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Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

pressure-polishing-pipettes-for-improved-patch-clamp-recording

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Stanford University 

Stanford University School of Medicine

&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x68C0;&#x67E5;&#x662F;&#x6709;&#x76CA;&#x7684;&#x8865;&#x5145;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E2A;&#x52A0;&#x901F;&#x5668;&#x7684;&#x4F53;&#x529B;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E0E;&#x7A7A;&#x95F4;&#x6570;&#x636E;&#x4ECE;&#x4FBF;&#x643A;&#x5F0F;&#x5168;&#x7403;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7CFB;&#x7EDF; (GPS) &#x5355;&#x4F4D;&#x6765;&#x786E;&#x5B9A;&#x7269;&#x7406;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;

&#x4FBF;&#x643A;&#x5F0F;&#x5168;&#x7403;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x5355;&#x4F4D;&#x8865;&#x5145;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E2A;&#x52A0;&#x901F;&#x5668;&#x7269;&#x7406;&#x6D3B;&#x52A8;&#x76D1;&#x89C6;&#x5668;&#x3002;

This study examines the usefulness of complementing accelerometry-based physical activity measurement with spatial data from portable global positioning system (GPS) units to determine where physical activity occurs.

Portable global positioning units to complement accelerometry-based physical activity monitors.

Cette &eacute;tude examine l&#39;utilit&eacute; de compl&eacute;ter la mesure de l&#39;activit&eacute; physique ax&eacute;e sur l&#39;acc&eacute;l&eacute;rom&eacute;trie avec des donn&eacute;es spatiales de portable positionnement global unit&eacute;s de syst&egrave;me (GPS) pour d&eacute;terminer o&ugrave; l&#39;activit&eacute; physique se produit.

Unit&eacute;s de positionnement globales portatives pour compl&eacute;ter les moniteurs acc&eacute;l&eacute;rom&eacute;trie bas&eacute;e sur l&#39;activit&eacute; physique.

Diese Studie untersucht die N&uuml;tzlichkeit der Erg&auml;nzung der Accelerometry basierenden physischen Aktivit&auml;tsmessung mit r&auml;umlichen Daten von tragbaren global Positionierung (GPS) Systemeinheiten um zu bestimmen, in denen k&ouml;rperlicher Aktivit&auml;t auftritt.

Tragbare globale Positionierung Einheiten, Accelerometry-basierte k&ouml;rperliche Aktivit&auml;t Monitoren zu erg&auml;nzen.

Questo studio esamina l&#39;utilit&agrave; di integrare la misurazione di attivit&agrave; fisica basata su accelerometry con dati spaziali da portatile unit&agrave; globale di posizionamento (GPS) sistema per determinare dove si verifica l&#39;attivit&agrave; fisica.

Portatile unit&agrave; di posizionamento globale per integrare attivit&agrave; fisica basata su accelerometry monitor.

&#x52A0;&#x901F;&#x5EA6;&#x8A08;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x8EAB;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52D5;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x304C;&#x8EAB;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D6;&#x30EB; &#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB; &#x30DD;&#x30B8;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; (GPS) &#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D6;&#x30EB; &#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB; &#x30DD;&#x30B8;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x8EAB;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30E2;&#x30CB;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xBCF4;&#xC644; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xCCB4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xD734;&#xB300;&#xC6A9; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xD3EC;&#xC9C0;&#xC154;&#xB2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (GPS) &#xB2E8;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xAC04; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC2E0;&#xCCB4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC18D;&#xB3C4;&#xACC4; &#xAE30;&#xBC18; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xCCB4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC18D;&#xB3C4;&#xACC4; &#xAE30;&#xBC18; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC644; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD734;&#xB300;&#xC6A9; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xD3EC;&#xC9C0;&#xC154;&#xB2DD; &#xC7A5;&#xCE58;.

Este estudio examina la utilidad de complementar la medici&oacute;n de la actividad f&iacute;sica basadas en la acelerometr&iacute;a con datos espaciales de unidades de sistema (GPS) posicionamiento global port&aacute;tiles para determinar d&oacute;nde se produce la actividad f&iacute;sica.

Unidades port&aacute;tiles de posicionamiento globales para complementar la actividad f&iacute;sica acelerometr&iacute;a monitores.

MEC 4 &#x548C; MEC 10 &#x662F;&#x4E9A;&#x6210;&#x5B54;&#x57FA;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x611F;&#x5B98;&#x529B;&#x5B66;&#x4F20;&#x9012;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x505C;&#x89E6;&#x6478;&#x611F;&#x89C9;&#x4E2D;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B; &#xFF08;&#x54C8;&#x6839;&#xFF0C;R.&#xFF0C;M.Chalfie &#x548C; m.b.&#x66FE;&#x5609;&#x6C11;&#x3002;2005.Neurosci nat&#x3002;&#x3002;8:43-50).&#x4ED6;&#x4EEC;&#x662F;&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x7EDF;&#x79F0;&#x4E3A; DEG/ENaCs&#xFF0C;&#x5728;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5927;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;MEC 4 &#x53EF;&#x4EE5;&#x88C5;&#x914D;&#x5230; homomeric &#x6E20;&#x9053;&#x548C;&#x8FDB;&#x7F1D;&#x9699;&#x6E20;&#x9053; (&#x53E4;&#x5FB7;&#x66FC;&#x3001; &#x6BD4;&#x5229;&#x65F6;&#x5BFC;&#x62A5;&#x3001; G.G.Ernstrom&#x3001; D.S.Chelur&#x3001; R.&#x54C8;&#x6839;&#x3001; C.A.&#x59DA;&#x548C; M.Chalfie &#x4E0E; MEC-10 coassemble&#x3002;2002.&#x6027;&#x8D28;&#x3002;415:1039-1042&#x5E74;).&#x8981;&#x6DF1;&#x5165;&#x6307;&#x5BFC;&#x6D47;&#x6CE8;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x539F;&#x5219;&#x548C;&#x836F;&#x7269;&#x963B;&#x6EDE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7535;&#x6781;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x3001; &#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x5F55;&#x97F3;&#x548C;&#x5916;&#x9762;&#x51FA; macropatches &#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7A81;&#x53D8; A713&#xFF0C;d &#x6216;&#x53D8;&#x6027;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3001; &#x6B8B;&#x7559;&#x91CF;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x6BD4;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x589E;&#x52A0;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7535;&#x6D41;&#x3001; &#x5F00;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x548C;&#x5F00;&#x653E;&#x65F6;&#x95F4; homomeric &#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x90A3;&#x7B28;&#x91CD;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x6B64;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5F00;&#x653E;&#x7684;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; MEC 10 &#x90E8;&#x5206;&#x6291;&#x5236;&#x5BF9;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8868;&#x660E;&#x4E9A;&#x57FA;-&#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x8282;&#x5F00;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x4E00;&#x60F3;&#x6CD5;&#x6765;&#x81EA;&#x5B8F;&#x89C2;&#x7535;&#x6D41;&#x5355;&#x7A81;&#x53D8;&#x548C;&#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7F1D;&#x9699;&#x6E20;&#x9053;&#x6240;&#x8FDB;&#x884C;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EA6;&#x7814;&#x7A76;&#x5229;&#x5C3F;&#x836F;&#x963F;&#x7C73;&#x6D1B;&#x5229;&#x5C01;&#x9501;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; A713 &#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x6216;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E0B;&#x964D;&#x4E3A;&#x963F;&#x7C73;&#x6D1B;&#x5229; homomeric &#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x3002;&#x4E0E;&#x5F00;&#x653E;&#x6982;&#x7387;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x662F;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6548;&#x679C;&#x88AB;&#x65E0;&#x5173;&#x5927;&#x5C0F;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x4FA7;&#x94FE;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x503C;&#x6307;&#x793A;&#x5728;&#x6B64;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E0A;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x6539;&#x53D8;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x963F;&#x7C73;&#x6D1B;&#x5229;&#x8BE5;&#x5757;&#x662F;&#x6269;&#x6563; DEG/&#x56E0;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x5728;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x963F;&#x7C73;&#x6D1B;&#x5229;&#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4ECE;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x80FD;&#x6E90;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x8F85;&#x52A9;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; d &#x7684;&#x804C;&#x4F4D;&#x662F;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EE3;&#x8868;&#x5B54;&#x57DF;&#x7684;&#x5F00;&#x59CB;&#x3002;

MEC 4 DEG/&#x56E0;&#x611F;&#x5B98;&#x529B;&#x5B66;&#x4F20;&#x9012;&#x901A;&#x9053;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7A81;&#x53D8;&#x6539;&#x53D8;&#x6D47;&#x6CE8;&#x548C;&#x836F;&#x7269;&#x5C01;&#x9501;&#x3002;

MEC-4 and MEC-10 are the pore-forming subunits of the sensory mechanotransduction complex that mediates touch sensation in Caenorhabditis elegans (O'Hagan, R., M. Chalfie, and M.B. Goodman. 2005. Nat. Neurosci. 8:43-50). They are members of a large family of ion channel proteins, collectively termed DEG/ENaCs, which are expressed in epithelial cells and neurons. In Xenopus oocytes, MEC-4 can assemble into homomeric channels and coassemble with MEC-10 into heteromeric channels (Goodman, M.B., G.G. Ernstrom, D.S. Chelur, R. O'Hagan, C.A. Yao, and M. Chalfie. 2002. Nature. 415:1039-1042). To gain insight into the structure-function principles that govern gating and drug block, we analyzed the effect of gain-of-function mutations using a combination of two-electrode voltage clamp, single-channel recording, and outside-out macropatches. We found that mutation of A713, the d or degeneration position, to residues larger than cysteine increased macroscopic current, open probability, and open times in homomeric channels, suggesting that bulky residues at this position stabilize open states. Wild-type MEC-10 partially suppressed the effect of such mutations on macroscopic current, suggesting that subunit-subunit interactions regulate open probability. Additional support for this idea is derived from an analysis of macroscopic currents carried by single-mutant and double-mutant heteromeric channels. We also examined blockade by the diuretic amiloride and two related compounds. We found that mutation of A713 to threonine, glycine, or aspartate decreased the affinity of homomeric channels for amiloride. Unlike the increase in open probability, this effect was not related to size of the amino acid side chain, indicating that mutation at this site alters antagonist binding by an independent mechanism. Finally, we present evidence that amiloride block is diffusion limited in DEG/ENaC channels, suggesting that variations in amiloride affinity result from variations in binding energy as opposed to accessibility. We conclude that the d position is part of a key region in the channel functionally and structurally, possibly representing the beginning of a pore-forming domain.

Gain-of-function mutations in the MEC-4 DEG/ENaC sensory mechanotransduction channel alter gating and drug blockade.

MEC-4 et MEC-10 sont les sous-unit&#xE9;s formant des pores du complexe m&#xE9;canotransduction sensorielle qui m&#xE9;diatise la sensation du toucher chez Caenorhabditis elegans (O&#x26;#39;Hagan, R., M. Chalfie, et MB Goodman. 2005. Nat. Neurosci. 08:43 -50). Ils sont membres d&#x26;#39;une grande famille de prot&#xE9;ines de canaux ioniques, collectivement appel&#xE9;s DEG / ENaCs, qui sont exprim&#xE9;s dans les cellules &#xE9;pith&#xE9;liales et les neurones. Dans les ovocytes de Xenopus, MEC-4 peut assembler dans des canaux et homom&#xE9;riques coassemble avec MEC-10 dans les canaux (Goodman h&#xE9;t&#xE9;rom&#xE8;res, MB, GG Ernstrom, DS Chelur, R. O&#x26;#39;Hagan, CA Yao, et M. Chalfie. 2002. Nature. 415:1039-1042). Pour mieux comprendre les principes de structure-fonction qui r&#xE9;gissent d&#xE9;clenchement et le bloc de drogue, nous avons analys&#xE9; l&#x26;#39;effet de gain de fonction des mutations en utilisant une combinaison de la pince de tension &#xE0; deux &#xE9;lectrodes, un seul canal d&#x26;#39;enregistrement, et &#xE0; l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur-out macropatches. Nous avons trouv&#xE9; que la mutation de A713, le ou la position d une d&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rescence, aux r&#xE9;sidus de plus de cyst&#xE9;ine augment&#xE9; courant macroscopique, la probabilit&#xE9; ouverte, et les temps ouverts dans les canaux homom&#xE9;riques, sugg&#xE9;rant que les r&#xE9;sidus encombrants &#xE0; cette position stabiliser les &#xC9;tats ouverts. De type sauvage MEC-10 partiellement supprim&#xE9;e l&#x26;#39;effet de ces mutations sur le courant macroscopique, ce qui sugg&#xE8;re que la sous-unit&#xE9; de sous-unit&#xE9;s interactions r&#xE9;guler probabilit&#xE9; ouvert. Un appui suppl&#xE9;mentaire pour cette id&#xE9;e est d&#xE9;riv&#xE9;e d&#x26;#39;une analyse des courants macroscopiques port&#xE9;s par un seul mutant et double-mutant canaux h&#xE9;t&#xE9;rom&#xE8;res. Nous avons &#xE9;galement examin&#xE9; par le blocus amiloride diur&#xE9;tique et deux compos&#xE9;s apparent&#xE9;s. On trouve que la mutation de A713 &#xE0; la thr&#xE9;onine, la glycine, ou l&#x26;#39;aspartate diminu&#xE9; l&#x26;#39;affinit&#xE9; de canaux homom&#xE8;res pour l&#x26;#39;amiloride. Contrairement &#xE0; l&#x26;#39;augmentation de la probabilit&#xE9; ouvert, cet effet n&#x26;#39;&#xE9;tait pas li&#xE9; &#xE0; la taille de la cha&#xEE;ne lat&#xE9;rale d&#x26;#39;acide amin&#xE9;, indiquant que la mutation &#xE0; cet antagoniste du site modifie obligatoire par un m&#xE9;canisme ind&#xE9;pendant. Enfin, nous pr&#xE9;sentons des preuves de ce bloc est la diffusion limit&#xE9;e amiloride en deg / ENaC canaux, ce qui sugg&#xE8;re que les variations de r&#xE9;sultat affinit&#xE9; amiloride de variations de l&#x26;#39;&#xE9;nergie de liaison par opposition &#xE0; l&#x26;#39;accessibilit&#xE9;. On en conclut que la position d est partie d&#x26;#39;une r&#xE9;gion cl&#xE9; dans le canal fonctionnel et structurel, pouvant repr&#xE9;senter le d&#xE9;but d&#x26;#39;un domaine de formation de pores.

Gain de fonction mutations dans le MEC-4 DEG m&#xE9;canotransduction Cha&#xEE;ne / ENaC sensorielle Alter Gating et le blocus des m&#xE9;dicaments

MEC-4 und MEC-10 sind die Pore-forming Untereinheiten des der sensorischen Mechanotransduction Komplex, der Note Empfindung in Caenorhabditis Elegans vermittelt (O&#39;Hagan, R., M. Chalfie und m.b. Goodman. 2005. Nat Neurosci. 08:43-50). sie sind Mitglieder einer gro&szlig;en Familie von Ionen-Kanal-Proteine, kollektiv bezeichnet DEG/ENaCs, die in Epithelzellen und Neuronen exprimiert werden. In Xenopus Oocytes kann MEC-4 in Homomeric Kan&auml;le zusammenstellen und coassemble mit MEC-10 in heteromeren Kan&auml;le (Goodman, m.b., g.g. Ernstrom, D.S. Chelur, R. O&#39;Hagan, C.A. Yao und M. Chalfie. 2002. Natur. 415:1039-1042). Um einen Einblick in die Struktur-Funktions-Prinzipien, die Anspritzung bestimmen und die Droge-Block, wir analysiert die Auswirkungen der Gain of Function-Mutationen, die mit einer Kombination aus zwei-Elektroden-Spannung Klemme, Einkanal-Aufnahme und au&szlig;en-Out Macropatches. Wir fanden, dass die Mutation des A713, die d oder Degeneration zu positionieren, R&uuml;ckst&auml;nde, die gr&ouml;&szlig;er als Cystein makroskopische aktuelle, offene Wahrscheinlichkeit und &Ouml;ffnungszeiten in Homomeric Kan&auml;le, was darauf hindeutet, dass sperrige vergr&ouml;&szlig;ert R&uuml;ckst&auml;nde an dieser Position stabilisieren offene Staaten. Wildtyp MEC-10 unterdr&uuml;ckt teilweise den Effekt von solchen Mutationen auf makroskopischen Strom, darauf hindeutet, dass Untereinheit-Untereinheit Interaktionen offen Wahrscheinlichkeit regulieren. Zus&auml;tzliche Unterst&uuml;tzung f&uuml;r diese Idee wird von einer Analyse der makroskopischen Str&ouml;mungen getragen von Einzel-Mutant und Doppel-Mutant heteromeren Kan&auml;le abgeleitet. Wir haben auch Blockade von Diuretikum Amilorids gepr&uuml;ft und zwei verwandte Substanzen. Wir fanden, dass die Mutation des A713 Threonin, Glycin oder Aspartat die Affinit&auml;t der Homomeric Kan&auml;le f&uuml;r Amilorids abgenommen. Im Gegensatz zu der Zunahme der offenen Wahrscheinlichkeit war dieser Effekt nicht im Zusammenhang mit Gr&ouml;&szlig;e der Aminos&auml;ure-Seitenkette, die darauf hinweist, dass Mutation an diesem Standort Antagonisten Binden anhand eines unabh&auml;ngigen Mechanismus &auml;ndert. Schlie&szlig;lich pr&auml;sentieren wir Beweise, dass dieser Amilorids-Block ist Verbreitung in DEG/ENaC-Kan&auml;le, begrenzt, darauf hindeutet, dass Variationen im Amilorids-Affinit&auml;t aus Schwankungen der Bindungsenergie im Gegensatz zur Zug&auml;nglichkeit ergeben. Wir schlie&szlig;en, dass die d-Position eine Schl&uuml;sselregion im Kanal funktionell und strukturell geh&ouml;rt m&ouml;glicherweise den Anfang einer Pore-forming-Dom&auml;ne darstellt.

Gain of Function-Mutationen im MEC-4 DEG/ENaC sensorische Mechanotransduction Kanal &auml;ndern Anschnitt- und Droge Blockade.

MEC-4 e MEC-10 sono le subunit&agrave; che formano dei pori del mechanotransduction sensoriali complesse che media sensazione tattile in Caenorhabditis elegans (o &#39; Hagan, R., M. Chalfie e M.B. Goodman. 2005. NAT. Neurosci. 08.43-50). Sono membri di una grande famiglia di proteine di canale ionico, collettivamente chiamati DEG/ENaCs, che sono espressi nelle cellule epiteliali e i neuroni. In ovociti di Xenopus, MEC-4 pu&ograve; assemblare in canali homomeric e coassemble con MEC-10 in canali eteromerico (Goodman, M.B., G.G. Ernstrom, D.S. Chelur, R. O&#39;Hagan, C.A. Yao e M. Chalfie. 2002. La natura. 415:1039-1042). Per guadagnare la comprensione dei principi di struttura-funzione che governano gating e blocco di droga, abbiamo analizzato l&#39;effetto di mutazioni di guadagno di funzione utilizzando una combinazione di morsetto di tensione di due elettrodi, registrazione monocanale e fuori-fuori macropatches. Abbiamo trovato che mutazione di A713, la d o la degenerazione di posizione, ai residui pi&ugrave; grandi di cisteina aumentato macroscopico probabilit&agrave; corrente, aperto e aperti volte nei canali homomeric, suggerendo che ingombranti residui in questa posizione stabilizzano gli stati aperti. Wild-type MEC-10 parzialmente soppresso l&#39;effetto di tali mutazioni su corrente macroscopica, suggerendo che le interazioni subunit&agrave;-subunit&agrave; regolano probabilit&agrave; aperta. Supporto aggiuntivo per questa idea &egrave; derivato da un&#39;analisi delle correnti macroscopiche trasportato dai canali eteromerico mutante di singolo e doppio-mutante. Abbiamo anche esaminato il blocco dall&#39;amiloride diuretico e due relativi composti. Abbiamo trovato che mutazione di A713 treonina, glicina o aspartato diminuito l&#39;affinit&agrave; dei canali homomeric amiloride. Al contrario l&#39;aumento di probabilit&agrave; aperta, questo effetto non era correlato alla dimensione della catena laterale dell&#39;amminoacido, che indica che la mutazione in questo sito altera antagonista vincolante da un meccanismo indipendente. Infine, vi presentiamo prova che quel blocco di amiloride &egrave; diffusione limitata nei canali DEG/ENaC, suggerendo che variazioni di affinit&agrave; amiloride derivano da variazioni di energia di legame in contrasto con l&#39;accessibilit&agrave;. Possiamo concludere che la posizione d fa parte di una regione chiave nel canale funzionalmente e strutturalmente, che forse rappresenta l&#39;inizio di un dominio che formano dei pori.

Guadagno di funzione mutazioni nel canale sensoriale mechanotransduction MEC-4 DEG/ENaC alterano blocco gating e droga.

MEC-4&#x3068;MEC-10&#x306F;&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;Caenorhabditis elegans&#xFF08;O&#x26;#39;Hagan&#x3001;R.&#x3001;M. Chalfie&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;MB&#x30B0;&#x30C3;&#x30C9;&#x30DE;&#x30F3;2005&#x3002;&#x30CA;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x3002;8&#x6642;43&#x5206;&#x306E;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x89E6;&#x899A;&#x305D;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;-50&#xFF09;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;DEG / ENaCs&#x3001;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5927;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MEC-4&#x306F;&#x30DB;&#x30E2;&#x30E1;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#xFF08;&#x30B0;&#x30C3;&#x30C9;&#x30DE;&#x30F3;&#x3001;MB&#x3001;GG Ernstrom&#x3001;DS Chelur&#x3001;R. O&#x26;#39;Hagan&#x3001;CA&#x30E4;&#x30AA;&#x3001;&#x3068;M. Chalfie 2002&#x3002;&#x81EA;&#x7136;&#x306B;MEC-10 coassemble&#x3002; 415:1039-1042&#xFF09;&#x3002;&#x30B2;&#x30FC;&#x3068;&#x85AC;&#x7269;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x539F;&#x7406;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;2&#x3064;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x96FB;&#x6975;&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x8A18;&#x9332;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;macropatches&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5229;&#x5F97;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;A713&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x3001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;d&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;&#x304B;&#x3055;&#x3070;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x78BA;&#x7387;&#x3001;&#x30DB;&#x30E2;&#x30E1;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x958B;&#x3044;&#x500D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;MEC-10&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x78BA;&#x7387;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30A2;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x904B;&#x3070;&#x308C;&#x305F;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x304B;&#x3089;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5229;&#x5C3F;&#x5264;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x3068;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5C01;&#x9396;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;A713&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30DB;&#x30E2;&#x30E1;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x958B;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x5074;&#x9396;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3068;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306F;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x30A2;&#x30DF;&#x30ED;&#x30EA;&#x30C9;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x3070;&#x3089;&#x3064;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D3;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;DEG / ENAC&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x62E1;&#x6563;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;d&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306F;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x5B54;&#x5F62;&#x6210;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x59CB;&#x307E;&#x308A;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x53CA;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5185;&#x3067;&#x30AD;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

MEC-4 DEG / ENAC&#x611F;&#x899A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7372;&#x5F97;&#x578B;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x5C01;&#x9396;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;

MEC 4 &#xBC0F; MEC 10 &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; Caenorhabditis elegans&#xC5D0; &#xD130;&#xCE58; &#xC13C; &#xC138;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAC10;&#xAC01; mechanotransduction&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xB2E8;&#xC704;&#xB294; (&#xC624; &#xD558;, R., M. &#xCC4C; &#xBC0F; M.B. &#xAD7F; &#xB9E8;. 2005. Nat. Neurosci&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. 8&#xC2DC; 43&#xBD84;-50). &#xD1B5;&#xCE6D; DEG/ENaCs, &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xB098;, &#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD070; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Xenopus oocytes MEC 4 &#xC218; homomeric &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xC870;&#xB9BD; &#xD558; &#xACE0; (&#xAD7F; &#xB9E8;, M.B., &#xD1B5;&#xD574; Ernstrom, D.S. Chelur, R. &#xC624; &#xD558;, C.A. &#xC57C; &#xC624;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; M. &#xCC4C; heteromeric &#xCC44;&#xB110;&#xB85C; &#xBA55;-10 coassemble. 2002&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xC5F0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. 415:1039-1042). &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xAD6C;&#xC870;-&#xAE30;&#xB2A5; &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC640; &#xB9C8;&#xC57D; &#xBE14;&#xB85D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; &#xC804;&#xADF9; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xB179;&#xC74C; &#xBC0F; &#xC678;&#xBD80; &#xC544;&#xC6C3; macropatches&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD568;&#xC218; &#xC774;&#xB4DD; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; A713, d &#xB610;&#xB294; &#xBCC0;&#xC131;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;, &#xD070; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xD604;&#xC7AC;, &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960;&#xACFC; &#xADF8; &#xBD80;&#xD53C;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; homomeric &#xCC44;&#xB110; &#xC624;&#xD508; &#xC2DC;&#xAC04; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC774;&#xC774; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC548;&#xC815; &#xC624;&#xD508; &#xC0C1;&#xD0DC;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBA55; 10 &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960; &#xADDC;&#xC81C; &#xC81C;&#xC548; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB958;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC774; &#xC544;&#xC774;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD94;&#xAC00; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC0F; &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; heteromeric &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xD574;&#xB958;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C;&#xC774; &#xB1E8; amiloride&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD09;&#xC1C4;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xAD00;&#xB828;. &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC;, &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;, &#xB610;&#xB294; aspartate a713&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; amiloride homomeric &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC624;&#xD508; &#xD655;&#xB960; &#xC99D;&#xAC00;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC801;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xCCB4;&#xC778;&#xC758; &#xD06C;&#xAE30;&#xB294;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; amiloride &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xD654; &#xC811;&#xADFC;&#xC131; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; amiloride &#xBE14;&#xB85D;&#xC740; &#xD655;&#xC0B0; DEG/ENaC &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC70; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE30; &#xACF5; &#xD615;&#xC131; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC2DC;&#xC791;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, d &#xC704;&#xCE58; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACB0;&#xB860;.

MEC 4 DEG/ENaC &#xAC10;&#xAC01; mechanotransduction &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD568;&#xC218; &#xC774;&#xB4DD; &#xBCC0;&#xC774; &#xAC8C;&#xC774;&#xD305; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC57D; &#xBD09;&#xC1C4; &#xBCC0;&#xACBD;.

MEC-4 y MEC-10 son las subunidades que forman poros del complejo mecanotransducci&#xF3;n sensorial que la sensaci&#xF3;n t&#xE1;ctil media en Caenorhabditis elegans (O&#x26;#39;Hagan, R., M. Chalfie, y Goodman MB. De 2005. Nat. Neurosci. 08:43 -50). Son miembros de una gran familia de prote&#xED;nas de los canales i&#xF3;nicos, denominados colectivamente DEG / ENaCs, que se expresan en las c&#xE9;lulas epiteliales y neuronas. En los ovocitos de Xenopus, el MEC-4 puede montar en los canales y homomeric coassemble con el MEC-10 en los canales de heterom&#xE9;ricos (Goodman, MB, GG Ernstrom, DS Chelur, R. O&#x26;#39;Hagan, Yao CA, y M. Chalfie. De 2002. Naturaleza. 415:1039-1042). Para profundizar en los principios de estructura-funci&#xF3;n que rigen la compuerta y el bloque de la droga, se analiz&#xF3; el efecto de mutaciones con ganancia de funci&#xF3;n usando una combinaci&#xF3;n de fijaci&#xF3;n de voltaje de dos electrodos, la grabaci&#xF3;n de un solo canal, y macropatches fuera-fuera. Hemos encontrado que la mutaci&#xF3;n de A713, la posici&#xF3;n D o degeneraci&#xF3;n, a los residuos de ciste&#xED;na m&#xE1;s grandes que aument&#xF3; macrosc&#xF3;pico probabilidad actual, abierto, y los tiempos abiertos en los canales homomeric, lo que sugiere que los residuos voluminosos en esta posici&#xF3;n estabilizar estados abiertos. De tipo salvaje MEC-10 parcialmente suprimida el efecto de dichas mutaciones en corriente macrosc&#xF3;pica, lo que sugiere que la subunidad subunidad interacciones regular probabilidad abierta. El apoyo adicional para esta idea se deriva de un an&#xE1;lisis de las corrientes macrosc&#xF3;picas realizadas por los canales de heterom&#xE9;ricos solo mutantes y doble mutante. Tambi&#xE9;n se examinaron el bloqueo de la amilorida diur&#xE9;tico y dos compuestos relacionados. Hemos encontrado que la mutaci&#xF3;n de A713 a treonina, glicina, o aspartato disminuy&#xF3; la afinidad de los canales para homomeric amilorida. A diferencia del aumento de la probabilidad abierto, este efecto no estaba relacionada con el tama&#xF1;o de la cadena lateral de amino&#xE1;cidos, lo que indica que la mutaci&#xF3;n en este antagonista sitio de uni&#xF3;n altera por un mecanismo independiente. Finalmente, se presentan pruebas de que bloque de amilorida es limitada difusi&#xF3;n en los canales de DEG / ENaC, lo que sugiere que las variaciones en la afinidad amilorida resultado de variaciones en la energ&#xED;a de enlace en lugar de la accesibilidad. Se concluye que la posici&#xF3;n d es parte de una regi&#xF3;n clave en el canal funcional y estructuralmente, que posiblemente representa el comienzo de un dominio de formaci&#xF3;n de poros.

Ganancia de funci&#xF3;n de mutaciones en el MEC-4 &#xBA; Canal Mecanotransducci&#xF3;n / ENaC sensorial Alter de apertura de puerta y el bloqueo de Drogas

&#x79BB;&#x5B50;&#x901A;&#x9053;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; MEC 4 &#x548C; MEC 10 &#x5F62;&#x5F0F;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x611F;&#x5B98;&#x529B;&#x5B66;&#x4F20;&#x9012;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x79C0;&#x4E3D;&#x9690;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4EA7;&#x54C1;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6; mec &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x4E2D;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8D21;&#x732E;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x4FE1;&#x9053;&#x7684;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8F85;&#x52A9;&#x901A;&#x9053;&#x4E9A;&#x57FA;&#xFF0C;MEC-2 &#xFF08;stomatin-&#x50CF;&#xFF09; &#x4F5C;&#x7528;&#x548C; MEC-6 (&#x5BF9;&#x6C27;&#x78F7;&#x9176;&#x6837;&#xFF09;&#xFF0C;&#x7531; coexpressing &#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E00;&#x79EF;&#x6781; MEC-4/MEC-10 &#x7F1D;&#x9699;&#x4E0E;&#x6E20;&#x9053;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x5EF6;&#x4F38;&#x4E8B;&#x5148;&#x8BF4;&#x660E; MEC 2 &#x548C; MEC 6 &#x534F;&#x540C;&#x589E;&#x52A0;&#x5B8F;&#x89C2;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x5F55;&#x97F3;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8F85;&#x52A9;&#x4E9A;&#x57FA;&#x6539;&#x53D8;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x5C5E;&#x6027;&#x6216;&#x8868;&#x9762;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7535;&#x6781;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x548C;&#x5916;&#x9762;&#x51FA; macropatch &#x8BB0;&#x5F55;&#xFF0C;&#x5BA1;&#x67E5;&#x7684;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x76D1;&#x7BA1;&#x901A;&#x9053;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x6210;&#x5458;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5168;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5355;&#x901A;&#x9053;&#x7535;&#x6D41;&#x7684; MEC 2 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x68C0;&#x67E5;&#x80C6;&#x56FA;&#x9187;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728; MEC 2 &#x884C;&#x52A8;&#x673A;&#x5236;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; MEC 2 &#x548C; MEC 6 &#x53D1;&#x6325;&#x8C03;&#x8282; MEC-4/MEC-10 &#x9891;&#x9053;&#x7684;&#x5730;&#x65B9;&#x819C;&#x73AF;&#x5883;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6E20;&#x9053;&#xFF0C;&#x88AB;&#x63A7;&#x4EE5;&#x6B66;&#x529B;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

MEC 2 &#x548C;&#x529B;&#x5B66;&#x79C0;&#x4E3D;&#x9690;&#x6746;&#x7EBF;&#x866B;&#x611F;&#x5B98;&#x4F20;&#x9012;&#x590D;&#x6742; MEC-6&#xFF1A; &#x542F;&#x7528;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x8F85;&#x52A9;&#x4E9A;&#x57FA;&#x3002;

The ion channel formed by the homologous proteins MEC-4 and MEC-10 forms the core of a sensory mechanotransduction channel in Caenorhabditis elegans. Although the products of other mec genes are key players in the biophysics of transduction, the mechanism by which they contribute to the properties of the channel is unknown. Here, we investigate the role of two auxiliary channel subunits, MEC-2 (stomatin-like) and MEC-6 (paraoxonase-like), by coexpressing them with constitutively active MEC-4/MEC-10 heteromeric channels in Xenopus oocytes. This work extends prior work demonstrating that MEC-2 and MEC-6 synergistically increase macroscopic current. We use single-channel recordings and biochemistry to show that these auxiliary subunits alter function by increasing the number of channels in an active state rather than by dramatically affecting either single-channel properties or surface expression. We also use two-electrode voltage clamp and outside-out macropatch recording to examine the effects of divalent cations and proteases, known regulators of channel family members. Finally, we examine the role of cholesterol binding in the mechanism of MEC-2 action by measuring whole-cell and single-channel currents in MEC-2 mutants deficient in cholesterol binding. We suggest that MEC-2 and MEC-6 play essential roles in modulating both the local membrane environment of MEC-4/MEC-10 channels and the availability of such channels to be gated by force in vivo.

MEC-2 and MEC-6 in the Caenorhabditis elegans sensory mechanotransduction complex: auxiliary subunits that enable channel activity.

Le canal ionique form&#xE9; par les prot&#xE9;ines homologues de MEC-4 et MEC-10 forme le c&#x153;ur d&#x26;#39;un canal sensoriel dans la m&#xE9;canotransduction Caenorhabditis elegans. Bien que les produits d&#x26;#39;autres g&#xE8;nes mec sont des acteurs cl&#xE9;s dans la biophysique de la transduction, le m&#xE9;canisme par lequel ils contribuent aux propri&#xE9;t&#xE9;s du canal est inconnue. Ici, nous &#xE9;tudions le r&#xF4;le de deux sous-unit&#xE9;s de canaux auxiliaires, MEC-2 (stomatine-like) et MEC-6 (paraoxonase-like), par co-exprimant eux avec constitutivement actives MEC-4/MEC-10 canaux h&#xE9;t&#xE9;rom&#xE8;res dans les ovocytes de Xenopus. Ce travail s&#x26;#39;&#xE9;tend avant de travailler d&#xE9;montrant que MEC-2 et MEC-6 en synergie augmenter le courant macroscopique. Nous utilisons &#xE0; canal unique enregistrements et de la biochimie de montrer que ces sous-unit&#xE9;s auxiliaires alt&#xE9;rer la fonction en augmentant le nombre de canaux dans un &#xE9;tat actif plut&#xF4;t que par affecte dramatiquement soit un seul canal d&#x26;#39;expression des propri&#xE9;t&#xE9;s ou de surface. Nous utilisons &#xE9;galement voltage &#xE0; deux &#xE9;lectrodes et l&#x26;#39;enregistrement en dehors macropatch-out afin d&#x26;#39;examiner les effets des cations divalents et les prot&#xE9;ases, les r&#xE9;gulateurs connus de membres de la famille de canaux. Enfin, nous examinons le r&#xF4;le de la liaison de cholest&#xE9;rol dans le m&#xE9;canisme de MEC-2 d&#x26;#39;action en mesurant les courants de cellules enti&#xE8;res et un seul canal dans MEC-2 mutants d&#xE9;ficients dans la liaison du cholest&#xE9;rol. Nous sugg&#xE9;rons que MEC-2 et MEC-6 jouent un r&#xF4;le essentiel dans la modulation de l&#x26;#39;environnement &#xE0; la fois locale de la membrane MEC-4/MEC-10 canaux et la disponibilit&#xE9; de ces cha&#xEE;nes &#xE0; &#xEA;tre ferm&#xE9;e par la force in vivo.

MEC-2 et MEC-6 dans le Caenorhabditis elegans m&#xE9;canotransduction sensorielle complexe: sous-unit&#xE9;s auxiliaires permettant l&#x26;#39;activit&#xE9; Manche

Die Ionenkanal bildete von den Homologen Proteine-Formularen MEC-4 und MEC-10 den Kern eines sensorischen Mechanotransduction-Kanals in Caenorhabditis Elegans. Obwohl die Produkte anderer Mec-Gene Key Player der Biophysik der Transduktion sind, ist der Mechanismus, mit dem sie dazu, die Eigenschaften des Kanals beitragen, unbekannt. Hier untersuchen wir die Rolle von zwei zus&auml;tzlichen Kanal-Untereinheiten, MEC-2 (Stomatin, heredit&auml;re Form-&auml;hnlich) und MEC-6 (Paraoxonase-&auml;hnlich), indem sie mit konstitutiv aktive MEC-4/MEC-10 heteromeren Koexpression Kan&auml;le in Xenopus Oocytes. Diese Arbeit erweitert fr&uuml;heren Arbeiten zeigen, dass MEC-2 und MEC-6 synergistisch makroskopischen Strom erh&ouml;hen. Wir verwenden ein-Kanal-Aufnahmen und Biochemie um zu zeigen, dass diese zus&auml;tzlichen Untereinheiten Funktion durch Erh&ouml;hung der Anzahl der Kan&auml;le in einen aktiven Zustand nicht durch dramatisch in Einkanal-Eigenschaften oder Oberfl&auml;che Ausdruck ver&auml;ndern. Wir verwenden auch zwei-Elektroden-Spannung Klemme und au&szlig;en-Out Macropatch aufzeichnen, um die Auswirkungen der bivalente kationen und Proteasen, bekannt Regler der Kanal Familienmitglieder zu untersuchen. Schlie&szlig;lich untersuchen wir die Rolle der Cholesterin-Bindung in MEC-2 Wirkungsmechanismus durch Messung der ganzen Zellen und Einkanal-Str&ouml;me in MEC-2 Mutanten einen Mangel an Cholesterin binden. Wir schlagen vor, dass MEC-2 und MEC-6 spielen wichtige Rollen in Modulation der lokalen Membran-Umgebung der MEC-4/MEC-10 Kan&auml;le und die Verf&uuml;gbarkeit dieser Kan&auml;le zu gewaltsam in-vivo Gating werden.

MEC-2 und MEC-6 in den Caenorhabditis Elegans sensorische Mechanotransduction Komplex: Hilfs-Untereinheiten, die Channel-Aktivit&auml;ten zu erm&ouml;glichen.

Il canale ionico formato dalle proteine omologhe 4 MEC MEC-10 forma il nucleo di un canale sensoriale mechanotransduction in Caenorhabditis elegans. Anche se i prodotti di altri geni mec sono giocatori chiave in biofisica di trasduzione, &egrave; sconosciuto il meccanismo con cui essi contribuiscono alle propriet&agrave; del canale. Qui, si indaga il ruolo delle due subunit&agrave; del canale ausiliario, MEC-2 (stomatina-like) e MEC-6-(paraoxonase-like), da li coexpressing con costitutivamente attiva eteromerico MEC-4/MEC-10 canali in ovociti di Xenopus. Questo lavoro si estende previo lavoro dimostrando che MEC-2 e MEC-6 sinergicamente aumentare corrente macroscopica. Usiamo monocanale registrazioni e biochimica di mostrare che queste subunit&agrave; ausiliaria alterare funzione aumentando il numero di canali in uno stato attivo, piuttosto che drammaticamente interessando Propriet&agrave; monocanale o espressione superficiale. Usiamo anche due elettrodi tensione pinza e macropatch fuori-uscita di registrazione per esaminare gli effetti di cationi bivalenti e proteasi, noto regolatori dei membri della famiglia canale. Infine, si esamina il ruolo dell&#39;associazione colesterolo nel meccanismo d&#39;azione MEC-2 misurando le correnti di cellule intere e single-channel MEC-2 mutanti carenti in associazione di colesterolo. Suggeriamo che MEC-2 e MEC-6 svolgono un ruolo fondamentale nel modulare sia l&#39;ambiente locale della membrana di MEC-4/MEC-10 canali e la disponibilit&agrave; di tali canali per essere gestita dalla forza in vivo.

MEC-2 e MEC-6 nel Caenorhabditis elegans sensoriale mechanotransduction complesso: subunit&agrave; ausiliaria che consentono attivit&agrave; del canale.

&#x76F8;&#x540C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;MEC-4&#x3068;MEC-10&#x5F62;&#x3001;&#x7DDA;&#x866B;&#xFF08;Caenorhabditis elegans&#xFF09;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x611F;&#x899A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;MEC&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E4;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;MEC-4/MEC-10&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x5171;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x88DC;&#x52A9;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;MEC-2&#xFF08;stomatin&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#xFF09;&#x3068;MEC-6&#xFF08;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AA;&#x30AD;&#x30BD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#xFF09;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;MEC-2&#x304A;&#x3088;&#x3073;MEC-6&#x306F;&#x76F8;&#x4E57;&#x7684;&#x306B;&#x5DE8;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4F5C;&#x696D;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x88DC;&#x52A9;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8868;&#x9762;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6570;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5909;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#xB7;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#xB7;&#x30EC;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4E8C;&#x4FA1;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;2&#x3064;&#x306E;&#x96FB;&#x6975;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3068;&#x5916;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;macropatch&#x8A18;&#x9332;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D50;&#x5408;&#x6B20;&#x640D;MEC-2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5168;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5358;&#x4E00;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;MEC-2&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;MEC-2&#x304A;&#x3088;&#x3073;MEC-6 MEC-4/MEC-10&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x53EF;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x819C;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x88DC;&#x52A9;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF1A;&#x7DDA;&#x866B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;MEC-2&#x304A;&#x3088;&#x3073;MEC-6&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x611F;&#x899A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x3092;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AC;&#x30F3;&#x30B9;

&#xC774;&#xC628; &#xCC44;&#xB110; &#xB3D9;&#xC885; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; MEC 4 &#xBC0F; MEC 10 &#xC591;&#xC2DD;&#xC5D0; Caenorhabditis elegans&#xC5D0; &#xAC10;&#xAC01; mechanotransduction &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD575;&#xC2EC;&#xC744; &#xD615;&#xC131;. Mec &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB2E4;&#xB978; &#xC81C;&#xD488;&#xC740; &#xBCC0;&#xD658;&#xC758; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xB9AC;&#xD559; &#xD575;&#xC2EC; &#xC120;&#xC218; &#xBE44;&#xB85D;&#xB294; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB450; &#xBCF4;&#xC870; &#xCC44;&#xB110; subunits, MEC-2 (stomatin &#xAC19;&#xC740;)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC44;&#xB110; constitutively &#xD65C;&#xC131; MEC 4/MEC 10 heteromeric&#xC640; coexpressing&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBA55;-6 (paraoxonase &#xAC19;&#xC740;). &#xC774; &#xC791;&#xD488; 2 &#xBA55;&#xACFC; &#xBA55; 6 synergistically&#xC5D0; &#xAC70;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB958; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC0AC;&#xC804; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110; &#xC218;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xCF1C; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC18D;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xD45C;&#xBA74; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC870; subunits &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xB179;&#xC74C; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. 2 &#xC804;&#xADF9; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xC640; &#xC678;&#xBD80; &#xC544;&#xC6C3; macropatch divalent &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xBC0F; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C;, &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xCC44;&#xB110; &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xACB0;&#xACFC;&#xB97C; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF4;&#xB824;&#xBA74; &#xB179;&#xC74C; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBA55; 2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xACB0;&#xD54D;&#xC5D0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCC44;&#xB110; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA55; 2 &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xCF5C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD14C;&#xB864; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC80;&#xC0AC;. MEC 2 &#xBC0F; MEC 6 &#xBCC0;&#xC870; &#xBA55; 10 MEC 4 &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xB85C;&#xCEEC; &#xB9C9; &#xD658;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD798;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBB38;&#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xAC00;&#xC6A9;&#xC131;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560; &#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

MEC 2&#xC640; Caenorhabditis elegans &#xAC10;&#xAC01; mechanotransduction &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; MEC 6: &#xCC44;&#xB110; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBCF4;&#xC870; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;.

El canal i&#xF3;nico formado por las prote&#xED;nas hom&#xF3;logas MEC-4 y MEC-10 constituye el n&#xFA;cleo de un canal de mecanotransducci&#xF3;n sensorial en Caenorhabditis elegans. Aunque los productos de otros genes mec son actores clave en la biof&#xED;sica de la transducci&#xF3;n, el mecanismo por el que contribuyen a las propiedades del canal es desconocido. En este sentido, investigar el papel de dos subunidades de los canales auxiliares, MEC 2-(stomatin-like) y MEC-6 (paraoxonasa-like), por coexpressing con constitutivamente activa MEC-4/MEC-10 canales heterom&#xE9;ricos en ovocitos de Xenopus. Este trabajo se extiende de trabajo previa que demuestra que el MEC y el MEC-2 de 6 sin&#xE9;rgicamente aumentar la corriente macrosc&#xF3;pica. Utilizamos un solo canal grabaciones y bioqu&#xED;mica para demostrar que estas subunidades auxiliares alterar la funci&#xF3;n mediante el aumento del n&#xFA;mero de canales en un estado activo en vez de por afectando dram&#xE1;ticamente sea de un solo canal propiedades o la expresi&#xF3;n de superficie. Tambi&#xE9;n se utilizan dos electrodos fijaci&#xF3;n de tensi&#xF3;n y fuera de espera de grabaci&#xF3;n macropatch para examinar los efectos de cationes divalentes y proteasas, reguladores conocidos de miembros de la familia de canal. Finalmente, se analiza el papel de la uni&#xF3;n de colesterol en el mecanismo de MEC-2 de acci&#xF3;n al medir las corrientes de c&#xE9;lulas enteras y de un solo canal en el MEC-2 mutantes deficientes en la uni&#xF3;n del colesterol. Sugerimos que el MEC y el MEC-2 6-juegan un papel esencial en la modulaci&#xF3;n tanto en el entorno local de la membrana MEC-4/MEC-10 canales y la disponibilidad de estos canales para ser cerrada por la fuerza en vivo,.

MEC-2 y el MEC de 6 en el Caenorhabditis elegans Mecanotransducci&#xF3;n sensorial complejo: subunidades auxiliares que permiten la actividad del canal

&#x767D;&#x5BAB;&#x5BF9;&#x513F;&#x7AE5;&#x80A5;&#x80D6;&#x95EE;&#x9898;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x961F;&#x5DF2;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x589E;&#x52A0;&#x6B65;&#x884C;&#x548C;&#x9A91;&#x81EA;&#x884C;&#x8F66;&#x4E0A;&#x5B66;&#x7684; 50%&#x5728; 5 &#x5E74;&#x5185;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x5B9E;&#x73B0;&#x76EE;&#x6807;&#x9700;&#x8981;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x5B66;&#x6821;&#x65C5;&#x884C;&#x3002;

&#x7F8E;&#x56FD;&#x5B66;&#x6821;&#x65C5;&#x884C;&#x3001; 2009 &#x8D8B;&#x52BF;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;

The White House Task Force on Childhood Obesity has set a goal of increasing walking and biking to school by 50% within 5 years. Meeting the goal requires a detailed understanding of the current patterns of school travel.

U.S. school travel, 2009 an assessment of trends.

La maison-blanche Task Force sur l&#39;ob&eacute;sit&eacute; infantile a fix&eacute; comme objectif d&#39;accro&icirc;tre la marche et le v&eacute;lo &agrave; l&#39;&eacute;cole de 50 % dans les cinq ans. L&#39;objectif de la r&eacute;union n&eacute;cessite une compr&eacute;hension d&eacute;taill&eacute;e des mod&egrave;les actuels de voyage scolaire.

&Eacute;cole am&eacute;ricaine voyager, 2009, une &eacute;valuation des tendances.

Das Wei&szlig;e Haus-Task-Force &uuml;ber Fettleibigkeit bei Kindern hat das Ziel der zunehmenden Wandern und Biken, Schule von 50 % innerhalb von 5 Jahren gesetzt. Das Ziel ist ein detailliertes Verst&auml;ndnis der aktuellen Muster der Schule Reise erforderlich.

US-Schule Reisen, 2009 eine Bewertung von Trends.

La casa bianca Task Force sull&#39;obesit&agrave; infantile ha fissato un obiettivo di crescente a piedi e in bicicletta a scuola da 50% entro 5 anni. Incontro l&#39;obiettivo richiede una comprensione dettagliata dei modelli attuali di school travel.

Viaggio scuola degli Stati Uniti, 2009 una valutazione delle tendenze.

&#x5C0F;&#x5150;&#x80A5;&#x6E80;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x30DB;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30CF;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30B9;&#x30AF;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30B9;&#x5897;&#x52A0;&#x30A6;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x5B66;&#x6821;&#x306B; 50 &#xFF05; &#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30AF; 5 &#x5E74;&#x4EE5;&#x5185;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x4F1A;&#x8B70;&#x5B66;&#x6821;&#x65C5;&#x884C;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x7406;&#x89E3;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x7C73;&#x56FD;&#x306E;&#x5B66;&#x6821;&#x65C5;&#x884C;&#x3001;2009 &#x5E74;&#x306E;&#x52D5;&#x5411;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;

&#xC720;&#xB144;&#xAE30; &#xBE44;&#xB9CC;&#xC5D0; &#xBC31;&#xC545;&#xAD00; &#xD0DC;&#xC2A4;&#xD06C; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xB294; &#xC0B0;&#xCC45; &#xD558; &#xACE0; 5 &#xB144; &#xC774;&#xB0B4; 50% &#xD559;&#xAD50;&#xC5D0; &#xC790;&#xC804;&#xAC70; &#xD0C0;&#xAE30;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC124;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xCDA9;&#xC871; &#xD604;&#xC7AC; &#xD559;&#xAD50; &#xC5EC;&#xD589; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xC790;&#xC138;&#xD788; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBBF8;&#xAD6D; &#xD559;&#xAD50; &#xC5EC;&#xD589;, &#xB3D9;&#xD5A5;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00;&#xB294; 2009.

El grupo de trabajo de la casa blanca en la obesidad infantil ha fijado la meta de aumentar a caminar y andar en bicicleta a la escuela en un 50% dentro de 5 a&ntilde;os. La meta requiere un entendimiento detallado de los patrones actuales de viaje de la escuela.

Austin L. Brown

Department of Molecular and Cellular Physiology

Stanford University

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Austin L. Brown

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular and Cellular Physiology

Stanford University

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Department of Molecular and Cellular Physiology