Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid ...

State University of New York at Stony Brook

&#x539F;&#x56E0;&#x53CA;&#x89E3;&#x51B3;&#x529E;&#x6CD5;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x6D82;&#x62B9;&#x5728;&#x57FA;&#x56E0;&#x5206;&#x578B;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

Cause and solutions to the polymerase chain reaction smear problem in genotyping.

Causes et solutions &agrave; la r&eacute;action en cha&icirc;ne par polym&eacute;rase frottis probl&egrave;me de g&eacute;notypage.

Ursachen und L&ouml;sungen f&uuml;r die Polymerase-Kettenreaktion Abstrich Problem in Genotypisierung.

Cause e soluzioni per la reazione a catena della polimerasi striscio problema di genotipizzazione.

&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x89E3;&#x6C7A;&#x7B56;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x5857;&#x308A;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6D0;&#xC778; &#xBC0F; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD574;&#xACB0;&#xCC45; &#xBB38;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xD615;&#xC5D0; &#xC5BC;&#xB8E9;.

Causas y soluciones para la reacci&oacute;n en cadena polimerasa frotis problema en genotipificaci&oacute;n.

&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x76EE;&#x6807;&#x4E3A;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#xFF1A; &#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT)&#x3001; 5-&#x7F9F;&#x8272;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53; (SERT) &#x548C;&#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x8F6C;&#x8FD0; &#xFF08;&#x51C0;&#x989D;&#xFF09;&#x3002;&#x51E0;&#x5341;&#x5E74;&#x6765;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x652F;&#x6301;&#x5C01;&#x9501;&#x7684; DAT &#x548C;&#x80DE;&#x5916; DA &#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x8C03;&#x89E3;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x5956;&#x52B1;&#x548C;&#x52A0;&#x56FA;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA; (DA) &#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x4E0E;&#x671F;&#x671B;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;DAT (DAT KO) &#x57FA;&#x56E0;&#x5254;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7814;&#x7A76;&#x4EE5;&#x53CA; SERT &#x6216;&#x7F51;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4ECD;&#x81EA;&#x6211;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0; / &#x663E;&#x793A;&#x6761;&#x4EF6;&#x6027;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x504F;&#x7231; (CPP) &#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x5BFC;&#x81F4; DA &#x5047;&#x8BF4;&#x7684;&#x91CD;&#x65B0;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x548C;&#x5197;&#x4F59;&#x5956;&#x52B1;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x5728;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x5956;&#x52B1; DAT &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x643A;&#x5E26;&#x662F;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027; DAT knockin &#x9F20;&#x6807;&#x7EBF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x6291;&#x5236;&#x81EA;&#x53D1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3001; &#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x63D0;&#x5347;&#x80DE;&#x5916;&#x7684; DA &#x4F0F;&#x9694;&#x6838;&#x548C;&#x4E0D;&#x751F;&#x4EA7;&#x5956;&#x52B1; CPP &#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5C01;&#x9501;&#x7684; DAT &#x662F;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x5956;&#x52B1;&#x529F;&#x80FD;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9F20;&#x6807;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x4E13;&#x95E8;&#x7528;&#x4E8E;&#x533A;&#x5206; DAT &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4ECE;&#x7F51;&#x548C; SERT &#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E2D;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;

&#x5E9F;&#x9664;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5956;&#x52B1;&#x3002;

There are three known high-affinity targets for cocaine: the dopamine transporter (DAT), the serotonin transporter (SERT), and the norepinephrine transporter (NET). Decades of studies support the dopamine (DA) hypothesis that the blockade of DAT and the subsequent increase in extracellular DA primarily mediate cocaine reward and reinforcement. Contrary to expectations, DAT knockout (DAT-KO) mice and SERT or NET knockout mice still self-administer cocaine and/or display conditioned place preference (CPP) to cocaine, which led to the reevaluation of the DA hypothesis and the proposal of redundant reward pathways. To study the role of DAT in cocaine reward, we have generated a knockin mouse line carrying a functional DAT that is insensitive to cocaine. In these mice, cocaine suppressed locomotor activity, did not elevate extracellular DA in the nucleus accumbens, and did not produce reward as measured by CPP. This result suggests that blockade of DAT is necessary for cocaine reward in mice with a functional DAT. This mouse model is unique in that it is specifically designed to differentiate the role of DAT from the roles of NET and SERT in cocaine-induced biochemical and behavioral effects.

Abolished cocaine reward in mice with a cocaine-insensitive dopamine transporter.

Il ya trois connus de haute affinit&#xE9; des cibles pour la coca&#xEF;ne: le transporteur de la dopamine (DAT), le transporteur de la s&#xE9;rotonine (SERT), et le transporteur de la noradr&#xE9;naline (NET). Des d&#xE9;cennies d&#x26;#39;&#xE9;tudes en charge de la dopamine (DA) l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que le blocus de la DAT et l&#x26;#39;augmentation subs&#xE9;quente de DA extracellulaire principalement m&#xE9;diation r&#xE9;compense de la coca&#xEF;ne et de renforcement. Contrairement aux attentes, DAT knock-out (DAT-KO) chez la souris et le SERT ou souris knockout NET encore l&#x26;#39;auto-administrer de la coca&#xEF;ne et / ou afficher pr&#xE9;f&#xE9;rence de place conditionn&#xE9;e (RPC) &#xE0; la coca&#xEF;ne, ce qui a conduit &#xE0; la r&#xE9;&#xE9;valuation de l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se DA et la proposition de la redondance circuits de r&#xE9;compense. Pour &#xE9;tudier le r&#xF4;le des DAT en r&#xE9;compense de la coca&#xEF;ne, nous avons g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; une lign&#xE9;e de souris knockin portant un DAT fonctionnelle qui est insensible &#xE0; la coca&#xEF;ne. Chez ces souris, la coca&#xEF;ne supprim&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; locomotrice, ne pas &#xE9;lever DA extracellulaire dans le noyau accumbens, et ne produisent pas de r&#xE9;compense, telle que mesur&#xE9;e par le RPC. Ce r&#xE9;sultat sugg&#xE8;re que le blocage de DAT est n&#xE9;cessaire pour la r&#xE9;compense de la coca&#xEF;ne chez la souris avec un DAT fonctionnelle. Ce mod&#xE8;le de souris est unique en ce qu&#x26;#39;il est sp&#xE9;cifiquement con&#xE7;u pour diff&#xE9;rencier le r&#xF4;le de la DAT &#xE0; partir des r&#xF4;les de NET et SERT en induite par la coca&#xEF;ne effets biochimiques et comportementaux.

R&#xE9;compense de la coca&#xEF;ne abolie chez les souris avec un transporteur de la dopamine de la coca&#xEF;ne-insensible

Es gibt drei bekannte hoher Affinit&auml;t Zielvorgaben f&uuml;r Kokain: der Dopamin-Transporter (DAT), den Serotonin-Transporter (SERT) und die Noradrenalin-Transporter (NET). Jahrzehntelange Studien unterst&uuml;tzen die (DA)-Dopaminhypothese, dass die Blockade der DAT und der anschlie&szlig;ende Anstieg der extrazellul&auml;ren DA in erster Linie Kokain Belohnung und St&auml;rkung vermitteln. Entgegen den Erwartungen DAT ko (DAT-KO) M&auml;use und SERT oder NET Knock-out-M&auml;use noch Selbstverwaltung Kokain und/oder anzeigen konditionierten Ort Pr&auml;ferenz (CPP) mit Kokain, f&uuml;hrte zu die Neubewertung der DA-Hypothese und den Vorschlag von redundanten Belohnung Bahnen. Um die Rolle der DAT in Kokain-Belohnung zu studieren, haben wir eine knockin Maus-Linie, die Durchf&uuml;hrung einer funktionalen DAT, die unempfindlich gegen Kokain wird generiert. Bei diesen M&auml;usen Kokain lokomotorische Aktivit&auml;t unterdr&uuml;ckt, extrazellul&auml;re DA in den Nucleus Accumbens nicht erh&ouml;hen und keine Belohnung gemessen durch CPP produzieren. Dieses Ergebnis legt nahe, dass Blockade der DAT ist notwendig f&uuml;r Kokain Belohnung bei M&auml;usen mit einem funktionalen DAT. Diese Maus-Modell ist einzigartig, da es spezifisch entworfen ist, um die Rolle der DAT von die Rolle des NET und SERT in induziert durch Kokain biochemischen und Verhaltens-Wirkungen zu unterscheiden.

Kokain-Belohnung bei M&auml;usen mit einem Kokain-unempfindliche Dopamin-Transporter abgeschafft.

Ci sono tre noti gli obiettivi ad alta affinit&agrave; per cocaina: il trasportatore della dopamina (DAT), il trasportatore della serotonina (SERT) e del trasportatore della noradrenalina (NET). Decenni di studi supportano l&#39;ipotesi della dopamina (DA) che il blocco di DAT e il conseguente aumento extracellulare DA mediazione principalmente rinforzo e ricompensa cocaina. Contrariamente alle aspettative, topi knockout (KO-DAT) DAT e topi knockout SERT o NET ancora auto-somministrarsi cocaina o visualizzare la preferenza di posto condizionata (CPP) alla cocaina, che ha portato alla rivalutazione dell&#39;ipotesi DA e la proposta di percorsi ridondanti ricompensa. Per studiare il ruolo di DAT in ricompensa cocaina, noi abbiamo generato una linea di mouse knockin portando un DAT funzionale che &egrave; insensibile alla cocaina. In questi topi, cocaina soppressa attivit&agrave; dell&#39;apparato locomotore, non ha fatto elevare extracellulare DA nel nucleus accumbens e non produrre ricompensa come misurato dalla CPP. Questo risultato suggerisce quel blocco di DAT &egrave; necessaria per la ricompensa di cocaina nei topi con un funzionale DAT. Questo modello di mouse &egrave; unico in quanto &egrave; specificamente progettato per differenziare il ruolo dei DAT dai ruoli di NET e SERT in effetti biochimici e comportamentali indotta da cocaina.

Abolita la ricompensa cocaina nei topi con un trasportatore della dopamina cocaina-insensibile.

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;DAT&#xFF09;&#x3001;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;SERT&#xFF09;&#x3068;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;NET&#xFF09;&#xFF1A;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5341;&#x5E74;&#x306F;&#x3001;DAT&#x306E;&#x5C01;&#x9396;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;DA&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5831;&#x916C;&#x3068;&#x5F37;&#x5316;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;DA&#xFF09;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E88;&#x60F3;&#x306B;&#x53CD;&#x3057;&#x3066;&#x3001;DAT&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#xFF08;DAT-KO&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;SERT&#x307E;&#x305F;&#x306F;NET&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7BA1;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x3051;&#x5834;&#x6240;DA&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306E;&#x518D;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x55DC;&#x597D;&#xFF08;CPP&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5197;&#x9577;&#x306E;&#x63D0;&#x6848;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x5831;&#x916C;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3002;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5831;&#x916C;&#x3067;DAT&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x920D;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;DAT&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x884C;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x81EA;&#x767A;&#x904B;&#x52D5;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x5074;&#x5750;&#x6838;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;DA&#x3092;&#x6607;&#x683C;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x305F;&#x3081;&#x3001;CPP&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5831;&#x916C;&#x3092;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;DAT&#x306E;&#x5C01;&#x9396;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;DAT&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5831;&#x916C;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x8A98;&#x767A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;NET&#x304A;&#x3088;&#x3073;SERT&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304B;&#x3089;&#x3001;DAT&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x70B9;&#x3067;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x5EC3;&#x6B62;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5831;&#x916C;

&#xAC70;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBAA9;&#xD45C;: &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; (DAT), &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xC804;&#xC1A1; (SERT) &#xBC0F; &#xB178;&#xB974; &#xC804;&#xC1A1; (&#xC778;&#xD130;&#xB137;). &#xC218;&#xC2ED; &#xB144;&#xAC04; &#xC5F0;&#xAD6C; DAT &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB2E4; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC99D;&#xAC00;&#xC758; &#xBD09;&#xC1C4; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xAC15; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; (DA) &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xB300;&#xC5D0; &#xBC18;&#xD558;&#xB294; DAT &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; (DAT KO) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; SERT &#xB610;&#xB294; NET &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950; &#xC544;&#xC9C1;&#xB3C4; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xD560; &#xBC0F; &#xBC14;&#xB978;&#xB41C; &#xACF3; &#xB2E4; &#xAC00;&#xC124;&#xC758; &#xC7AC;&#xD3C9;&#xAC00; &#xBC0F; &#xC911;&#xBCF5; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC744; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC124;&#xC815; (CPP) &#xD45C;&#xC2DC;. &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xBCF4;&#xC0C1;&#xC5D0; DAT&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; DAT &#xB4E4;&#xACE0; knockin &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC120; &#xC0DD;&#xC131; &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC6B4;&#xC804; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB2E4; &#xD575; accumbens&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; CPP&#xB85C; &#xCE21;&#xC815; &#xB41C; &#xBCF4;&#xC0C1;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4; &#xADF8; &#xBD09;&#xC1C4;&#xC758; DAT &#xAE30;&#xB2A5; DAT.&#xC640; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xBCF4;&#xC0C1;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4; &#xC774; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC774;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD2B9;&#xD788; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC720;&#xB3C4; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xD589;&#xB3D9; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xADF8;&#xBB3C;&#xACFC; SERT&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0;&#xC11C; DAT&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC640; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xBCF4;&#xC0C1;&#xC744; &#xD3D0;&#xC9C0;.

Hay tres conocidos de alta afinidad para los objetivos de la coca&#xED;na: el transportador de dopamina (DAT), el transportador de la serotonina (SERT), y el transportador de norepinefrina (NET). D&#xE9;cadas de estudios apoyan la dopamina (DA) hip&#xF3;tesis de que el bloqueo de DAT y el consiguiente aumento de DA extracelular, principalmente mediar recompensa de coca&#xED;na y el refuerzo. Contrariamente a lo esperado, por nocaut DAT (DAT-KO) ratones y SERT o ratones knock-out NET sigue autoadministrarse coca&#xED;na y / o mostrar preferencia de lugar condicionado (CPP) a la coca&#xED;na, lo que condujo a la reevaluaci&#xF3;n de la hip&#xF3;tesis del fiscal de distrito y la propuesta de los despedidos v&#xED;as de recompensa. Para estudiar el papel de DAT en la recompensa de coca&#xED;na, hemos generado una l&#xED;nea de ratones knockin llevar a un DAT funcional que es insensible a la coca&#xED;na. En estos ratones, la coca&#xED;na suprime la actividad locomotora, no elevar la DA extracelular en el n&#xFA;cleo accumbens, y no produjo recompensa seg&#xFA;n lo medido por CPP. Este resultado sugiere que el bloqueo de DAT es necesario para la recompensa coca&#xED;na en ratones con un DAT funcional. Este modelo de rat&#xF3;n es &#xFA;nico, ya que est&#xE1; espec&#xED;ficamente dise&#xF1;ado para diferenciar el papel de la DAT de las funciones de red y Sert en el consumo de coca&#xED;na, efectos bioqu&#xED;micos y de comportamiento.

La coca&#xED;na Abolido recompensa en ratones con un transportador de dopamina coca&#xED;na y min&#xFA;sculas

&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x4E0E;&#x5220;&#x9664;&#x9664;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x8DEF; 2 (EL2) &#x4E2D;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x751F;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5168;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT) &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; (dmDATx7)&#x3002;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x79CD;&#x6216;&#x4E24;&#x79CD;&#x7684; EL2 &#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x968F;&#x673A;&#x7A81;&#x53D8;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EA7;&#x751F;&#x4EFB;&#x4F55;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x4E0D;&#x80FD;&#x7531;&#x4EFB;&#x4F55;&#x5176;&#x4ED6;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x53D6;&#x4EE3;&#x4E24;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7279;&#x5B9A;&#x8BD5;&#x5242; MTSEA &#x751F;&#x7269;&#x7D20; DTT &#x6CBB;&#x7597;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x540E;&#x4EC5;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A; dmDATx7&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728; dmDATx7 &#x4E2D;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x5176;&#x4ED6;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;MTSEA-&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x6807;&#x8BB0;&#x5FC5;&#x987B;&#x7531; DTT &#x6CBB;&#x7597;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684; EL2 &#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684; EL2 &#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x5F62;&#x6210;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6570;&#x7801;&#x5730;&#x9762;&#x7535;&#x89C6;&#x5904;&#x7406;&#x4E86;&#x8FD0;&#x8F93;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x4E0D;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C0F;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x548C;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x7B26;&#x5408; EL2 &#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x5373; DAT &#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x548C; (&#x6216;) &#x5176;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x3002;

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x5F62;&#x6210;&#x4E8C;&#x786B;&#x952E;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

We have generated a fully functional dopamine transporter (DAT) mutant (dmDATx7) with all cysteines removed except the two cysteines in extracellular loop 2 (EL2). Random mutagenesis at either or both EL2 cysteines did not produce any functional transporter mutants, suggesting that the two cysteines cannot be replaced by any other amino acids. The cysteine-specific reagent MTSEA-biotin labeled dmDATx7 only after a DTT treatment which reduces disulfide bond. Since there are no other cysteines in dmDATx7, the MTSEA-biotin labeling must be on the EL2 cysteines made available by the DTT treatment. This result provides the first direct evidence that the EL2 cysteines form a disulfide bond. Interestingly, the DTT treatment had little effect on transport activity suggesting that the disulfide bond is not necessary for the uptake function of DAT. Our results and previous results are consistent with the notion that the disulfide bond between EL2 cysteines is required for DAT biosynthesis and/or its delivery to the cell surface.

Direct evidence that two cysteines in the dopamine transporter form a disulfide bond.

Nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; un mutant de transporteur (DAT) de dopamine enti&egrave;rement fonctionnel (dmDATx7) avec tous les cyst&eacute;ines supprim&eacute;s sauf les deux cyst&eacute;ines en boucle extracellulaire 2 (EL2). Mutagen&egrave;se al&eacute;atoire &agrave; un ou les deux cyst&eacute;ines de EL2 ne produire pas de n&#39;importe quel mutants transporteur fonctionnelle, ce qui sugg&egrave;re que les deux cyst&eacute;ines ne peuvent &ecirc;tre remplac&eacute;s par n&#39;importe quel autres acides amin&eacute;s. Le r&eacute;actif de cyst&eacute;ine sp&eacute;cifique MTSEA-biotine &eacute;tiquet&eacute; dmDATx7 qu&#39;apr&egrave;s un traitement de TNT, ce qui r&eacute;duit la liaison disulfure. Puisqu&#39;il n&#39;y a aucune autres cyst&eacute;ines dans dmDATx7, l&#39;&eacute;tiquetage des MTSEA-biotine doit &ecirc;tre sur du EL2 cyst&eacute;ines mis &agrave; disposition par le traitement de la TNT. Ce r&eacute;sultat fournit la premi&egrave;re preuve directe que les cyst&eacute;ines EL2 forment un pont disulfure. Fait int&eacute;ressant, le traitement de la TNT avait peu d&#39;effet sur le transport activit&eacute; ce qui sugg&egrave;re que la liaison disulfure n&#39;est pas n&eacute;cessaire pour la fonction de capture de DAT. Nos r&eacute;sultats et les r&eacute;sultats ant&eacute;rieurs sont compatibles avec la notion que la liaison disulfure entre les cyst&eacute;ines EL2 est n&eacute;cessaire pour la biosynth&egrave;se DAT ou sa livraison &agrave; la surface des cellules.

Preuve directe que deux cyst&eacute;ines en transporteur de la dopamine forment un pont disulfure.

Wir haben eine voll funktionsf&auml;hige Dopamin-Transporter (DAT)-Mutante (dmDATx7) mit allen Cysteine entfernt au&szlig;er den zwei Cysteine in extrazellul&auml;re Schleife 2 (EL2) generiert. Zuf&auml;llige Mutagenese an einem oder beiden EL2 Cysteine konnte nicht erstellen alle funktionalen Transporter-Mutanten, die darauf hindeutet, dass die zwei Cysteine durch jede andere Aminos&auml;uren nicht ersetzt werden k&ouml;nnen. Das Reagenz Cystein-spezifische MTSEA-Biotin beschriftet dmDATx7 nur nach einer DVB-t-Behandlung die Disulfidbindung reduziert. Da es keine andere Cysteine in dmDATx7 gibt, muss die MTSEA-Biotin-Kennzeichnung auf die EL2 Cysteine durch die DVB-t-Behandlung zur Verf&uuml;gung gestellt. Dieses Ergebnis stellt erste Beweise, dass die EL2 Cysteine eine Disulfidbindung bilden. Interessanterweise hatte die DTT-Behandlung kaum Auswirkungen auf Transport Aktivit&auml;t darauf hindeutet, dass die Disulfidbindung nicht notwendig f&uuml;r die Aufnahme-Funktion des DAT. Unsere Resultate und Ergebnisse fr&uuml;herer stehen im Einklang mit der Vorstellung, dass die Disulfidbindung zwischen EL2 Cysteine f&uuml;r DAT-Biosynthese und/oder seine Lieferung an der Zelloberfl&auml;che erforderlich ist.

Direkte Beweise, dass zwei Cysteine in der Dopamin-Transporter eine Disulfidbindung bilden.

Noi abbiamo generato un mutante transporter (DAT) completamente funzionale della dopamina (dmDATx7) con tutte le cisteine rimossi tranne i due cisteine nel ciclo extracellulare 2 (EL2). Mutagenesi casuale a uno o entrambi EL2 cisteine non produceva qualsiasi mutanti transporter funzionale, suggerendo che i due cisteine non possono essere sostituiti da altri aminoacidi. Il reagente cisteina specifici MTSEA-biotina etichettati dmDATx7 solo dopo un trattamento di DTT che riduce il legame disolfuro. Poich&eacute; non ci sono nessun altro cisteine in dmDATx7, il MTSEA-biotina etichettatura deve essere sulle cisteine EL2 messi a disposizione dal trattamento DTT. Questo risultato fornisce la prima prova diretta che le cisteine EL2 formano un legame disolfuro. Interessante, il trattamento DTT ha avuto poco effetto sul trasporto attivit&agrave; suggerendo che il legame disolfuro non &egrave; necessario per la funzione di assorbimento di DAT. Nostri risultati e i risultati precedenti sono coerenti con la nozione che il ponte disolfuro tra cisteine EL2 &egrave; necessaria per la biosintesi DAT e/o la sua consegna alla superficie delle cellule.

Prova diretta che due cisteine del trasportatore della dopamina formano un legame disolfuro.

&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; 2 &#xFF08;EL2&#xFF09; &#x3067; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; (DAT) &#x5909;&#x7570;&#x4F53; (dmDATx7) &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x5909;&#x7570; EL2 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x304B;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x4EFB;&#x610F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x304C;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x56FA;&#x6709;&#x8A66;&#x85AC;&#x30E2;&#x30F3; &#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3; dmDATx7 &#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059; DTT &#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x306E;&#x307F;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F;&#x3002;DmDATx7 &#x3067;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30E2;&#x30F3; &#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x6A19;&#x8B58; DTT &#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD; EL2 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C; EL2 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;DTT &#x6CBB;&#x7642;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x8F38;&#x9001;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x30C0;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C; EL2 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E; DAT &#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6982;&#x5FF5;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3; &#x30FB; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; 2 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x30B8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB8E8;&#xD504; 2 (EL2)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC744; &#xC81C;&#xC678; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC744; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC791;&#xB3D9; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; (DAT) &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (dmDATx7)&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;. &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xB610;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450;&#xAC00; EL2 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC784;&#xC758;&#xC758; mutagenesis &#xB450; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xB2E4;&#xB978; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xCCB4;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC804;&#xC1A1; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xC2DC; &#xC57D; MTSEA biotin &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; &#xAC10;&#xC18C; DTT &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; dmDATx7 &#xB77C;&#xB294;. DmDATx7 &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC774;&#xD6C4; MTSEA biotin &#xB77C;&#xBCA8; &#xB9CC;&#xB4E0; DTT &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; EL2 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC774;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; EL2 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, DTT &#xCE58;&#xB8CC;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; &#xC804;&#xC1A1; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC548; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; DAT.&#xC758; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xAC70;&#xC758; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xC804; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xB150; EL2 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xAC04;&#xC758; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xACB0;&#xD569; DAT &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;&#xB294; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294;.

&#xC9C1;&#xC811; &#xC99D;&#xAC70; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790;&#xC5D0; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC774;&#xD669;&#xD654; &#xC720;&#xB300;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos generado a un mutante del transportador (DAT) de dopamina completamente funcional (dmDATx7) con todos ciste&iacute;nas quitados excepto los dos ciste&iacute;nas en lazo extracelular 2 (EL2). Mutag&eacute;nesis al azar en uno o ambos EL2 ciste&iacute;nas no produjo a ning&uacute;n mutantes transportador funcionales, sugiriendo que los dos ciste&iacute;nas no pueden reemplazarse por otros amino&aacute;cidos. El reactivo espec&iacute;fico de ciste&iacute;na MTSEA-biotina marcados dmDATx7 s&oacute;lo despu&eacute;s de un tratamiento de TDT que reduce Enlace disulfuro. Puesto que no hay ning&uacute;n otros ciste&iacute;nas en dmDATx7, el etiquetado de MTSEA-biotina debe estar en las ciste&iacute;nas EL2 puestos a disposici&oacute;n por el tratamiento de la TDT. Este resultado proporciona la primera evidencia directa que las ciste&iacute;nas EL2 forman un enlace disulfuro. Curiosamente, el tratamiento de la TDT tuvo poco efecto sobre transporte actividad sugiriendo que el enlace de disulfuro no es necesario para la funci&oacute;n de absorci&oacute;n de DAT. Nuestros resultados y los resultados son consistentes con la idea de que el enlace de disulfuro entre ciste&iacute;nas EL2 es necesario para la bios&iacute;ntesis DAT o su entrega a la superficie de la c&eacute;lula.

Evidencia directa que dos ciste&iacute;nas en el transportador de dopamina forman un enlace disulfuro.

I trasportatori della dopamina, la noradrenalina e la serotonina sono bersagli molecolari di cocaina, anfetamine e terapeutici antidepressivi. I residui coinvolti nell&#39;associazione di questi farmaci sono sconosciuti. Abbiamo partecipato parecchi tondi di mutagenesi casuale e diretto dal sito del trasportatore della noradrenalina mouse e proiettato per mutanti con alterata sensibilit&agrave; all&#39;inibizione di cocaina di assorbimento del substrato. Abbiamo identificato una mutazione tripla che mantiene la funzione di trasporto di tipo selvatico, ma Visualizza una 37-fold diminuzione della sensibilit&agrave; di cocaina e 24-fold diminuzione della sensibilit&agrave; di desipramina. In contrasto, sensibilit&agrave; di mutante ad anfetamine, metanfetamine e metilfenidato sono solo leggermente modificato. I nostri dati rivelano residui critici contribuendo alle inibizioni potente assorbimento di questi importanti farmaci. Inoltre, questa farmaco-resistente Tripla mutante pu&ograve; essere utilizzata per generare una linea unica knock-in mouse per studiare il ruolo di trasportatore della noradrenalina in effetti addictive di cocaina e gli effetti terapeutici di desipramina.

Mutazioni funzionali in transporter noradrenalina mouse riducono la sensibilit&agrave; all&#39;inibizione di cocaina.

&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x3001; &#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x548C; 5-&#x7F9F;&#x8272;&#x80FA;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8005;&#x3001; &#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x3001; &#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x6297;&#x6291;&#x90C1;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x836F;&#x7269;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x5728;&#x9F20;&#x6807;&#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x51E0;&#x8F6E;&#x7684;&#x968F;&#x673A;&#x548C;&#x5B9A;&#x70B9;&#x8BF1;&#x53D8;&#x548C;&#x7B5B;&#x67E5;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x6539;&#x53D8;&#x5BF9;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x4E09;&#x91CD;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x63A5;&#x8FD1;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x8FD0;&#x8F93;&#x529F;&#x80FD;&#x4FDD;&#x7559;&#xFF0C;&#x4F46;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x8DCC;&#x5E45;&#x4E3A; 37-fold &#x548C; 24-fold &#x5730;&#x6614;&#x5E15;&#x660E;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x3001; &#x7532;&#x57FA;&#x5B89;&#x975E;&#x4ED6;&#x660E;&#x548C;&#x54CC;&#x918B;&#x7532;&#x916F;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x90FD;&#x53EA;&#x662F;&#x7565;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x91CD;&#x8981;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x70C8;&#x6027;&#x5438;&#x6536;&#x7981;&#x5FCC;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x8010;&#x836F;&#x7684;&#x4E09;&#x91CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x6572;&#x95E8;&#x58F0;&#x4E2D;&#x9F20;&#x6807;&#x884C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x7684;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x4E0A;&#x763E;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x5730;&#x6614;&#x5E15;&#x660E;&#x7684;&#x7597;&#x6548;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5728;&#x9F20;&#x6807;&#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x529F;&#x80FD;&#x7A81;&#x53D8;&#x964D;&#x4F4E;&#x5BF9;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;

The transporters of dopamine, norepinephrine and serotonin are molecular targets of cocaine, amphetamine, and therapeutic antidepressants. The residues involved in binding these drugs are unknown. We have performed several rounds of random and site-directed mutagenesis in the mouse norepinephrine transporter and screened for mutants with altered sensitivity to cocaine inhibition of substrate uptake. We have identified a triple mutation that retains close to wild-type transport function but displays a 37-fold decrease in cocaine sensitivity and 24-fold decrease in desipramine sensitivity. In contrast, the mutant's sensitivities to amphetamine, methamphetamine, and methylphenidate are only slightly changed. Our data reveal critical residues contributing to the potent uptake inhibitions by these important drugs. Furthermore, this drug-resistant triple mutant can be used to generate a unique knock-in mouse line to study the role of norepinephrine transporter in the addictive effects of cocaine and the therapeutic effects of desipramine.

Functional mutations in mouse norepinephrine transporter reduce sensitivity to cocaine inhibition.

Les transporteurs de la dopamine, la noradr&eacute;naline et la s&eacute;rotonine sont des cibles mol&eacute;culaires de la coca&iuml;ne, amph&eacute;tamines et th&eacute;rapeutiques antid&eacute;presseurs. Les r&eacute;sidus impliqu&eacute;s dans la liaison de ces drogues sont inconnus. Nous avons effectu&eacute; plusieurs s&eacute;ries de mutag&eacute;n&egrave;se al&eacute;atoire et dirig&eacute;e dans le transporteur de la noradr&eacute;naline de souris et projet&eacute; des mutants avec une sensibilit&eacute; alt&eacute;r&eacute;e &agrave; l&#39;inhibition de la coca&iuml;ne de captation de substrat. Nous avons identifi&eacute; une mutation triple qui conserve &agrave; proximit&eacute; de la fonction de transport de type sauvage, mais affiche une 37-fold diminution de sensibilit&eacute; de la coca&iuml;ne et 24-fold diminution de sensibilit&eacute; de la d&eacute;sipramine. En revanche, sensibilit&eacute;s de mutant d&#39;amph&eacute;tamine, m&eacute;thamph&eacute;tamine ou le m&eacute;thylph&eacute;nidate sont l&eacute;g&egrave;rement modifi&eacute;es. Nos donn&eacute;es r&eacute;v&egrave;lent des r&eacute;sidus importants contribuant aux inhibitions puissant de l&#39;absorption de ces m&eacute;dicaments importants. En outre, cet triple mutant r&eacute;sistant &agrave; la drogue peut &ecirc;tre utilis&eacute; pour g&eacute;n&eacute;rer une ligne unique souris knock-in pour &eacute;tudier le r&ocirc;le du transporteur de la noradr&eacute;naline dans les effets provoquant une d&eacute;pendance de la coca&iuml;ne et les effets th&eacute;rapeutiques de la d&eacute;sipramine.

Les mutations fonctionnelles en transporteur de la noradr&eacute;naline de souris r&eacute;duisent la sensibilit&eacute; &agrave; l&#39;inhibition de la coca&iuml;ne.

Die Transporter von Dopamin, Noradrenalin und Serotonin sind Molekulare Ziele von Kokain, Amphetamine und therapeutische Antidepressiva. Die R&uuml;ckst&auml;nde, die Bindung dieser Drogen beteiligt sind unbekannt. Wir haben mehrere Runden von zuf&auml;lligen und Site-verwiesene Mutagenese in der Maus-Noradrenalin-Transporter und geschirmt f&uuml;r Mutanten mit ver&auml;nderter Sensibilit&auml;t f&uuml;r Kokain Hemmung der Substrat-Aufnahme. Wir haben eine dreifache Mutation identifiziert, die in der N&auml;he von Wildtyp Transportfunktion beh&auml;lt jedoch zeigt eine 37-fold Abnahme der Kokain-Empfindlichkeit und 24-fold Abnahme der Desipramin Empfindlichkeit. Im Gegensatz dazu sind der Mutant Empfindlichkeiten und Amphetamin, Methamphetamin und Methylphenidat nur geringf&uuml;gig ge&auml;ndert. Unsere Daten zeigen kritische R&uuml;ckst&auml;nde Beitrag zum die potente Aufnahme Hemmungen durch diese wichtige Medikamente. Dar&uuml;ber hinaus kann diese medikamentenresistente dreifach Mutant verwendet werden, erzeugen eine einzigartige Knock-in Maus-Linie, um die Rolle der Noradrenalin-Transporter in die s&uuml;chtig machende Effekte von Kokain und die therapeutische Wirkung von Desipramin zu studieren.

Funktionale Mutationen im Maus-Noradrenalin-Transporter reduzieren Sensibilit&auml;t f&uuml;r Kokain-Hemmung.

&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6CBB;&#x7642;&#x6297;&#x3046;&#x3064;&#x85AC;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x85AC;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x8F38;&#x9001;&#x4F53;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x6307;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x5EA6;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x57FA;&#x677F;&#x5438;&#x53CE;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;&#x4E0A;&#x6620;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x4FDD;&#x6301;&#x3001;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E; 37-fold &#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3068;&#x30C7;&#x30B7;&#x30D7;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E; 24-fold &#x4F4E;&#x4E0B;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB; &#x30C7;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x304C;&#x5C11;&#x3057;&#x3060;&#x3051;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x85AC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5438;&#x53CE;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x5909;&#x7570;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x8F38;&#x9001;&#x4F53;&#x306E;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7FD2;&#x6163;&#x6027;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3068;&#x30C7;&#x30B7;&#x30D7;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30B3;&#x30DE;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x8F38;&#x9001;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC;, norepinephrine&#xACFC; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xB294; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;, &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD56D;&#xC6B0;&#xC6B8;&#xC81C;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xD45C;&#xC801;. &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; norepinephrine &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC784;&#xC758; &#xBC0F; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xAC10;&#xB3C5; mutagenesis&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xD310; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC758; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xAC10;&#xB3C4;&#xC640; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC804;&#xC1A1; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xAC10;&#xB3C4; 37-fold &#xAC10;&#xC18C; &#xBC0F; &#xB370; &#xAC10;&#xB3C4; 24-fold &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC554;&#xD398;&#xD0C0;&#xBBFC;, &#xBA54; &#xB2F4; &#xD398;&#xD0C0; &#xBBFC;, &#xBC0F; methylphenidate &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC57D;&#xAC04; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xC784;&#xBB34;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D;&#xB825;&#xC774; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC758; &#xAD00;&#xC131; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB370;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; norepinephrine &#xC804;&#xC1A1;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB178;&#xD06C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB77C;&#xC778; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; norepinephrine &#xC804;&#xC1A1; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xC774; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xB3C4; &#xC904;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Los transportadores de la dopamina, la noradrenalina y la serotonina son dianas moleculares de coca&iacute;na, anfetaminas y antidepresivos terap&eacute;uticos. Los residuos implicados en vinculante de estas drogas son desconocidos. Hemos realizado varias rondas de mutag&eacute;nesis al azar y dirigida en el transportador de norepinefrina de rat&oacute;n y defendido por mutantes con sensibilidad alterada a la inhibici&oacute;n de la coca&iacute;na de la absorci&oacute;n del sustrato. Hemos identificado una mutaci&oacute;n triple que conserva cerca de funci&oacute;n de transporte de tipo salvaje pero muestra una 37-fold disminuci&oacute;n en la sensibilidad de coca&iacute;na y 24-fold disminuci&oacute;n en la sensibilidad de la desipramina. En contraste, las sensibilidades de los mutantes anfetamina, metanfetamina y metilfenidato se cambian solamente levemente. Nuestros datos revelan residuos cr&iacute;ticos contribuyendo a las inhibiciones de absorci&oacute;n potente por estos f&aacute;rmacos importantes. Adem&aacute;s, este mutante triple resistente a los medicamento puede utilizarse para generar una l&iacute;nea &uacute;nica del rat&oacute;n knock-in para estudiar el papel del transportador de norepinefrina en los efectos adictivos de la coca&iacute;na y los efectos terap&eacute;uticos de la desipramina.

Las mutaciones funcionales en transportador de norepinefrina rat&oacute;n reducen la sensibilidad a la inhibici&oacute;n de la coca&iacute;na.

&#x53EF;&#x5361;&#x56E0; methiodide &#xFF08;&#x5398;&#x7C73;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5E26;&#x7535;&#x7684;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x8840;&#x8111;&#x5C4F;&#x969C;&#x3002;&#x5DF2;&#x5047;&#x5B9A;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x5398;&#x7C73;&#x5F71;&#x54CD;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x5916;&#x5468;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5398;&#x7C73;&#x7684; IC(50) &#x503C;&#x5C1A;&#x672A;&#x660E;&#x786E;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x76EE;&#x6807;&#xFF1A; &#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x548C;&#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x3001; 5-&#x7F9F;&#x8272;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x94A0;&#x901A;&#x9053;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EB9;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECE;&#x7A81;&#x89E6;&#x4F53;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6307;&#x51FA;&#x5398;&#x7C73;&#x5355;&#x80FA;&#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x6291;&#x5236; IC(50) &#x503C;&#x662F; 31-fold &#x5230; 184-fold &#x9AD8;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6BCF;&#x4E00;&#x8FD0;&#x8F93;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x3002;&#x80CC;&#x6839;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x6291;&#x5236;&#x94A0;&#x901A;&#x9053;&#x4E0E; 75 microM&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x5398;&#x7C73;&#x6D53;&#x5EA6;&#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x660E;&#x663E; IC(50) &#x8FBE; 3 &#x6BEB;&#x7C73;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5398;&#x7C73;&#x540C;&#x7B49;&#x5242;&#x91CF;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7B49;&#x6548;&#x7684;&#x5916;&#x56F4;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x5BF9;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x4E3B;&#x8981;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0; methiodide potencies&#x3002;

Cocaine methiodide (CM), a charged cocaine analog, cannot pass the blood brain barrier. It has been assumed the effects of systemic CM represent cocaine actions in peripheral tissues. However, the IC(50) values of CM have not been clearly determined for the major cocaine targets: dopamine, norepinephrine, and serotonin transporters, and sodium channels. Using cells transfected with individual transporters from mice and synaptosomes from mouse striatum tissues, we observed that the inhibition IC(50) values for monoamine uptake by CM were 31-fold to 184-fold higher compared to cocaine at each of the transporters. In dorsal root ganglion neurons, cocaine inhibited sodium channels with an apparent IC(50) of 75 microM, while CM showed no observable effect at concentrations up to 3 mM. These results indicate that an equal dose of CM will not produce an equivalent peripheral effect of cocaine.

Potencies of cocaine methiodide on major cocaine targets in mice.

Coca&iuml;ne n&eacute;fopam (CM), un analogue de la coca&iuml;ne charg&eacute;e, impossible de passer la barri&egrave;re h&eacute;mato-enc&eacute;phalique. Il a &eacute;t&eacute; consid&eacute;r&eacute; que les effets syst&eacute;miques cm repr&eacute;sentent des actions de la coca&iuml;ne dans les tissus p&eacute;riph&eacute;riques. Toutefois, les valeurs de l&#39;IC (50) cm n&#39;ont pas &eacute;t&eacute; clairement &eacute;tablis pour les cibles principales de coca&iuml;ne : les transporteurs de la dopamine, la noradr&eacute;naline et la s&eacute;rotonine et les canaux sodiques. &Agrave; l&#39;aide de cellules transfect&eacute;es avec les transporteurs individuels des souris et des synaptosomes de tissus striatum de souris, nous avons observ&eacute; que les valeurs d&#39;IC (50) inhibition d&#39;absorption de monoamine de CM ont &eacute;t&eacute; 31-fold &agrave; 184-fold plus &eacute;lev&eacute; par rapport &agrave; la coca&iuml;ne &agrave; chacun des transporteurs. Dans les neurones des ganglions de la racine dorsale, coca&iuml;ne inhibe les canaux sodiques avec une apparente IC (50) de 75 microM, tandis que CM a montr&eacute; aucun effet observable &agrave; des concentrations pouvant atteindre 3 mM. Ces r&eacute;sultats indiquent qu&#39;une dose &eacute;gale de CM ne produira pas d&#39;effet p&eacute;riph&eacute;rique &eacute;quivalent de coca&iuml;ne.

Puissances de coca&iuml;ne n&eacute;fopam sur des cibles principales de coca&iuml;ne chez la souris.

Kokain Methiodide (CM), ein aufgeladener Kokain-Analog, nicht die Blut-Hirn-Schranke &uuml;bergeben werden. Es wurde davon ausgegangen, dass die Auswirkungen der systemischen CM Kokain Aktionen in peripheren Geweben darstellen. Jedoch die Werte IC (50) cm nicht eindeutig festgestellt f&uuml;r die gro&szlig;en Kokain-Ziele: Dopamin, Noradrenalin und Serotonin-Transporter und Natrium-Kan&auml;le. Die mit einzelnen Transporter von M&auml;usen und Synaptosomes aus Maus Striatum Gewebe transfected Zellen verwenden, wir beobachteten, dass die Hemmung IC (50) Werte f&uuml;r Monoaminoxidase-Aufnahme durch CM 31-fold waren zu 184-fold h&ouml;her im Vergleich zu Kokain an jedem der Transporteure. In Spinalganglien Ganglion Neuronen, Kokain gehemmt Natrium-Kan&auml;le mit einer scheinbaren IC (50) von 75 MicroM, w&auml;hrend CM zeigte keine wahrnehmbare Auswirkung bei Konzentrationen bis zu 3 mM. Diese Ergebnisse zeigen, dass eine gleiche Dosis CM gleicher peripheren Wirkung von Kokain nicht bringen wird.

Potenzen von Kokain Methiodide auf gro&szlig;en Kokain Ziele in M&auml;usen.

Cocaina methiodide (CM), un analogo carico di cocaina, non &egrave; possibile passare la barriera emato-encefalica. &Egrave; stato assunto che gli effetti sistemici cm rappresentano azioni di cocaina nei tessuti periferici. Tuttavia, i valori IC(50) di CM non sono stati chiaramente determinati per gli obiettivi principali di cocaina: i trasportatori della dopamina, noradrenalina e serotonina e canali del sodio. Utilizzando celle transfected con singoli trasportatori da topi e ad dai tessuti di topo striato, abbiamo osservato che i valori IC(50) di inibizione per assorbimento delle monoamine da CM erano 31-fold di 184-fold maggiore rispetto alla cocaina a ciascuno dei trasportatori. Nei neuroni del ganglio dorsale radice, cocaina inibisce canali del sodio con un apparente IC(50) di 75 microM, mentre CM ha mostrato nessun effetto osservabile a concentrazioni fino a 3 mM. Questi risultati indicano che una dose uguale di CM non produrr&agrave; un effetto periferico equivalente di cocaina.

Potenze di cocaina methiodide sui bersagli principali cocaina nei topi.

&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D3;&#x30AF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30C9; (CM)&#x3001;&#x8377;&#x96FB;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x8133;&#x95A2;&#x9580;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5168;&#x8EAB;&#x306E; CM &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x672B;&#x68A2;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;CM &#x306E; ic50 &#x5024; &#xFF08;50 &#x5024;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;: &#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x3001;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3002;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7DDA;&#x6761;&#x4F53;&#x7D44;&#x7E54;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x305F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6291;&#x5236; ic50 &#x5024; &#xFF08;50 &#x5024;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;CM &#x304C; 31-fold &#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5404; 184-fold &#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x5F8C;&#x6839;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3001;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E; ic50 &#x5024; &#xFF08;50 75 &#x306E; microM &#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F; CM &#x4E2D;&#x306E;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; 3 mM &#x307E;&#x3067;&#x3002;&#x7B49;&#x3057;&#x3044;&#x7528;&#x91CF; CM &#x306E;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7B49;&#x4FA1;&#x672B;&#x68A2;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D3;&#x30AF;&#x30FC;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30C9; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E0A;&#x306E;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x3002;

&#xCF54;&#xCE74;&#xC778; methiodide (CM), &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xD608;&#xC561; &#xB1CC; &#xC7A5;&#xBCBD;&#xC744; &#xC804;&#xB2EC;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; CM&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, CM&#xC758; IC(50) &#xAC12; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC8FC;&#xC694; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1;: &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC;, norepinephrine&#xACFC; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xBC0F; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xCC44;&#xB110;. &#xC6B0;&#xB9AC; m &#xBAA8;&#xB178; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC758; &#xC800;&#xD574; IC(50) &#xAC12;&#xC740; 31-fold &#xAD00;&#xCC30; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC640; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; synaptosomes &#xD398; &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, 184-fold &#xB192;&#xC740; &#xAC01; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;. &#xC9C0; &#xB8E8;&#xD2B8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; c M &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xD600; &#xAD00;&#xCC30;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xBC18;&#xBA74; 75 Microm&#xC758; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; IC(50) &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; &#xCC44;&#xB110; &#xC800;&#xD574; 3 m M&#xAE4C;&#xC9C0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; CM&#xC758; &#xB3D9;&#xB4F1;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC758; &#xB3D9;&#xB4F1;&#xD55C; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC950;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC8FC;&#xC694; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; methiodide potencies.

Coca&iacute;na metiodida (CM), un an&aacute;logo de la cargada de coca&iacute;na, no puede pasar la barrera hematoencef&aacute;lica. Se ha asumido que los efectos sist&eacute;micos cm representan acciones de coca&iacute;na en los tejidos perif&eacute;ricos. Sin embargo, los valores IC(50) de CM no han sido claramente determinados por los objetivos principales de la coca&iacute;na: transportadores de la dopamina, norepinefrina y serotonina y los canales de sodio. Usando c&eacute;lulas transfectadas con transportistas individuales de ratones y sinaptosomas de tejidos de rat&oacute;n estriado, observamos que los valores IC(50) de inhibici&oacute;n para la absorci&oacute;n de la monoamina cm fueron 31-fold a 184-fold superior en comparaci&oacute;n con coca&iacute;na en cada uno de los transportadores. En las neuronas del ganglio de ra&iacute;z dorsal, coca&iacute;na inhibe los canales de sodio con un aparente IC(50) de 75 microM, mientras CM no mostr&oacute; ning&uacute;n efecto observable a concentraciones de hasta 3 mM. Estos resultados indican que una dosis igual de CM no producir&aacute; un efecto equivalente perif&eacute;rico de coca&iacute;na.

Potencias de coca&iacute;na metiodida objetivos principales de la coca&iacute;na en ratones.

&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6291;&#x5236;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (DAT)&#x3001; &#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; (&#x51C0;&#x989D;) &#x548C; 5-&#x7F9F;&#x8272;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;RTI-113&#xFF0C;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7684;&#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;&#x662F; 100 &times; &#x5728;&#x6291;&#x5236; DAT &#x6BD4;&#x6291;&#x5236;&#x7F51;&#x66F4;&#x6709;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x7F9F;&#x57FA;&#x7EC4;&#x53BB;&#x9664;&#x6B8B;&#x7559; Tyr151 &#x5728;&#x7F51;&#x7EDC;&#x4E2D;&#x901A;&#x8FC7;&#x5C06;&#x5B83;&#x66FF;&#x6362;&#x4E3A;&#x516C;&#x5171;&#x5C4B; &#xE473;&#xFF0C;DAT&#xFF0C;&#x76F8;&#x5E94;&#x6B8B;&#x7559;&#x589E;&#x52A0; RTI-113 &#x81F3;&#x51C0;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#xFF0C;DAT &#x53CD;&#x5411;&#x7A81;&#x53D8;&#x5219;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x81F3; RTI 113 DAT &#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;RTI-31 &#x6A21;&#x62DF;&#x53E6;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x53D6;&#x800C;&#x4EE3;&#x4E4B;&#x7684;&#x662F;&#x4E00;&#x7EC4;&#x7532;&#x57FA;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6; 2 &beta; &#x4F4D;&#x7F6E;&#x5177;&#x6709;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F5C;&#x4E3A; RTI 113 &#x4F46;&#x4E0E;&#x82EF;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6291;&#x5236;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x540C;&#x6837;&#x597D;&#x65E0;&#x8BBA;&#x7F9F;&#x57FA;&#x7EC4;&#x51FA;&#x5E2D;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6B8B;&#x4F59;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4F5C;&#x51FA;&#x4E86;&#x8D21;&#x732E;&#xFF0C;&#x63A5;&#x8FD1;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6; 2 &beta; &#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x90FD;&#x7B26;&#x5408;&#x5728;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x6700;&#x521D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x91CD;&#x53E0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6709;&#x5BC6;&#x5207;&#x7684;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6211;&#x4EEC;&#x5148;&#x524D;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0; DAT &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x6570;&#x503C;&#x6A21;&#x62DF;&#x8BA1;&#x7B97;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x5BF9;&#x63A5;&#x4EA7;&#x751F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E86;&#x5728; RTI 113 &#x6291;&#x5236;&#x6548;&#x529B;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x4E0E;&#x53EF;&#x5361;&#x56E0;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6; 2 &beta; &#x7EC4;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; 151 &#x4E2D;&#x53BB;&#x7532;&#x80BE;&#x4E0A;&#x817A;&#x7D20;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A21;&#x62DF; RTI 113&#x3002;

Cocaine binds and inhibits dopamine transporter (DAT), norepinephrine transporter (NET) and serotonin transporter. The residues forming cocaine binding sites are unknown. RTI-113, a cocaine analog, is 100Ã— more potent at inhibiting DAT than inhibiting NET. Here we show that removing the hydroxyl group from residue Tyr151 in NET by replacing it with Phe, the corresponding residue in DAT, increased the sensitivity of NET to RTI-113, while the reverse mutation in DAT decreased the sensitivity of DAT to RTI-113. In contrast, RTI-31, another cocaine analog having the same structure as RTI-113 but with the phenyl group at the 2Î² position replaced by a methyl group, inhibits the transporter mutants equally well whether a hydroxyl group is present at the residue or not. The data suggest that this residue contributes to cocaine binding site and is close to the 2Î² position of cocaine analogs. These results are consistent with our previously proposed cocaine-DAT binding model where cocaine initially binds to a site that does not overlap with, but is close to, the dopamine-binding site. Computational modeling and molecular docking yielded a binding model that explains the observed changes in RTI-113 inhibition potencies.

Interaction of tyrosine 151 in norepinephrine transporter with the 2Î² group of cocaine analog RTI-113.

La coca&iuml;ne se lie et inhibe le transporteur de la dopamine (DAT), le transporteur de la noradr&eacute;naline (NET) et le transporteur de la s&eacute;rotonine. Les r&eacute;sidus formant des sites de fixation de coca&iuml;ne sont inconnus. RTI-113, un analogue de la coca&iuml;ne, est plus puissant &agrave; inhiber DAT qu&#39;inhibant NET 100 &times;. Nous d&eacute;montrons que retirer le groupement hydroxyle de r&eacute;sidus Tyr151 dans filet en le rempla&ccedil;ant par Phe, le r&eacute;sidu correspondant dans le DAT, augmente la sensibilit&eacute; du NET &agrave; RTI-113, tandis que la mutation inverse en DAT diminu&eacute; la sensibilit&eacute; de DAT RTI-113. En revanche, RTI-31, un autre coca&iuml;ne analogique ayant la m&ecirc;me structure que la RTI-113 mais avec le groupe ph&eacute;nyle en position 2&beta; remplac&eacute;e par un groupement m&eacute;thyle, inhibe les mutants du transporteur tout aussi bien qu&#39;un groupe hydroxyle est pr&eacute;sent au niveau du r&eacute;sidu ou non. Les donn&eacute;es sugg&egrave;rent que ce r&eacute;sidu contribue au site de liaison de coca&iuml;ne et se trouve &agrave; proximit&eacute; de la position 2&beta; des analogues de la coca&iuml;ne. Ces r&eacute;sultats sont compatibles avec notre mod&egrave;le de liaison de coca&iuml;ne-DAT pr&eacute;alablement propos&eacute; o&ugrave; coca&iuml;ne lie au d&eacute;part vers un site qui ne se chevauche pas avec, mais est proche de, le site de liaison de la dopamine. La mod&eacute;lisation informatique et amarrage mol&eacute;culaire a produit un mod&egrave;le de liaison qui explique les changements observ&eacute;s dans les dilutions de l&#39;inhibition de RTI-113.

Interaction de la tyrosine 151 en transporteur de la noradr&eacute;naline avec le groupe 2&beta; de coca&iuml;ne analogiques RTI-113.

Kokain bindet und hemmt Dopamin-Transporter (DAT), Noradrenalin-Transporter (NET) und Serotonin-Transporter. Die R&uuml;ckst&auml;nde bilden Kokain-Bindungsstellen sind unbekannt. RTI-113, ein Kokain-Analog, ist st&auml;rker auf Hemmung DAT als Hemmung NET 100 &times;. Hier zeigen wir, dass die Empfindlichkeit des NET zu RTI-113, Entfernen der Hydroxylgruppe aus Tyr151 R&uuml;ckstand im Netz ersetzt sie durch Phe, der entsprechende R&uuml;ckstand in DAT, erh&ouml;ht werden, w&auml;hrend die R&uuml;ckmutationsversuch in DAT die Empfindlichkeit des DAT RTI-113 sank. Im Gegensatz dazu hemmt RTI-31, analog einer anderen Kokain haben die gleiche Struktur wie RTI-113 jedoch die Phenylgruppe an der 2&beta;-Position durch eine Methylgruppe ersetzt die Transporter-Mutanten gleicherma&szlig;en gut, ob eine Hydroxylgruppe bei der R&uuml;ckstand anwesend oder nicht ist. Die Daten deuten darauf hin, dass diese R&uuml;ckst&auml;nde zur Kokain-Bindungsstelle tr&auml;gt und in der N&auml;he der 2&beta;-Position der Kokain-Analoga liegt. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit unserer zuvor vorgeschlagenen Kokain-DAT-Bindungsmodell wo Kokain zun&auml;chst an einen Standort, der &uuml;berschneidet sich nicht bindet mit, aber nah an die Dopamin-Bindungsstelle. Computational Modeling und Molekulare Andocken ergab ein Bindungsmodell, das die beobachteten Ver&auml;nderungen im RTI-113 Hemmung Potenzen erkl&auml;rt.

Interaktion von Tyrosin 151 in Noradrenalin-Transporter mit der 2&beta;-Gruppe von Kokain analoge RTI-113.

Cocaina si lega e inibisce il trasportatore della dopamina (DAT), noradrenalina transporter (NET) e trasportatore di serotonina. I residui che formano i siti di legame cocaina sono sconosciuti. RTI-113, un analogo della cocaina, &egrave; pi&ugrave; potente inibisce DAT rispetto inibendo NET 100 &times;. Qui vi mostriamo che rimuovendo il gruppo dell&#39;idrossile da residui Tyr151 in NET sostituendolo con Phe, il residuo corrispondente in DAT, la sensibilit&agrave; aumentata di netto a RTI-113, mentre la mutazione inversa in DAT diminuito la sensibilit&agrave; del DAT di RTI-113. In contrasto, RTI-31, un&#39;altra cocaina analogico avendo la stessa struttura come RTI-113, ma con il gruppo fenile nella posizione del CH2, sostituita da un gruppo metile, inibisce i mutanti transporter altrettanto bene se un gruppo dell&#39;idrossile &egrave; presente presso il residuo o non. I dati suggeriscono che questo residuo contribuisce al sito di legame di cocaina ed &egrave; vicina alla posizione di CH2 di analoghi di cocaina. Questi risultati sono coerenti con il nostro modello di associazione cocaina-DAT precedentemente proposta dove cocaina inizialmente associa a un sito che non si sovrappongono, ma &egrave; vicino a, il sito di legame della dopamina. Modellazione computazionale e docking molecolare ha prodotto un modello di associazione che spiega i cambiamenti osservati in potenze di inibizione RTI-113.

Interazione di tirosina 151 nel trasportatore della noradrenalina con il gruppo CH2 di cocaina analogico RTI-113.

&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; (DAT), &#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#xFF08;&#x7D14;&#x984D;&#xFF09; &#x3068;&#x30BB;&#x30ED;&#x30C8;&#x30CB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RTI 113 &#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;100 &times; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x308A; DAT &#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; DAT RTI 113 &#x3078;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E; DAT &#x306E;&#x9006;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x3001;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; &#x30CD;&#x30C3;&#x30C8; Tyr151 &#x6B8B;&#x57FA;&#x304B;&#x3089; Phe &#x306E; DAT &#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x53D6;&#x308A;&#x5916;&#x3057;&#x304C;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8; RTI 113 &#x3078;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3088;&#x304F;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x6B8B;&#x6E23;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;RTI 31 &#x5225;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048; 2&beta; &#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x57FA;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;RTI 113 &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x3058;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x5747;&#x7B49;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x6B8B;&#x6E23;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E; 2&beta; &#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3069;&#x3053;&#x5F53;&#x521D;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;&#x91CD;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4EE5;&#x524D;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; DAT &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A08;&#x7B97;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x5206;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; RTI 113 &#x963B;&#x5BB3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30FC;&#x306E;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5909;&#x66F4;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30B3;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; 2&beta; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068;&#x30CE;&#x30EB;&#x30A8;&#x30D4;&#x30CD;&#x30D5;&#x30EA;&#x30F3;&#x8F38;&#x9001;&#x4F53;&#x3067;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; 151 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; RTI 113&#x3002;

&#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC804;&#xC1A1; (DAT), &#xB178;&#xB974; &#xC804;&#xC1A1; (&#xC778;&#xD130;&#xB137;) &#xBC0F; &#xC138;&#xB85C;&#xD1A0;&#xB2CC; &#xC218;&#xC1A1;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD615;&#xC131; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RTI-113, &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;&#xB294; 100 &times; &#xC5B5;&#xC81C; &#xADF8;&#xBB3C; &#xBCF4;&#xB2E4; DAT &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB354; &#xAC15;&#xB825; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Phe, DAT&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30;&#xB97C; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558; &#xC5EC; &#xCC0C; &#xAEBC; &#xAE30; &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; tyr151&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218; &#xC0B0; &#xAE30; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC81C;&#xAC70; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; RTI-113, NET&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; DAT&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; RTI-113&#xC5D0; DAT&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. &#xBC18;&#xBA74;, RTI 31 &#xB2E4;&#xB978; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xBA54; &#xD2F8; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xCCB4; 2&beta; &#xC704;&#xCE58;&#xC758; RTI-113&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD398; &#xB2D0; &#xADF8;&#xB8F9;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC804;&#xC1A1; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB611;&#xAC19;&#xC774; &#xC218; &#xC0B0; &#xAE30; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC798;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC81C;&#xC548;&#xC774; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xC720;&#xC0AC; &#xCCB4;&#xC758; 2&beta; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE5D;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5B4;&#xB514; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; &#xCC98;&#xC74C; &#xACB0;&#xC18D;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xACB9;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xCF54;&#xCE74;&#xC778; DAT &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB378; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC0B0; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xB098;&#xC654;&#xACE0; RTI-113 &#xC800;&#xD574; potencies&#xC758; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB378;.

&#xCF54;&#xCE74;&#xC778;&#xC758; 2&beta; &#xADF8;&#xB8F9; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; 151 norepinephrine &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; RTI-113.

Coca&iacute;na se une e inhibe el transportador de dopamina (DAT), transportador de norepinefrina (NET) y transportador de serotonina. Se desconocen los residuos formando sitios de uni&oacute;n de coca&iacute;na. RTI-113, un an&aacute;logo de la coca&iacute;na, es m&aacute;s potente en la inhibici&oacute;n de DAT que inhibir NET 100 &times;. Aqu&iacute; mostramos que eliminar el grupo hidroxilo de residuos Tyr151 en red mediante su sustituci&oacute;n con Phe, el residuo correspondiente en DAT, aument&oacute; la sensibilidad de la red para RTI-113, mientras que la mutaci&oacute;n reversa en DAT disminuye la sensibilidad de DAT a RTI-113. En cambio, RTI-31, coca&iacute;na otro an&aacute;logo que tiene la misma estructura que RTI-113, pero con el grupo fenilo en la posici&oacute;n de 2&beta; substituida por un grupo metilo, inhibe a los mutantes de transportador igualmente bien si un grupo hidroxilo est&aacute; presente en los residuos o no. Los datos sugieren que este residuo contribuye al sitio de uni&oacute;n de coca&iacute;na y est&aacute; cerca de la posici&oacute;n de 2&beta; de an&aacute;logos de coca&iacute;na. Estos resultados son consistentes con nuestro modelo de enlace de coca&iacute;na previamente propuesto-DAT donde coca&iacute;na une inicialmente a un sitio que no se superpone con, pero est&aacute; cerca, el sitio de uni&oacute;n a dopamina. Modelado computacional y acoplamiento molecular rindieron un modelo de enlace que explica los cambios observados en potencias de inhibici&oacute;n de RTI-113.

Erik Hill

Department of Pediatrics

State University of New York at Stony Brook

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

Erik Hill

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State University of New York at Stony Brook

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

Department of Pediatrics