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A Modified EPA Method 1623 that Uses Tangential Flow Hollow-fiber Ultrafiltration and Heat Dissociation Steps to Detect Waterborne <em>Cryptosporidium</em> and <em>Giardia spp.</em>

Cryptosporidium and Giardia species are two of the most prevalent protozoa that cause waterborne diarrheal disease outbreaks worldwide. To better ...

Shaw Environmental & Infrastructure

&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x866B;&#x5375;&#x6709;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6297;&#x836F;&#x6027;&#x5F88;&#x591A;&#x5316;&#x5B66;&#x6740;&#x83CC;&#x5242;&#x5395;&#x3002;&#x7528;&#x4E8E;&#x786E;&#x5B9A;&#x5375;&#x56CA;&#x611F;&#x67D3;&#x529B;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x9F20;&#x6807;&#x3001; &#x9E21;&#x548C;&#x732B;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x9EC4;&#x91D1;&#x6807;&#x51C6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5B83;&#x4EEC;&#x53EA;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5375;&#x56CA;&#x6D3B;&#x529B;&#x7684;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E24;&#x79CD;&#x5907;&#x9009;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x91CF;&#x5316;&#x540E;&#x6CBB;&#x7597;&#x51E0;&#x79CD;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x6740;&#x83CC;&#x5242;&#x5395;&#x7684;&#x53EF;&#x884C; T.&#x866B;&#x866B;&#x5375;&#x3002;&#x9996;&#x5148;&#x662F;&#x9488;&#x5BF9; ACT1 &#x548C; SporoSAG &#x57FA;&#x56E0;&#x6765;&#x679A;&#x4E3E;&#x53EF;&#x884C; T.&#x866B;&#x866B;&#x5375;&#x5B9A;&#x91CF;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9176;&#x5B9E;&#x65F6;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (RT-qPCR) &#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;RT qPCR C(T) &#x503C; Wescodyne(R)&#x3001; &#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4E59;&#x9187;&#x6216;&#x70ED;&#x5904;&#x7406;&#x866B;&#x5375;&#x56CA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5DEE;&#x522B;&#x4E0D;&#x5927;&#x800C;&#x672A;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x63A7;&#x4EF6;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7528;&#x798F;&#x5C14;&#x9A6C;&#x6797;&#x6216; Clorox(R) &#x6CBB;&#x7597;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684; C(T) &#x503C; 2-log(10) &#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; T.&#x866B;&#x56CA;&#x7A7A;&#x6591;&#x8BD5;&#x9A8C; &#xFF08;&#x9876;&#x90E8;&#x6D4B;&#x5B9A;)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8861;&#x91CF;&#x5375;&#x56CA;&#x6D3B;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4F7F;&#x7528;&#x73E0;&#x94E3;&#x524A;&#x548C;&#x80C6;&#x6C41;&#x6D88;&#x5316;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F; excysted &#x866B;&#x5B50;&#x5728;&#x5408;&#x6D41;&#x7684;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5355;&#x5C42;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x9178;&#x5316;&#x4E59;&#x9187;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x5B50;&#x5B62;&#x5B50;&#x6D3B;&#x529B;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11;&#x6216; Wescodyne(R) &#x6CBB;&#x7597;&#x866B;&#x5375;&#x867D;&#x7136;&#x81F3;&#x5C11; 2-log(10) &#x51CF;&#x5C11;&#x6591;&#x5757;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x7684;&#x6709;&#x4EBA;&#x6307;&#x51FA;&#x4E0E; Clorox(R) &#x6CBB;&#x7597;&#x866B;&#x5375;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x798F;&#x5C14;&#x9A6C;&#x6797;&#x6216;&#x70ED;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x866B;&#x5375;&#x56CA;&#x5BFC;&#x81F4;&#x81F3;&#x5C11; 5-log(10) &#x51CF;&#x5C11;&#x6591;&#x5757;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x57FA;&#x4E8E; mRNA &#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027; pcr &#x9488;&#x5BF9; ACT1 &#x6216; SporoSAG &#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x76F8;&#x5BF9;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9876;&#x90E8;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8BC1;&#x660E;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x6548;&#x548C;&#x654F;&#x611F;&#x91CF;&#x5316;&#x5375;&#x56CA;&#x6D3B;&#x529B;&#x4E0E;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x9274;&#x5B9A;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9A;&#x91CF;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x83CC;&#x6591;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5BF9;&#x5316;&#x5B66;&#x6740;&#x83CC;&#x5242;&#x5395;&#x5F13;&#x5F62;&#x866B;&#x866B;&#x5375;&#x7684;&#x6297;&#x6027;&#x3002;

Toxoplasma gondii oocysts are highly resistant to many chemical sanitizers. Methods used to determine oocyst infectivity have relied primarily on mouse, chicken, and feline bioassays. Although considered gold standards, they only provide a qualitative assessment of oocyst viability. In this study, two alternative approaches were developed to quantitate viable T. gondii oocysts following treatment with several common sanitizers. The first is a quantitative reverse transcriptase real-time PCR (RT-qPCR) assay targeting the ACT1 and SporoSAG genes to enumerate viable T. gondii oocysts. RT-qPCR C(T) values between Wescodyne(R), acidified ethanol, or heat treated oocysts were not significantly different as compared with untreated controls. By contrast, treatment with formalin or Clorox(R) resulted in a 2-log(10) reduction in C(T) values. An in vitro T. gondii oocyst plaque assay (TOP-assay) was also developed to measure oocyst viability. This assay used a combination of bead milling and bile digestion, followed by culturing the excysted sporozoites in a confluent fibroblast cell monolayer. Results showed that no significant reduction in sporozoite viability was detected in acidified ethanol or Wescodyne(R) treated oocysts while at least a 2-log(10) reduction in plaques formed was observed with Clorox(R) treated oocysts. Moreover, formalin or heat treatment of oocysts resulted in at least a 5-log(10) reduction in plaques formed. This study demonstrates that an mRNA-based PCR viability assay targeting the ACT1 or SporoSAG genes is a relatively rapid technique compared to in vitro and in vivo assays. In addition, the TOP-assay proved very effective and sensitive at quantifying oocyst viability when compared with animal bioassays.

Using quantitative reverse transcriptase PCR and cell culture plaque assays to determine resistance of Toxoplasma gondii oocysts to chemical sanitizers.

Toxoplasma gondii oocystes sont tr&#xE8;s r&#xE9;sistants &#xE0; de nombreux produits chimiques d&#xE9;sinfectants. Les m&#xE9;thodes utilis&#xE9;es pour d&#xE9;terminer l&#x26;#39;infectiosit&#xE9; des oocystes sont appuy&#xE9;s principalement sur la souris, le poulet, et des essais biologiques f&#xE9;lins. Bien que consid&#xE9;r&#xE9; comme l&#x26;#39;&#xE9;talon-or, ils ne fournissent une &#xE9;valuation qualitative de la viabilit&#xE9; des oocystes. Dans cette &#xE9;tude, deux approches alternatives ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9;es pour quantifier viables T. gondii oocystes apr&#xE8;s le traitement avec plusieurs d&#xE9;sinfectants communs. La premi&#xE8;re est une transcriptase inverse quantitative PCR en temps r&#xE9;el (RT-qPCR) test ciblant les g&#xE8;nes RET1 et SporoSAG d&#x26;#39;&#xE9;num&#xE9;rer viables T. gondii oocystes. RT-qPCR C (T) des valeurs comprises entre Wescodyne (R), l&#x26;#39;&#xE9;thanol acidifi&#xE9;, ou de chaleur oocystes trait&#xE9;s n&#x26;#39;&#xE9;taient pas significativement diff&#xE9;rents par rapport aux t&#xE9;moins non trait&#xE9;s. En revanche, le traitement avec du formol ou Clorox (R) a entra&#xEE;n&#xE9; une 2-log (10) de r&#xE9;duction de C (T) des valeurs. Une in vitro de T. gondii dosage de plaque d&#x26;#39;oocystes (TOP-test) a &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;velopp&#xE9; pour mesurer la viabilit&#xE9; des oocystes. Ce test a utilis&#xE9; une combinaison de fraisage talon et la digestion bile, suivie par la culture des sporozo&#xEF;tes excysted dans une monocouche de cellules fibroblastes confluents. Les r&#xE9;sultats ont montr&#xE9; qu&#x26;#39;aucune r&#xE9;duction significative de la viabilit&#xE9; des sporozo&#xEF;tes a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9; dans de l&#x26;#39;&#xE9;thanol acidifi&#xE9; ou Wescodyne (R) des oocystes trait&#xE9;s tout au moins une r&#xE9;duction de 2 log (10) dans les plaques form&#xE9;es a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e avec Clorox (R) des oocystes trait&#xE9;s. En outre, le traitement au formol ou la chaleur d&#x26;#39;oocystes a fait au moins une r&#xE9;duction de 5 log (10) dans les plaques form&#xE9;es. Cette &#xE9;tude d&#xE9;montre que l&#x26;#39;ARNm d&#x26;#39;un dosage bas&#xE9; sur la viabilit&#xE9; PCR ciblant les g&#xE8;nes Act1 ou SporoSAG est une technique relativement rapide par rapport &#xE0; l&#x26;#39;in vitro et in vivo. En outre, le TOP-test s&#x26;#39;est av&#xE9;r&#xE9; tr&#xE8;s efficace et sensible &#xE0; quantifier la viabilit&#xE9; des oocystes par rapport &#xE0; des essais biologiques d&#x26;#39;origine animale.

Utilisation de la transcriptase inverse quantitative des dosages PCR et culture cellulaire Plaque pour d&#xE9;terminer la r&#xE9;sistance des oocystes de Toxoplasma gondii &#xE0; d&#xE9;sinfectants chimiques

Toxoplasma Gondii Oozysten sind sehr widerstandsf&auml;hig gegen viele chemische Sanitizers. Methoden zur Bestimmung der Oozyste Infektiosit&auml;t haben in erster Linie auf Maus, Huhn und katzenartige Bioassays verlassen. Obwohl Gold Standards, bieten sie nur eine qualitative Bewertung der Oozyste Lebensf&auml;higkeit. In dieser Studie wurden zwei alternative Ans&auml;tze entwickelt, um tragf&auml;hige T. Gondii Oozysten nach Behandlung mit mehreren gemeinsamen Sanitizers Quantifizierung. Die erste ist eine quantitative Reverse Transkriptase Echtzeit-PCR (RT-qPCR) Assay gezielt die Gene ACT1 und SporoSAG um tragf&auml;hige T. Gondii Oozysten aufzulisten. RT-qPCR C(T) Werte zwischen Wescodyne(R), ges&auml;uerte Ethanol oder w&auml;rmebehandelt Oozysten waren nicht signifikant im Vergleich zu unbehandelten Kontrollen. Behandlung mit Formalin oder Clorox(R) f&uuml;hrte hingegen eine Verringerung 2-log(10) C(T) Werte. Ein in-vitro-T. Gondii Oozyste Plakette Assay (TOP-Assay) wurde auch entwickelt, um Oozyste Lebensf&auml;higkeit zu messen. Diese Probe verwendet eine Kombination aus Perlen-Fr&auml;sen und Galle Verdauung, gefolgt von der Kultivierung der Excysted Sporozoites in einem konfluierende Fibroblast Zellen Monolage. Ergebnisse zeigten, dass keine signifikante Verringerung der Sporozoite Lebensf&auml;higkeit in anges&auml;uertem &Auml;thanol festgestellt oder Wescodyne(R) behandelt Oozysten w&auml;hrend mindestens einem 2-log(10) R&uuml;ckgang der Plaketten gebildet mit Clorox(R) beobachtet wurde behandelt Oozysten. Dar&uuml;ber hinaus f&uuml;hrte Formalin oder W&auml;rmebehandlung von Oozysten in mindestens einem 5-log(10) R&uuml;ckgang der Plaketten gebildet. Diese Studie zeigt, dass eine mRNA basierende PCR Entwicklungsf&auml;higkeit-Probe ACT1 oder SporoSAG Gene targeting eine relativ rasche Technik im Vergleich zur in-vitro- und in-vivo-Tests. Dar&uuml;ber hinaus erwies sich der TOP-Assay, sehr effektiv und sensibler auf die Quantifizierung der Oozyste Rentabilit&auml;t im Vergleich zu tierischen Bioassays.

Mit quantitative Reverse-Transkriptase-PCR und Zelle-Kultur-Plaque-Proben Widerstand von Toxoplasma Gondii Oozysten zu chemischen Sanitizers zu bestimmen.

Le oocisti di Toxoplasma gondii sono altamente resistenti a molti disinfettanti chimici. Metodi utilizzati per determinare l&#39;infettivit&agrave; di oocisti hanno contato principalmente sul mouse, pollo e biotest felino. Anche se considerato il gold standard, che forniscono solo una valutazione qualitativa della redditivit&agrave; di oocisti. In questo studio, sono stati sviluppati due approcci alternativi per quantificare vitali oocisti di T. gondii dopo il trattamento con disinfettanti comuni diversi. Il primo &egrave; un transcriptase d&#39;inversione quantitativa Real-Time PCR (RT-qPCR) dosaggio targeting dei geni ACT1 e SporoSAG per enumerare vitali oocisti di T. gondii. RT-qPCR c (t) i valori tra Wescodyne(R), acidificato etanolo o trattate termicamente oocisti non erano significativamente differenti rispetto ai controlli non trattati. Al contrario, trattamento con formalina o Clorox(R) ha provocato una riduzione dei valori di c (t) 2-log(10). Un&#39;analisi in vitro T. gondii oocisti placca (TOP-saggio) &egrave; stata sviluppata anche per misurare la redditivit&agrave; di oocisti. Questo dosaggio utilizzato una combinazione di digestione fresatura e bile perlina, seguita da coltura gli sporozoiti excysted in un monostrato di cellule confluenti del fibroblasto. I risultati hanno mostrato che nessuna riduzione significativa redditivit&agrave; sporozoite &egrave; stato rilevato in etanolo acidificato o Wescodyne(R) trattati oocisti mentre &egrave; stata osservata almeno una riduzione 2-log(10) in placche formate con Clorox(R) trattati oocisti. Inoltre, formalina o trattamento termico di oocisti ha provocato almeno una riduzione 5-log(10) in placche formate. Questo studio dimostra che un mRNA-based PCR targeting dei geni ACT1 o SporoSAG &egrave; una tecnica relativamente rapida rispetto ai saggi in vitro e in vivo. Inoltre, il TOP-saggio si dimostr&ograve; molto efficace e sensibile a quantificare la redditivit&agrave; oocisti quando confrontato con analisi biologiche animali.

Utilizzando quantitativi reverse transcriptase PCR e cellula placca cultura dosaggi per determinare la resistenza delle oocisti di Toxoplasma gondii a disinfettanti chimici.

&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x6D88;&#x6BD2;&#x5264;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3001;&#x30CB;&#x30EF;&#x30C8;&#x30EA;&#x3001;&#x30CD;&#x30B3;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x983C;&#x3063;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x91D1;&#x306E;&#x6A19;&#x6E96;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x3060;&#x3051;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x306A;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x6D88;&#x6BD2;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x306B;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x5217;&#x6319;&#x3059;&#x308B;ACT1&#x3068;SporoSAG&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;PCR&#xFF08;RT-QPCR&#xFF09;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; RT-qPCR&#x306B;C&#xFF08;T&#xFF09;Wescodyne&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5024;&#xFF08;R&#xFF09;&#x3001;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x71B1;&#x51E6;&#x7406;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x672A;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x5BFE;&#x7167;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30DB;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EA;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;R&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;C&#xFF08;T&#xFF09;&#x5024;&#x306E;2  - &#x30ED;&#x30B0;&#xFF08;10&#xFF09;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#xFF08;TOP-&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#xFF09;&#x306B;&#x3082;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5358;&#x5C64;&#x3067;&#x8131;&#x56A2;&#x3057;&#x305F;&#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x7D9A;&#x3044;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x30DF;&#x30EB;&#x3084;&#x80C6;&#x6C41;&#x3001;&#x6D88;&#x5316;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x30ED;&#x30B0;&#xFF08;10&#xFF09;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;R&#xFF09;&#x51E6;&#x7406;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30DD;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x9178;&#x6027;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;Wescodyne&#xFF08;R&#xFF09;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306F;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30DB;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EA;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x71B1;&#x51E6;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;5&#x30ED;&#x30B0;&#xFF08;10&#xFF09;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ACT1&#x307E;&#x305F;&#x306F;SporoSAG&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;mRNA&#x306E;PCR&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;TOP-&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5316;&#x5B66;&#x6D88;&#x6BD2;&#x306B;&#x30C8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;PCR&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;

Toxoplasma gondii oocysts&#xB294; &#xB9CE;&#xC740; &#xD654;&#xD559; &#xC18C;&#xB3C5; &#xC81C;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAC15;&#xD558;&#xB2E4;. Oocyst infectivity &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;, &#xB2ED;, &#xACE0;&#xC591;&#xC774; bioassays&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACE8;&#xB4DC; &#xD45C;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB2E8;&#xC9C0; oocyst &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xC9C8;&#xC801; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB300;&#xCCB4; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC0B4; &#xADE0; &#xC81C;&#xC640; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; T. gondii oocysts quantitate&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC5F4;&#xAC70; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; T. gondii oocysts ACT1 &#xBC0F; SporoSAG &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB7C9; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR (RT qPCR) &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC774;&#xB2E4;. RT qPCR C(T) &#xAC12;&#xC774; Wescodyne(R), acidified &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C; &#xB610;&#xB294; &#xC5F4; &#xCC98;&#xB9AC; oocysts &#xC0AC;&#xC774; &#xCE58;&#xB8CC; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD3EC; &#xB974; &#xB9D0;&#xB9B0; &#xB610;&#xB294; Clorox(R) &#xCE58;&#xB8CC; C(T) &#xAC12;&#xC5D0; 2-log(10) &#xAC10;&#xC18C; &#xACB0;&#xACFC;. &#xCCB4; &#xC678; T. gondii oocyst &#xD50C; &#xB77C;&#xD06C; &#xC2DC;&#xD5D8; (&#xC704;&#xCABD;-&#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;) &#xB610;&#xD55C; oocyst &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; confluent fibroblast &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xCE35;&#xC5D0; excysted sporozoites &#xBC30;&#xC591; &#xC774;&#xC5B4;&#xC11C; &#xBE44;&#xB4DC; &#xBC00;&#xB9C1; &#xBC0F; &#xB2F4; &#xC999; &#xC18C;&#xD654;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4; acidified &#xC5D0;&#xD0C4;&#xC62C; sporozoite &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB610;&#xB294; Wescodyne(R) &#xCE58;&#xB8CC; oocysts &#xD50C; &#xB77C;&#xD06C; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 2-log(10) &#xAC10;&#xC18C; clorox(r)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; oocysts &#xCDE8;&#xAE09;. &#xB610;&#xD55C;, &#xD3EC; &#xB974; &#xB9D0;&#xB9B0; &#xB610;&#xB294; &#xC5F4; &#xCC98;&#xB9AC; oocysts &#xD50C; &#xB77C;&#xD06C; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 5-log(10) &#xAC10;&#xC18C; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC774; &#xD559;&#xBB38;&#xC740; &#xC124;&#xBA85; &#xD55C;&#xB2E4; mRNA &#xAE30;&#xBC18; PCR &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xBD84;&#xC11D; ACT1 &#xB610;&#xB294; SporoSAG &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE60;&#xB978; &#xAE30;&#xC220; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC704; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xB3D9;&#xBB3C; bioassays&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; oocyst &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC785;&#xC99D; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xD654;&#xD559; &#xC18C;&#xB3C5; &#xC81C;&#xC5D0; Toxoplasma gondii oocysts&#xC758; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC815;&#xB7C9; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; PCR &#xBC0F; &#xC140; &#xBB38;&#xD654; &#xD328;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

Ooquistes de Toxoplasma gondii son altamente resistentes a muchos desinfectantes qu&#xED;micos. Los m&#xE9;todos utilizados para determinar la infectividad de ooquistes se han basado principalmente en el rat&#xF3;n, el pollo, y bioensayos de felinos. Aunque se consideran las normas de oro, que s&#xF3;lo proporcionan una evaluaci&#xF3;n cualitativa de la viabilidad de los ooquistes. En este estudio, dos enfoques alternativos se han desarrollado para cuantificar viables de T. gondii ooquistes despu&#xE9;s del tratamiento con varios desinfectantes comunes. La primera es una transcriptasa inversa cuantitativa en tiempo real PCR (RT-PCR cuantitativa) de ensayo dirigido a los genes ACT1 y SporoSAG para enumerar viables de T. gondii ooquistes. RT-qPCR C (T) valores entre Wescodyne (R), etanol acidificado, o calor oocistos tratados no fueron significativamente diferentes en comparaci&#xF3;n con los controles no tratados. Por el contrario, el tratamiento con formalina o Clorox (R) result&#xF3; en un 2-log (10) reducci&#xF3;n en C (T) valores. Una in vitro de T. gondii ensayo de placa de ooquistes (TOP-ensayo) tambi&#xE9;n fue desarrollado para medir la viabilidad de los ooquistes. Este ensayo utiliza una combinaci&#xF3;n de molienda con perlas y la digesti&#xF3;n biliar, seguido por cultivo de los esporozoitos excysted en una monocapa de c&#xE9;lulas de fibroblastos confluente. Los resultados mostraron que ninguna reducci&#xF3;n significativa en la viabilidad esporozoito se detect&#xF3; en etanol acidificado o Wescodyne (R) oocistos tratados mientras que al menos una reducci&#xF3;n de 2-log (10) en las placas formadas se observ&#xF3; con Clorox (R) oocistos tratados. Adem&#xE1;s, el tratamiento con formalina o calor de ooquistes result&#xF3; en al menos una reducci&#xF3;n de 5-log (10) en placas formadas. Este estudio demuestra que un ensayo basado en la PCR ARNm viabilidad orientaci&#xF3;n de los genes ACT1 o SporoSAG es una t&#xE9;cnica relativamente r&#xE1;pida en comparaci&#xF3;n con in vitro y en ensayos in vivo. Adem&#xE1;s, el TOP-ensayo demostrado ser muy eficaz y sensible a la cuantificaci&#xF3;n de la viabilidad de ooquistes cuando se compara con los bioensayos animales.

Uso de la transcriptasa reversa cuantitativa de PCR y ensayos en cultivos celulares de placa para determinar la resistencia de los ooquistes de Toxoplasma gondii a los desinfectantes qu&#xED;micos

Leah Fohl Villegas

Shaw Environmental & Infrastructure

A Modified EPA Method 1623 that Uses Tangential Flow Hollow-fiber Ultrafiltration and Heat Dissociation Steps to Detect Waterborne Cryptosporidium and Giardia spp.