electroporation-hindbrain-to-trace-axonal-trajectories-synaptic

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Electroporation of  the chick embryonic neural tube has many advantages such as being quick and efficient  for the expression of foreign genes into ...

The Hebrew University of Jerusalem

&#x4E2D;&#x592E;&#x80A5;&#x80D6;&#x662F;&#x7ECF;&#x5E38;&#x4E0E;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x708E;&#x75C7;&#x53CA;&#x809D;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#xFF0C;&#x5728;&#x6B64;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F53;&#x5916;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5982;&#x679C;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x8BF1;&#x5BFC; preexposed &#x5BF9;&#x708E;&#x75C7;&#x523A;&#x6FC0;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&#x4ECE; &#xFF08;&#x5398;&#x7C73;&#xFF09; &#x672A;&#x7ECF;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x7684; 3T3 L1 &#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x6DB2;&#x6216;&#x4E0E; TNFalpha &#xFF08;CM TNFalpha) &#x7528;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x7CAE;&#x519C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x809D;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x68C0;&#x6D4B;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5728; CM TNFalpha &#x51E0;&#x79CD;&#x708E;&#x75C7;&#x4ECB;&#x8D28;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;CM TNFalpha &#x6CBB;&#x7597;&#x7CAE;&#x519C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x51FA;&#x7EA6; 45%&#x51CF;&#x5C11;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x523A;&#x6FC0;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x3001; &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x5E95;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; B&#x3001; &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53CA;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;-3 &#x5398;&#x7C73;&#x5904;&#x7406;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5982;&#x679C;&#x4E0D;&#x6539;&#x53D8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E30;&#x5EA6;&#x603B;&#x91CF;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x5B83;&#x7531;&#x4E8C;&#x6298;&#x5728;&#x5398;&#x7C73;&#x6CBB;&#x7597;&#x7CAE;&#x519C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5374;&#x4E0D;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x66B4;&#x9732;&#x5398;&#x7C73;-TNFalpha&#x3002;IL 1beta mRNA &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x9AD8;&#x67B6;&#x4E09;&#x6298;&#x4E2D; TNFalpha &#x6CBB;&#x7597;&#x8102;&#x80AA;&#x548C; CM TNFalpha &#x4E86; 10 &#x500D;&#x6D53;&#x5EA6;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684; IL 1beta &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; TNFalpha &#x6216; IL 1alpha&#x3002;IL 1beta &#x76F4;&#x63A5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x5728;&#x7CAE;&#x519C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;HepG2&#xFF0C;&#x548C;&#x539F;&#x4EE3;&#x5927;&#x9F20;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5F53; TNFalpha &#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x6CCC;/&#x751F;&#x4EA7;&#x7684; IL 1beta &#x4ECE;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6291;&#x5236;&#x767D;&#x4ECB;&#x7D20;-1 &#x8F6C;&#x6362;&#x9176; &#xFF08;&#x51B0;-1) &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E8C; &#xFF08;&#x4EA4;&#x6D41;-YVAD-&#x897F;&#x9EA6;&#x514B;)&#xFF0C;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x767D;&#x4ECB;&#x7D20;-1 &#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x6CBB;&#x7597;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x5230; CM TNFalpha &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5927;&#x7F51;&#x819C;&#x8102;&#x80AA;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x7684; IL 1beta &#x5206;&#x6CCC;&#x76F8;&#x5173;&#x4E0E;&#x4F53;&#x91CD;&#x6307;&#x6570; (R(2) = 0.639&#xFF0C;P &lt; 0.01&#xFF09;&#xFF0C;&#x548C;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; CM &#x8BF1;&#x5BFC;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297; HepG2 &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;inhibitable &#x7684;&#x767D;&#x4ECB;&#x7D20;-1 &#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-1beta &#x53EF;&#x80FD;&#x6784;&#x6210;&#x6444;&#x52A8;&#x76F8;&#x58F0;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x3002;

&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-1beta &#x53EF;&#x8C03;&#x89E3;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x62B5;&#x6297;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8102;&#x80AA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

Central obesity is frequently associated with adipose tissue inflammation and hepatic insulin resistance. To identify potential individual mediators in this process, we used in vitro systems and assessed if insulin resistance in liver cells could be induced by secreted products from adipocytes preexposed to an inflammatory stimulus. Conditioned medium from 3T3-L1 adipocytes pretreated without (CM) or with TNFalpha (CM-TNFalpha) was used to treat Fao hepatoma cells. ELISAs were used to assess the concentration of several inflammatory mediators in CM-TNFalpha. CM-TNFalpha-treated Fao cells exhibited about 45% diminution in insulin-stimulated phosphorylation of insulin receptor, insulin receptor substrate proteins, protein kinase B, and glycogen synthase kinase-3 as compared with CM-treated cells, without changes in the total abundance of these protein. Insulin increased glycogenesis by 2-fold in CM-treated Fao cells but not in cells exposed to CM-TNFalpha. Expression of IL-1beta mRNA was elevated 3-fold in TNFalpha-treated adipocytes, and CM-TNFalpha had 10-fold higher concentrations of IL-1beta but not TNFalpha or IL-1alpha. IL-1beta directly induced insulin resistance in Fao, HepG2, and in primary rat hepatocytes. Moreover, when TNFalpha-induced secretion/production of IL-1beta from adipocytes was inhibited by the IL-1 converting enzyme (ICE-1) inhibitor II (Ac-YVAD-CMK), insulin resistance was prevented. Furthermore, liver-derived cells treated with IL-1 receptor antagonist were protected against insulin resistance induced by CM-TNFalpha. Finally, IL-1beta secretion from human omental fat explants correlated with body mass index (R(2) = 0.639, P < 0.01), and the resulting CM induced insulin resistance in HepG2 cells, inhibitable by IL-1 receptor antagonist. Our results suggest that adipocyte-derived IL-1beta may constitute a mediator in the perturbed cross talk between adipocytes and liver cells in response to adipose tissue inflammation.

Interleukin-1beta may mediate insulin resistance in liver-derived cells in response to adipocyte inflammation.

L&#x26;#39;ob&#xE9;sit&#xE9; centrale est fr&#xE9;quemment associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;inflammation des tissus adipeux et r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;insuline h&#xE9;patique. Pour identifier d&#x26;#39;&#xE9;ventuels m&#xE9;diateurs individuels dans ce processus, nous avons utilis&#xE9; dans les syst&#xE8;mes in vitro et a &#xE9;valu&#xE9; si la r&#xE9;sistance d&#x26;#39;insuline dans les cellules h&#xE9;patiques pourrait &#xEA;tre induite par les produits s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;s par les adipocytes preexposed &#xE0; un stimulus inflammatoire. Le milieu conditionn&#xE9; &#xE0; partir des adipocytes 3T3-L1 pr&#xE9;trait&#xE9;s sans (CM) ou avec du TNFalpha (CM-TNFalpha) a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour traiter les cellules d&#x26;#39;h&#xE9;patome Fao. ELISA ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour &#xE9;valuer la concentration de plusieurs m&#xE9;diateurs inflammatoires dans CM-TNFalpha. CM-TNF-trait&#xE9;s cellules Fao expos&#xE9; d&#x26;#39;environ 45% en diminution de l&#x26;#39;insuline stimul&#xE9;e par phosphorylation du r&#xE9;cepteur de l&#x26;#39;insuline, prot&#xE9;ines r&#xE9;cepteur de l&#x26;#39;insuline substrat, la prot&#xE9;ine kinase B, et la glycog&#xE8;ne synthase kinase-3 par rapport &#xE0; CM-cellules trait&#xE9;es, sans changements dans l&#x26;#39;abondance totale de ces prot&#xE9;ines. L&#x26;#39;insuline a augment&#xE9; glycogen&#xE8;se par un facteur 2 dans les cellules Fao CM-trait&#xE9;s, mais pas dans les cellules expos&#xE9;es &#xE0; CM-TNFalpha. L&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;IL-1beta ARNm a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;lev&#xE9; &#xE0; 3 fois dans le TNFalpha-trait&#xE9;s adipocytes, et CM-TNFalpha eu 10 fois plus fortes concentrations de l&#x26;#39;IL-1beta, mais pas TNF ou d&#x26;#39;IL-1alpha. IL-1beta induite directement r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;insuline de la FAO, HepG2, et dans les h&#xE9;patocytes primaires de rat. En outre, lorsque la s&#xE9;cr&#xE9;tion induite par le TNFalpha-/ production d&#x26;#39;IL-1beta des adipocytes a &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e par l&#x26;#39;IL-1 converting enzyme (ICE-1) inhibiteur II (Ac-YVAD-CMK), r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;insuline a &#xE9;t&#xE9; emp&#xEA;ch&#xE9;. En outre, le foie des cellules d&#xE9;riv&#xE9;es de trait&#xE9;s avec de l&#x26;#39;IL-1 antagoniste des r&#xE9;cepteurs ont &#xE9;t&#xE9; prot&#xE9;g&#xE9;s contre l&#x26;#39;insulino-r&#xE9;sistance induite par CM-TNFalpha. Enfin, l&#x26;#39;IL-1beta la s&#xE9;cr&#xE9;tion de l&#x26;#39;homme &#xE9;piplo&#xEF;ques explants gras en corr&#xE9;lation avec l&#x26;#39;indice de masse corporelle (R (2) = 0,639, P &#x26;lt;0,01), et la r&#xE9;sistance CM r&#xE9;sultant insuline induite dans les cellules HepG2, inhib&#xE9;e par l&#x26;#39;IL-1 antagoniste des r&#xE9;cepteurs. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que adipocyte IL-1beta peut constituer un m&#xE9;diateur dans le discours perturb&#xE9; croix entre les adipocytes et les cellules du foie en r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;inflammation du tissu adipeux.

L&#x26;#39;interleukine-1beta peut servir de m&#xE9;diateur r&#xE9;sistance &#xE0; l&#x26;#39;insuline du foie des cellules d&#xE9;riv&#xE9;es de r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;inflammation des adipocytes

Zentrale Adipositas ist h&auml;ufig verbunden mit Fettgewebe Entz&uuml;ndung und hepatische Insulinresistenz. Um m&ouml;gliche einzelne Mediatoren in diesem Prozess zu identifizieren, wir haben in-vitro-Systeme und beurteilt, wenn Insulin-Resistenz in Leberzellen durch sezernierte Erzeugnisse aus Adipozyten, die preexposed auf eine entz&uuml;ndliche Reiz induziert werden konnte. Konditionierten Medium aus 3T3-L1 Adipozyten vorbehandelt ohne (CM) oder mit TNFalpha (CM-TNFalpha) wurde zur Behandlung von Fao berechnete Zellen. ELISAs wurden verwendet, um die Konzentration von mehreren entz&uuml;ndlichen Mediatoren in CM-TNFalpha zu bewerten. CM-TNFalpha-behandelte Fao Zellen stellte etwa 45 % Minderung der Phosphorylierung Insulinrezeptor, Insulin-Rezeptor-Substrat-Proteine, Proteinkinase B Insulin stimuliert, und Glykogen-Synthase Kinase-3 im Vergleich zu CM-behandelten Zellen, ohne &Auml;nderungen in der gesamten F&uuml;lle von diesen Protein. Insulin, erh&ouml;hte Glycogenesis von 2-fold in CM-behandelten Fao Zellen aber nicht in den Zellen, CM-TNFalpha ausgesetzt. CM-TNFalpha hatte 10fach verbesserter h&ouml;here Konzentrationen von IL-1beta aber nicht TNFalpha oder IL-1alpha Expression von IL-1beta mRNA war erh&ouml;hte 3-Band in TNFalpha-behandelten Adipozyten IL-1beta induzierte direkt Insulin-Resistenz der Fao, HepG2, und in prim&auml;ren Ratte Hepatozyten. Wenn TNFalpha induziert Sekretion/Produktion von IL-1beta von Adipozyten durch die IL-1 konvertieren (ICE-1) Enzymhemmung II (Ac-YVAD-CMK) gehemmt war, wurde dar&uuml;ber hinaus Insulinresistenz verhindert. Dar&uuml;ber hinaus wurden Leber-abgeleitete Zellen mit IL-1-Rezeptor-Antagonisten behandelt gegen Insulin-Resistenz induziert durch CM-TNFalpha gesch&uuml;tzt. Schlie&szlig;lich IL-1beta Sekretion von menschlichen Omentum Fett Explantaten korreliert mit Body-mass-Index (Optionsbildschirm 0.639, P = 0.01 &lt;), und die daraus resultierende CM induzierter Insulinresistenz in HepG2-Zellen, inhibitable durch IL-1-Rezeptor-Antagonisten. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass IL-1beta Adipozyt abgeleitete Vermittler bei der gest&ouml;rt Cross-Talk zwischen Adipozyten und Leberzellen als Reaktion auf Fettgewebe Entz&uuml;ndung darstellen kann.

Interleukin-1beta kann Insulin-Resistenz in Leber-abgeleitete Zellen als Reaktion auf Adipozyt Entz&uuml;ndung vermitteln.

L&#39;obesit&agrave; centrale &egrave; spesso associata con l&#39;infiammazione del tessuto adiposo e la resistenza all&#39;insulina epatica. Per identificare potenziali singoli mediatori in questo processo, abbiamo utilizzato sistemi in vitro e valutata la resistenza di insulina in cellule del fegato potrebbe essere indotta dai prodotti secrete da adipociti preexposed ad uno stimolo infiammatorio. Medio condizionato da adipociti 3T3-L1 pretrattato senza (CM) o con TNFalpha (CM-TNFalpha) &egrave; stato usato per trattare la Fao autofagia. Elisa sono state utilizzate per valutare la concentrazione di diversi mediatori infiammatori in CM-TNFalpha. CM-TNFalpha-trattato Fao cellule esposte circa 45% diminuzione di insulina stimolata fosforilazione del recettore insulina, insulina recettore substrato proteine, chinasi di proteina B e glicogeno sintasi chinasi-3 rispetto alle cellule trattate CM, senza cambiamenti nell&#39;abbondanza totale di queste proteine. Insulina glicogenesi aumentato di 2 volte in CM-trattato Fao cellule ma non nelle cellule esposte a CM-TNFalpha. Espressione di IL-1beta mRNA &egrave; state elevate in triplice adipociti trattati TNFalpha, e CM-TNFalpha era 10 volte pi&ugrave; alte concentrazioni di IL-1beta ma non TNFalpha o IL-1alpha. IL-1beta indotta direttamente la resistenza di insulina in Fao, HepG2 e in epatociti di ratto primario. Inoltre, quando indotta da TNFalpha secrezione/produzione di IL-1beta da adipociti era inibito dall&#39;inibitore enzimatico (ICE-1) conversione IL-1 II (Ac-YVAD-CMK), insulino-resistenza &egrave; stata evitata. Inoltre, le cellule derivate da fegato trattate con un antagonista del recettore IL-1 erano protetti contro la resistenza all&#39;insulina indotta da TNFalpha CM. Infine, IL-1beta secrezione da espianti grassi omentale umani correlato con indice di massa corporea (R(2) = 0.639, P &lt; 0.01), e il risultante CM indotta da resistenza di insulina in cellule HepG2, inhibitable da antagonista del recettore IL-1. I nostri risultati suggeriscono che IL-1beta derivato degli adipociti pu&ograve; costituire un mediatore nel perturbato cross talk tra adipociti e cellule del fegato in risposta all&#39;infiammazione del tessuto adiposo.

Interleuchina-1beta possa mediare la resistenza di insulina in cellule derivate dal fegato in risposta all&#39;infiammazione degli adipociti.

&#x4E2D;&#x5FC3;&#x6027;&#x80A5;&#x6E80;&#x306F;&#x3001;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x3084;&#x809D;&#x81D3;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x7CFB;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;preexposed&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x88FD;&#x54C1;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308C;&#x3070;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x306A;&#x3057;&#xFF08;CM&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;TNF&#x3B1;&#x306E;&#xFF08;CM-TNF&#x3B1;&#x306E;&#xFF09;&#x3067;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;3T3-L1&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x99B4;&#x5316;&#x57F9;&#x5730;&#x306F;&#x3001;FAO&#x306E;&#x809D;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; ELISA&#x306F;CM-TNF&#x3B1;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CM-&#x51E6;&#x7406;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;CM-TNF&#x3B1;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;FAO&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x304C;&#x5408;&#x8A08;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x57FA;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;A&#x3001;B&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;3&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x7D04;45&#xFF05;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;CM&#x51E6;&#x7406;FAO&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;CM-TNF&#x3B1;&#x306E;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;2&#x500D;&#x3067;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; IL-1&#x3B2;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;3&#x500D;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x3001;CM-TNF&#x3B1;&#x306E;&#x306F;&#x3001;10&#x500D;&#x9AD8;&#x3044;IL-1&#x3B2;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;IL-1&#x3B1;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; IL-1&#x3B2;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x3001;FAO&#x3001;HepG2&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x521D;&#x4EE3;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; &#xFF08;ICE-1&#xFF09;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;II&#xFF08;AC-YVAD-CMK&#xFF09;IL-1&#x5909;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;IL-1&#x3B2;&#x306E;TNF&#x3B1;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x5206;&#x6CCC;/&#x751F;&#x7523;&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x304C;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;IL-1&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3067;&#x6CBB;&#x7642;&#x3057;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;CM-TNF&#x3B1;&#x306E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30DC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30DE;&#x30B9;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;R&#xFF08;2&#xFF09;= 0.639&#x3001;P &#x26;lt;0.01&#xFF09;&#x3001;IL-1&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;HepG2&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;CM&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x5927;&#x7DB2;&#x8102;&#x80AA;&#x690D;&#x304B;&#x3089;&#x306E;IL-1&#x3B2;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;IL-1&#x3B2;&#x304C;&#x3067;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8102;&#x80AA;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x6442;&#x52D5;&#x3002;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;-1&#x3B2;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x80AA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x809D;&#x81D3;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;

&#xC911;&#xC559; &#xBE44;&#xB9CC; &#xC9C0;&#xBC29; &#xC870;&#xC9C1; &#xC5FC;&#xC99D;&#xACFC; &#xAC04;&#xC7A5; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xC790;&#xC8FC; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xAC04; &#xC138;&#xD3EC; &#xC548;&#xC5D0; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D; adipocytes &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; preexposed&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44; &#xC81C;&#xD488;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xBC1C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD3C9;&#xAC00;. (CM) &#xC5C6;&#xC774; pretreated 3T3 L1 adipocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xB978;&#xB41C; &#xB9E4;&#xCCB4; &#xB610;&#xB294; TNFalpha (CM-TNFalpha) Fao&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. ELISAs CM Tnfalpha&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Fao &#xC140; CM TNFalpha &#xCC98;&#xB9AC;&#xB294; &#xC57D; 45% &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE30;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; B&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD1D; &#xD48D;&#xBD80;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xC5C6;&#xC774; CM &#xCDE8;&#xAE09; &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; glycogen synthase &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 3 &#xC804;&#xC2DC;. &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; 2-fold &#xC2DC;&#xB0B4; CM &#xCDE8;&#xAE09; Fao&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; glycogenesis &#xC138;&#xD3EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC140; &#xC548;&#xC5D0; CM-Tnfalpha&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C;. IL 1beta Mrna&#xC758; &#xC2DD; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xB41C; 3&#xC5D0; TNFalpha &#xCC98;&#xB9AC; adipocytes, &#xC774;&#xC5C8;&#xACE0; CM TNFalpha IL-1beta &#xD558;&#xC9C0; TNFalpha &#xB610;&#xB294; IL 1alpha&#xC758; &#xC0AC;&#xC9C4; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4;. IL 1beta &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D; &#xD558;&#xB294; Fao, HepG2, &#xAE30;&#xBCF8; &#xC950; hepatocytes&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, TNFalpha &#xC720;&#xB3C4; &#xBD84; &#xBE44;/&#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; IL 1beta adipocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774; &#xBCC0;&#xD658; (&#xC5BC;&#xC74C;-1) &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; II (Ac-YVAD-CMK)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;, &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D;&#xC774; &#xBABB;&#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC04; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D; CM-Tnfalpha&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xBCF4;&#xD638; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; omental &#xC9C0;&#xBC29; explants&#xC5D0;&#xC11C; IL 1beta &#xBD84; &#xBE44; &#xC0C1;&#xAD00; &#xCCB4; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xC9C0; &#xC218; (R(2) 0.639, P = &lt; 0.01), &#xACB0;&#xACFC; CM &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; inhibitable, HepG2 &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xCCB4;&#xD615; &#xD30C;&#xC0DD; IL 1beta &#xAD50;&#xB780;&#xB41C; &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xD1A0;&#xD06C; adipocytes &#xC751;&#xB2F5; adipose &#xC870;&#xC9C1; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8;-1beta &#xCCB4;&#xD615; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04; &#xC720;&#xB798; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La obesidad central se asocia frecuentemente con la inflamaci&#xF3;n del tejido adiposo y resistencia a la insulina hep&#xE1;tica. Para determinar los posibles mediadores individuales en este proceso, se utiliza en sistemas in vitro y evaluar si la resistencia a la insulina en las c&#xE9;lulas del h&#xED;gado puede ser inducida por productos secretados por los adipocitos preexpuesto a un est&#xED;mulo inflamatorio. El medio condicionado de los adipocitos 3T3-L1, sin tratamiento previo (CM) o con TNF (TNF-CM) fue utilizado para tratar las c&#xE9;lulas de hepatoma Fao. ELISA se utilizaron para evaluar la concentraci&#xF3;n de varios mediadores inflamatorios en la CM-TNF. CM-TNF-c&#xE9;lulas tratadas Fao exhibido alrededor del 45% en la disminuci&#xF3;n de la insulina estimula la fosforilaci&#xF3;n de receptor de la insulina, las prote&#xED;nas del receptor de insulina sustrato, la prote&#xED;na quinasa B, y la gluc&#xF3;geno sintasa quinasa-3 en comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas tratadas con CM, sin cambios en la abundancia total de estas prote&#xED;nas. La insulina aumentado glucog&#xE9;nesis por dos veces en la CM-c&#xE9;lulas tratadas con la FAO, pero no en c&#xE9;lulas expuestas a CM-TNF. Expresi&#xF3;n de IL-1 beta ARNm se elev&#xF3; 3-pliegue en TNF-tratados adipocitos, y CM-TNF ten&#xED;a 10-veces mayores concentraciones de IL-1 beta, pero no TNFalfa o IL-1 alfa. IL-1beta inducida directamente a resistencia a la insulina en la FAO, HepG2, y en hepatocitos primarios de rata. Por otra parte, cuando TNF inducida por la secreci&#xF3;n / producci&#xF3;n de IL-1 beta de los adipocitos fue inhibida por la IL-1 la enzima convertidora (ICE-1) inhibidor II (Ac-YVAD-CMK), resistencia a la insulina fue impedido. Adem&#xE1;s, derivados de h&#xED;gado-c&#xE9;lulas tratadas con IL-1 antagonista de los receptores estaban protegidos contra la resistencia a la insulina inducida por CM-TNF. Por &#xFA;ltimo, la IL-1 beta secreci&#xF3;n de grasa omental humanos explantes se correlacionaron con el &#xED;ndice de masa corporal (R (2) = 0,639, P &#x26;lt;0,01), y la CM como resultado resistencia a la insulina inducida en las c&#xE9;lulas HepG2, inhibirse por la IL-1 antagonista de los receptores. Nuestros resultados sugieren que la derivada de los adipocitos de IL-1&#xDF; puede constituir un mediador en la charla perturbado cruce entre los adipocitos y c&#xE9;lulas hep&#xE1;ticas en respuesta a la inflamaci&#xF3;n del tejido adiposo.

La interleucina-1 beta puede mediar resistencia a la insulina en el h&#xED;gado derivados de las c&#xE9;lulas en respuesta a la inflamaci&#xF3;n del adipocito

This study determined the role of MMP9/gelatinase B during the migration onset of Neural Crest Cells (NCC) in avian embryos. NCC are neuroepithelial progenitors that convert into mesenchyme and migrate along defined paths throughout the embryo. To engage in migration, NCC loose cell contacts, detach from the neural tube and invade the surrounding environment. Multiple signals and transcription factors that regulate these events have been identified. Nevertheless, little is known regarding effectors that act downstream to execute the actual NCC migration. Matrix metalloproteinases (MMPs) compose a large family of enzymes whose principal substrates are basement membranes, adhesion proteins and the extracellular matrix (ECM) components. A major subgroup of MMPs, the gelatinases (MMP9 and 2) are central to many adult physiological and pathological processes, such as tumor metastasis and angiogenesis, in which cell-cell and cell-matrix contacts are degraded to allow migration. As NCC undergo similar processes during development, we hypothesized that MMP9 may also promote the migration of NCC. MMP9 was found to be expressed in delaminating and migrating NCC of both cranial and trunk axial levels. Blocking MMP9 resulted in a dramatic inhibition of NCC delamination and migration, without perturbing specification or survival. This inhibition occurred at regions containing both premigratory and migrating cells, indicative for the central role of MMP9 in executing the detachment of NCC from the neural tube as well as their migration. Conversely, excess MMP9 enhanced mesenchymalization and delamination of NCC and accelerated progenitors to undergo precocious migration. Examination of the mechanistic activity of MMP9 revealed its capability to degrade the adhesion molecule N-cadherin as well as the basement-membrane protein laminin within or around NCC, respectively. Altogether, our study reveals MMP9 as a novel effector which is required for NCC delamination and migration.

Matrix metalloproteinase 9/gelatinase B is required for neural crest cell migration.

Cette &eacute;tude a d&eacute;termin&eacute; le r&ocirc;le de MMP9/g&eacute;latinase B durant le d&eacute;but de la migration de cellules sur la cr&ecirc;te neurale (CNC) dans les embryons aviaires. NCC sont neuro&eacute;pith&eacute;liales prog&eacute;niteurs qui convertissent en m&eacute;senchyme et migrent le long des chemins d&eacute;finis tout au long de l&#39;embryon. Pour entreprendre une migration, contacts de cellule l&acirc;che NCC, d&eacute;tacher du tube neural et envahir le milieu environnant. Plusieurs signaux et des facteurs de transcription qui r&eacute;gissent ces &eacute;v&eacute;nements ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. N&eacute;anmoins, peu est connu au sujet des effecteurs qui agissent en aval pour ex&eacute;cuter la migration r&eacute;elle de la NCC. M&eacute;talloprot&eacute;inases matricielles (MMP) forment une grande famille d&#39;enzymes dont les principaux substrats sont des membranes basales, prot&eacute;ines d&#39;adh&eacute;sion et les composants de la matrice extracellulaire (ECM). Un sous-groupe important des MPM, les g&eacute;latinases (MMP9 et 2) sont au c&oelig;ur de nombreux processus physiologiques et pathologiques adultes, tels que les m&eacute;tastases tumorales et angiogen&egrave;se, dans quelle cellule-cellule et cellule-matrice, les contacts sont d&eacute;grad&eacute;es pour permettre la migration. Comme NCC subissent des processus semblables au cours du d&eacute;veloppement, nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se que MMP9 peut aussi favoriser la migration de la NCC. MMP9 a &eacute;t&eacute; trouv&eacute; &agrave; s&#39;exprimer dans le NCC d&eacute;lamination et migration des deux cr&acirc;nienne et niveaux axial de tronc. Blocage MMP9 a entra&icirc;n&eacute; une inhibition dramatique de d&eacute;collement de la NCC et migration, sans sp&eacute;cification perturbante ou de survie. Cette inhibition est survenu r&eacute;gions contenant des cellules pr&eacute;-migratoires et de migration, indicatives pour le r&ocirc;le central de MMP9 qu&#39;impliquent le d&eacute;tachement de CCN du tube neural, mais aussi leur migration. &Agrave; l&#39;inverse, exc&egrave;s MMP9 am&eacute;lior&eacute; mesenchymalization et la d&eacute;lamination de la NCC et acc&eacute;l&eacute;r&eacute;e de prog&eacute;niteurs pour subir une migration pr&eacute;coce. L&#39;examen de l&#39;activit&eacute; m&eacute;canistique de MMP9 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; sa capacit&eacute; &agrave; d&eacute;grader la mol&eacute;cule d&#39;adh&eacute;rence N-cadh&eacute;rine ainsi que la membrane basale prot&eacute;ine laminin dans ou autour de NCC, respectivement. Au total, notre &eacute;tude r&eacute;v&egrave;le MMP9 un effecteur roman qui est requis pour la migration et la d&eacute;lamination de la NCC.

Matrice m&eacute;talloprot&eacute;inase 9/g&eacute;latinase B est requis pour la migration des cellules neurales de cr&ecirc;te.

Questo studio ha determinato il ruolo di MMP9/gelatinasi B durante l&#39;insorgenza di migrazione della cresta neurale cellule (NCC) in embrioni aviari. NCC sono progenitori neuroepithelial che convertono in mesenchima e migrano lungo percorsi definiti in tutto l&#39;embrione. Per impegnarsi in migrazione, contatti allentati cella NCC, staccare dal tubo neurale e invadere l&#39;ambiente circostante. Sono stati identificati diversi segnali e fattori di trascrizione che regolano questi eventi. Tuttavia, poco &egrave; noto riguardo effettori che agiscono a valle per eseguire la migrazione di NCC effettiva. Metalloproteinasi della matrice (MMP) compongono una grande famiglia di enzimi cui substrati principali sono membrane basali, proteine di adesione e i componenti della matrice extracellulare (ECM). Un importante sottogruppo di MMP, il gelatinases (MMP9 e 2) sono al centro di molti adulti processi fisiologici e patologici, come metastasi tumorali e l&#39;angiogenesi, in cui la cellula-cellula e cellula-matrice contatti vengono degradati per consentire la migrazione. Come NCC subiscono processi simili durante lo sviluppo, abbiamo ipotizzato che MMP9 possono anche promuovere la migrazione di NCC. MMP9 &egrave; stato trovato per essere espresso in NCC delaminazioni e migrazione di entrambi craniale e livelli di assiale del tronco. Blocco MMP9 ha provocato una drammatica inibizione di delaminazione NCC e migrazione, senza specificazione perturbante o di sopravvivenza. Questa inibizione si &egrave; verificato alle regioni contenenti cellule sia premigratory e migrazione, indicative per il ruolo centrale di MMP9 in esecuzione il distaccamento di NCC dal tubo neurale, come pure la loro migrazione. Al contrario, eccesso MMP9 enhanced mesenchymalization e delaminazione di NCC e accelerato progenitori per subire un precoce migrazione. Esame dell&#39;attivit&agrave; meccanicistica di MMP9 ha rivelato la sua capacit&agrave; di degradare la molecola di adesione N-caderina, come pure la membrana basale della proteina laminina all&#39;interno o nei dintorni di NCC, rispettivamente. Complessivamente, il nostro studio rivela MMP9 come un romanzo effettrici che sono necessario per la migrazione e delaminazione NCC.

Matrix metalloproteinase 9/gelatinasi B &egrave; necessario per la migrazione cellulare cresta neurale.

Hindbrain dorsal interneurons that comprise the rhombic lip relay sensory information and coordinate motor outputs. The progenitor dA1 subgroup of interneurons, which is formed along the dorsal-most region of the caudal rhombic lip, gives rise to the cochlear and precerebellar nuclei. These centers project sensory inputs toward upper-brain regions. The fundamental role of dA1 interneurons in the assembly and function of these brainstem nuclei is well characterized. However, the precise en route axonal patterns and synaptic targets of dA1 interneurons are not clear as of yet. Novel genetic tools were used to label dA1 neurons and trace their axonal trajectories and synaptic connections at various stages of chick embryos. Using dA1-specific enhancers, two contralateral ascending axonal projection patterns were identified; one derived from rhombomeres 6-7 that elongated in the dorsal funiculus, while the other originated from rhombomeres 2-5 and extended in the lateral funiculus. Targets of dA1 axons were followed at later stages using PiggyBac-mediated DNA transposition. dA1 axons were found to project and form synapses in the auditory nuclei and cerebellum. Investigation of mechanisms that regulate the patterns of dA1 axons revealed a fundamental role of Lim-homeodomain (HD) proteins. Switch in the expression of the specific dA1 Lim-HD proteins Lhx2/9 into Lhx1, which is typically expressed in dB1 interneurons, modified dA1 axonal patterns to project along the routes of dB1 subgroup. Together, the results of this research provided new tools and knowledge to the assembly of trajectories and connectivity of hindbrain dA1 interneurons and of molecular mechanisms that control these patterns.

Axonal patterns and targets of dA1 interneurons in the chick hindbrain.

Les interneurones dorsales post&eacute;rieur qui composent la l&egrave;vre rhombique relaient les informations sensorielles et coordonnent les sorties moteurs. Le sous-groupe de dA1 prog&eacute;nitrices des interneurones, lequel est form&eacute; le long de la r&eacute;gion dorsale de la l&egrave;vre rhombique caudale, donne naissance aux noyaux cochl&eacute;aires et precerebellar. Ces centres du projet des inputs sensoriels vers les r&eacute;gions sup&eacute;rieures du cerveau. Le r&ocirc;le fondamental des interneurones dA1 dans l&#39;Assembl&eacute;e et la fonction de ces noyaux du tronc c&eacute;r&eacute;bral sont bien caract&eacute;ris&eacute;es. Cependant, les mod&egrave;les d&#39;axonales en route pr&eacute;cis et les cibles synaptiques des interneurones dA1 ne sont pas clairs pour le moment. Nouveaux outils g&eacute;n&eacute;tiques ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;es &agrave; &eacute;tiqueter dA1 neurones et tracer leurs trajectoires axonales et les connexions synaptiques &agrave; divers stades d&#39;embryons de poulets. &Agrave; l&#39;aide d&#39;exhausteurs de dA1 sp&eacute;cifique, deux controlat&eacute;rale croissant de mod&egrave;les de projection axonale ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;es ; un d&eacute;riv&eacute; rhombomeres 6-7 qui s&#39;allongent dans le funicule dorsal, tandis que les autres provenaient de rhombomeres 2-5 et prorog&eacute; depuis lors par le funicule lat&eacute;ral. Cibles des axones dA1 suivaient &agrave; un stade ult&eacute;rieur &agrave; l&#39;aide de la transposition de l&#39;ADN induite par le PiggyBac. dA1 axones trouv&eacute;es au projet et forme de synapses dans les noyaux auditifs et le cervelet. Les m&eacute;canismes qui r&eacute;gulent les patrons des axones dA1 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; un r&ocirc;le fondamental des prot&eacute;ines Lim-hom&eacute;odomaine (HD). Commutateur dans l&#39;expression des prot&eacute;ines sp&eacute;cifiques dA1 Lim-HD Lhx2/9 le Lhx1, qui est g&eacute;n&eacute;ralement exprim&eacute;e en interneurones dB1, modifi&eacute;e dA1 axonale patrons pour projeter le long des routes du sous-groupe dB1. Ensemble, les r&eacute;sultats de cette recherche fournissent de nouveaux outils et connaissances &agrave; l&#39;Assembl&eacute;e de trajectoires et de la connectivit&eacute; des interneurones dA1 cerveau post&eacute;rieur et des m&eacute;canismes mol&eacute;culaires qui r&eacute;gissent ces patrons.

Mod&egrave;les axonales et cibles des interneurones dA1 dans le cerveau post&eacute;rieur de poussin.

Interneurons dorsale hindbrain che compongono il labbro rombico rel&egrave; informazioni sensoriali e coordinare uscite motore. Il sottogruppo di dA1 progenitore dei interneurons, che si forma lungo la regione pi&ugrave; dorsale del labbro rombico caudale, d&agrave; origine ai nuclei cocleari e precerebellar. Questi centri di progetto input sensoriali verso regioni del cervello superiore. Il ruolo fondamentale di dA1 interneurons in Assemblea e la funzione di questi nuclei del tronco encefalico &egrave; ben caratterizzate. Tuttavia, la precise rotta modelli assonale e bersagli sinaptici di dA1 interneurons non sono chiari ancora. Nuovi strumenti genetici sono stati utilizzati per etichettare i neuroni dA1 e tracciare le traiettorie assonale e connessioni sinaptiche nelle varie fasi di embrioni di pulcino. Utilizzando specifici dA1 esaltatori, due controlaterale ascendente modelli di proiezione assonale sono state identificate; una derivata da rhombomeres 6-7 che allungata il funiculus dorsale, mentre gli altri originati da rhombomeres 2-5 ed estesa nel funiculus laterale. Gli obiettivi degli assoni dA1 furono seguiti nelle fasi successive utilizzando la trasposizione del DNA mediata da PiggyBac. dA1 assoni sono stati trovati a progetto e forma sinapsi nel cervelletto e nuclei uditivi. Indagine dei meccanismi che regolano i modelli degli assoni dA1 ha rivelato un ruolo fondamentale delle proteine Lim-homeodomain (HD). Interruttore nell&#39;espressione di proteine specifiche dA1 Lim-HD Lhx2/9 in Lhx1, che &egrave; in genere espressa in dB1 interneurons, modificata dA1 assonale modelli di progetto lungo le rotte del sottogruppo dB1. Insieme, i risultati di questa ricerca forniti nuovi strumenti e conoscenze per l&#39;assemblaggio di traiettorie e connettivit&agrave; dei interneurons dA1 hindbrain e dei meccanismi molecolari che controllano questi modelli.

Modelli assonale e obiettivi di dA1 interneurons in hindbrain il pulcino.

Compartment boundaries act as organizing centers that segregate adjacent areas into domains of gene expression and regulation, and control their distinct fates via the secretion of signalling factors. During hindbrain development, a specialized cell-population forms boundaries between rhombomeres. These boundary cells demonstrate unique morphological properties and express multiple genes that differs them from intra-rhombomeric cells. Yet, little is known regarding the mechanisms that controls the expression or function of these boundary markers.Multiple components of the FGF signaling system, including ligands, receptors, downstream effectors as well as proteoglycans are shown to localize to boundary cells in the chick hindbrain. These patterns raise the possibility that FGF signaling plays a role in regulating boundary properties. We provide evidence to the role of FGF signaling, particularly the boundary-derived FGF3, in regulating the expression of multiple markers at hindbrain boundaries. These findings enable further characterization of the unique boundary-cell population, and expose a new function for FGFs as regulators of boundary-gene expression in the chick hindbrain.

Expression of hindbrain boundary markers is regulated by FGF3.

Limites servent de centres que de s&eacute;parer les zones adjacentes dans les domaines de l&#39;expression g&eacute;nique et r&egrave;glement d&#39;organisation du compartiment et contr&ocirc;ler leur destin distinct par l&#39;interm&eacute;diaire de la s&eacute;cr&eacute;tion de facteurs de signalisation. Au cours du d&eacute;veloppement du cerveau post&eacute;rieur, une population de cellules sp&eacute;cialis&eacute;e forme fronti&egrave;re entre rhombomeres. Ces cellules montrent des propri&eacute;t&eacute;s morphologiques uniques et expriment des g&egrave;nes multiples qui eux diff&egrave;re des cellules intra-rhombomeric. Pourtant, on sait peu sur les m&eacute;canismes contr&ocirc;lant l&#39;expression ou la fonction de ces bornes.Plusieurs composants du syst&egrave;me, y compris les ligands, r&eacute;cepteurs, effecteurs en aval ainsi que des prot&eacute;oglycanes de signalisation FGF apparaissent &agrave; localiser les cellules dans le cerveau post&eacute;rieur de poussin. Ces mod&egrave;les soul&egrave;vent la possibilit&eacute; que le FGF signalisation joue un r&ocirc;le dans la r&eacute;gulation des propri&eacute;t&eacute;s de la limite. Nous fournissons des preuves du r&ocirc;le de FGF de signalisation, en particulier la limite d&eacute;riv&eacute;e FGF3, dans la r&eacute;gulation de l&#39;expression des marqueurs multiples aux limites du cerveau post&eacute;rieur. Ces constatations permettent davantage de caract&eacute;risation de la population de cellules limite unique et exposent une nouvelle fonction pour FGFs comme r&eacute;gulateurs d&#39;expression limite-g&egrave;ne dans le cerveau post&eacute;rieur de poussin.

Expression des marqueurs de limite de cerveau post&eacute;rieur est r&eacute;gul&eacute;e par FGF3.

Vano i confini atto come organizzare centri che segregano le zone adiacenti in domini di espressione genica e di regolamento e controllano i loro destini distinti tramite la secrezione di fattori di segnalazione. Durante lo sviluppo del hindbrain, una popolazione di cellule specializzata forma i confini tra rhombomeres. Queste cellule contorno dimostrano propriet&agrave; morfologiche uniche ed esprimono pi&ugrave; geni che li differisce dalle cellule intra-rhombomeric. Eppure, poco &egrave; noto riguardo i meccanismi che controlla l&#39;espressione o la funzione di questi marcatori di confine.Pi&ugrave; componenti di FGF segnalando il sistema, tra cui ligandi, i recettori, effettori a valle cos&igrave; come i proteoglicani sono mostrati da localizzare alle cellule contorno del hindbrain pulcino. Questi modelli di aumentare la possibilit&agrave; che FGF segnalando un ruolo nella regolazione della propriet&agrave; di contorno. Forniamo prove per il ruolo di FGF segnalando, particolarmente il confine-derivati FGF3, nel regolare l&#39;espressione di marcatori multipli presso i confini hindbrain. Questi risultati permettono ulteriore caratterizzazione della popolazione unico limite-cella ed espongono una nuova funzione per FGFs come regolatori di confine-gene expression in hindbrain il pulcino.

Espressione di marcatori di confine hindbrain &egrave; regolata da FGF3.

Neural crest cells (NCCs) migrate throughout the embryo to differentiate into cell types of all germ layers. Initial directed NCC emigration relies on planar cell polarity (PCP), which through the activity of the small GTPases RhoA and Rac governs the actin-driven formation of polarized cell protrusions. We found that the actin binding protein calponin 2 (Cnn2) was expressed in protrusions at the leading edge of migratory NCCs in chicks and frogs. Cnn2 knockdown resulted in NCC migration defects in frogs and chicks and randomized outgrowth of cell protrusions in NCC explants. Morphant cells showed central stress fibers at the expense of the peripheral actin network. Cnn2 acted downstream of Wnt/PCP, as migration defects induced by dominant-negative Wnt11 or inhibition of RhoA function were rescued by Cnn2 knockdown. These results suggest that Cnn2 modulates actin dynamics during NCC migration as an effector of noncanonical Wnt/PCP signaling.

Calponin 2 acts as an effector of noncanonical Wnt-mediated cell polarization during neural crest cell migration.

Migrent les cellules neurales de cr&ecirc;te (CNC) tout au long de l&#39;embryon se diff&eacute;rencier en types cellulaires de toutes les couches de germe. Initiale dirig&eacute;e de l&#39;&eacute;migration NCC s&#39;appuie sur la polarit&eacute; de cellule planaire (PCP), qui, par le biais de l&#39;activit&eacute; des petites GTPases RhoA et Rac, r&eacute;git la formation ax&eacute;e sur l&#39;actine de protub&eacute;rances cellule polaris&eacute;e. Nous avons trouv&eacute; que l&#39;actine liaison prot&eacute;ine calponine 2 (Cnn2) a &eacute;t&eacute; exprim&eacute;e en saillies &agrave; la fine pointe des migrateurs CNC de poussins et de grenouilles. Cnn2 knockdown a entra&icirc;n&eacute; NCC migration d&eacute;fauts de grenouilles et de poussins et d&#39;excroissance randomis&eacute;e de protub&eacute;rances cellulaires des explants de NCC. Morphant cellules des fibres de stress central a montr&eacute; au d&eacute;triment du r&eacute;seau d&#39;actine p&eacute;riph&eacute;rique. Cnn2 agi en aval de Wnt/PCP, migration, d&eacute;fauts induits par dominant n&eacute;gatif Wnt11 ou inhibition de la fonction de RhoA furent secourus par Cnn2 knockdown. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que Cnn2 module dynamique de l&#39;actine au cours de la migration de la NCC comme effecteur de la signalisation Wnt/PCP non canonique.

2 La calponine agit comme un processeur d&#39;effets de polarisation cellulaire non canonique Wnt au cours de la migration des cellules neurales de cr&ecirc;te.

La migrazione di cellule della cresta neurale (CNC) in tutto l&#39;embrione a differenziarsi in tipi cellulari di tutti gli strati del germe. Iniziale dell&#39;emigrazione NCC diretto si basa sulla polarit&agrave; planare delle cellule (PCP), che attraverso l&#39;attivit&agrave; del piccolo GTPases RhoA e Rac governa la formazione guidata da actina di protrusioni cella polarizzata. Abbiamo trovato che l&#39;actina associazione proteina calponin 2 (Cnn2) &egrave; stata espressa in sporgenze all&#39;avanguardia di migratori CNC in pulcini e rane. Cnn2 atterramento provocato difetti di migrazione NCC in rane, pulcini e randomizzato escrescenza di protrusioni cellulari in NCC espianti. Morphant cellule ha mostrato lo stress centrale fibre a scapito della rete periferica dell&#39;actina. Cnn2 ha agito a valle di Wnt/PCP, come migrazione indotti da dominante negativo Wnt11 o inibizione della funzione RhoA difetti furono salvati da Cnn2 atterramento. Questi risultati suggeriscono che Cnn2 modula dinamiche di actina durante la migrazione di NCC come un effector di segnalazione Wnt/PCP canonica.

2 Calponin agisce come un generatore di effetti di polarizzazione canonica Wnt-mediata delle cellule durante la migrazione cellulare cresta neurale.

Complex patterns and networks of genes coordinate rhombomeric identities, hindbrain segmentation and neuronal differentiation and are responsible for later brainstem functions. Pax6 is a highly conserved transcription factor crucial for neuronal development, yet little is known regarding its early roles during hindbrain segmentation. We show that Pax6 expression is highly dynamic in rhombomeres, suggesting an early function in the hindbrain. Utilization of multiple gain- and loss-of-function approaches in chick and mice revealed that loss of Pax6 disrupts the sharp expression borders of Krox20, Kreisler, Hoxa2, Hoxb1 and EphA and leads to their expansion into adjacent territories, whereas excess Pax6 reduces these expression domains. A mutual negative cross-talk between Pax6 and Krox20 allows these genes to be co-expressed in the hindbrain through regulation of the Krox20-repressor gene Nab1 by Pax6. Rhombomere boundaries are also distorted upon Pax6 manipulations, suggesting a mechanism by which Pax6 acts to set hindbrain segmentation. Finally, FGF signaling acts upstream of the Pax6-Krox20 network to regulate Pax6 segmental expression. This study unravels a novel role for Pax6 in the segmental organization of the early hindbrain and provides new evidence for its significance in regional organization along the central nervous system.

A novel role for Pax6 in the segmental organization of the hindbrain.

Des motifs complexes et des r&eacute;seaux de g&egrave;nes coordonnent les identit&eacute;s rhombomeric, segmentation du cerveau post&eacute;rieur et la diff&eacute;renciation neuronale et sont responsables de fonctions plus tard de tronc c&eacute;r&eacute;bral. Pax6 est un facteur de transcription hautement conserv&eacute;e crucial pour le d&eacute;veloppement neuronal, mais peu est connu au sujet de ses premiers r&ocirc;les au cours de la segmentation du cerveau post&eacute;rieur. Nous montrons que Pax6 expression est tr&egrave;s dynamique en rhombomeres, ce qui sugg&egrave;re une fonction pr&eacute;coce dans le cerveau post&eacute;rieur. Utilisation de multiples gain - et perte de fonction s&#39;approche en Poussin et souris a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que la perte de Pax6 perturbe les fronti&egrave;res de la forte expression de Krox20, Kreisler, Hoxa2, Hoxb1 et EphA et conduit &agrave; leur expansion dans les territoires adjacents, tandis que les exc&egrave;s Pax6 r&eacute;duit ces domaines d&#39;expression. Une interf&eacute;rence n&eacute;gative mutuelle entre Pax6 et Krox20 permet ces g&egrave;nes d&#39;&ecirc;tre co-exprim&eacute;e dans le cerveau post&eacute;rieur par la r&eacute;gulation du g&egrave;ne Krox20-r&eacute;presseur Nab1 par Pax6. Rhombom&egrave;re limites sont aussi se d&eacute;former lors des manipulations de Pax6, sugg&eacute;rant un m&eacute;canisme par lequel Pax6 agit pour d&eacute;finir la segmentation du cerveau post&eacute;rieur. Enfin, FGF actes en amont du r&eacute;seau Pax6-Krox20 de signalisation pour r&eacute;guler l&#39;expression segmentaire Pax6. Cette &eacute;tude d&eacute;voile un nouveau r&ocirc;le pour Pax6 dans l&#39;organisation segmentaire de la cerveau post&eacute;rieur au d&eacute;but et fournit de nouvelles preuves de son importance dans l&#39;organisation r&eacute;gionale le long du syst&egrave;me nerveux central.

Un nouveau r&ocirc;le pour Pax6 dans l&#39;organisation segmentaire de la cerveau post&eacute;rieur.

Modelli complessi e reti di geni coordinano rhombomeric identit&agrave;, hindbrain segmentazione e differenziazione neuronale e sono responsabili per le funzioni del tronco cerebrale pi&ugrave; tardi. PAX6 &egrave; un fattore di trascrizione altamente conservata cruciale per lo sviluppo neuronale, ancora poco si sa per quanto riguarda i suoi primi ruoli durante la segmentazione hindbrain. Mostriamo che espressione di Pax6 &egrave; altamente dinamico in rhombomeres, suggerendo una funzione precoce nel hindbrain. L&#39;utilizzo di pi&ugrave; guadagno e perdita-di-funzione si avvicina in pulcino e topi ha rivelato che la perdita di Pax6 sconvolge i bordi taglienti espressione di Krox20, Kreisler, Hoxa2, Hoxb1 ed EphA e porta alla loro espansione in territori adiacenti, mentre Pax6 in eccesso riduce questi domini di espressione. Un cross-talk negativo reciproco tra Pax6 e Krox20 permette di questi geni di essere espressi in hindbrain attraverso il regolamento del gene Krox20-repressor Nab1 di Pax6. Rhombomere confini sono distorte anche su manipolazioni Pax6, suggerendo un meccanismo mediante il quale Pax6 agisce per impostare segmentazione hindbrain. Infine, FGF atti a monte della rete Pax6-Krox20 di segnalazione per regolare espressione segmentale Pax6. Questo studio si dipana un nuovo ruolo per Pax6 nell&#39;organizzazione segmentale del hindbrain precoce e fornisce nuove prove per la sua importanza nell&#39;organizzazione regionale lungo il sistema nervoso centrale.

Ayelet Kohl

Koret School of Veterinary Medicine

The Hebrew University of Jerusalem

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Ayelet Kohl

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The Hebrew University of Jerusalem

Electroporation of the Hindbrain to Trace Axonal Trajectories and Synaptic Targets in the Chick Embryo

Koret School of Veterinary Medicine