xAD6C;&#xC870; &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xC5EC;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. 86.2&#xB3C4; &#xC774;&#xC0C1; &#xB192;&#xC740; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F4; &#xC9D1;&#xACC4; C. Incubating &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB09C;&#xBC29; porin &#xC9D1;&#xACC4; (&amp;gt; &#xB610;&#xB294; = 12.5) &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xC624;&#xD504;&#xB2DD;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xB4DC;. &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xD65C;&#xC131; &#xC228; &#xAD6C;&#xBA4D;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; trimeric nativelike &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; refold&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, refolded porin&#xC758; &#xC5F4; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC758; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; porin&#xC744; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC804;&#xAC1C; &#xACFC;&#xC815; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; pH &#xAC12;&#xC5D0; &#xB09C;&#xBC29; &#xC2DC;&#xC124; &#xB300;&#xC0C1; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0B0;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &amp;gt; = 12.5 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB09C;&#xBC29; &#xC2DC;&#xC124;;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xC5F4;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB192;&#xC740; pH &#xAC12;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC815;&#xC804;&#xAE30; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAD50;&#xB780;&#xC740; &#xACB0;&#xB860; &#xC815;&#xB82C; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xC804;&#xAC1C;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC804;&#xAC1C; &#xBC0F; refolding porin &#xACBD;&#xB85C; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; porin Paracoccus denitrificans&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC804;&#xAC1C; &#xBC0F; refolding &#xACBD;&#xB85C; &#xCD94;&#xC801; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos investigado porina prote&#xED;na de membrana externa de Paracoccus denitrificans para su estabilidad frente al calor y el pH. Los caminos de despliegue y repliegue se han analizado. Porin incub&#xF3; a pH 12,5 y por encima se somete a un lento desarrollo en una estructura desordenada. La prote&#xED;na podr&#xED;a ser replegada desdobla en una estructura nativelike que es funcionalmente activa, pero con una desviaci&#xF3;n distinta de la prote&#xED;na nativa. Esta estructura nativelike exhiben una estabilidad t&#xE9;rmica completamente diferente. Aunque la agregaci&#xF3;n normalmente se considera un problema estructural &#x26;quot;callej&#xF3;n sin salida&#x26;quot;, la posibilidad de abrir una porina agregado y la formaci&#xF3;n de una estructura funcionalmente activo fue analizado aqu&#xED;. Agregados Porin sobre calentamiento por encima de 86,2 &#xB0; C. La incubaci&#xF3;n de la prote&#xED;na agregada por calor a pH alto (&#x26;gt; o = 12,5) conduce a una apertura lenta de la prote&#xED;na en una estructura desordenada. Fue posible replegar esta desordenada prote&#xED;na en una estructura trim&#xE9;rica nativelike que era capaz de formar poros activos. Sin embargo, la estabilidad t&#xE9;rmica de la replegada porina era diferente a la de la porina nativa. Para comprender el mecanismo b&#xE1;sico detr&#xE1;s de los procesos en desarrollo, la prote&#xED;na se someti&#xF3; a calentamiento a diversos valores de pH. Se observ&#xF3; que a pH&#x26;gt; o = 12,5 la prote&#xED;na no agregada despu&#xE9;s del calentamiento, sino que se abre en una estructura desordenada. Se concluye que a valores de pH altos, las interacciones electrost&#xE1;ticas de varios residuos de amino&#xE1;cidos son perturbadas que conduce a despliega en una estructura desordenada. Este estudio muestra por primera vez un camino de desplegamiento y replegamiento totalmente nuevo para porina.

Seguimiento de los Caminos de desplegado y replegado de Porin prote&#xED;na de membrana exterior de Paracoccus denitrificans

Omp85 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF0C;&#x5176;&#x6210;&#x5458;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x3002;Omp85 &#x5948;&#x745F;&#x83CC;&#x548C;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; YaeT &#x663E;&#x793A;&#x4E3A;&#x5916;&#x819C;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B58;&#x5728;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x5230; YaeT &#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A; proteobacteria&#xFF0C;&#x8868;&#x793A; YtfM&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x51FD;&#x6570;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x8BB2;&#x8FF0;&#x3002;&#x50CF; YaeT&#xFF0C;YtfM &#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x7531;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x7684;&#x5468;&#x8D28;&#x57DF;&#x548C;&#x819C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7FA7;&#x57FA;&#x7AEF;&#x57DF;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5411; YtfM &#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x7279;&#x6027;&#x6BD4;&#x8F83; YaeT &#x5173;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6316;&#x7A7A;&#x5E94;&#x53D8;&#x663E;&#x793A; ytfM &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x975E;&#x5FC5;&#x9700;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x5916;&#x819C;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x53EF;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x662F;&#x5F3A;&#x70C8;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; YtfM &#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

YtfM&#xFF0C;Omp85 &#x5BB6;&#x65CF;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;

Omp85 proteins form a ubiquitous protein family, members of which are found in all Gram-negative bacteria. Omp85 of Neisseria meningitidis and YaeT of Escherichia coli are shown to be essential for outer membrane biogenesis. Interestingly, there exists a homologue to YaeT in E. coli and many proteobacteria, denoted YtfM, the function of which has not been described yet. Like YaeT, YtfM is predicted to consist of an amino-terminal periplasmic domain and a membrane-located carboxy-terminal domain. In this study, we present a first characterisation of YtfM by comparison to YaeT concerning structural, biochemical and electrophysiological properties. Furthermore, a knockout strain revealed that ytfM is a non-essential gene and lack of the protein had no effect on outer membrane composition and integrity. The only observable phenotype was strongly reduced growth, indicating an important role of YtfM in vivo.

Characterisation of YtfM, a second member of the Omp85 family in Escherichia coli.

Omp85 prot&#xE9;ines forment une famille prot&#xE9;ine ubiquitaire, dont les membres se retrouvent dans toutes les bact&#xE9;ries Gram-n&#xE9;gatives. Omp85 de Neisseria meningitidis et YaeT d&#x26;#39;Escherichia coli sont pr&#xE9;sent&#xE9;s comme essentiels pour la biogen&#xE8;se membrane externe. Fait int&#xE9;ressant, il existe un homologue &#xE0; YaeT chez E. coli et de nombreux prot&#xE9;obact&#xE9;ries, not&#xE9;e YtfM, dont la fonction n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crit pour le moment. Comme YaeT, YtfM est pr&#xE9;dite &#xE0; se composent d&#x26;#39;un domaine amino-terminal p&#xE9;riplasmique et une membrane situ&#xE9;e-carboxy-terminale du domaine. Dans cette &#xE9;tude, nous pr&#xE9;sentons une premi&#xE8;re caract&#xE9;risation de YtfM par rapport &#xE0; YaeT concernant les propri&#xE9;t&#xE9;s structurelles, biochimiques et &#xE9;lectrophysiologiques. Par ailleurs, une souche KO a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que ytfM est un g&#xE8;ne non essentiel et le manque de la prot&#xE9;ine n&#x26;#39;a eu aucun effet sur la composition de la membrane ext&#xE9;rieure et l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9;. Le ph&#xE9;notype ne observable a &#xE9;t&#xE9; fortement r&#xE9;duit la croissance, indiquant un r&#xF4;le important de YtfM in vivo.

Caract&#xE9;risation des YtfM, un deuxi&#xE8;me membre de la famille Omp85 dans Escherichia Coli

Omp85 Proteine bilden eine allgegenw&auml;rtige Proteinfamilie, dessen Mitglieder in alle gramnegativen Bakterien gefunden werden. Omp85 von Neisseria Meningitidis und YaeT von Escherichia coli sind wesentlich f&uuml;r die &auml;u&szlig;ere Membran Biogenese dargestellt. Interessanterweise gibt es ein Homolog zu YaeT in E. Coli und viele Proteobacteria, bezeichnet YtfM, deren Funktion noch nicht beschrieben wurde. Wie YaeT YtfM vorhergesagt wird aus einer periplasmatischen amino-Terminal-Dom&auml;ne und einer Membran gelegenen Carboxy-Terminal-Dom&auml;ne. In dieser Studie stellen wir eine erste Charakterisierung des YtfM Vergleich YaeT &uuml;ber strukturelle, biochemische und elektrophysiologische Eigenschaften. Dar&uuml;ber hinaus ergab eine k.o.-Belastung, dass YtfM ein wesentlicher-gen ist und Mangel des Proteins keinen Einfluss auf die Zusammensetzung der Au&szlig;enmembran und Integrit&auml;t hatte. Der Ph&auml;notyp nur beobachtbare war stark reduziertem Wachstum, eine wichtige Rolle des YtfM in-vivo.

Charakterisierung der YtfM, ein zweites Mitglied der Omp85 Familie in Escherichia coli.

Omp85 proteine formano una famiglia di proteine onnipresente, membri che si trovano in tutti i batteri Gram-negativi. Omp85 di Neisseria meningitidis e YaeT di Escherichia coli sono mostrati per essere essenziale per la biogenesi della membrana esterna. Curiosamente, esiste un omologo di YaeT in e. coli e molti proteobacteria, indicato con YtfM, la cui funzione non &egrave; stata ancora descritta. Come YaeT, YtfM &egrave; previsto consiste in un dominio periplasmico amminico-terminale e un dominio carbossi-terminale situato a membrana. In questo studio, presentiamo una caratterizzazione prima di YtfM in confronto a YaeT riguardanti propriet&agrave; strutturali, biochimici ed elettrofisiologici. Inoltre, un ceppo ad eliminazione diretta ha rivelato che ytfM &egrave; un gene non essenziali e mancanza della proteina ha avuto alcun effetto sulla composizione della membrana esterna e l&#39;integrit&agrave;. Il fenotipo solo osservabile &egrave; stata fortemente ridotta crescita, indicando un ruolo importante di YtfM in vivo.

Caratterizzazione di YtfM, un secondo membro della famiglia Omp85 in Escherichia coli.

Omp85&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x83CC;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x9AC4;&#x819C;&#x708E;&#x83CC;&#x3068;YaeT&#x306E;Omp85&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x819C;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3084;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x3001;&#x793A;&#x3055;YtfM&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;YaeT&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3002; YaeT&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;YtfM&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x819C;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;YaeT&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;YtfM&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x682A;&#x306F;ytfM&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5FC5;&#x9808;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x819C;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x306E;&#x307F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;in vivo&#x3067;&#x306E;YtfM&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

YtfM&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;Omp85&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;2&#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;

Omp85 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD615;&#xC131; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xB294; &#xBA64;&#xBC84;&#xB294; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC00;&#xC871;. Omp85 Neisseria meningitidis &#xBC0F; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; YaeT &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xC18D;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC0F; &#xB9CE;&#xC740; proteobacteria, &#xC5B4;&#xB5A4; &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xD45C;&#xC2DC; YtfM YaeT homologue&#xB97C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. YaeT, &#xCC98;&#xB7FC; YtfM &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; periplasmic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; carboxy &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xB420; &#xC804;&#xB9DD; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; Ytfm&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD2B9;&#xC131; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD6C;&#xC870;, &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; electrophysiological &#xC18D;&#xC131;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; YaeT. &#xB610;&#xD55C;, &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xACF5;&#xAC1C; Ytfm&#xC740; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC774; &#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD80;&#xC871; &#xD588;&#xB2E4; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xAD6C;&#xC131; &#xBC0F; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC5D0;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CC; &#xAD00;&#xCC30; &#xD615; YtfM in vivo&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD588;&#xB2E4;.

YtfM, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; Omp85 &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

Omp85 prote&#xED;nas forman una familia de prote&#xED;nas ubicuo, los miembros de los cuales se encuentran en todas las bacterias Gram-negativas. Omp85 de Neisseria meningitidis y YaeT de Escherichia coli se demostrado ser esencial para la biog&#xE9;nesis membrana externa. Curiosamente, existe un hom&#xF3;logo a YaeT en E. coli y muchos Proteobacteria, denotado YtfM, la funci&#xF3;n de los cuales no se ha descrito todav&#xED;a. Como YaeT, YtfM se predice que consisten en un dominio peripl&#xE1;smico amino-terminal y una membrana situada dominio carboxi-terminal. En este estudio, se presenta una primera caracterizaci&#xF3;n de YtfM en comparaci&#xF3;n con YaeT sobre las propiedades estructurales, bioqu&#xED;micos y electrofisiol&#xF3;gicos. Adem&#xE1;s, una cepa nocaut revel&#xF3; que ytfM es un gen no esencial y la falta de la prote&#xED;na no tuvo ning&#xFA;n efecto sobre la composici&#xF3;n de la membrana externa y la integridad. El fenotipo observable s&#xF3;lo se redujo fuertemente el crecimiento, lo que indica un papel importante de YtfM in vivo.

Caracterizaci&#xF3;n de YtfM, un segundo miembro de la Familia Omp85 en Escherichia Coli

&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5408;&#x6210;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684; glycerophospholipids &#x548C;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F; &#xFF08;TG&#xFF09; &#x4EE5;&#x7EF4;&#x62A4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x80FD;&#x91CF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x78F7;&#x8102;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684; 3-&#x78F7;&#x9178;&#x7518;&#x6CB9;&#x7684;&#x4E32;&#x884C; acylations &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x4ECE;&#x5934;&#x3002;&#x9176; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase (AGPAT) &#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9178;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x78F7;&#x8102;&#x9178;&#x7684; sn 2 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9884;&#x8BA1; AGPAT &#x9F3B;&#x606F;&#x8089; cDNA &#x514B;&#x9686;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6307;&#x5B9A;&#x5B83;&#x7684; AGPAT9&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B; AGPAT9 &#x57FA;&#x56E0;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x6574;&#x4E2A; 14 &#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x4E3A; 534 &#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;AGPAT9 &#x9AD8;&#x5EA6;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x80BA;&#x548C;&#x813E;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5927;&#x7F51;&#x819C;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x80CE;&#x76D8;&#x3002;&#x5728;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2; (CHO) &#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE; AGPAT9&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; AGPAT &#x6D3B;&#x52A8;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x80C6;&#x78B1;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x5F53; AGPAT9 coexpressed &#x4E0E; AGPAT1 &#x5728; CHO &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x65F6;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E9A;&#x578B;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; (ER) &#x548C;&#x5360;&#x7528;&#x76F8;&#x540C;&#x7684; AGPAT1 ER &#x57DF;&#x3002;&#x5929;&#x51AC;&#x9170;&#x80FA;&#x4E0E;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x542B;&#x91CF; NHX (4) D &#x6BCD;&#x9898;&#x4E0E; EGTR &#x6BCD;&#x9898;&#x4E2D;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1; AGPAT9 &#x4FDD;&#x7559; AGPAT &#x6D3B;&#x52A8;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x5929;&#x51AC;&#x9170;&#x80FA;&#x548C;&#x7CBE;&#x6C28;&#x9178; (4) D NHX &#x548C; EGTR &#x56FE;&#x6848;&#x5206;&#x522B;&#x4E0D;&#x662F;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#xFF0C;&#x58C1;&#x7403;&#x4E91;&#x5357;&#x6A21;&#x578B;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728; AGPAT9 &#x4E2D;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x53E3;&#x888B;&#x53EF;&#x5BB9;&#x7EB3;&#x8102;&#x80AA;&#x9170;&#x94FE;&#x7684;&#x53D6;&#x5411;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x8D28;&#x800C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x50AC;&#x5316; HX (4) D &#x6BCD;&#x9898;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E; AGPAT9 &#x7684;&#x80BA;&#x548C;&#x813E;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x548C; TG &#x5408;&#x6210;&#x7275;&#x8FDE;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x8868;&#x5F81;&#x4EBA;&#x7C7B; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase &#x9F3B;&#x606F;&#x8089; 9&#xFF1A; &#x514B;&#x9686;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x5206;&#x5E03;&#x3001; &#x57FA;&#x56E0;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Most cells synthesize their glycerophospholipids and triglycerides (TG) to maintain the cellular integrity and to provide energy for cellular functions. The phospholipids are synthesized de novo in cells through an evolutionary conserved process involving serial acylations of glycerol-3-phosphate. Several isoforms of the enzyme 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase (AGPAT) acylate lysophosphatidic acid at the sn-2 position to produce phosphatidic acid. We cloned a cDNA predicted to be an AGPAT isoform and designated it AGPAT9. The human AGPAT9 gene spans across 14 exons and encodes for a polypeptide of 534 amino acids. AGPAT9 is highly expressed in the lung and spleen, followed by leukocyte, omental adipose tissue, and placenta. In the Chinese Hamster Ovary (CHO), cell lysates overexpressing AGPAT9, we observed AGPAT activity but not the lysophosphatidylcholine acyltransferase activity. When AGPAT9 is coexpressed with AGPAT1 in CHO cells, both the isoforms localize to the endoplasmic reticulum (ER) and occupy the same ER domain as AGPAT1. Despite substitution of asparagine with proline in the NHX(4)D motif and arginine with cysteine in the EGTR motif, AGPAT9 retains AGPAT activity suggesting that residues asparagine and arginine in the NHX(4)D and EGTR motifs respectively are not essential for the enzymatic activity. Based on the X-ray crystallographic structure of a related acyltransferase, squash gpat, a model is proposed in which a hydrophobic pocket in AGPAT9 accommodates fatty acyl chains of both substrates in an orientation, whereas the HX(4)D motif participates in catalysis. Based on the activity and expression pattern of AGPAT9 in the lung and spleen, this novel isoform could be implicated in the biosynthesis of phospholipids and TG in these tissues.

Functional characterization of human 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase isoform 9: cloning, tissue distribution, gene structure, and enzymatic activity.

La plupart des cellules synth&#xE9;tisent leurs glyc&#xE9;rophospholipides et des triglyc&#xE9;rides (TG) pour maintenir l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; cellulaire et pour fournir l&#x26;#39;&#xE9;nergie aux fonctions cellulaires. Les phospholipides sont synth&#xE9;tis&#xE9;s de novo dans les cellules par le biais d&#x26;#39;un processus &#xE9;volutif conserv&#xE9;e impliquant acylations s&#xE9;rie de glyc&#xE9;rol-3-phosphate. Plusieurs isoformes de l&#x26;#39;enzyme 1-acylglyc&#xE9;rol-3-phosphate-O-acyltransf&#xE9;rase (AGPAT) acylate acide lysophosphatidique &#xE0; la position sn-2 pour produire l&#x26;#39;acide phosphatidique. Nous avons clon&#xE9; un ADNc pr&#xE9;vu pour &#xEA;tre une isoforme AGPAT et a d&#xE9;sign&#xE9; AGPAT9. Le humaine AGPAT9 g&#xE8;ne s&#x26;#39;&#xE9;tend sur 14 exons et code pour un polypeptide d&#x26;#39;acides amin&#xE9;s 534. AGPAT9 est fortement exprim&#xE9; dans le poumon et la rate, suivie par des leucocytes, le tissu adipeux &#xE9;piplo&#xEF;que, et le placenta. Dans l&#x26;#39;ovaire de hamster chinois (CHO), lysats cellulaires surexprimant AGPAT9, nous avons observ&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; AGPAT mais pas l&#x26;#39;activit&#xE9; lysophosphatidylcholine acyltransf&#xE9;rase. Lorsque AGPAT9 est co-exprim&#xE9; avec AGPAT1 dans les cellules CHO, les deux isoformes les localiser dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique (RE) et occupent le m&#xEA;me domaine que ER AGPAT1. Malgr&#xE9; la substitution de l&#x26;#39;asparagine par la proline dans le NHX (4) motif D et de l&#x26;#39;arginine en cyst&#xE9;ine dans le motif EGTR, AGPAT9 conserve une activit&#xE9; AGPAT sugg&#xE9;rant que l&#x26;#39;asparagine et arginine r&#xE9;sidus dans le NHX (4) D et de motifs EGTR respectivement ne sont pas indispensables pour la enzymatique activit&#xE9;. Bas&#xE9; sur la structure cristallographique aux rayons X d&#x26;#39;une acyltransf&#xE9;rase li&#xE9;e, GPAT de squash, un mod&#xE8;le est propos&#xE9; dans lequel une poche hydrophobe dans AGPAT9 accueille des cha&#xEE;nes acyles gras des deux substrats dans une orientation, alors que le HX (4) motif D participe &#xE0; la catalyse. Bas&#xE9; sur le mod&#xE8;le d&#x26;#39;activit&#xE9; et l&#x26;#39;expression de AGPAT9 dans le poumon et la rate, cette nouvelle isoforme pourraient &#xEA;tre impliqu&#xE9;s dans la biosynth&#xE8;se des phospholipides et des TG dans ces tissus.

Caract&#xE9;risation fonctionnelle de l&#x26;#39;homme 1-acylglyc&#xE9;rol-3-phosphate-O-acyltransf&#xE9;rase Isoform 9: structure d&#x26;#39;un g&#xE8;ne Clonage, la distribution tissulaire, et l&#x26;#39;activit&#xE9; enzymatique

Die meisten Zellen synthetisieren ihre Glycerophospholipids und Triglyceride (TG), die zellul&auml;re Integrit&auml;t zu bewahren und Energie f&uuml;r zellul&auml;re Funktionen bereitzustellen. Die Phospholipide sind synthetisiert de Novo in den Zellen bis konservierten Evolutionsprozesses mit seriellen Acylations von Glycerin-3-Phosphat. Verschiedene Isoformen des Enzyms 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase (AGPAT) Acylate Lysophosphatidic S&auml;ure an der sn-2-Position, Phosphatids&auml;ure S&auml;ure zu produzieren. Wir eine DNA, die voraussichtlich eine AGPAT-Isoform geklont und benannte es AGPAT9. Das menschliche AGPAT9-gen erstreckt sich &uuml;ber 14 Exons und kodiert f&uuml;r ein Polypeptid 534 Aminos&auml;uren. AGPAT9 dr&uuml;ckt sich hoch in die Lunge und Milz, gefolgt von Leukozyten, Omentum Fettgewebe und Plazenta. In Chinese Hamster Ovary (CHO), beobachteten Zelllysate &uuml;berexprimierenden AGPAT9, wir AGPAT T&auml;tigkeit aber nicht die Lysophosphatidylcholine Acyltransferase Aktivit&auml;t. Wenn AGPAT9 mit AGPAT1 in CHO-Zellen coexpressed ist, die beiden Isoformen lokalisieren, dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) und ER derselben Dom&auml;ne als AGPAT1 zu besetzen. Trotz Substitution von Asparagin mit Prolin in der NHX (4) D-Motiv und Arginin mit Cystein in der EGTR-Motiv AGPAT9 beh&auml;lt AGPAT-Aktivit&auml;t, was darauf hindeutet, dass R&uuml;ckst&auml;nde Asparagin und Arginin in der NHX (4) D und EGTR Motive bzw. sind nicht wesentlich f&uuml;r die enzymatische Aktivit&auml;t. Basierend auf der x-ray kristallographische Struktur von einem verwandten Acyltransferase, Squash Gpat, ist ein Modell vorgeschlagen in dem eine hydrophobe Tasche in AGPAT9 fetthaltige Acyl-Ketten von beiden Substraten eine Ausrichtung, beherbergt, w&auml;hrend das HX (4) D-Motiv an der Katalyse beteiligt ist. Auf der Grundlage des Aktivit&auml;t und Expression-Musters von AGPAT9 in Lunge und Milz, konnte diese neuartige Isoform in die Biosynthese von Phospholipiden und TG in diesen Geweben verwickelt werden.

Funktionelle Charakterisierung der menschlichen 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase Isoform 9: Klonen, Gewebe-Verteilung, Genstruktur und enzymatische Aktivit&auml;t.

La maggior parte delle cellule di sintetizzare la loro glycerophospholipids e trigliceridi (TG) per mantenere l&#39;integrit&agrave; cellulare e per fornire energia per le funzioni cellulari. I fosfolipidi vengono sintetizzati de novo nelle cellule attraverso un processo evolutivo conservata che coinvolgono seriale acylations di glicerolo-3-fosfato. Diverse isoforme dell&#39;enzima 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase (AGPAT) acilare lysophosphatidic acido in posizione sn-2 per la produzione di acido fosfatidico. Abbiamo clonato un cDNA previsto per un&#39;isoforma AGPAT ed indicato esso AGPAT9. Il gene umano AGPAT9 si estende attraverso 14 esoni e codifica per un polipeptide di 534 aminoacidi. AGPAT9 &egrave; altamente espressa nel polmone e milza, seguita da leucociti, tessuto adiposo omentale e placenta. Nell&#39;ovaio criceto cinese (CHO), lisati cellulari con sovraesprimono relativa AGPAT9, abbiamo osservato AGPAT attivit&agrave; ma non l&#39;attivit&agrave; di lysophosphatidylcholine aciltransferasi. Quando AGPAT9 &egrave; coespressi con AGPAT1 in cellule CHO, entrambe le isoforme localizzare il reticolo endoplasmatico (ER) e occupano lo stesso dominio ER come AGPAT1. Nonostante la sostituzione dell&#39;asparagina con prolina nel motivo D NHX (4) e arginina con la cisteina nel motivo EGTR, AGPAT9 mantiene attivit&agrave; AGPAT, suggerendo che l&#39;asparagina residui e arginina in NHX (4) D ed EGTR motivi rispettivamente non sono essenziali per l&#39;attivit&agrave; enzimatica. Basata sulla struttura cristallografica ai raggi x di una correlata aciltransferasi, squash gpat, un modello &egrave; proposto in cui una tasca idrofobica in AGPAT9 accomoda catene acilico grassi sia substrati in un orientamento, mentre il motivo D HX (4) partecipa alla catalisi. Basato sul modello attivit&agrave; ed espressione del AGPAT9 nel polmone e milza, questo romanzo isoforma potrebbe essere implicato nella biosintesi di fosfolipidi e TG in questi tessuti.

Caratterizzazione funzionale dell&#39;isoforma 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase umano 9: clonazione, distribuzione tissutale, struttura del gene e l&#39;attivit&agrave; enzimatica.

&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9;&#xFF08;TG&#xFF09;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x306E;de novo&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;sn-2&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;1-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;-O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AGPAT&#xFF09;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;cDNA&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;AGPAT&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;AGPAT9&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;AGPAT9&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;14&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x304C;&#x308B;&#x3068;534&#x500B;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3002; AGPAT9&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x3001;&#x5927;&#x7DB2;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x3001;&#x80CE;&#x76E4;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x80BA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x813E;&#x81D3;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#xFF08;CHO&#xFF09;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;AGPAT9&#x3092;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;AGPAT&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30EB;&#x30B3;&#x30EA;&#x30F3;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AGPAT9&#x306F;&#x3001;CHO&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;AGPAT1&#x3068;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;ER&#xFF09;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x3001;AGPAT1&#x540C;&#x3058;ER&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5360;&#x6709;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; EGTR&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x4E2D;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;NHX&#xFF08;4&#xFF09;D&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;AGPAT9&#x306F;NHX&#xFF08;4&#xFF09;D&#x3068;EGTR&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x3084;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AE;&#x30CB;&#x30F3;&#x304C;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;AGPAT&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3002;&#x95A2;&#x9023;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x3001;&#x30B9;&#x30AB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;GPAT&#x306E;X&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;HX&#xFF08;4&#xFF09;D&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x304C;&#x89E6;&#x5A92;&#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E00;&#x65B9;&#x308C;&#x308B;AGPAT9&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x9396;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x80BA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x813E;&#x81D3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;AGPAT9&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;TG&#x3002;

&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x5206;&#x5E03;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF1A;&#x30D2;&#x30C8;1  - &#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;-O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;9&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;

&#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD569;&#xC131; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; glycerophospholipids&#xC640; &#xC911;&#xC131; &#xC9C0;&#xBC29; (TG) &#xC138;&#xD3EC; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8;&#xC740; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; 3 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xC758; &#xC9C1;&#xB82C; acylations &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC9C4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD569;&#xC131;&#xB41C; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4;. &#xC5EC;&#xB7EC; isoforms &#xD6A8;&#xC18C; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase (AGPAT) acylate lysophosphatidic &#xC0B0; phosphatidic &#xC0B0; &#xC0DD;&#xC0B0; sn-2 &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758;. &#xC6B0;&#xB9AC; AGPAT isoform &#xC608;&#xC0C1; Cdna&#xB97C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; agpat9&#xC744; &#xC9C0;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; AGPAT9 &#xC720;&#xC804;&#xC790; 14 exons&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; &#xACE0; 534 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; polypeptide&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Agpat9&#xC740; &#xD3D0;&#xC640; &#xBE44;&#xC7A5;, &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;, omental &#xC9C0;&#xBC29; &#xC870;&#xC9C1;, &#xD0DC; &#xBC18; &#xC774;&#xC5B4;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; (&#xC870;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; lysates AGPAT9, overexpressing &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; AGPAT &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; lysophosphatidylcholine acyltransferase &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0;. AGPAT9 &#xC870; &#xC140;&#xC5D0; agpat1&#xC640; coexpressed&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; isoforms endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (ER)&#xB97C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; agpat1&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xCC28;&#xC9C0;. &#xB300;&#xCCB4; NHX (4) D &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0;&#xACFC; &#xC544;&#xC2A4;&#xD30C;&#xB77C;&#xAE34;&#xACFC; EGTR &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xACFC; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;&#xC5D0; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; AGPAT9 &#xC720;&#xC9C0; AGPAT &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC548; &#xADF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC544;&#xC2A4;&#xD30C;&#xB77C;&#xAE34;&#xACFC; NHX (4) D&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB974;&#xAE30;&#xB2CC;&#xACFC; EGTR &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xAC01;&#xAC01; &#xD558;&#xC9C0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; acyltransferase, &#xC2A4;&#xCFFC;&#xC2DC; gpat&#xC758; crystallographic x-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; agpat9&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131;&#xC758; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xB294; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC9C0;&#xBC29; acyl &#xCCB4;&#xC778;&#xC744; &#xC218;&#xC6A9; HX (4) D &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xD3D0;&#xC640; &#xBE44;&#xC7A5;&#xC5D0; agpat9&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;,&#xC774; &#xC18C;&#xC124; isoform&#xC774; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8;&#xACFC; TG&#xC758; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase isoform 9&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;: &#xBCF5;&#xC81C;, &#xC870;&#xC9C1; &#xBD84;&#xD3EC;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;.

La mayor&#xED;a de las c&#xE9;lulas sintetizan sus glicerofosfol&#xED;pidos y triglic&#xE9;ridos (TG) para mantener la integridad celular y para proporcionar energ&#xED;a para las funciones celulares. Los fosfol&#xED;pidos son sintetizados de novo en c&#xE9;lulas a trav&#xE9;s de un proceso evolutivo conservada que implica acilaciones serie de glicerol-3-fosfato. Varias isoformas de la enzima 1-acilglicerol-3-fosfato-O-aciltransferasa (AGPAT) &#xE1;cido lisofosfat&#xED;dico acilato en la posici&#xF3;n sn-2 para producir &#xE1;cido fosfat&#xED;dico. Hemos clonado un ADNc prev&#xE9; que sea una isoforma AGPAT y design&#xF3; AGPAT9. El gen humano AGPAT9 extiende a trav&#xE9;s de 14 exones y codifica para un polip&#xE9;ptido de 534 amino &#xE1;cidos. AGPAT9 es altamente expresado en el pulm&#xF3;n y el bazo, seguido por el tejido de leucocitos, adiposo omental, y la placenta. En el ovario de h&#xE1;mster chino (CHO), lisados &#x200B;&#x200B;celulares que sobreexpresan AGPAT9, se observ&#xF3; actividad AGPAT pero no la actividad aciltransferasa lisofosfatidilcolina. Cuando se AGPAT9 coexpressed con AGPAT1 en c&#xE9;lulas CHO, tanto las isoformas de localizar en el ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico (ER) y ocupan el mismo dominio de ER como AGPAT1. A pesar de la sustituci&#xF3;n de la asparagina con prolina en la NHX (4) motivo D y arginina con ciste&#xED;na en el motivo EGTR, AGPAT9 retiene actividad AGPAT lo que sugiere que los residuos de asparagina y la arginina en la NHX (4) D y motivos EGTR, respectivamente, no son esenciales para el enzim&#xE1;tica actividad. Bas&#xE1;ndose en la estructura cristalogr&#xE1;fica de rayos X de una relacionada GPAT aciltransferasa, la calabaza, se propone un modelo en el que un bolsillo hidrof&#xF3;bico en AGPAT9 acomoda grasos cadenas de acilo de ambos sustratos en una orientaci&#xF3;n, mientras que el HX (4) motivo D participa en la cat&#xE1;lisis. Basado en el patr&#xF3;n de actividad y la expresi&#xF3;n de AGPAT9 en el pulm&#xF3;n y bazo, esta nueva isoforma podr&#xED;an estar implicados en la bios&#xED;ntesis de fosfol&#xED;pidos y TG en estos tejidos.

Caracterizaci&#xF3;n funcional de los Derechos Humanos 1-acilglicerol-3-fosfato-O-aciltransferasa Isoforma 9: Estructura Gen&#xE9;tica clonaci&#xF3;n, distribuci&#xF3;n tisular, y la actividad enzim&#xE1;tica

1-Acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 2 (AGPAT2) &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x5E7F;&#x4E49;&#x8102;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5F02;&#x5E38;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x57FA;&#x7840; AGPAT2 &#x865A;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5E76;&#x53D1;&#x75C7;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210; Agpat2 &#x7A7A;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;Agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E25;&#x91CD;&#x5F71;&#x54CD;&#x767D;&#x8272;&#x548C;&#x68D5;&#x8272;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3001; &#x6781;&#x7AEF;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x3001; &#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x548C;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x7684;&#x8102;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5F02;&#x5E38;&#x3002;&#x8102;&#x6E90;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C; de novo &#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x7387;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x5927;&#x7EA6;&#x9E21;&#x6C41; Agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x810F;&#x3002;Monoacylglycerol &#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53; 1 &#x7684; mRNA &#x53CA;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x5728;&#x809D;&#x810F;&#x7684; Agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F;&#x5408;&#x6210;&#x66FF;&#x4EE3; monoacylglycerol &#x901A;&#x8DEF;&#x88AB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; AGPAT2 &#x6CA1;&#x6709;&#x5DF2;&#x663E;&#x8457;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x7CAE;&#x4E0D;&#x542B;&#x8102;&#x80AA;&#x51CF;&#x5C11;&#x5927;&#x7EA6; 50 %agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A; monoacylglycerol &#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x81B3;&#x98DF;&#x8102;&#x80AA;&#x548C;&#x809D;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F;&#x5408;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E; Agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x8102;&#x80AA;&#x3002;

AGPAT2 &#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x5E7F;&#x4E49;&#x8102;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5F02;&#x5E38;&#x5728;&#x809D;&#x810F;&#x7684;&#x8102;&#x80AA;&#x4E0E;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

Mutations in 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 2 (AGPAT2) cause congenital generalized lipodystrophy. To understand the molecular mechanisms underlying the metabolic complications associated with AGPAT2 deficiency, Agpat2 null mice were generated. Agpat2(-/-) mice develop severe lipodystrophy affecting both white and brown adipose tissue, extreme insulin resistance, diabetes, and hepatic steatosis. The expression of lipogenic genes and rates of de novo fatty acid biosynthesis were increased approximately 4-fold in Agpat2(-/-) mouse livers. The mRNA and protein levels of monoacylglycerol acyltransferase isoform 1 were markedly increased in the livers of Agpat2(-/-) mice, suggesting that the alternative monoacylglycerol pathway for triglyceride biosynthesis is activated in the absence of AGPAT2. Feeding a fat-free diet reduced liver triglycerides by approximately 50% in Agpat2(-/-) mice. These observations suggest that both dietary fat and hepatic triglyceride biosynthesis via a monoacylglycerol pathway may contribute to hepatic steatosis in Agpat2(-/-) mice.

Molecular mechanisms of hepatic steatosis and insulin resistance in the AGPAT2-deficient mouse model of congenital generalized lipodystrophy.

Mutations dans 1-acylglyc&#xE9;rol-3-phosphate-O-acyltransf&#xE9;rase 2 (AGPAT2) provoquer cong&#xE9;nitale lipodystrophie g&#xE9;n&#xE9;ralis&#xE9;e. Pour comprendre les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui sous-tendent les complications m&#xE9;taboliques associ&#xE9;es &#xE0; AGPAT2 carence, les souris nulles AGPAT2 ont &#xE9;t&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;s. AGPAT2 (- / -) des souris de d&#xE9;velopper une lipodystrophie s&#xE9;v&#xE8;re affectant &#xE0; la fois blanc et le tissu adipeux brun, r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;insuline, le diab&#xE8;te, et la st&#xE9;atose h&#xE9;patique. L&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes et des taux de la lipogen&#xE8;se de novo biosynth&#xE8;se des acides gras ont &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9;s d&#x26;#39;environ 4 fois dans AGPAT2 (- / -) foies de souris. Les niveaux d&#x26;#39;ARNm et de prot&#xE9;ine de monoacylglyc&#xE9;rol acyltransf&#xE9;rase isoforme 1 ont &#xE9;t&#xE9; nettement augment&#xE9; dans le foie des AGPAT2 (- / -) des souris, sugg&#xE9;rant que la voie alternative pour monoacylglyc&#xE9;rol biosynth&#xE8;se des triglyc&#xE9;rides est activ&#xE9; en l&#x26;#39;absence de AGPAT2. Une alimentation sans gras r&#xE9;duit les triglyc&#xE9;rides du foie d&#x26;#39;environ 50% en AGPAT2 (- / -) chez la souris. Ces observations sugg&#xE8;rent que les deux graisses alimentaires et de la biosynth&#xE8;se des triglyc&#xE9;rides h&#xE9;patiques par une voie monoacylglyc&#xE9;rol peut contribuer &#xE0; la st&#xE9;atose h&#xE9;patique dans AGPAT2 (- / -) chez la souris.

M&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires de la st&#xE9;atose h&#xE9;patique et l&#x26;#39;insulinor&#xE9;sistance dans le mod&#xE8;le murin d&#xE9;ficient en AGPAT2 de la lipodystrophie g&#xE9;n&#xE9;ralis&#xE9;e cong&#xE9;nitale

Mutationen im 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 2 (AGPAT2) verursachen kongenitale generalisierte Lipodystrophie. Um die molekularen Mechanismen der metabolischen Komplikationen im Zusammenhang mit AGPAT2-Mangel zu verstehen, wurden Agpat2 null M&auml;use generiert. Agpat2(-/-) M&auml;use entwickeln schwere Lipodystrophie sowohl wei&szlig;e und braune Fettgewebe, extreme Insulinresistenz, Diabetes und hepatische Steatose. Preise der de-Novo-Fetts&auml;ure-Biosynthese und die Expression von Genen Lipogenic wurden ca. 4-fach in Agpat2(-/-) Maus Lebern erh&ouml;ht. Die mRNA und Protein Ebenen der Monoacylglycerol Acyltransferase Isoform 1 wurden deutlich erh&ouml;ht, in der Leber von Agpat2(-/-) M&auml;use, was darauf hindeutet, dass die alternative Monoacylglycerol-Bahn f&uuml;r Triglycerid-Biosynthese der AGPAT2 aktiviert ist. F&uuml;tterung eine fettfreie Ern&auml;hrung reduziert Leber Triglyceride um ca. 50 % bei Agpat2(-/-) M&auml;usen. Diese Beobachtungen legen nahe, dass beide Di&auml;t Fett und hepatische Triglycerid-Biosynthese &uuml;ber Monoacylglycerol Weg zu hepatische Steatose Agpat2(-/-) M&auml;usen beitragen kann.

Molekulare Mechanismen der hepatischen Steatose und Insulin-Resistenz bei AGPAT2-defizienten Mausmodell kongenitale generalisierte Lipodystrophie.

Mutazioni in 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 2 (AGPAT2) causano lipodistrofia generalizzata. Per comprendere i meccanismi molecolari sottostanti le complicanze metaboliche associate a deficit di AGPAT2, Agpat2 null topi sono stati generati. Agpat2(-/-) topi sviluppano lipodistrofia grave che colpisce sia del tessuto adiposo bianco e marrone, estrema insulino-resistenza, diabete e steatosi epatica. L&#39;espressione dei geni lipogenici e tariffe del de novo biosintesi degli acidi grassi sono stati aumentati circa 4 volte nel fegato del mouse Agpat2(-/-). I livelli di mRNA e proteina di monoacilglicerolo aciltransferasi isoforma 1 erano notevolmente aumentati nel fegato dei topi Agpat2(-/-), suggerendo che il percorso alternativo monoacilglicerolo per la biosintesi dei trigliceridi &egrave; attivato in assenza di AGPAT2. Alimentazione una dieta priva di grassi ridotto fegati trigliceridi di circa il 50% in Agpat2(-/-) topi. Queste osservazioni suggeriscono che entrambi biosintesi dietetico trigliceridi grasso ed epatica attraverso un percorso monoacilglicerolo possono contribuire alla steatosi epatica in topi Agpat2(-/-).

Meccanismi molecolari di epatica steatosi e insulino-resistenza nel modello del mouse AGPAT2-carenti di lipodistrofia generalizzata.

1  - &#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;-O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;2&#xFF08;AGPAT2&#xFF09;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x5168;&#x8EAB;&#x6027;&#x30EA;&#x30DD;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AGPAT2&#x6B20;&#x4E4F;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6027;&#x5408;&#x4F75;&#x75C7;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;Agpat2&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Agpat2&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x767D;&#x3068;&#x8910;&#x8272;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x3001;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3001;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x30EA;&#x30DD;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8102;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;de novo&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;Agpat2&#x3067;&#x7D04;4&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x809D;&#x81D3;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;AGPAT2&#x306E;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;1&#x306E;mRNA&#x3068;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;Agpat2&#x306E;&#x809D;&#x81D3;&#x3067;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;Agpat2&#x3067;&#x7D04;50&#xFF05;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x7121;&#x8102;&#x80AA;&#x306E;&#x98DF;&#x4E8B;&#x3092;&#x4F9B;&#x7D66;&#x3059;&#x308B;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x200B;&#x200B;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x98DF;&#x7269;&#x8102;&#x80AA;&#x3068;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9;&#x5408;&#x6210;&#x304C;Agpat2&#x3067;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x5148;&#x5929;&#x6027;&#x5168;&#x8EAB;&#x6027;&#x30EA;&#x30DD;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;AGPAT2&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;

1-Acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 2 (AGPAT2)&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xC120; &#xCC9C; &#xC801; &#xC77C;&#xBC18;&#xD654; lipodystrophy. &#xAE30;&#xBCF8; AGPAT2 &#xACB0;&#xD54D;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB300;&#xC0AC; &#xD569;&#xBCD1;&#xC99D; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; Agpat2 null &#xC950; &#xC0DD;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Agpat2(-/-) &#xC950; &#xC2EC;&#xD55C; lipodystrophy &#xBAA8;&#xB450; &#xD770;&#xC0C9;&#xACFC; &#xAC08;&#xC0C9; &#xC9C0;&#xBC29; &#xC870;&#xC9C1;, &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D;, &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; &#xBC0F; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC9C0; &#xBC29;&#xC99D;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC1C;. Lipogenic &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xC9C0;&#xBC29;&#xC0B0; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; Agpat2(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC04;&#xC740; &#xC57D; 4-fold &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. Monoacylglycerol acyltransferase isoform 1&#xC758; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900; triglyceride &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; monoacylglycerol &#xD1B5;&#xB85C; AGPAT2 &#xC5C6;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC81C;&#xC548; Agpat2(-/-) &#xC950;&#xC758; &#xAC04;&#xC740; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC29; &#xC5C6;&#xB294; &#xC2DD;&#xB2E8; &#xC218; &#xC720; &#xAC04; &#xD2B8;&#xB9AC; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC; Agpat2(-/-) &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 50% &#xAC10;&#xC18C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCE21; monoacylglycerol &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC0DD; &#xB450; &#xC2DD;&#xC774; &#xC9C0;&#xBC29;&#xACFC; &#xAC04;&#xC7A5; triglyceride &#xD569;&#xC131; Agpat2(-/-) &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC9C0; &#xBC29;&#xC99D;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC120; &#xCC9C; &#xC131; &#xC77C;&#xBC18;&#xD654; lipodystrophy&#xC758; AGPAT2 &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC9C0; &#xBC29;&#xC99D;&#xACFC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Las mutaciones en el 1-acilglicerol-3-fosfato-O-aciltransferasa 2 (AGPAT2) causar la lipodistrofia generalizada cong&#xE9;nita. Para comprender los mecanismos moleculares que subyacen a las complicaciones metab&#xF3;licas asociadas a la deficiencia de AGPAT2, los ratones AGPAT2 nulos se generaron. AGPAT2 (- / -) ratones desarrollan lipodistrofia severa que afecta tanto a blanco y tejido adiposo marr&#xF3;n, extrema resistencia a la insulina, la diabetes y esteatosis hep&#xE1;tica. La expresi&#xF3;n de los genes y las tasas de lipog&#xE9;nicos de la bios&#xED;ntesis de &#xE1;cidos grasos de novo se incrementaron en aproximadamente 4 veces en AGPAT2 (- / -) h&#xED;gados de los ratones. Los niveles de ARNm y prote&#xED;nas de monoacilglicerol aciltransferasa isoforma 1 se incrementaron notablemente en los h&#xED;gados de los AGPAT2 (- / -) ratones, lo que sugiere que la v&#xED;a alternativa para la bios&#xED;ntesis de monoacilglicerol triglic&#xE9;ridos se activa en ausencia de AGPAT2. La alimentaci&#xF3;n de una dieta libre de grasas del h&#xED;gado reduce los triglic&#xE9;ridos en aproximadamente un 50% en AGPAT2 (- / -) ratones. Estas observaciones sugieren que tanto la grasa de la dieta y la bios&#xED;ntesis hep&#xE1;tica de triglic&#xE9;ridos a trav&#xE9;s de una v&#xED;a monoacilglicerol puede contribuir a la esteatosis hep&#xE1;tica en AGPAT2 (- / -) ratones.

Mecanismos moleculares de la esteatosis hep&#xE1;tica y resistencia a la insulina en el modelo de rat&#xF3;n deficiente en AGPAT2 de lipodistrofia generalizada cong&#xE9;nita

&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x8DE8;&#x5916;&#x819C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5C0F;&#x548C;&#x4EB2;&#x6C34;&#x6027;&#x6EB6;&#x8D28;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x3002;Octameric &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x3001; &#x5176;&#x5927;&#x5E45;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x72ED;&#x7A84;&#x533A;&#x57DF;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5927;&#x578B;&#x7684;&#x5468;&#x8D28;&#x5FAA;&#x73AF; L6 &#x8868;&#x793A;&#x65B0;&#x578B;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;L6 &#x7531; 13 &#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7EC4;&#x6210;&#xFF0C;&#x662F;&#x76F4;&#x63A5;&#x6BD7;&#x90BB;&#x7684;&#x72ED;&#x7A84;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x7B2C; 3&#x3001; 5&#x3001; 7&#x3001; 9&#x3001; &#x548C; 11 &#x4E2A;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684; L6 &#x5FAA;&#x73AF;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8FD8;&#x539F;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x5B54;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x6BDB;&#x5B54;&#x3002;&#x8102;&#x8D28;&#x53CC;&#x5C42;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x6240;&#x6709;&#x7A81;&#x53D8;&#x6E20;&#x9053;&#x597D;&#x6B79;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (wt) &#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; L6 &#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x7535;&#x538B;&#x95E8;&#x63A7;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x5931;&#x8E2A;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x662F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x6298;&#x53E0;&#x6210;&#x5F3A;&#x7535;&#x573A;&#x54CD;&#x5E94;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Delta7&#xFF0C;Delta9 &#x548C; Delta11 &#x7A81;&#x53D8;&#x4E86;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; wt &#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x5173;&#x952E;&#x7535;&#x538B;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; L6 &#x5FAA;&#x73AF;&#x4E0D;&#x662F;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x4E3B;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x95E8;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;L6 &#x5927;&#x7F3A;&#x5931;&#x5BFC;&#x81F4; 3-6 &#x6298;&#x53EF;&#x8403;&#x53D6;&#x7684;&#x6BDB;&#x5B54;&#xFF0C;&#x5C11;&#x800C;&#x5C0F;&#x5220;&#x9664;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6BDB;&#x5B54;&#x5927; L6 &#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x5220;&#x9664;&#x64CD;&#x4F5C;&#x662F;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6BD4;&#x89C4;&#x6A21;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x66F4;&#x5BBD;&#x5BB9;&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x7535;&#x5BFC;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; wt &#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x8FC7;&#x5B54;&#x9699;&#x7531;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x6BD4;&#x4E2D;&#x6027;&#x6EB6;&#x8D28;&#x7684;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x786E;&#x5B9A;&#x6EB6;&#x8D28;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x5206;&#x679D;&#x5B54;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x5B50;&#x884C;&#x5217;&#x5F0F;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x5468;&#x8D28;&#x56DE;&#x8DEF;&#x7684;&#x803B;&#x57A2;&#x5206;&#x679D;&#x4ECE;&#x5B54;&#x591A;&#x5143;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x6295;&#x5F71;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

MspA is the major porin of Mycobacterium smegmatis and mediates diffusion of small and hydrophilic solutes across the outer membrane. The octameric structure of MspA, its sharply defined constriction zone, and a large periplasmic loop L6 represent novel structural features. L6 consists of 13 amino acids and is directly adjacent to the constriction zone. Deletion of 3, 5, 7, 9, and 11 amino acids of the L6 loop resulted in functional pores that restored glucose uptake and growth of a porin mutant of M. smegmatis. Lipid bilayer experiments revealed that all mutant channels were noisier than wild type (wt) MspA, indicating that L6 is required for pore stability in vitro. Voltage gating of the Escherichia coli porin OmpF was attributed to loops that collapse into the channel in response to a strong electrical field. Here, we show that deletion mutants Delta7, Delta9, and Delta11 had critical voltages similar to wt MspA. This demonstrated that the L6 loop is not the primary voltage-dependent gating mechanism of MspA. Surprisingly, large deletions in L6 resulted in 3-6-fold less extractable pores, whereas small deletions did not alter expression levels of MspA. Pores with large deletions in L6 were more permissive for glucose than smaller deletion mutants, whereas their single channel conductance was similar to that of wt MspA. These results indicate that translocation of ions through the MspA pore is governed by different mechanisms than that of neutral solutes. This is the first study identifying a molecular determinant of solute translocation in a mycobacterial porin.

Functions of the periplasmic loop of the porin MspA from Mycobacterium smegmatis.

MSPA est le porine majeure de Mycobacterium smegmatis et de diffusion des solut&#xE9;s m&#xE9;die petites et hydrophile &#xE0; travers la membrane externe. La structure de la MSPA octam&#xE9;rique, sa zone d&#x26;#39;&#xE9;tranglement nettement d&#xE9;finie, et une grande boucle p&#xE9;riplasmique L6 repr&#xE9;sentent de nouvelles caract&#xE9;ristiques structurelles. L6 se compose de 13 acides amin&#xE9;s et est directement adjacente &#xE0; la zone d&#x26;#39;&#xE9;tranglement. Suppression de 3, 5, 7, 9, et 11 acides amin&#xE9;s de la boucle L6 entra&#xEE;n&#xE9; dans les pores fonctionnels qui restaur&#xE9; absorption du glucose et la croissance d&#x26;#39;un mutant porine de M. smegmatis. Exp&#xE9;riences bicouche lipidique a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que tous les canaux mutants &#xE9;taient plus bruyants que de type sauvage (wt) MSPA, indiquant que L6 est n&#xE9;cessaire pour la stabilit&#xE9; des pores in vitro. D&#xE9;clenchement de tension de l&#x26;#39;Escherichia coli porine OmpF a &#xE9;t&#xE9; attribu&#xE9; &#xE0; boucles que l&#x26;#39;effondrement dans le canal en r&#xE9;ponse &#xE0; un fort champ &#xE9;lectrique. Ici, nous montrons que des mutants de d&#xE9;l&#xE9;tion Delta7, Delta9, et Delta11 eu des tensions critiques similaires &#xE0; poids MSPA. Cela d&#xE9;montre que la boucle L6 n&#x26;#39;est pas le m&#xE9;canisme de d&#xE9;clenchement primaire d&#xE9;pendant de la tension de la MSPA. &#xC9;tonnamment, des d&#xE9;l&#xE9;tions importantes dans L6 abouti &#xE0; 3-6-plis pores moins extractibles, tandis que de petites d&#xE9;l&#xE9;tions ne modifie pas les niveaux d&#x26;#39;expression de la MSPA. Pores avec des d&#xE9;l&#xE9;tions importantes dans L6 &#xE9;taient plus permissive pour le glucose de mutants de d&#xE9;l&#xE9;tion plus petits, alors que leur seul canal de conductance &#xE9;tait semblable &#xE0; celle des poids MSPA. Ces r&#xE9;sultats indiquent que la translocation des ions &#xE0; travers le pore MSPA est r&#xE9;gi par des m&#xE9;canismes diff&#xE9;rents de ceux que des solut&#xE9;s neutres. Cette &#xE9;tude est la premi&#xE8;re identification d&#x26;#39;un d&#xE9;terminant mol&#xE9;culaire de la translocation de solut&#xE9; dans une porine mycobact&#xE9;rienne.

Fonctions de la boucle p&#xE9;riplasmique de la MSPA Porin de Mycobacterium smegmatis

MSPA es la porina importante de Mycobacterium smegmatis y la difusi&#xF3;n media de solutos peque&#xF1;os e hidr&#xF3;filas a trav&#xE9;s de la membrana externa. La estructura de octam&#xE9;rico MSPA, su zona estrictamente definida constricci&#xF3;n, y un gran bucle peripl&#xE1;smico L6 representan nuevas caracter&#xED;sticas estructurales. L6 consta de 13 amino&#xE1;cidos y es directamente adyacente a la zona de constricci&#xF3;n. Supresi&#xF3;n de 3, 5, 7, 9, y 11 amino&#xE1;cidos del bucle L6 result&#xF3; en poros funcionales que restaura la captaci&#xF3;n de glucosa y el crecimiento de un mutante de M. smegmatis porina. Experimentos bicapa lip&#xED;dica revel&#xF3; que todos los canales mutantes eran m&#xE1;s ruidosas que de tipo salvaje (wt) MSPA, indicando que L6 es necesario para la estabilidad de poro in vitro. Compuerta de voltaje de la Escherichia coli OmpF porina se atribuy&#xF3; a los bucles que colapso en el canal en respuesta a un campo el&#xE9;ctrico fuerte. Aqu&#xED;, mostramos que mutantes de deleci&#xF3;n Delta7, delta9 y Delta11 tenido tensiones cr&#xED;ticas similares a peso MSPA. Esto demostr&#xF3; que el bucle L6 no es el principal mecanismo dependiente de la tensi&#xF3;n de puerta de MSPA. Sorprendentemente, las grandes deleciones en L6 dio lugar a poros menos extra&#xED;bles 3-6-veces, mientras que peque&#xF1;as deleciones no alter&#xF3; los niveles de expresi&#xF3;n de MSPA. Los poros con deleciones grandes en L6 fueron m&#xE1;s permisiva para la glucosa que mutantes de deleci&#xF3;n m&#xE1;s peque&#xF1;as, mientras que su conductancia solo canal fue similar a la de peso MSPA. Estos resultados indican que la translocaci&#xF3;n de iones a trav&#xE9;s del poro MSPA se rige por mecanismos distintos que el de solutos neutros. Este es el primer estudio la identificaci&#xF3;n de un factor determinante molecular de la translocaci&#xF3;n de solutos en una porina por micobacterias.

Funciones del bucle peripl&#xE1;smico de la MSPA Porin de Mycobacterium smegmatis

MspA ist die gro&szlig;e porin von Mycobacterium Smegmatis und Verbreitung von kleinen und hydrophile Analyten durch die &auml;u&szlig;ere Membran vermittelt. Die Octameric MspA, seine scharf definierten Verengung-Zone und einer gro&szlig;en periplasmatischen Schleife L6 Ressourcenstruktur neuartiges strukturellen Merkmale. L6 besteht aus 13 Aminos&auml;uren und grenzt direkt an die Verengung-Zone. L&ouml;schen von 3, 5, 7, 9 und 11 Aminos&auml;uren der L6-Schleife f&uuml;hrte zu funktionalen Poren, die Glukoseaufnahme und das Wachstum von porin Mutanten von M. Smegmatis wiederhergestellt. Lipid Bilayer Experimente ergaben, dass alle mutierten Kan&auml;le lauter als Wildtyp (wt) MspA waren, darauf hinweist, dass L6 f&uuml;r in-vitro-Pore Stabilit&auml;t erforderlich ist. Spannung Anspritzung porin OmpF Escherichia-coli wurde Schleifen zugeschrieben, die in den Kanal als Reaktion auf ein starkes elektrisches Feld zu reduzieren. Hier zeigen wir, dass die L&ouml;schung Mutanten Delta7, Delta9 und Delta11 wt MspA &auml;hnlich kritische Spannungen hatte. Dies zeigte, dass die L6-Schleife nicht der prim&auml;re Spannung-abh&auml;ngigen-gating-Mechanismus der MspA ist. &Uuml;berraschenderweise ergab gro&szlig;e Deletionen in L6 3-6-fach weniger extrahierbare Poren, w&auml;hrend kleine Deletionen Ausdruck Niveaus der MspA nicht ver&auml;ndert. Poren mit gro&szlig;er Deletionen in L6 waren mehr Glukose als kleinere L&ouml;schung Mutanten, permissive, w&auml;hrend ihre single-Channel Leitwert des wt MspA vergleichbar war. Diese Ergebnisse zeigen die Umsiedlung von Ionen durch die MspA Pore durch unterschiedliche Mechanismen als die von neutralen Analyten geregelt wird. Dies ist die erste Studie, die eine molekulare Determinante der gel&ouml;sten Translokation in einem mykobakterieller porin identifizieren.

Funktionen der periplasmatischen Schleife von den porin MspA aus Mycobacterium Smegmatis.

MspA &egrave; il porin principali di Mycobacterium smegmatis e media diffusione di soluti idrofili e piccoli attraverso la membrana esterna. La struttura octameric di MspA, sua zona di costrizione nettamente definiti e un grande ciclo periplasmico L6 rappresentano romanzo caratteristiche strutturali. L6 &egrave; direttamente adiacente alla zona di costrizione e si compone di 13 aminoacidi. Delezione di 3, 5, 7, 9 e 11 amminoacidi del ciclo L6 ha provocato nei pori funzionali che ripristino l&#39;assorbimento del glucosio e la crescita di un mutante di M. smegmatis porin. Gli esperimenti del doppio strato lipidico ha rivelato che tutti i canali mutanti erano pi&ugrave; rumorosi rispetto a wild type (wt) MspA, indicando che L6 &egrave; necessaria per la stabilit&agrave; dei pori in vitro. Tensione gating dell&#39;Escherichia coli porin OmpF &egrave; stato attribuito agli anelli che collassano in canale in risposta ad un forte campo elettrico. Qui, ci mostra che mutanti di delezione Delta7, Delta9 e Delta11 ha avuto critiche tensioni simili a wt MspA. Questo ha dimostrato che il ciclo L6 non &egrave; il principale meccanismo di controllo voltaggio-dipendenti di MspA. Sorprendentemente, grandi delezioni in L6 ha portato in 3-6 volte meno pori estraibili, mentre piccole delezioni non hanno modificato i livelli di espressione di MspA. I pori con grandi delezioni in L6 erano pi&ugrave; permissivi per glucosio pi&ugrave; piccoli mutanti di delezione, mentre loro conduttanza del singolo canale era simile a quello di wt MspA. Questi risultati indicano che traslocazione degli ioni attraverso MspA poro &egrave; governata da meccanismi differenti rispetto a quello dei soluti neutri. Questo &egrave; il primo studio identifica un determinante molecolare del soluto traslocazione in un porin micobatteriche.

Funzioni del ciclo periplasmico del porin MspA da Mycobacterium smegmatis.

MSPA&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x3068;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x819C;&#x3092;&#x6A2A;&#x5207;&#x3063;&#x3066;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F;&#x3001;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002; MSPA&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6025;&#x6FC0;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304F;&#x3073;&#x308C;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;L6&#x306E;&#x516B;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; L6&#x306F;&#x3001;13&#x500B;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x53CE;&#x7E2E;&#x30BE;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 3&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x3001;5&#x3001;7&#x3001;9&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;L6&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;11&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306F;&#x3001;M.&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3068;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x305F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x5B54;&#x5185;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8102;&#x8CEA;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5C64;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;L6&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF08;wt&#xFF09;MSPA&#x3088;&#x308A;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x591A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;OmpF&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x305F;&#x5F37;&#x3044;&#x96FB;&#x5834;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x5D29;&#x58CA;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;Delta7&#x3001;Delta9&#x3068;&#x3001;Delta11&#x306F;&#x91CD;&#x91CF;MSPA&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x96FB;&#x5727;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;L6&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;MSPA&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x6B20;&#x5931;&#x304C;MSPA&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;L6&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6B20;&#x5931;&#x306F;&#x3001;3&#x304B;&#x3089;6&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x5B54;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x91CD;&#x91CF;MSPA&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;L6&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6B20;&#x5931;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x5B54;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x6B20;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5BDB;&#x5927;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;MSPA&#x5B54;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x6027;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x652F;&#x914D;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DD;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x79FB;&#x884C;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30B9;&#x30E1;&#x30B0;&#x30DE;&#x30C1;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;MSPA&#x306E;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;

MspA Mycobacterium smegmatis &#xC8FC;&#xC694; porin &#xC774;&#xBA70; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC791;&#xACE0; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; solutes&#xC758; &#xBCF4;&#xAE09;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Octameric &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; MspA, &#xAE09;&#xACA9;&#xD788; &#xC815;&#xC758; &#xAE34;&#xCD95; &#xC601;&#xC5ED; &#xBC0F; &#xB300;&#xD615; periplasmic &#xB8E8;&#xD504; L6 &#xC18C;&#xC124;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. L6 13 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC9C1;&#xC811; &#xC218;&#xCD95; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C;. 3, 5, 7, 9, &#xC0AD;&#xC81C; &#xBC0F; L6 &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; 11 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC774; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xBC0F; M. smegmatis&#xC758; porin &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBAA8; &#xACF5; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC9C0;&#xC9C8; bilayer &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCC44;&#xB110; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD0C0;&#xC785; (wt) L6 &#xAE30; &#xACF5; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; MspA &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC544;&#xC218;&#xB77C;&#xC7A5; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xACE0; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC555; OmpF porin &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xB8E8;&#xD504; &#xCC44;&#xB110; &#xAC15;&#xD55C; &#xC804;&#xAE30;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; &#xCD95;&#xC18C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Delta7, Delta9, &#xBC0F; Delta11 &#xC0AD;&#xC81C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC804;&#xC555; wt MspA &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC5F0; L6 &#xB8E8;&#xD504; Mspa&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, L6 &#xD070; &#xC0AD;&#xC81C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC774; &#xBAA8; &#xACF5; &#xB35C; 3 6 &#xBC30; &#xBC18;&#xBA74; &#xC791;&#xC740; &#xC0AD;&#xC81C; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC758; MspA &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. L6 &#xD070; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB41C; &#xBAA8; &#xACF5; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; wt MspA &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBC18;&#xBA74; &#xC791;&#xC740; &#xC0AD;&#xC81C; &#xBBA4;&#xD134;&#xD2B8; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804; &#xAE30; &#xACF5; &#xC911;&#xB9BD; solutes &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC728; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; MspA &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; mycobacterial porin&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6A9; &#xC9C8; &#xC804; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC774;&#xB2E4;.

Mycobacterium smegmatis&#xC5D0;&#xC11C; porin MspA periplasmic &#xB8E8;&#xD504;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;.

&#x78F7;&#x8102;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D1;&#x751F; de novo &#x6216;&#x901A;&#x8FC7;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x7684;&#x91CD;&#x5851;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x5B58;&#x50A8;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8DEF;&#x5F84;&#x7684;&#x6700;&#x7EC8;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferases (AGPATs) &#x4E19;&#x70EF;&#x9178;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9178; (LPA) &#x7684; sn-2 (&#x78B3; 2) &#x4F4D;&#x7F6E;&#x4EA7;&#x751F;&#x78F7;&#x8102;&#x9178; (PA)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9176;&#x53C2;&#x4E0E;&#x78F7;&#x8102;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6D89;&#x53CA;&#x4E32;&#x884C; acylations &#x7684;&#x7518;&#x6CB9;-3-&#x78F7;&#x9178;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x514B;&#x9686;&#x7684; cDNA &#x9884;&#x8BA1; AGPAT &#x5F02;&#x6784;&#x4F53; &#xFF08;AGPAT10&#xFF09;&#x3002;&#x6B64; cDNA &#x6700;&#x8FD1;&#x5217;&#x4E3A;&#x7518;&#x6CB9;-3-&#x78F7;&#x9178;-O-&#x9170;&#x9F3B;&#x606F;&#x8089; 3 (GPAT3)&#x3002;&#x5F53;&#x6B64; AGPAT10/GPAT3 cDNA &#x4E0E;&#x4F1A;&#x8005;&#x5728;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x5375;&#x5DE2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x65F6;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4EA7;&#x54C1;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x611F;&#x67D3;&#x91CD;&#x7EC4; AGPAT10/GPAT3 &#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x663E;&#x793A;&#x86CB;&#x767D;&#x5177;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684; 2 nmol/min &#x6BCF;&#x6BEB;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; V(max) &#x4E0E;&#x9C81;&#x68D2; AGPAT &#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x904F;&#x5236;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4EBA;&#x80DA;&#x80BE; 293 &#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6B64; AGPAT &#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x57FA;&#x677F;&#x7279;&#x6B8A;&#x6027; LPA &#x548C;&#x9170; CoA &#x4E3A;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;AGPAT2 &#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A;&#x5F53;&#x6297;&#x539F;&#x5728; sh-RNA-AGPAT2-&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; AGPAT &#x6D3B;&#x52A8;&#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x4EBA;&#x554A; 7 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x518D;&#x6B21;&#x8868;&#x660E; AGPAT &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4EE5;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; GPAT3 &#x7684; cDNA AGPAT &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x6211;&#x4EEC;&#x66F4;&#x613F;&#x610F;&#x6807;&#x8BC6;&#x6B64;&#x514B;&#x9686;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E3A; AGPAT10&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase &#x9F3B;&#x606F;&#x8089; 10/&#x7518;&#x6CB9;-3-&#x78F7;&#x9178;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53; 3 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;

Synthesis of phospholipids can occur de novo or via remodeling of the existing phospholipids. Synthesis of triglycerides, a form of energy storage in cells, is an end product of these pathways. Several 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferases (AGPATs) acylate lysophosphatidic acid (LPA) at the sn-2 (carbon 2) position to produce phosphatidic acid (PA). These enzymes are involved in phospholipids and triglyceride synthesis through an evolutionary conserved process involving serial acylations of glycerol-3-phosphate. We cloned a cDNA predicted to be an AGPAT isoform (AGPAT10). This cDNA has been recently identified as glycerol-3-phosphate-O-acyltransferase isoform 3 (GPAT3). When this AGPAT10/GPAT3 cDNA was expressed in Chinese Hamster ovary cells, the protein product localizes to the endoplasmic reticulum. In vitro enzymatic activity using lysates of human embryonic kidney-293 cells infected with recombinant AGPAT10/GPAT3 adenovirus show that the protein has a robust AGPAT activity with an apparent V(max) of 2 nmol/min per mg protein, but lacks GPAT enzymatic activity. This AGPAT has similar substrate specificities for LPA and acyl-CoA as shown for another known isoform, AGPAT2. We further show that when overexpressed in human Huh-7 cells depleted of endogenous AGPAT activity by sh-RNA-AGPAT2-lentivirus, the protein again demonstrates AGPAT activity. These observations strongly suggest that the cDNA previously identified as GPAT3 has AGPAT activity and thus we prefer to identify this clone as AGPAT10 as well.

Functional characterization of the human 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase isoform 10/glycerol-3-phosphate acyltransferase isoform 3.

Synth&#xE8;se des phospholipides peuvent survenir de novo ou par remodelage des phospholipides existants. Synth&#xE8;se des triglyc&#xE9;rides, une forme de stockage de l&#x26;#39;&#xE9;nergie dans les cellules, est un produit final de ces voies. Plusieurs 1-acylglyc&#xE9;rol-3-phosphate-O-acyltransf&#xE9;rases (AGPATs) acylate acide lysophosphatidique (LPA) &#xE0; la sn-2 (carbone 2) mesure de produire de l&#x26;#39;acide phosphatidique (PA). Ces enzymes sont impliqu&#xE9;es dans la synth&#xE8;se des triglyc&#xE9;rides et des phospholipides &#xE0; travers un processus &#xE9;volutif conserv&#xE9;e impliquant acylations s&#xE9;rie de glyc&#xE9;rol-3-phosphate. Nous avons clon&#xE9; un ADNc pr&#xE9;vu pour &#xEA;tre une isoforme AGPAT (AGPAT10). Cet ADNc a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;cemment identifi&#xE9; comme le glyc&#xE9;rol-3-phosphate-O-acyltransf&#xE9;rase isoforme 3 (GPAT3). Lorsque cet ADNc AGPAT10/GPAT3 a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9; dans des cellules ovariennes de hamster chinois, le produit de la prot&#xE9;ine se localise dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique. In vitro l&#x26;#39;activit&#xE9; enzymatique en utilisant des lysats de rein d&#x26;#39;embryon humain-293 cellules infect&#xE9;es par un virus recombinant &#xE9;mission ad&#xE9;novirus AGPAT10/GPAT3 que la prot&#xE9;ine a une activit&#xE9; AGPAT solide avec une apparente V (max) de 2 nmol / mn par mg de prot&#xE9;ine, mais manque GPAT activit&#xE9; enzymatique . Cette AGPAT a des sp&#xE9;cificit&#xE9;s de substrat similaires pour l&#x26;#39;APL et l&#x26;#39;acyl-CoA comme le montre un autre isoforme connue, AGPAT2. Nous montrons en outre que lorsqu&#x26;#39;il est surexprim&#xE9; dans de l&#x26;#39;homme Huh-7 cellules appauvries de l&#x26;#39;activit&#xE9; AGPAT endog&#xE8;ne par sh-ARN-AGPAT2-lentivirus, la prot&#xE9;ine d&#xE9;montre &#xE0; nouveau l&#x26;#39;activit&#xE9; AGPAT. Ces observations sugg&#xE8;rent fortement que l&#x26;#39;ADNc pr&#xE9;c&#xE9;demment identifi&#xE9;e comme GPAT3 a une activit&#xE9; AGPAT et donc nous pr&#xE9;f&#xE9;rons pour identifier ce clone comme AGPAT10 ainsi.

Caract&#xE9;risation fonctionnelle de l&#x26;#39;10/glycerol-3-phosphate Isoform 1-acylglyc&#xE9;rol-3-phosphate-O-acyltransf&#xE9;rase humaines acyltransf&#xE9;rase isoforme 3

Synthese von Phospholipiden kann auftreten, de Novo oder &uuml;ber den Umbau der vorhandenen Phospholipiden. Synthese von Triglyceriden, eine Form der Energiespeicherung in Zellen, ist ein Endprodukt der diese Bahnen. Mehrere 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferases (AGPATs) Acylate Lysophosphatidic Acid (LPA) an der Position der sn-2-2 (Karbon), Phosphatids&auml;ure S&auml;ure (PA) zu produzieren. Diese Enzyme sind an Phospholipide und Triglycerid-Synthese durch konservierte Evolutionsprozesses mit seriellen Acylations von Glycerin-3-Phosphat beteiligt. Wir geklont eine DNA, die voraussichtlich eine AGPAT Isoform (AGPAT10). Diese cDNA wurde vor kurzem als Glycerin-3-Phosphat-O-Acyltransferase Isoform 3 (GPAT3) identifiziert. Wenn diese AGPAT10/GPAT3-cDNA in Chinese Hamster Eierstock Zellen ausgedr&uuml;ckt wurde, lokalisiert das Protein-Produkt auf dem Endoplasmatischen Retikulum. In-vitro-enzymatische Aktivit&auml;t mit Lysates menschlicher embryonaler Niere-293-Zellen mit rekombinanten AGPAT10/GPAT3-Adenovirus-zeigen, dass das Protein eine robuste AGPAT-Aktivit&auml;t mit einer scheinbaren V(max) 2 Nmol/min. pro mg Protein hat, aber GPAT enzymatische Aktivit&auml;t fehlen infiziert. Diese AGPAT hat &auml;hnliche Substrat Besonderheiten f&uuml;r LPA und wie dies bei einem anderen bekannten Isoform, AGPAT2-Acyl-CoA. Weiter zeigen wir, dass beim Pleuramesotheliom in den menschlichen Huh-7-Zellen, die endogene AGPAT Aktivit&auml;t von sh-RNA-AGPAT2-Lentiviren ausgelaugt, das Protein wieder AGPAT Aktivit&auml;t zeigt. Diese Beobachtungen empfehlen dringend, dass die DNA, die zuvor als GPAT3 identifiziert AGPAT Ereignisse hat und damit wir bevorzugen diese Klon als auch als AGPAT10 zu identifizieren.

Funktionelle Charakterisierung der menschlichen 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase Isoform 10/Glycerin-3-Phosphat-Acyltransferase Isoform 3.

Sintesi dei fosfolipidi possono verificarsi de novo o via che ritocca i fosfolipidi esistenti. La sintesi dei trigliceridi, una forma di accumulo di energia nelle cellule, &egrave; un prodotto finale di questi percorsi. Diversi 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferases (AGPATs) acilare lysophosphatidic acido (LPA) alla posizione sn-2 (carbonio 2) per la produzione di acido fosfatidico (PA). Questi enzimi sono coinvolti nella sintesi dei trigliceridi attraverso un processo evolutivo conservato che coinvolgono seriale acylations di glicerolo-3-fosfato e fosfolipidi. Abbiamo clonato un cDNA previsto per un&#39;isoforma AGPAT (AGPAT10). Questo cDNA &egrave; stato recentemente identificato come glicerolo-3-fosfato-O-aciltransferasi isoforma 3 (GPAT3). Quando questo cDNA AGPAT10/GPAT3 &egrave; stato espresso nelle cellule di ovaio di criceto cinese, il prodotto della proteina localizza il reticolo endoplasmatico. Attivit&agrave; enzimatica in vitro utilizzando lisati di cellule di rene-293 embrionali umane infettate con ricombinante Visualizza adenovirus AGPAT10/GPAT3 che la proteina ha una robusta attivit&agrave; AGPAT con un&#39;apparente FV 2 nmol/min per proteina mg, ma manca di attivit&agrave; enzimatica GPAT. Questo AGPAT ha simile specificit&agrave; di substrato per LPA e acil-CoA come mostrato per un altro noto isoforma, AGPAT2. Mostriamo ulteriormente quando overexpressed in cellule umane Huh-7 impoverite di attivit&agrave; AGPAT endogena da sh-RNA-AGPAT2-lentivirus, la proteina dimostra ancora una volta attivit&agrave; AGPAT. Queste osservazioni suggeriscono fortemente che il cDNA precedentemente identificato come GPAT3 ha un&#39;attivit&agrave; AGPAT e cos&igrave; noi preferiamo identificare questo clone come AGPAT10 pure.

Caratterizzazione funzionale dell&#39;isoforma 10-glicerolo-3-fosfato aciltransferasi isoforma 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase umano 3.

&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306F;de novo&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8CAF;&#x8535;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7523;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;PA&#xFF09;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;sn-2&#x4F4D;&#xFF08;&#x30AB;&#x30FC;&#x30DC;&#x30F3;2&#xFF09;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;1  - &#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;-O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AGPATs&#xFF09;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;LPA&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30C9;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;cDNA&#x3092;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;AGPAT&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#xFF08;AGPAT10&#xFF09;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;cDNA&#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;-O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;3&#xFF08;GPAT3&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;AGPAT10/GPAT3 cDNA&#x3092;&#x30C1;&#x30E3;&#x30A4;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5375;&#x5DE3;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;mg&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5F53;&#x305F;&#x308A;2 nmol /&#x5206;&#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;V&#xFF08;&#x6700;&#x5927;&#xFF09;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5805;&#x7262;&#x306A;AGPAT&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;GPAT&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;AGPAT10/GPAT3&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x6027;&#x814E;&#x81D3;293&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6EB6;&#x89E3;&#x7269;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;in vitro&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x3002;&#x5225;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;AGPAT2&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;AGPAT&#x306F;&#x3001;LPA&#x3068;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;SH-RNA-AGPAT2-&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;AGPAT&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;Huh-7&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x518D;&#x3073;AGPAT&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x200B;&#x200B;&#x5BDF;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;GPAT3&#x304C;AGPAT&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;AGPAT10&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x597D;&#x3080;&#x3088;&#x3046;&#x306B;cDNA&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;1-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;-O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;10/glycerol-3-phosphate&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;3&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;

&#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xC874; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574;. &#xD2B8;&#xB9AC; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC;, &#xC140;&#xC5D0; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC800;&#xC7A5;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xD569;&#xC131;&#xC774;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xB05D; &#xC81C;&#xD488;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferases (AGPATs) acylate lysophosphatidic (LPA)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B0; phosphatidic &#xC0B0; (PA)&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; sn-2 (&#xD0C4;&#xC18C; 2) &#xC704;&#xCE58;. &#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xB294; &#xC778;&#xC9C0;&#xC9C8;&#xACFC; triglyceride &#xD569;&#xC131; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; 3 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xC758; &#xC9C1;&#xB82C; acylations &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC9C4;&#xD654; &#xBCF4;&#xC874; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; AGPAT isoform (AGPAT10) &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xCE21; &#xD558;&#xB294; Cdna&#xB97C; &#xBCF5;&#xC81C;. &#xC774; cDNA &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; 3 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; O acyltransferase isoform 3 (GPAT3)&#xC73C;&#xB85C; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; AGPAT10/GPAT3 cDNA &#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; &#xB09C;&#xC18C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xD488; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; localizes. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; AGPAT10/GPAT3 &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC1FC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 nmol/mg &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xB2F9; &#xBD84;&#xC758; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; v(max)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; AGPAT &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; GPAT &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC871;&#xC744; &#xBD88;&#xC5B4;&#xB123;&#xC5B4; &#xC778;&#xAC04; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0;&#xC7A5;-293 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; lysates&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCCB4; &#xC678; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;. &#xC774; AGPAT&#xC5D0;&#xB294; LPA&#xC640; acyl CoA &#xB2E4;&#xB978; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; isoform, agpat2&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xC26C;-RNA-AGPAT2-lentivirus &#xC5EC; &#xC0DD; AGPAT &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD5C8; 7 &#xC140;&#xC5D0; overexpressed &#xB54C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB294; AGPAT &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30;&#xC774; gpat3&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; Cdna&#xB294; AGPAT &#xD65C;&#xB3D9; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; agpat10&#xC774;&#xC774; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC120;&#xD638; &#xD558;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; 1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase isoform 10/&#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864;-3-&#xC778;&#xC0B0; acyltransferase isoform 3&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;.

S&#xED;ntesis de fosfol&#xED;pidos puede ocurrir de novo o mediante la remodelaci&#xF3;n de los fosfol&#xED;pidos existentes. S&#xED;ntesis de triglic&#xE9;ridos, una forma de almacenamiento de energ&#xED;a en las c&#xE9;lulas, es un producto final de estas v&#xED;as. Varios 1-acilglicerol-3-fosfato-O-aciltransferasas (AGPATs) acilato &#xE1;cido lisofosfat&#xED;dico (LPA) en el sn-2 (carbono 2) condiciones de producir &#xE1;cido fosfat&#xED;dico (PA). Estas enzimas est&#xE1;n implicadas en la s&#xED;ntesis de fosfol&#xED;pidos y triglic&#xE9;ridos a trav&#xE9;s de un proceso evolutivo conservada que implica acilaciones serie de glicerol-3-fosfato. Hemos clonado un ADNc prev&#xE9; que sea una isoforma AGPAT (AGPAT10). Este ADNc se ha identificado recientemente como glicerol-3-fosfato-O-aciltransferasa isoforma 3 (GPAT3). Cuando esto AGPAT10/GPAT3 cDNA fue expresada en c&#xE9;lulas de ovario de h&#xE1;mster chino, el producto de prote&#xED;na se localiza en el ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico. En la actividad enzim&#xE1;tica in vitro utilizando lisados &#x200B;&#x200B;de ri&#xF1;&#xF3;n embrionario humano 293-c&#xE9;lulas infectadas con el adenovirus recombinante muestran AGPAT10/GPAT3 que la prote&#xED;na tiene una actividad AGPAT robusta con una aparente V (max) de 2 nmol / min por mg de prote&#xED;na, pero carece de actividad enzim&#xE1;tica GPAT . Este AGPAT tiene especificidades de sustrato similares para LPA y acil CoA-como se muestra por otra isoforma conocida, AGPAT2. Adem&#xE1;s, muestran que cuando se sobreexpresa en humanos Huh-7 agotadas las c&#xE9;lulas de la actividad end&#xF3;gena AGPAT por sh-ARN-AGPAT2-lentivirus, la prote&#xED;na vuelve a demostrar la actividad AGPAT. Estas observaciones sugieren fuertemente que el cDNA identificado previamente como GPAT3 tiene actividad AGPAT y por lo tanto se prefiere para identificar este clon como AGPAT10 tambi&#xE9;n.

Caracterizaci&#xF3;n funcional de la isoforma humana 10/glycerol-3-phosphate 1-acilglicerol-3-fosfato-O-aciltransferasa Aciltransferasa Isoforma 3

Human rabies still continues to be a significant health problem in India and other developing countries where dogs are the major vectors of transmission. Rabies in humans can present in two clinical forms, i.e., furious and paralytic. While diagnosis of furious rabies can be made based on the typical symptoms and signs, paralytic rabies poses a diagnostic dilemma to the neurologists who may encounter these cases in their practice. Although there are certain clinical features that distinguish this disease from other forms of Guillain-Barre syndromes, confirmation of diagnosis may require laboratory assistance. Conventional techniques such as antigen detection, antibody assays and virus isolation have limited success. The recently introduced molecular techniques show more promise in confirming the cases of paralytic rabies. There has not been much success in the treatment of confirmed rabies cases and recovery from rabies is extremely rare. Therefore, preventive measures of this dreaded disease after an exposure become extremely important. The present article reviews the current status of human rabies with regard to antemortem diagnosis, disease management and post-exposure prophylaxis.

Antemortem diagnosis and prevention of human rabies.

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La rage humaine continue &#xE0; &#xEA;tre un important probl&#xE8;me de sant&#xE9; en Inde et dans d&#x26;#39;autres pays en d&#xE9;veloppement o&#xF9; les chiens sont les principaux vecteurs de transmission. La rage chez les humains peuvent se pr&#xE9;senter sous deux formes cliniques, c&#x26;#39;est &#xE0; dire, furieux et paralytique. Bien que le diagnostic de la rage furieuse peut &#xEA;tre faite sur la base des sympt&#xF4;mes et signes typiques, la rage paralytique pose un dilemme diagnostique pour les neurologues qui peuvent rencontrer ces cas dans leur pratique. Bien qu&#x26;#39;il existe certaines caract&#xE9;ristiques cliniques qui distinguent cette maladie &#xE0; partir d&#x26;#39;autres formes de syndromes de Guillain-Barr&#xE9;, la confirmation du diagnostic peut avoir besoin d&#x26;#39;aide de laboratoire. Les techniques conventionnelles telles que la d&#xE9;tection d&#x26;#39;antig&#xE8;nes, titrages d&#x26;#39;anticorps et d&#x26;#39;isolement du virus ont un succ&#xE8;s limit&#xE9;. Les techniques introduites r&#xE9;cemment mol&#xE9;culaires sont plus prometteurs &#xE0; confirmer les cas de rage paralytique. Il n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; un grand succ&#xE8;s dans le traitement des cas de rage confirm&#xE9;s et de r&#xE9;cup&#xE9;ration de la rage est extr&#xEA;mement rare. Par cons&#xE9;quent, les mesures de pr&#xE9;vention de cette terrible maladie apr&#xE8;s une exposition est devenue extr&#xEA;mement importante. Le pr&#xE9;sent article examine l&#x26;#39;&#xE9;tat actuel de la rage humaine en ce qui concerne le diagnostic ante-mortem, la gestion des maladies et prophylaxie post-exposition.

Diagnostic ante-mortem et la pr&#xE9;vention de la rage humaine

Menschlicher Tollwut weiterhin erhebliche gesundheitliche Probleme in Indien und andere Entwicklungsl&auml;nder wo Hunde sind die wichtigsten &Uuml;bertr&auml;ger von. Tollwut beim Menschen kann in zwei klinische Formen, d. h. w&uuml;tend und paralytischer pr&auml;sentieren. W&auml;hrend Diagnostik der w&uuml;tende Tollwut anhand der typischen Symptome und Zeichen gebildet werden kann, stellt paralytischer Tollwut eine diagnostische Dilemma der Neurologen, die diese F&auml;lle in der Praxis auftreten k&ouml;nnen. Zwar gibt es bestimmte klinische Merkmale, die diese Krankheit von anderen Formen des Guillain-Barr&eacute; Syndrome unterscheiden, kann Best&auml;tigung der Diagnose Labor Hilfe ben&ouml;tigen. Herk&ouml;mmliche Verfahren wie Antigennachweis, Antik&ouml;rper Assays und Virusisolierung haben begrenzten Erfolg. Die k&uuml;rzlich eingef&uuml;hrten molekularen Techniken zeigen mehr Versprechen bei der Best&auml;tigung die F&auml;lle von paralytischer Tollwut. Es wurde nicht viel Erfolg bei der Behandlung der best&auml;tigten Tollwut-F&auml;lle und Erholung von Tollwut ist &auml;u&szlig;erst selten. Daher werden vorbeugende Ma&szlig;nahmen dieser gef&uuml;rchteten Krankheit nach einer Exposition &auml;u&szlig;erst wichtig. Der vorliegende Artikel Bewertungen den aktuellen Status der menschlichen Tollwut hinsichtlich aufgrund Diagnostik, Behandlung und Postexpositionsprophylaxe.

Aufgrund Diagnose und Pr&auml;vention der menschlichen Tollwut.

Rabbia umana continua ancora ad essere un problema significativo per la salute in India e altri paesi in via di sviluppo dove i cani sono i principali vettori di trasmissione. Rabbia negli esseri umani pu&ograve; presentare in due forme cliniche, cio&egrave;, furioso e paralitico. Mentre la diagnosi di rabbia furiosa pu&ograve; essere fatta in basata ai tipici sintomi e segni, rabbia paralitica pone un dilemma diagnostico per i neurologi che possono incontrare questi casi nella loro pratica. Anche se ci sono determinate caratteristiche cliniche che contraddistinguono questa malattia da altre forme di sindromi di Guillain-Barre, conferma della diagnosi pu&ograve; richiedere assistenza di laboratorio. Le tecniche convenzionali quali l&#39;individuazione dell&#39;antigene, anticorpo dosaggi e l&#39;isolamento del virus hanno un successo limitato. Il recentemente introdotte tecniche molecolari Visualizza pi&ugrave; promessa a confermare i casi di rabbia paralitica. Non c&#39;&egrave; stato molto successo nel trattamento di casi di rabbia confermata e ripresa dalla rabbia &egrave; estremamente rara. Pertanto, misure di prevenzione di questa temuta malattia dopo un&#39;esposizione diventano estremamente importante. Il presente articolo cliente lo stato attuale della rabbia umana per quanto riguarda la diagnosi ante mortem, gestione delle malattie e profilassi post-esposizione.

Ante mortem diagnosi e prevenzione della rabbia umana.

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Antemortem &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04; &#xAD11;&#xACAC;&#xBCD1;&#xC758; &#xC608;&#xBC29;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La rabia humana contin&#xFA;a siendo un problema significativo para la salud en la India y otros pa&#xED;ses en desarrollo donde los perros son los principales vectores de transmisi&#xF3;n. La rabia en los seres humanos pueden presentar en dos formas cl&#xED;nicas, es decir, furiosa y paral&#xED;tica. Si bien el diagn&#xF3;stico de rabia furiosa se puede hacer sobre la base de los s&#xED;ntomas y signos t&#xED;picos, rabia paral&#xED;tica plantea un dilema de diagn&#xF3;stico a los neur&#xF3;logos que se pueden encontrar estos casos en su pr&#xE1;ctica. Aunque hay ciertas caracter&#xED;sticas cl&#xED;nicas que distinguen a esta enfermedad de otras formas de s&#xED;ndromes de Guillain-Barr&#xE9;, la confirmaci&#xF3;n del diagn&#xF3;stico puede requerir la asistencia de laboratorio. Las t&#xE9;cnicas convencionales tales como la detecci&#xF3;n de ant&#xED;genos, anticuerpos y ensayos de aislamiento del virus se han limitado &#xE9;xito. Las t&#xE9;cnicas introducidas recientemente moleculares m&#xE1;s prometedores en la confirmaci&#xF3;n de los casos de rabia paral&#xED;tica. No ha habido mucho &#xE9;xito en el tratamiento de casos de rabia confirmados y la recuperaci&#xF3;n de la rabia es extremadamente rara. Por lo tanto, las medidas de prevenci&#xF3;n de esta terrible enfermedad despu&#xE9;s de una exposici&#xF3;n a ser extremadamente importante. El presente art&#xED;culo revisa el estado actual de la rabia humana en relaci&#xF3;n con el diagn&#xF3;stico antes de la muerte, la gesti&#xF3;n de la enfermedad y la profilaxis post-exposici&#xF3;n.

Antemortem diagn&#xF3;stico y la prevenci&#xF3;n de la rabia humana

1-&#x6CB9;&#x8102;-3-&#x78F7;&#x9178; O-&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; (AGPAT) &#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20; 2 &#x529F;&#x80FD;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E22;&#x5931;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x767D;&#x8272;&#x548C;&#x68D5;&#x8272;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE;&#x51FA;&#x751F;&#x3002;AGPAT2 &#x751F;&#x6210;&#x7684; glycerophospholipids &#x548C;&#x7518;&#x6CB9;&#x4E09;&#x916F;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x3002;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6216;&#x8102;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5F02;&#x5E38;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9AD8;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x8840;&#x75C7;&#x3001; &#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3001; &#x91CD;&#x5EA6;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x4EBA;&#x7C7B; AGPAT2 &#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7279;&#x6027;&#x548C;&#x5176;&#x5BC6;&#x5207;&#x7684;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#xFF0C;AGPAT1&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7531;&#x6C19;&#x6C14;&#x901A;&#x8FC7;&#x91CD;&#x7EC4;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; Agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x53CA;&#x5176;&#x8868;&#x8FBE;&#x7814;&#x7A76;&#x5176;&#x5728;&#x809D;&#x810F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;AGPAT1 &#x548C; AGPAT2 &#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x57FA;&#x677F;&#x5177;&#x4F53;&#x60C5;&#x51B5;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9178;&#x548C;&#x8102;&#x9170; CoA &#x975E;&#x5E38;&#x76F8;&#x4F3C;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; AGPATs &#x4E0E;&#x7518;&#x6CB9;-3-&#x78F7;&#x9178;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176; 1 (GPAT1) &#x900F;&#x9732;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E09;&#x7EA7;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x7B26;&#x5408;&#x5176;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x5F53; co-expressed&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53; co-localize &#x5230;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#xFF0C;&#x6062;&#x590D;&#x6240;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; AGPAT1 &#x6216; AGPAT2 Agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x810F;&#x4E2D;&#x7684; AGPAT &#x6D3B;&#x52A8;&#x672A;&#x80FD;&#x6539;&#x5584;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x3002;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5728;&#x809D;&#x8C03;&#x63A7; AGPAT1 &#x6216; AGPAT2 &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x6700;&#x5C0F;&#x548C;&#x809D;&#x810F;&#x8102;&#x80AA;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x7684;&#x540E;&#x679C;&#x548C;&#x635F;&#x5931; Agpat2(-/-) &#x5C0F;&#x9F20;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; 1-&#x6CB9;&#x8102;-3-&#x78F7;&#x9178; O-&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x9176; 1 &#x548C; 2&#xFF1A; &#x751F;&#x5316;&#x7279;&#x6027;&#x548C;&#x65E0;&#x529B;&#x62EF;&#x6551; Agpat2(-/-) &#x57FA;&#x56E0; lipodystrophic &#x5C0F;&#x9F20;&#x809D;&#x8102;&#x80AA;&#x3002;

Loss-of-function mutations in 1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase (AGPAT) 2 in humans and mice result in loss of both the white and brown adipose tissues from birth. AGPAT2 generates precursors for the synthesis of glycerophospholipids and triacylglycerols. Loss of adipose tissue, or lipodystrophy, results in hyperinsulinemia, diabetes mellitus, and severe hepatic steatosis. Here, we analyzed biochemical properties of human AGPAT2 and its close homolog, AGPAT1, and we studied their role in liver by transducing their expression via recombinant adenoviruses in Agpat2(-/-) mice. The in vitro substrate specificities of AGPAT1 and AGPAT2 are quite similar for lysophosphatidic acid and acyl-CoA. Protein homology modeling of both the AGPATs with glycerol-3-phosphate acyltransferase 1 (GPAT1) revealed that they have similar tertiary protein structure, which is consistent with their similar substrate specificities. When co-expressed, both isoforms co-localize to the endoplasmic reticulum. Despite such similarities, restoring AGPAT activity in liver by overexpression of either AGPAT1 or AGPAT2 in Agpat2(-/-) mice failed to ameliorate the hepatic steatosis. From these studies, we suggest that the role of AGPAT1 or AGPAT2 in liver lipogenesis is minimal and that accumulation of liver fat is primarily a consequence of insulin resistance and loss of adipose tissue in Agpat2(-/-) mice.

Human 1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase isoforms 1 and 2: biochemical characterization and inability to rescue hepatic steatosis in Agpat2(-/-) gene lipodystrophic mice.

Perte de fonction des mutations dans 1-acylglyc&#xE9;rol-3-phosphate O-acyltransf&#xE9;rase (AGPAT) 2 chez les humains et les souris en r&#xE9;sultat la perte de deux des tissus adipeux blanc et brun, de la naissance. AGPAT2 g&#xE9;n&#xE8;re pr&#xE9;curseurs pour la synth&#xE8;se de glyc&#xE9;rophospholipides et triacylglyc&#xE9;rols. La perte de tissu adipeux, ou lipodystrophie, les r&#xE9;sultats de l&#x26;#39;hyperinsulin&#xE9;mie, le diab&#xE8;te sucr&#xE9;, et &#xE0; une st&#xE9;atose h&#xE9;patique s&#xE9;v&#xE8;re. Ici, nous avons analys&#xE9; les propri&#xE9;t&#xE9;s biochimiques de l&#x26;#39;homme et son homologue AGPAT2 pr&#xE8;s, AGPAT1, et nous avons &#xE9;tudi&#xE9; leur r&#xF4;le dans le foie par transduction leur expression par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;ad&#xE9;novirus recombinants dans AGPAT2 (- / -) chez la souris. Le sp&#xE9;cificit&#xE9;s de substrat dans in vitro de AGPAT1 et AGPAT2 sont assez semblables pour l&#x26;#39;acide lysophosphatidique et l&#x26;#39;acyl-CoA. La mod&#xE9;lisation par homologie des prot&#xE9;ines &#xE0; la fois des AGPATs avec le glyc&#xE9;rol-3-phosphate acyltransf&#xE9;rase 1 (GPAT1) a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; qu&#x26;#39;ils ont m&#xEA;me structure tertiaire de la prot&#xE9;ine, ce qui est coh&#xE9;rent avec leurs sp&#xE9;cificit&#xE9;s de substrat similaires. Lors de la co-exprim&#xE9;, les deux isoformes de co-localiser dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique. Malgr&#xE9; ces similitudes, le r&#xE9;tablissement de l&#x26;#39;activit&#xE9; dans le foie AGPAT par la surexpression de deux ou AGPAT1 AGPAT2 dans AGPAT2 (- / -) chez la souris n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;am&#xE9;liorer la st&#xE9;atose h&#xE9;patique. De ces &#xE9;tudes, nous sugg&#xE9;rons que le r&#xF4;le de AGPAT1 ou de la lipogen&#xE8;se h&#xE9;patique AGPAT2 est minime et que l&#x26;#39;accumulation de graisse du foie est avant tout une cons&#xE9;quence de r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;insuline et la perte de tissu adipeux dans AGPAT2 (- / -) chez la souris.

Human 1-acylglyc&#xE9;rol-3-phosphate O-acyltransf&#xE9;rase isoformes 1 et 2: caract&#xE9;risation biochimique et Incapacit&#xE9; de sauvetage st&#xE9;atose h&#xE9;patique dans AGPAT2 (- / -) Souris lipodystrophiques Gene

Loss of Function-Mutationen im 1-Acylglycerol-3-Phosphat O-Acyltransferase (AGPAT) 2 bei Menschen und M&auml;usen f&uuml;hren zu Verlust von beiden die wei&szlig;e und braune Fettgewebe von der Geburt. AGPAT2 generiert Ausgangsstoffe f&uuml;r die Synthese von Glycerophospholipids und Triacylglycerol. Verlust von Fettgewebe und Lipodystrophie, f&uuml;hrt Hyperinsulin&auml;mie, Diabetes Mellitus und schwere hepatische Steatose. Hier wir analysierten biochemische Eigenschaften der menschlichen AGPAT2 und seine enge Homolog, AGPAT1, und wir ihre Rolle in der Leber durch transducing ihren Ausdruck &uuml;ber rekombinante Adenoviren Agpat2(-/-) M&auml;usen untersucht. Die in-vitro-Substrat Besonderheiten der AGPAT1 und AGPAT2 sind ziemlich &auml;hnlich f&uuml;r Lysophosphatidic Acid und Coenzym a. Protein Homologie Modellierung von beiden die AGPATs mit Glycerin-3-Phosphat-Acyltransferase 1 (GPAT1) ergab, dass sie &auml;hnliche terti&auml;ren Protein haben-Struktur, die mit ihrer &auml;hnlichen Substrat Besonderheiten im Einklang steht. Wenn co-expressed, beide Isoformen co-localize zu dem Endoplasmatischen Retikulum. Trotz dieser &Auml;hnlichkeiten Fehler bei der Wiederherstellung von AGPAT Aktivit&auml;t in der Leber durch eine &Uuml;berexpression von entweder AGPAT1 oder AGPAT2 bei Agpat2(-/-) M&auml;usen zur Besserung der hepatischen Steatose. Aus diesen Studien empfehlen wir, dass die Rolle des AGPAT1 oder AGPAT2 in der Leber Lipogenese minimal ist und Anh&auml;ufung von Leber Fett in erster Linie eine Folge des Insulin-Resistenz und Verlust des Fettgewebes bei Agpat2(-/-) M&auml;usen ist.

Menschliche 1-Acylglycerol-3-Phosphat-O-Acyltransferase-Isoformen 1 und 2: Biochemische Charakterisierung und Unf&auml;higkeit, hepatische Steatose Agpat2(-/-) Gen Lipodystrophic M&auml;usen zu retten.

Mutazioni con perdita di funzione in 1-acilglicerolo-3-fosfato O-aciltransferasi (AGPAT) 2 in esseri umani e topi comportare la perdita di entrambi i colori bianchi e marroni tessuti adiposi dalla nascita. AGPAT2 genera dei precursori per la sintesi di glycerophospholipids e triacylglycerols. Perdita di tessuto adiposo, o lipodistrofia, risultati in iperinsulinemia, diabete mellito e steatosi epatica grave. Qui, abbiamo analizzato le propriet&agrave; biochimiche di AGPAT2 umana e il suo stretto omologo, AGPAT1, e abbiamo studiato il loro ruolo nel fegato da transducing loro espressione tramite adenovirus ricombinante nei topi Agpat2(-/-). La specificit&agrave; di substrato in vitro di AGPAT1 e AGPAT2 sono abbastanza simili per acido lysophosphatidic e acil-CoA. Modellazione di omologia di proteina di entrambe le AGPATs con glicerolo-3-fosfato aciltransferasi 1 (GPAT1) ha rivelato che hanno simili proteine terziarie struttura, che &egrave; coerenza con la loro specificit&agrave; di substrato simile. Quando co-expressed, entrambi isoforme co-localize al reticolo endoplasmatico. Nonostante tali somiglianze, ripristinando l&#39;attivit&agrave; AGPAT nel fegato di sovraespressione di AGPAT1 o di AGPAT2 in Agpat2(-/-) topi non &egrave; riuscito a migliorare la steatosi epatica. Da questi studi, suggeriamo che il ruolo di AGPAT1 o AGPAT2 nella lipogenesi epatica &egrave; minimo e che l&#39;accumulo di fegato grasso &egrave; principalmente una conseguenza della resistenza all&#39;insulina e la perdita di tessuto adiposo in topi Agpat2(-/-).

Umano 1-acilglicerolo-3-fosfato O-aciltransferasi isoforme 1 e 2: caratterizzazione biochimica e l&#39;incapacit&agrave; di salvare la steatosi epatica in topi di Agpat2(-/-) gene lipodistrofiche.

&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x751F;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x304B;&#x3089;&#x767D;&#x3068;&#x8910;&#x8272;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;1-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x306E;O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;AGPAT&#xFF09;2&#x3002; AGPAT2&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8102;&#x8CEA;&#x3068;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30EA;&#x30DD;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3001;&#x9AD8;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x8840;&#x75C7;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3001;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;AGPAT2&#x3068;&#x306E;&#x7DCA;&#x5BC6;&#x306A;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3001;AGPAT1&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Agpat2&#x3067;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4F1D;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002; AGPAT1&#x3068;AGPAT2&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306E;&#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;CoA&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x3088;&#x304F;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 1&#xFF08;GPAT1&#xFF09;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x3068;AGPATs&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x985E;&#x4F3C;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306B;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3002; Agpat2&#x3067;AGPAT1&#x307E;&#x305F;&#x306F;AGPAT2&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x809D;&#x81D3;&#x3067;AGPAT&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x985E;&#x4F3C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x751F;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;AGPAT1&#x307E;&#x305F;&#x306F;AGPAT2&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x3067;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x8102;&#x80AA;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Agpat2&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3068;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x55AA;&#x5931;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;1  - &#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;-3  - &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;O-&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;1&#x304A;&#x3088;&#x3073;2&#xFF1A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;Agpat2&#x306B;&#x8102;&#x80AA;&#x809D;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7121;&#x529B;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;Lipodystrophic&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;

1-Acylglycerol-3-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; O-acyltransferase (AGPAT) 2&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xC950;&#xC758;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xBCC0;&#xC774; &#xBAA8;&#xB450; &#xD770;&#xC0C9;&#xACFC; &#xAC08;&#xC0C9; &#xC9C0;&#xBC29; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xD0C4;&#xC0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC190;&#xC2E4; &#xB420;. Agpat2&#xB294; glycerophospholipids&#xC640; triacylglycerols&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xBC29; &#xC870;&#xC9C1; &#xB610;&#xB294; lipodystrophy, &#xACB0;&#xACFC;: hyperinsulinemia, &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1; mellitus &#xBC0F; &#xC2EC;&#xD55C; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC9C0; &#xBC29;&#xC99D;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; agpat2&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xCCB4;, AGPAT1, &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; transducing Agpat2(-/-) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; adenoviruses &#xD1B5;&#xD574; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. AGPAT1 &#xBC0F; agpat2&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; lysophosphatidic &#xC0B0;&#xACFC; acyl Coa&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; 3 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; acyltransferase 1&#xB85C; &#xB450;&#xB294; Agpats&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD638;&#xBAB0;&#xB85C;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; (GPAT1) &#xB4E4;&#xC740; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; 3 &#xCC28; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;. &#xB54C; &#xB450; isoforms endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; co-localize co-expressed. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9; AGPAT Agpat2(-/-) &#xC950;&#xC5D0; AGPAT1 &#xB610;&#xB294; agpat2&#xC758; overexpression&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xAC1C;&#xB7C9; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC9C0; &#xBC29;&#xC99D;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04; lipogenesis AGPAT1 &#xB610;&#xB294; agpat2&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xAC04; &#xC9C0;&#xBC29; &#xCD95;&#xC801;&#xC740; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xBC29; &#xC870;&#xC9C1; Agpat2(-/-) &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; 1-acylglycerol-3-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; O acyltransferase isoforms 1&#xACFC; 2: &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; Agpat2(-/-) &#xC720;&#xC804;&#xC790; lipodystrophic &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC9C0; &#xBC29;&#xC99D;&#xC744; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825;.

La p&#xE9;rdida de la funci&#xF3;n de las mutaciones en 1-acilglicerol-3-fosfato O-aciltransferasa (AGPAT) 2 en los seres humanos y los ratones resultan en la p&#xE9;rdida tanto de los tejidos adiposos blanco y marr&#xF3;n desde el nacimiento. AGPAT2 genera precursores para la s&#xED;ntesis de glicerofosfol&#xED;pidos y triacilgliceroles. La p&#xE9;rdida de tejido adiposo, o lipodistrofia, los resultados de la hiperinsulinemia, diabetes mellitus, y la esteatosis hep&#xE1;tica grave. En este sentido, se analizaron las propiedades bioqu&#xED;micas de AGPAT2 humana y su hom&#xF3;logo de cerca, AGPAT1, y hemos estudiado su papel en la transducci&#xF3;n de h&#xED;gado por su expresi&#xF3;n a trav&#xE9;s de los adenovirus recombinantes en AGPAT2 (- / -) ratones. El de especificidades de sustrato in vitro de AGPAT1 y AGPAT2 son muy similares para el &#xE1;cido lisofosfat&#xED;dico y acil-CoA. Modelado prote&#xED;na homolog&#xED;a tanto de los AGPATs con glicerol-3-fosfato aciltransferasa 1 (GPAT1) revel&#xF3; que tienen una estructura similar prote&#xED;na terciaria, que es consistente con sus especificidades de sustrato similares. Cuando se co-expresa, ambas isoformas co-localizar al ret&#xED;culo endopl&#xE1;smico. A pesar de estas similitudes, la restauraci&#xF3;n de la actividad AGPAT en el h&#xED;gado por la sobreexpresi&#xF3;n de cualquiera de las AGPAT1 o AGPAT2 en AGPAT2 (- / -) ratones no para mejorar la esteatosis hep&#xE1;tica. A partir de estos estudios, que sugieren que el papel de AGPAT1 o AGPAT2 en la lipog&#xE9;nesis hep&#xE1;tica es m&#xED;nima y que la acumulaci&#xF3;n de grasa en el h&#xED;gado es principalmente una consecuencia de la resistencia a la insulina y la p&#xE9;rdida de tejido adiposo en AGPAT2 (- / -) ratones.

Humano 1-acilglicerol-3-fosfato O-aciltransferasa isoformas 1 y 2: Caracterizaci&#xF3;n bioqu&#xED;mica y la incapacidad de Rescate esteatosis hep&#xE1;tica en AGPAT2 (- / -) ratones de genes lipodistr&#xF3;fica

Suja Sukumaran

Shimadzu

Scientific Instruments

Concentration Determination of Nucleic Acids and Proteins Using the Micro-volume Bio-spec Nano Spectrophotometer

Suja Sukumaran

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