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Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Columbia University

Columbia College

&#x8F6C;&#x8BA9; RNAs &#x88AB;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x524D;&#x4F53; 5&#39; &#x548C; 3&#39; &#x672B;&#x7AEF;&#x7684;&#x6269;&#x5C55;&#x540D;&#x3002;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; P &#x4E2D;&#x79FB;&#x9664; endonucleolytically 5&#39; &#x7AEF;&#x7684;&#x9886;&#x5BFC;&#x8005;&#x3002;tRNase Z tRNA &#x6210;&#x719F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5220;&#x9664; endonucleolytically 3&#39; &#x7AEF;&#x62D6;&#x8F66;&#x3002;&#x5171;&#x540C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5728; chin &#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3001; archaebacteria &#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5982;&#x672A;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x548C;&#x5FC5;&#x987B;&#x7531;&#x5171;&#x540C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8BC4;&#x4F30;&#x6DFB;&#x52A0;&#x9176;&#x7684; 3&#39; &#x7AEF;&#x62D6;&#x8F66;&#x79FB;&#x8D70;&#x540E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3002;tRNase Z &#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7684;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B7E;&#x540D;&#x987A;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5B88;&#x6052;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178;&#x7FA4;&#x96C6; &#xFF08;HxHxDH&#xFF09;&#xFF0C;&#x662F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684; &beta;-&#x5185;&#x9170;&#x80FA;&#x9176;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x5165;&#x624B;&#x6606;&#x866B;&#x6746;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x679C;&#x8747; tRNase Z&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B8C;&#x6210;&#x4E86;&#x4ED6;&#x7684; 18 &#x6B8B;&#x7559; Ala &#x626B;&#x63CF;&#x7FA4;&#x96C6;&#x6765;&#x5206;&#x6790;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5173;&#x952E;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x666F;&#x89C2;&#x3002;&#x548C;&#x4ED6;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7FA4;&#x96C6;&#x5206;&#x4E3A;&#x4E09;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5F71;&#x54CD;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#xFF1A; &#x66FF;&#x6362;&#x516B;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x4E2D;&#x7684;&#x6709;&#x4EC0;&#x4E48;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4E94;&#x4E2A;&#x66FF;&#x6362;&#x9002;&#x5EA6;&#x964D;&#x4F4E;&#x6548;&#x7387; (&#x5927;&#x7EA6; 5-50 &#x500D;) &#x4E2D;&#x4E94;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x3001; &#x4E00;&#x4E2A;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x4E09;&#x7EC4;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x4E00;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;, &#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x4E25;&#x91CD;&#x964D;&#x4F4E;&#x6548;&#x7387; (&#x5927;&#x7EA6; 500-5000 &#x500D;)&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x53CA;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x79BB;&#x89E3;&#x5E38;&#x6570; &#xFF08;Kd &#x503C;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x663E;&#x793A;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B9E;&#x8D28;&#x6027;&#x7684;&#x5DEE;&#x522B;&#xFF0C;&#x548C;&#x516C;&#x91CC; &#xFF08;2-20 nM&#xFF09; &#x987A;&#x5E8F;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x964D;&#x4F4E;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6548;&#x7387;&#x6240;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5728;&#x4ED6;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#x57DF;&#x662F;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684; kcat &#x503C; &#xFF1B;&#x5B88;&#x6052;&#x3001; &#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x4ED6;&#x5185;&#x7684;&#x7FA4;&#x96C6; tRNase Z &#x56E0;&#x6B64;&#x53C2;&#x4E0E;&#x50AC;&#x5316;&#xFF0C;&#x548C;&#x5E95;&#x7269;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x529F;&#x80FD;&#x5176;&#x4ED6;&#x5730;&#x65B9;&#x5FC5;&#x987B;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

&#x5728;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x679C;&#x8747; tRNase Z &#x5728;&#x50AC;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x8D77;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4ED6;&#x57DF;&#x672A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5E95;&#x7269;&#x8BC6;&#x522B;&#x6216;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;

Transfer RNAs are transcribed as precursors with extensions at both the 5' and 3' ends. RNase P removes endonucleolytically the 5' end leader. tRNase Z can remove endonucleolytically the 3' end trailer as a necessary step in tRNA maturation. CCA is not transcriptionally encoded in the tRNAs of eukaryotes, archaebacteria and some bacteria and must be added by a CCA-adding enzyme after removal of the 3' end trailer. tRNase Z is a member of the beta-lactamase family of metal-dependent hydrolases, the signature sequence of which, the conserved histidine cluster (HxHxDH), is essential for activity. Starting with baculovirus-expressed fruit fly tRNase Z, we completed an 18 residue Ala scan of the His cluster to analyze the functional landscape of this critical region. Residues in and around the His cluster fall into three categories based on effects of the substitutions on processing efficiency: substitutions in eight residues have little effect, five substitutions reduce efficiency moderately (approximately 5-50-fold), while substitutions in five conserved residues, one serine, three histidine and one aspartate, severely reduce efficiency (approximately 500-5000-fold). Wild-type and mutant dissociation constants (Kd values), determined using gel shifts, displayed no substantial differences, and were of the same order as kM (2-20 nM). Lower processing efficiencies arising from substitutions in the His domain are almost entirely due to reduced kcat values; conserved, functionally important residues within the His cluster of tRNase Z are thus involved in catalysis, and substrate recognition and binding functions must reside elsewhere in the protein.

Residues in the conserved His domain of fruit fly tRNase Z that function in catalysis are not involved in substrate recognition or binding.

ARN de transfert sont transcrits comme pr&eacute;curseurs avec des extensions aux extr&eacute;mit&eacute;s de la 5&#39; et 3&#39;. RNase P supprime endonucl&eacute;olytique le leader d&#39;extr&eacute;mit&eacute; 5&#39;. tRNase Z s&#39;enl&egrave;vent endonucl&eacute;olytique la remorque 3&#39; fin comme une &eacute;tape n&eacute;cessaire dans la maturation des ARNt. CCA n&#39;est pas cod&eacute; de transcription dans les ARNt eucaryotes, archaebact&eacute;ries et certaines bact&eacute;ries et doit &ecirc;tre ajout&eacute; par une enzyme de la CCA-ajout apr&egrave;s le retrait de la remorque d&#39;extr&eacute;mit&eacute; 3&#39;. tRNase Z est un membre de la famille des b&ecirc;ta-lactamases des hydrolases m&eacute;tal-d&eacute;pendante, la s&eacute;quence de signature dont, le cluster conserv&eacute;e histidine (HxHxDH), est essentiel pour l&#39;activit&eacute;. &Agrave; partir de drosophile exprim&eacute;s par les baculovirus tRNase Z, nous avons termin&eacute; un scan d&#39;Ala 18 r&eacute;sidus de son cluster afin d&#39;analyser le paysage fonctionnel de cette r&eacute;gion critique. R&eacute;sidus dans et autour de sa chute de cluster en trois cat&eacute;gories fond&eacute;es sur les effets des substitutions sur l&#39;efficacit&eacute; de traitement : substitutions dans huit r&eacute;sidus ont peu d&#39;effet, cinq remplacements r&eacute;duisent l&#39;efficacit&eacute; mod&eacute;r&eacute;ment (environ 5 &agrave; 50 fois), tandis que les substitutions dans cinq r&eacute;sidus conserv&eacute;s, une s&eacute;rine, trois histidine et un aspartate, s&eacute;v&egrave;rement r&eacute;duire efficacit&eacute; (environ 500-5000-fois). Les constantes de dissociation sauvage et mutantes (valeurs de Kd), d&eacute;termin&eacute;es &agrave; l&#39;aide de gel de d&eacute;placements, n&#39;affichent aucune diff&eacute;rence substantielle et &eacute;taient du m&ecirc;me ordre que kM (2 &agrave; 20 nM). Traitement inf&eacute;rieur les gains d&#39;efficacit&eacute; d&eacute;coulant de substitutions dans son domaine sont presque enti&egrave;rement due &agrave; des valeurs de kcat r&eacute;duite ; r&eacute;sidus conserv&eacute;s, fonctionnellement importantes au sein de son cluster de tRNase Z sont donc impliqu&eacute;s dans la catalyse et les fonctions de reconnaissance et de liaison substrat doivent r&eacute;sider ailleurs dans la prot&eacute;ine.

R&eacute;sidus dans le conserv&eacute; son domaine de tRNase Z de la mouche des fruits qui fonctionnent dans la catalyse ne sont pas impliqu&eacute;s dans la reconnaissance du substrat ou de liaison.

R&#xFC;ckst&#xE4;nde in der konservierten Seine Dom&#xE4;ne der Fruchtfliege tRNase Z, dass Funktion in der Katalyse sind nicht im Substrat Anerkennung oder Bindung beteiligt.

Trasferimento RNAs sono trascritti come precursori con estensioni sia il 5&#39; e 3&#39; estremit&agrave;. RNasi P rimuove endonucleolytically il leader di estremit&agrave; 5&#39;. tRNase Z pu&ograve; rimuovere endonucleolytically il 3&#39; estremit&agrave; trailer come un passo necessario nella maturazione del tRNA. CCA non &egrave; transcriptionally codificato nel tRNA di eucarioti, archaebacteria e alcuni batteri e dovr&agrave; essere aggiunti da un enzima CCA-aggiunta dopo la rimozione del trailer 3&#39; estremit&agrave;. tRNase Z &egrave; un membro della famiglia di idrolasi metallo-dipendente, la sequenza di firma di cui il cluster conservate istidina (HxHxDH), &egrave; essenziale per l&#39;attivit&agrave; beta-lattamasi. A partire da Mosca della frutta espresse baculovirus tRNase Z, abbiamo completato una scansione di Ala 18 residui della sua cluster per analizzare il paesaggio funzionale di questa regione critica. Residui nel e intorno al suo cluster rientrano in tre categorie basate sugli effetti delle sostituzioni sull&#39;efficienza di elaborazione: sostituzioni in otto residui hanno poco effetto, cinque sostituzioni riducono moderatamente l&#39;efficienza (circa 5-50 volte), mentre le sostituzioni in cinque residui conservati, una serina, istidina tre e uno aspartato, gravemente ridurre efficienza (circa 500-5000-fold). Costanti di dissociazione wild-type e mutanti (valori di Kd), determinati utilizzando gel di turni, visualizzato sostanziali differenze e sono stati dello stesso ordine come kM (2-20 nM). Elaborazione inferiore efficienze derivanti da sostituzioni nel suo dominio sono quasi interamente dovuti a valori ridotti kcat; residui funzionalmente importanti, conservate all&#39;interno del suo cluster di tRNase Z sono cos&igrave; coinvolti nella catalisi, e le funzioni di riconoscimento e legame del substrato devono risiedere altrove nella proteina.

Residui nel suo dominio di Mosca della frutta tRNase Z che funzionano in catalisi non sono coinvolti nel riconoscimento del substrato o associazione conservata.

&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC; Rna &#x4E21;&#x65B9;&#x3001;5&#39; &#x3068; 3&#39; &#x7AEF;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; P endonucleolytically 5&#39; &#x6700;&#x5F8C;&#x306E;&#x5F15;&#x51FA;&#x7DDA;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;tRNase Z endonucleolytically 3&#39; &#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30FC;&#x306F; tRNA &#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x524A;&#x9664;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CCA &#x306F;&#x767A;&#x73FE;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3001;&#x53E4;&#x7D30;&#x83CC;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E; Trna &#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3001;CCA &#x4ED8;&#x52A0;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x9664;&#x53BB;&#x5F8C;&#x306E; 3&#39; &#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30FC;&#x8FFD;&#x52A0;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;tRNase Z &#x91D1;&#x5C5E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x7F72;&#x540D;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; (HxHxDH) &#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E; &beta;-&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4E00;&#x54E1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30AD;&#x30E5;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x767A;&#x73FE;&#x30D5;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C4; &#x30D5;&#x30E9;&#x30A4; tRNase Z &#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x306E; 18 &#x6B8B;&#x6E23; Ala &#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x98A8;&#x666F;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x3068;&#x3001;&#x5F7C;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x79CB;&#x51E6;&#x7406;&#x52B9;&#x7387;&#x306B;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B4;&#x30EA;&#x306B;&#xFF1A; 8 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3001;5 &#x7F6E;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5EA6;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059; (&#x7D04; 5 &#x301C; 50 &#x500D;&#xFF09;&#x3001;5 &#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x57FA; 1 &#x3064;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;3 &#x3064;&#x306E;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x3001;1 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x3067;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x52B9;&#x7387; (&#x7D04; 500-5000 &#x500D;&#xFF09; &#x3092;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x578B;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570; &#xFF08;Kd &#x5024;&#xFF09;&#x3001;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3082;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305A;&#x3001;kM &#xFF08;2 20 nM&#xFF09; &#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x9806;&#x5E8F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3001;&#x5F7C;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x51E6;&#x7406;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B; kcat &#x5024;&#x305F;&#x3081;;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3001;&#x5F7C;&#x5185;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; tRNase Z &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3068;&#x57FA;&#x8CEA;&#x8A8D;&#x8B58;&#x30FB; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5F7C;&#x30D5;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C4; &#x30D5;&#x30E9;&#x30A4; tRNase Z &#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x57FA;&#x8CEA;&#x8A8D;&#x8B58;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x3002;

&#xC804;&#xC1A1; RNAs 5&#39;&#xC640; 3&#39; &#xB05D;&#xC5D0; &#xD655;&#xC7A5;&#xBA85;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. RNase P endonucleolytically 5&#39; &#xB05D; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. tRNase Z tRNA &#xC131;&#xC219;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C; endonucleolytically 3&#39; &#xCD5C;&#xC885; &#xD2B8;&#xB808;&#xC77C;&#xB7EC;&#xB97C; &#xC81C;&#xAC70;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. CCA &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;, archaebacteria &#xBC0F; &#xC77C;&#xBD80; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; Trnas&#xC5D0;&#xC11C; transcriptionally &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xACE0; 3&#39; &#xCD5C;&#xC885; &#xD2B8;&#xB808;&#xC77C;&#xB7EC;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xD6C4; CCA &#xCD94;&#xAC00; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD94;&#xAC00; &#xB418;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. tRNase Z&#xB294; &#xC11C;&#xBA85; &#xC21C;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; (HxHxDH)&#xB294; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAE08;&#xC18D; &#xC885;&#xC18D; hydrolases &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xB77D; &#xD0C0; &#xB9C8; &#xC81C; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xC758; 18 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; Ala &#xC2A4;&#xCE94; &#xC644;&#xB8CC; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xD45C;&#xD604; &#xACFC;&#xC77C; &#xD30C;&#xB9AC; tRNase Z&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD574; &#xC11C;,&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD48D;&#xACBD; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;. &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xC758; &#xC8FC;&#xC704; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC94;&#xC8FC;&#xB85C;&#xC744;: 8 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xAC70;&#xC758; 5 &#xB300;&#xCCB4; &#xC54C;&#xB9DE;&#xAC8C; &#xD6A8;&#xC728; &#xAC10;&#xC18C; (&#xC57D; 5-50 &#xBC30;), 5 &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;, &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0;, 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xD788;&#xC2A4;&#xD2F0;&#xB518; &#xBC0F; &#xD558;&#xB098;&#xC758; aspartate &#xB300;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xC904;&#xC77C; &#xD6A8;&#xC728; (&#xC57D; 500-5000-&#xBC30;). &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; (Kd &#xAC12;), &#xC824; &#xAD50;&#xB300;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098;&#xACE0; kM (2-20 nM) &#xC21C;&#xC11C; &#xC600;&#xB2E4;. &#xB0AE;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC740; &#xADF8;&#xC758; &#xB300;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xAC70;&#xC758; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB3C4;&#xC2EC; &#xACF5;&#xD56D; &#xAC12;; &#xADF8;&#xC758; &#xC548;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874;, &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; tRNase Z&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xAD00;&#xB828; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD310; &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD568;&#xC218; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC8FC;&#xD574; &#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACFC;&#xC77C; &#xD30C;&#xB9AC; tRNase Z&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAE30;&#xD310; &#xC778;&#xC2DD; &#xB610;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBCF4;&#xC874;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;.

ARN de transferencia se transcriben como precursores con extensiones en los extremos tanto 5&#39; y 3&#39;. Rnasa P elimina endonucleolytically el l&iacute;der del extremo 5&#39;. tRNase Z puede eliminar endonucleolytically el trailer del extremo 3&#39; como un paso necesario en la maduraci&oacute;n del tRNA. CCA transcripcionalmente no est&aacute; codificado en los tRNAs de eucariotas, archaebacteria y algunas bacterias y se debe agregar una enzima CCA-agregar despu&eacute;s del retiro del remolque extremo 3&#39;. tRNase Z es un miembro de la familia de beta-lactamasa de hidrolasas dependientes de metal, la secuencia de la firma de los cuales, el cluster de histidina conservado (HxHxDH), es esencial para la actividad. A partir de mosca de la fruta de baculovirus expresados tRNase Z, completamos una exploraci&oacute;n de Ala 18 residuos de su grupo para analizar el paisaje funcional de esta regi&oacute;n cr&iacute;tica. Residuos en los alrededores de su racimo se dividen en tres categor&iacute;as basadas en efectos de las substituciones en eficiencia: sustituciones en ocho residuos tienen poco efecto, cinco sustituciones reducen eficiencia moderado (aproximadamente 5-50-fold), mientras substituciones en cinco residuos conservados, una serina, histidina tres y un aspartato, seriamente reducir la eficiencia (aproximadamente 500-5000-fold). Constantes de disociaci&oacute;n de tipo salvaje y mutante (valores de Kd), determinadas cambios de gel, muestran diferencias substanciales y eran de la misma categor&iacute;a kM (2-20 nM). Menor procesamiento eficiencias derivadas de sustituciones en su dominio son casi en su totalidad debido a la reducida kcat valores; residuos conservados, funcionalmente importantes dentro de su grupo de tRNase Z as&iacute; est&aacute;n involucrados en la cat&aacute;lisis, y las funciones de reconocimiento y Uni&oacute;n del sustrato deben residir en otra parte en la prote&iacute;na.

Residuos en el conservado su dominio de la mosca de la fruta tRNase Z que funcionan en cat&aacute;lisis no est&aacute;n involucrados en el reconocimiento de sustrato o vinculante.

chin &#x5982;&#x88AB;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7ED3;&#x675F;&#x9886;&#x8896;&#x7684; 5&#39; &#x548C; 3&#39; &#x7AEF;&#x62D6;&#x8F66;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x3002;5&#39; &#x7AEF;&#x9886;&#x5BFC;&#x4EBA;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; P&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x738B;&#x56FD;&#x4E2D;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; (tRNase) Z &#x53EF;&#x4EE5;&#x5220;&#x9664; endonucleolytically 3&#39; &#x7AEF;&#x62D6;&#x8F66;&#x3002;((L)&#xFF09; &#x957F;&#x548C;&#x77ED; ((S)&#xFF09; &#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; tRNase Z &#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;tRNase Z(L) &#x5904;&#x7406;&#x6838;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; pre-tRNA &#x5927;&#x7EA6; 1600-fold tRNase Z (S) &#x6BD4;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x5E76;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x62E5;&#x6709;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x4EA4;&#x901A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;tRNase Z(L) &#x80FD;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5904;&#x7406;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6838;-&#x548C; mitochondrially &#x7F16;&#x7801; pre-tRNAs&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x591A;&#x6570;&#x5728; 22 mitochondrially &#x7F16;&#x7801; chin &#x5982;&#x53D1;&#x73B0;&#x8D85;&#x8FC7; 150 &#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; tRNA(Ser(UCN)) &#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F71;&#x54CD;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6548;&#x7387;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x6709;&#x4E9B;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x9176;&#x5207;&#x4F4D;&#x70B9;&#x548C;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66F4;&#x6539;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD; tRNase Z &#x52A0;&#x5DE5;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; pre-tRNAs&#xFF0C;&#x6216;&#x8BB8;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x75C5;&#x3002;

&#x8F6C;&#x8BA9; Z &#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176;&#x5207;&#x4F4D;&#x70B9;&#x3001; &#x5904;&#x7406;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x886C;&#x5E95;&#x4E8C;&#x7EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x81EA;&#x7136;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F71;&#x54CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; pre-tRNASer(UCN) &#x53D1;&#x751F;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;

tRNAs are transcribed as precursors with a 5' end leader and a 3' end trailer. The 5' end leader is processed by RNase P, and in most organisms in all three kingdoms, transfer ribonuclease (tRNase) Z can endonucleolytically remove the 3' end trailer. Long ((L)) and short ((S)) forms of the tRNase Z gene are present in the human genome. tRNase Z(L) processes a nuclear-encoded pre-tRNA approximately 1600-fold more efficiently than tRNase Z(S) and is predicted to have a strong mitochondrial transport signal. tRNase Z(L) could, thus, process both nuclear- and mitochondrially encoded pre-tRNAs. More than 150 pathogenesis-associated mutations have been found in the mitochondrial genome, most of them in the 22 mitochondrially encoded tRNAs. All the mutations investigated in human mitochondrial tRNA(Ser(UCN)) affect processing efficiency, and some affect the cleavage site and secondary structure. These changes could affect tRNase Z processing of mutant pre-tRNAs, perhaps contributing to mitochondrial disease.

Naturally occurring mutations in human mitochondrial pre-tRNASer(UCN) can affect the transfer ribonuclease Z cleavage site, processing kinetics, and substrate secondary structure.

ARNt est transcrits comme pr&eacute;curseurs avec un leader d&#39;extr&eacute;mit&eacute; 5&#39; et d&#39;une remorque d&#39;extr&eacute;mit&eacute; 3&#39;. Le leader d&#39;extr&eacute;mit&eacute; 5&#39; est trait&eacute; par la RNase P, et dans la plupart des organismes dans tous les trois royaumes, ribonucl&eacute;ase de transfert (tRNase) Z peut endonucl&eacute;olytique enlever la remorque d&#39;extr&eacute;mit&eacute; 3&#39;. Long ((L)) et les formes abr&eacute;g&eacute;es de ((S)) du g&egrave;ne tRNase Z sont pr&eacute;sents dans le g&eacute;nome humain. tRNase Z(L) traite un pre-tRNA cod&eacute;es environ 1600-fold plus efficacement que tRNase Z (S) et est cens&eacute; pour avoir un signal fort mitochondriale de transport. tRNase Z(L) a, ainsi, pu traiter les deux nucl&eacute;aire- et mitochondries cod&eacute; pre-tRNAs. Plus de 150 mutations de pathogen&egrave;se associ&eacute;es ont &eacute;t&eacute; retrouv&eacute;es dans le g&eacute;nome mitochondrial, la plupart d&#39;entre eux dans les 22 ARNt mitochondries cod&eacute;. Toutes les mutations &eacute;tudi&eacute;es dans tRNA(Ser(UCN)) mitochondrial humain affectent l&#39;efficacit&eacute; du traitement, et certains affectent le site de clivage et de la structure secondaire. Ces changements pourraient affecter tRNase Z traitement de mutants pre-tRNAs, peut-&ecirc;tre contribuer &agrave; la maladie mitochondriale.

Naturellement les mutations survenant dans pre-tRNASer(UCN) mitochondrial humain peuvent affecter le site de clivage de la ribonucl&eacute;ase Z transfert, traitement cin&eacute;tique et structure secondaire du substrat.

tRNAs sind als Vorl&auml;ufer mit einer 5&#39;-Ende-F&uuml;hrer und ein 3&#39;-Ende-Trailer transkribiert. Der 5&#39;-Ende-F&uuml;hrer wird von RNase P verarbeitet und in den meisten Organismen in alle drei Reiche k&ouml;nnen Transfer Ribonuklease (tRNase) Z Endonucleolytically Entfernen der 3&#39;-Ende-Trailer. Long ((L)) und Kurzformen ((S)) im tRNase Z-gen sind im menschlichen Genom vorhanden. tRNase Z(L) verarbeitet ein nuklear-codierte Pre-tRNA etwa 1600-fold effizienter als tRNase Z (S) und wird voraussichtlich eine starke mitochondriale Transport-Signal haben. tRNase Z(L) konnte, also beide nukleare verarbeiten- und mitochondrially Pre-tRNAs codiert. Mehr als 150 Pathogenese-assoziierten Mutationen es wurden im mitochondrialen Genom, die meisten davon in den 22 mitochondrially codierten tRNAs gefunden. Alle Mutationen, die in menschlichen mitochondrischen tRNA(Ser(UCN)) untersucht Verarbeitungseffizienz, einige ber&uuml;hren und die Spaltung Website und Sekund&auml;rstruktur. Diese &Auml;nderungen k&ouml;nnten tRNase Z Verarbeitung von mutant Pre-tRNAs, vielleicht zur Mitochondriopathie betreffen.

Nat&uuml;rlich k&ouml;nnen auftretende Mutationen im menschlichen mitochondrischen pre-tRNASer(UCN) die &Uuml;bertragung Ribonuklease Z Spaltung Website, Verarbeitung Kinetik und Substrat Sekund&auml;rstruktur beeinflussen.

tRNA &egrave; trascritti come precursori con un leader di estremit&agrave; 5&#39; e 3&#39; estremit&agrave; rimorchio. Il leader di estremit&agrave; 5&#39; &egrave; elaborato da RNasi P, e nella maggior parte degli organismi in tutti e tre i regni, trasferimento ribonucleasi (tRNase) Z pu&ograve; rimuovere endonucleolytically il trailer di estremit&agrave; 3&#39;. Long ((L)) e forme brevi ((S)) del gene della tRNase Z sono presenti nel genoma umano. tRNase Z(L) elabora una pre-tRNA nucleare codificato circa 1600-fold in modo pi&ugrave; efficiente rispetto a tRNase Z (S) e si prevede di avere un segnale forte trasporto mitocondriale. tRNase Z(L) potrebbe, cos&igrave;, processo sia nucleare- ed mitochondrially con codifica pre-tRNAs. Pi&ugrave; di 150 mutazioni associate a patogenesi sono state trovate nel genoma mitocondriale, la maggior parte di loro nel 22 tRNA mitochondrially codificato. Tutte le mutazioni indagate in tRNA(Ser(UCN)) mitocondriale umana possono influenzare l&#39;efficienza di elaborazione, e alcuni possono influenzare il sito di clivaggio e struttura secondaria. Questi cambiamenti potrebbero influenzare il trattamento tRNase Z dei mutanti pre-tRNAs, forse contribuire alla malattia mitocondriale.

Naturalmente le mutazioni che si verificano pre-tRNASer(UCN) mitocondriale umana possono influenzare il sito di clivaggio ribonucleasi Z trasferimento, elaborazione cinetica e struttura secondaria del substrato.

Trna &#x306F; 5&#39; &#x7AEF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x3068; 3&#39; &#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30FC;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;5&#39; &#x7AEF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC; RNase P &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x738B;&#x56FD;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x9001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; (tRNase) Z endonucleolytically &#x524A;&#x9664; 3&#39; &#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30F3;&#x30B0; ((L)) &#x3068;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x30C8; ((S)) &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; tRNase Z &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;tRNase Z(L) &#x6838;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; pre-tRNA &#x7D04; 1600-fold tRNase Z (S) &#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x51E6;&#x7406;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;tRNase Z(L) &#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6838;&#x51E6;&#x7406;- &#x3068; pre-tRNAs mitochondrially &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x4E0A; 150 &#x75C5;&#x614B;&#x95A2;&#x9023;&#x5909;&#x7570;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; 22 mitochondrially &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; Trna &#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E; tRNA(Ser(UCN)) &#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x51E6;&#x7406;&#x52B9;&#x7387;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x75C5;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E; pre-tRNAs &#x306E; tRNase Z &#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x81EA;&#x7136;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2; pre-tRNASer(UCN) &#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x51E6;&#x7406;&#x52D5;&#x614B;, &#x8EE2;&#x9001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC; Z &#x80F8;&#x306E;&#x8C37;&#x9593;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

tRNAs 5&#39; &#xB05D; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC790; 3&#39; &#xCD5C;&#xC885; &#xD2B8;&#xB808;&#xC77C;&#xB7EC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC120;&#xAD6C;&#xC790;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 5&#39; &#xCD5C;&#xC885; &#xB9AC;&#xB354; RNase P&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB418; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0BC;&#xAD6D;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;, &#xC804;&#xC1A1; ribonuclease (tRNase) Z &#xC218; endonucleolytically &#xC81C;&#xAC70; 3&#39; &#xCD5C;&#xC885; &#xD2B8;&#xB808;&#xC77C;&#xB7EC;. ((L)) &#xAE38;&#xACE0; &#xC9E7;&#xC740; ((S)) &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; tRNase Z &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;. tRNase Z(L) &#xCC98;&#xB9AC; &#xD575; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; pre-tRNA &#xC57D; 1600-fold tRNase Z (S) &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xD55C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC804;&#xC1A1; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xC804;&#xB9DD; &#xC774;&#xB2E4;. tRNase Z(L) &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xB458; &#xB2E4; &#xD575;&#xC744; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC218;,-mitochondrially pre-tRNAs &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 150 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; pathogenesis &#xAD00;&#xB828; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xAC8C;&#xB188; 22 mitochondrially &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; Trnas&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAC04; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; Trna(ser(ucn))&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC0AC; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xC77C;&#xBD80; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; 2 &#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC544;&#xB9C8;&#xB3C4; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; pre-tRNAs tRNase Z &#xCC98;&#xB9AC; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; pre-tRNASer(UCN) &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBCC0;&#xC774; &#xC804;&#xC1A1; ribonuclease Z &#xCABC;&#xAC1C; &#xC9D0; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, &#xCC98;&#xB9AC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD310; &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870; &#xB2EC;&#xB77C;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

tRNAs se transcriben como precursores con un l&iacute;der del extremo 5&#39; y un remolque de extremo 3&#39;. El l&iacute;der del extremo 5&#39; es procesado por la Rnasa P, y en la mayor&iacute;a de los organismos en todos los tres reinos, transferencia ribonucleasa (tRNase) Z puede endonucleolytically quitar el trailer del extremo 3&#39;. Largo ((L)) y formas cortas ((S)) del gen tRNase Z est&aacute;n presentes en el genoma humano. tRNase Z(L) procesa un pre-tRNA nuclear-codificados aproximadamente 1600-fold m&aacute;s eficientemente que tRNase Z (S) y se prev&eacute; tener una se&ntilde;al fuerte de transporte mitocondrial. tRNase Z(L) podr&iacute;a, as&iacute;, procesar tanto nuclear- y codificado mitochondrially pre-tRNAs. M&aacute;s de 150 mutaciones asociadas a patogenesia se han encontrado en el genoma mitocondrial, la mayor&iacute;a de ellos en los 22 tRNAs mitochondrially codificado. Todas las mutaciones en tRNA(Ser(UCN)) mitocondrial humano afectan la eficiencia de procesamiento, y algunos afectan al sitio de la hendidura y estructura secundaria. Estos cambios podr&iacute;an afectar tRNase Z procesamiento de mutantes pre-tRNAs, tal vez contribuir a enfermedad mitocondrial.

Naturalmente que ocurren mutaciones en pre-tRNASer(UCN) mitocondrial humano pueden afectar el sitio de la hendidura de ribonucleasa Z de transferencia, cin&eacute;tica de la transformaci&oacute;n y estructura secundaria del sustrato.

tRNase Z&#xFF0C;&#x54EA;&#x4E9B;&#x53EF;&#x4EE5; endonucleolytically &#x5220;&#x9664; pre-tRNA 3&#39; &#x7AEF;&#x62D6;&#x8F66;&#xFF0C;&#x62E5;&#x6709;&#x7B7E;&#x540D;&#x4ED6;&#x57DF; &#xFF08;HxHxDH &#xFF1B;&#x4E3B;&#x9898;&#x4E8C;&#xFF09; &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7684;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x7684; &beta;-&#x5185;&#x9170;&#x80FA;&#x9176;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x4E3B;&#x9898;&#x4E8C;&#x7FA7;&#x57FA;&#x4FA7;&#x534F;&#x8C03;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#xFF0C;&#x6784;&#x6210;&#x50AC;&#x5316;&#x6838;&#x5FC3;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x4E0E;&#x56FE;&#x6848; III-V&#x3002;PxKxRN &#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x6211;&#x7684;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E8C;&#x6C28;&#x57FA;&#x4E00;&#x8FB9;&#x8C03;&#x8282; tRNase Z &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5171;&#x540C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4E2D;&#x7684; anti-determinant &#x5F71;&#x54CD;&#x6BCD;&#x9898;&#x6210;&#x719F; tRNA&#x3002;Ala &#x8D70;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E24;&#x4E2A;&#x540C;&#x6E90;&#x5757;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#x610F;&#x5916;&#x51CF;&#x5C11;&#x50AC;&#x5316;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#x5927;&#x5927;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F71;&#x54CD; k(cat) &#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD; k(M)&#xFF0C;5 &#x81F3; 15 &#x500D; k(M) &#x88AB;&#x4E0A;&#x5347;&#x4E2D;&#x7684; PxKxRN &#x5FAA;&#x73AF;&#x548C;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E2D;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5B88;&#x6052;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x66FF;&#x6362;&#x4E0E;&#x6211;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x589E;&#x52A0; k(M) &#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E3A;&#x57FA;&#x677F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x8868;&#x793A;&#x7684; tRNase Z &#x5904;&#x7406;&#x6210;&#x719F; tRNA &#x4E0E;&#x5171;&#x540C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5728; 3&#39; &#x7AEF;&#x5927;&#x7EA6;&#x6BD4;&#x62E5;&#x6709;&#x7684; 3&#39; &#x7AEF;&#x62D6;&#x8F66;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x51CF;&#x5C11; k(cat) &#x4E0E; k(M)&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5171;&#x540C;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8BC4;&#x4F30; anti-determinant&#xFF0C;&#x5C06;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x81EA;&#x7136;&#x5E8F;&#x5217; pre-tRNA &#x5C11; 80 &#x500D;&#x6709;&#x6548;&#x3002;

&#x610F;&#x5916;&#x8D21;&#x732E; pre-tRNA 3&#39; &#x7AEF;&#x52A0;&#x5DE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x7AEF;&#x7684; tRNase Z &#x4ED6;&#x57DF;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x5757;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x3002;

tRNase Z, which can endonucleolytically remove pre-tRNA 3'-end trailers, possesses the signature His domain (HxHxDH; Motif II) of the beta-lactamase family of metal-dependent hydrolases. Motif II combines with Motifs III-V on its carboxy side to coordinate two divalent metal ions, constituting the catalytic core. The PxKxRN loop and Motif I on the amino side of Motif II have been suggested to modulate tRNase Z activity, including the anti-determinant effect of CCA in mature tRNA. Ala walks through these two homology blocks reveal residues in which the substitutions unexpectedly reduce catalytic efficiency. While substitutions in Motif II can drastically affect k(cat) without affecting k(M), five- to 15-fold increases in k(M) are observed with substitutions in several conserved residues in the PxKxRN loop and Motif I. These increases in k(M) suggest a model for substrate binding. Expressed tRNase Z processes mature tRNA with CCA at the 3' end approximately 80 times less efficiently than a pre-tRNA possessing natural sequence of the 3'-end trailer, due to reduced k(cat) with no effect on k(M), showing the CCA anti-determinant to be a characteristic of this enzyme.

Residues in two homology blocks on the amino side of the tRNase Z His domain contribute unexpectedly to pre-tRNA 3' end processing.

tRNase Z, quel endonucl&eacute;olytique peut retirer des remorques pre-tRNA extr&eacute;mit&eacute; 3&#39;-, poss&egrave;de la signature de son domaine (HxHxDH ; Motif II) de la famille des b&ecirc;ta-lactamases des hydrolases m&eacute;tal-d&eacute;pendante. Motif II combine avec Motifs III-V sur son c&ocirc;t&eacute; carboxy pour coordonner les deux ions m&eacute;talliques divalents, constituant le noyau catalytique. La boucle de PxKxRN et Motif j&#39;ai c&ocirc;t&eacute; amino de Motif II ai sugg&eacute;r&eacute; &agrave; moduler l&#39;activit&eacute; de tRNase Z, y compris l&#39;effet anti-determinant du CCA dans les ARNt mature. Ala promenades &agrave; travers ces deux blocs d&#39;homologie r&eacute;v&egrave;lent des r&eacute;sidus dans lequel les substitutions inopin&eacute;ment r&eacute;duisent l&#39;efficacit&eacute; catalytique. Tandis que les substitutions au Motif II peuvent consid&eacute;rablement affecter k(cat) sans affecter k(M), augmente de 5 &agrave; 15 fois dans k(M) sont observ&eacute;s avec les substitutions dans plusieurs r&eacute;sidus conserv&eacute;s dans la boucle de PxKxRN et le Motif j&#39;ai. Ces augmentations k(M) sugg&egrave;rent un mod&egrave;le pour la liaison du substrat. Expresse tRNase Z traite des ARNt mature avec CCA &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; 3&#39; environ 80 fois moins efficace qu&#39;un pre-tRNA poss&eacute;dant une s&eacute;quence naturelle de la remorque de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; 3&#39;, en raison de la r&eacute;duction k(cat) sans effet sur la k(M), montrant la CCA anti-determinant &ecirc;tre une caract&eacute;ristique de cette enzyme.

R&eacute;sidus en deux blocs de l&#39;homologie du c&ocirc;t&eacute; de l&#39;amin&eacute; de la tRNase Z son domaine contribuent inopin&eacute;ment &agrave; pre-tRNA 3&#39; fin au traitement.

tRNase Z, welche Dose Endonucleolytically entfernen pre-tRNA 3&#39;-Ende-Anh&auml;nger, besitzt der Signatur seine Dom&auml;ne (HxHxDH; Motiv II) aus der Familie der Beta-Lactamase von Metall-abh&auml;ngige-HYDROLASEN. Motiv II kombiniert mit Motiven III-V auf seiner Carboxy-Seite um zwei bivalente Metallionen, Konstituierung den katalytischen Kern zu koordinieren. Die PxKxRN Schleife und Motiv ich amino auf der Motiv II vorgeschlagen wurden, um tRNase Z-Aktivit&auml;t, einschlie&szlig;lich der anti-determinant Wirkung des CCA in Reife tRNA zu modulieren. Ala Spazierg&auml;nge durch diese zwei Homologie-Bl&ouml;cke zeigen R&uuml;ckst&auml;nde, in denen die Ersetzungen unerwartet katalytische Effizienz verringert. W&auml;hrend Substitutionen Motiv II k&ouml;nnen ohne k(M) k(cat) drastisch beeinflussen sind f&uuml;nf und 15 8-fach in k(M) Anstiege mit Ersetzungen mehrere konservierte R&uuml;ckst&auml;nde in der PxKxRN Schleife und Motiv ich. Diese Erh&ouml;hungen der k(M) schlagen ein Modell f&uuml;r Substrat Bindung. Ausdr&uuml;ckliche tRNase Z verarbeitet Reifen tRNA mit CCA am 3&#39;-Ende ca. 80 mal weniger effizient als eine Pre-tRNA besitzen nat&uuml;rliche Folge von den 3&#39;-Ende-Anh&auml;nger, aufgrund der reduzierten k(cat) keine Auswirkungen auf k(M), zeigen die CCA anti-determinant ein Charakteristikum dieses Enzyms zu sein.

R&uuml;ckst&auml;nde in zwei Homologie-Bl&ouml;cken amino seitlich von der tRNase Z seiner Domain tragen unerwartet zu pre-tRNA 3&#39; End-Verarbeitung.

tRNase Z, endonucleolytically che pu&ograve; rimuovere pre-tRNA 3&#39;-fine rimorchi, possiede la firma del suo dominio (HxHxDH; Motif II) della famiglia delle idrolasi metallo-dipendente beta-lattamasi. Motivo II combina con motivi III-V su un lato carbossilico per coordinare due ioni metallici bivalenti, che costituiscono il nucleo catalitico. Il ciclo PxKxRN e Motif sul lato amminico del II motivo ho stato suggerito a modulare l&#39;attivit&agrave; tRNase Z, compreso l&#39;effetto anti-determinant di CCA in tRNA maturo. Ala passeggiate attraverso questi due blocchi di omologia rivelano residui in cui le sostituzioni inaspettatamente riducono l&#39;efficienza catalitica. Mentre le sostituzioni in Motif II possono influenzare drasticamente k(cat) senza influire sulle k(M), aumenti di cinque - a 15 volte in k(M) sono osservati con le sostituzioni in diversi residui conservati nel ciclo PxKxRN e Motif I. Questi aumenti in k(M) suggeriscono un modello per l&#39;associazione di substrato. Espresso tRNase Z i processi tRNA maturo con CCA all&#39;estremit&agrave; 3&#39; circa 80 volte meno efficiente rispetto a un pre-tRNA che possiedono naturale sequenza di 3&#39;-trailer finale, a causa della ridotta k(cat) senza alcun effetto sul k(M), mostrando il CCA anti-determinant essere una caratteristica di questo enzima.

Residui in due blocchi di omologia sul lato amminico di tRNase Z suo dominio inaspettatamente contribuiscono a pre-tRNA 3&#39; fine lavorazione.

tRNase Z &#x306F;&#x3001;&#x524A;&#x9664;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059; endonucleolytically pre-tRNA 3&#39;-&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30FC;&#x3092;&#x7D42;&#x4E86;&#x3001;&#x7F72;&#x540D;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5F7C;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; &#xFF08;HxHxDH;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; II) &#x91D1;&#x5C5E;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x306E; &beta;-&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30DE;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x3002;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; II &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; III-V &#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E; 2&#x4FA1;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x5074;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;PxKxRN &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3068; Motif &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; II &#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x5074;&#x79C1;&#x306F;&#x6210;&#x719F; tRNA &#x306E; CCA &#x306E; anti-determinant &#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;tRNase Z &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ala &#x6563;&#x7B56;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x89E6;&#x5A92;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x7F6E;&#x63DB;&#x304C;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x6E1B;&#x3089;&#x3059;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;K&#xFF08;m&#xFF09; &#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305A; k(cat) &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; II &#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;k&#xFF08;m&#xFF09; &#x306E; 5 &#x301C; 15 &#x500D;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3092;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3068; PxKxRN &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3067;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5897;&#x52A0; k&#xFF08;m&#xFF09; &#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8868;&#x73FE; tRNase Z &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x6210;&#x719F; tRNA &#x306E; 3&#39; &#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x306B; cca &#x306E; 3&#39; &#x81EA;&#x7136;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B; pre-tRNA &#x7D04; 80 &#x500D;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;-&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x306E;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x524A;&#x6E1B;&#x306E; k(cat) k&#xFF08;m&#xFF09;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B; anti-determinant&#x3001;CCA &#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x4E2D;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x3002;

2 &#x3064;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x5074; tRNase Z &#x5F7C;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x4E2D;&#x306E;&#x6B8B;&#x7559;&#x304C;&#x7A81;&#x7136; pre-tRNA 3&#39; &#x7AEF;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

tRNase Z, &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; endonucleolytically pre-tRNA 3&#39;-&#xCD5C;&#xC885; &#xC608;&#xACE0;&#xD3B8; &#xC81C;&#xAC70;, &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xC11C;&#xBA85;&#xC774; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (HxHxDH; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; II)&#xC758; &#xAE08;&#xC18D; &#xC885;&#xC18D; hydrolases &#xBCA0;&#xD0C0;-&#xB77D; &#xD0C0; &#xB9C8; &#xC81C; &#xAC00;&#xC871;&#xC758;. &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; 2 &#xCC28; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD575;&#xC2EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xB450; divalent &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558;&#xB294; carboxy &#xD3B8;&#xC774; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; 3-V&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PxKxRN &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; II &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC5D0; &#xB098; tRNase Z &#xD65C;&#xB3D9;, CCA&#xC758; anti-determinant &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; Trna&#xC5D0; &#xBCC0;&#xC870;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; homology &#xBE14;&#xB85D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Ala &#xC0B0;&#xCC45; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB294; &#xB300;&#xCCB4; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD6A8;&#xC728; &#xAC10;&#xC18C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;. &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; 2&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xCCB4; k(M) &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; k(cat) &#xB098;&#xC624;&#xB294;&#xC9C0; &#xACFC;&#xAC10; &#xD558; &#xAC8C;, &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; k(m)&#xC5D0;&#xC11C; 5 &#xC6D4;&#xC5D0; 15 &#xBC30; &#xC99D;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C;&#xB2E4; PxKxRN &#xB8E8;&#xD504;&#xC640; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4;&#xC640; &#xB098;. K(m)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; tRNase Z &#xCC98;&#xB9AC; CCA&#xC640; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; tRNA 3&#39; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC57D; 80 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB35C; 3&#39; &#xC5D4;&#xB4DC; &#xD2B8;&#xB808;&#xC77C;&#xB7EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; k(cat) k(M), CCA&#xC774;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xC218;&#xB97C; anti-determinant &#xD398;&#xC774;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574;&#xC758; &#xC790;&#xC5F0; &#xC21C;&#xC11C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558;&#xB294; pre-tRNA &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

TRNase Z &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xCE21;&#xC5D0; &#xB450; homology &#xBE14;&#xB85D;&#xC5D0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C; pre-tRNA 3&#39; &#xB05D; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;.

tRNase Z, que endonucleolytically puede quitar acoplados pre-tRNA extremo 3&#39;-, posee la firma su dominio (HxHxDH; Adorno II) de la familia de beta-lactamasa de hidrolasas dependientes de metal. Adorno II combina con motivos III-V en su lado de carboxi coordinar dos iones met&aacute;licos divalentes, que constituyen el n&uacute;cleo catal&iacute;tico. El lazo de PxKxRN y motivo del lado amino de adorno II he sido sugerido para modular la actividad de tRNase Z, incluyendo el efecto anti-determinant de la CCA en el tRNA maduro. Ala caminatas a trav&eacute;s de estos dos bloques de homolog&iacute;a revelan residuos en las cuales las substituciones inesperadamente reducen eficacia catal&iacute;tica. Mientras substituciones en motivo II pueden afectar dr&aacute;sticamente k(cat) sin afectar k, aumenta de cinco a 15 veces en k se observan con sustituciones en varios residuos conservados en el lazo de PxKxRN y adorno I. Estos aumentos en k sugieren un modelo para el atascamiento del substrato. Expresa tRNase Z procesos maduros tRNA con CCA en el extremo 3&#39; aproximadamente 80 veces menos eficiente que un pre-tRNA que poseen una secuencia natural del remolque el extremo 3&#39;-, debido a la reducida k(cat) con ning&uacute;n efecto sobre k, mostrando la CCA anti-determinant a ser una caracter&iacute;stica de esta enzima.

Residuos en dos bloques de homolog&iacute;a en el lado de amino&aacute;cidos de la tRNase Z su dominio contribuyan inesperadamente a pre-tRNA 3&#39; final de procesamiento.

Neela Zareen

Department of Biology

Columbia University

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Neela Zareen

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biology

Columbia University

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Department of Biology