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Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria

Many intracellular bacterial pathogens use freshwater protozoans as a natural reservoir for proliferation in the environment. Legionella pneumophila, the ...

Oregon Health & Science University

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&#x6C27;&#x6C14;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6CA1;&#x6709;&#x6E05;&#x7406;&#x7684;&#x548C;&#x5C5E;&#x6027;&#x88AB;&#x622A;&#x65AD;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x516D;&#x7684;&#x5206;&#x679D;&#x3002;

Unraveling of microbial genome data has indicated that two distantly related truncated hemoglobins (trHbs), HbN and HbO, might occur in many species of slow-growing pathogenic mycobacteria. Involvement of HbN in bacterial defense against NO toxicity and nitrosative stress has been proposed. A gene, encoding a putative HbN homolog with conserved features of typical trHbs, has been identified within the genome sequence of fast-growing mycobacterium, Mycobacterium smegmatis. Sequence analysis of M. smegmatis HbN indicated that it is relatively smaller in size and lacks N-terminal pre-A region, carrying 12-residue polar sequence motif that is present in HbN of M. tuberculosis. HbN encoding gene of M. smegmatis was expressed in E. coli as a 12.8kD homodimeric heme protein that binds oxygen reversibly with high affinity (P50 approximately 0.081 mm Hg) and autooxidizes faster than M. tuberculosis HbN. The circular dichroism spectra indicate that HbN of M. smegmatis and M. tuberculosis are structurally similar. Interestingly, an hmp mutant of E. coli, unable to metabolize nitric oxide, exhibited very low NO uptake activity in the presence of M. smegmatis HbN as compared to HbN of M. tuberculosis. On the basis of cellular heme content, specific nitric oxide dioxygenase (NOD) activity of M. smegmatis HbN was nearly one-third of that from M. tuberculosis. Additionally, the hmp mutant of E. coli, carrying M. smegmatis HbN, exhibited nearly 10-fold lower cell survival under nitrosative stress and nitrite derived reactive nitrogen species as compared to the isogenic strain harboring HbN of M. tuberculosis. Taken together, these results suggest that NO metabolizing activity and protection provided by M. smegmatis HbN against toxicity of NO and reactive nitrogen is significantly lower than HbN of M. tuberculosis. The lower efficiency of M. smegmatis HbN for NO detoxification as compared to M. tuberculosis HbN might be related to different level of NO exposure and nitrosative stress faced by these mycobacteria during their cellular metabolism.

Oxygen binding and NO scavenging properties of truncated hemoglobin, HbN, of Mycobacterium smegmatis.

D&eacute;m&ecirc;ler de g&eacute;nomes microbiens donn&eacute;es a indiqu&eacute; que deux apparent&eacute; h&eacute;moglobines tronqu&eacute;s (trHbs), HbN et HbO, pourraient se produire dans de nombreuses esp&egrave;ces de mycobact&eacute;ries pathog&egrave;nes &agrave; croissance lente. Participation de HbN en d&eacute;fense bact&eacute;rienne contre aucune toxicit&eacute; et nitrosative le stress a &eacute;t&eacute; propos&eacute;e. Un g&egrave;ne codant un homologue HbN putatif avec fonctionnalit&eacute;s conserv&eacute;es de trHbs typique, a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; dans la s&eacute;quence du g&eacute;nome d&#39;essor mycobacterium, Mycobacterium smegmatis. Analyse de la s&eacute;quence de M. smegmatis HbN indique qu&#39;elle est relativement plu petit et qu&#39;il n&#39;a pas de r&eacute;gion de pr&eacute;-A N-terminale, transportant un motif 12-r&eacute;sidus polaires s&eacute;quence qui est pr&eacute;sent dans HbN de M. tuberculosis. HbN codant le g&egrave;ne de M. smegmatis a &eacute;t&eacute; exprim&eacute; chez e. coli comme un 12.8kD prot&eacute;ine &agrave; h&egrave;me homodim&egrave;re qui lie l&#39;oxyg&egrave;ne de mani&egrave;re r&eacute;versible avec une haute affinit&eacute; (P50 environ 0,081 mm Hg) et autooxidizes plus vite que M. tuberculosis HbN. Le spectre de dichro&iuml;sme circulaire indique que HbN de M. smegmatis et M. tuberculosis sont structurellement semblables. Fait int&eacute;ressant, un mutant de PGH d&#39;e. coli, incapable de m&eacute;taboliser l&#39;oxyde nitrique, n&#39;expos&eacute; tr&egrave;s faible aucune activit&eacute; d&#39;absorption en pr&eacute;sence de M. smegmatis HbN comparativement &agrave; HbN de M. tuberculosis. Sur la base du contenu cellulaire h&egrave;me, activit&eacute; dioxyg&eacute;nase (NOD) l&#39;oxyde nitrique sp&eacute;cifique de M. smegmatis HbN &eacute;tait pr&egrave;s d&#39;un tiers de celle de M. tuberculosis. En outre, le mutant de PGH d&#39;e. coli, transportant M. smegmatis HbN, expose la presque 10 fois inf&eacute;rieure survie cellulaire nitrosative stress&eacute; et nitrite d&eacute;riv&eacute;s des esp&egrave;ces r&eacute;actives de l&#39;azote par rapport &agrave; la souche isog&eacute;nique HbN de M. tuberculosis. Pris ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent qu&#39;aucune activit&eacute; de m&eacute;tabolisme et de la protection fournie par M. smegmatis HbN contre la toxicit&eacute; du non et azote r&eacute;actif est significativement plus faible que HbN de M. tuberculosis. L&#39;efficacit&eacute; moindre de M. smegmatis HbN pour aucun d&eacute;sintoxication par rapport &agrave; M. tuberculosis HbN pourrait &ecirc;tre li&eacute;e &agrave; un niveau diff&eacute;rent d&#39;aucun stress exposition et nitrosative face ces mycobact&eacute;ries au cours de leur m&eacute;tabolisme cellulaire.

Liaison de l&#39;oxyg&egrave;ne et aucune propri&eacute;t&eacute; antiradicalaire de l&#39;h&eacute;moglobine tronqu&eacute;e, HbN, de Mycobacterium smegmatis.

Unraveling del genoma microbico dei dati ha indicato che due tiepidi emoglobine troncate (trHbs), HbN e HbO, pu&ograve; verificarsi in molte specie di micobatteri patogeni a crescita lenta. Coinvolgimento di HbN batterica difesa contro lo stress non tossicit&agrave; e A&beta; &egrave; stato proposto. &Egrave; stato identificato un gene che codifica per un omologo HbN putativo con conservata funzionalit&agrave; del tipico trHbs, all&#39;interno della sequenza del genoma della crescita rapida mycobacterium, Mycobacterium smegmatis. Analisi di sequenza di M. smegmatis HbN indicano che &egrave; relativamente pi&ugrave; piccolo di dimensioni e manca di regione di pre-A N-terminale, che trasportano motivo 12-residui polari sequenza che &egrave; presente in HbN di M. tuberculosis. HbN gene codifica di M. smegmatis &egrave; stata espressa in e. coli come un 12.8kD della proteina eme ereditaria che lega ossigeno reversibilmente con alta affinit&agrave; (P50 circa 0,081 mm Hg) e autooxidizes pi&ugrave; veloce di M. tuberculosis HbN. Gli spettri di Dicroismo circolare indicano che HbN di M. smegmatis e M. tuberculosis sono strutturalmente simili. &Egrave; interessante notare che, un mutante hmp di e. coli, incapace di metabolizzare l&#39;ossido nitrico, non esposto molto basso nessuna attivit&agrave; di assorbimento in presenza di M. smegmatis HbN rispetto HbN di M. tuberculosis. In base al contenuto cellulare eme, ossido nitrico specifiche attivit&agrave; diossigenasi (NOD) di M. smegmatis HbN era quasi un terzo di quello da M. tuberculosis. Inoltre, il mutante hmp di e. coli, portando M. smegmatis HbN, esposto quasi 10 volte inferiore sopravvivenza delle cellule sotto stress A&beta; e nitriti derivano specie reattive dell&#39;azoto rispetto al ceppo isogeni harboring HbN di M. tuberculosis. Presi insieme, questi risultati suggeriscono che nessuna attivit&agrave; metabolico e la protezione fornita da M. smegmatis HbN contro la tossicit&agrave; di NO e azoto reattivo &egrave; significativamente inferiore a HbN di M. tuberculosis. La bassa efficienza di M. smegmatis HbN per nessun disintossicazione rispetto a M. tuberculosis HbN potrebbe essere correlato a diversi livelli di NO stress esposizione e A&beta; affrontato da questi micobatteri durante il loro metabolismo cellulare.

Associazione ossigeno e nessuna propriet&agrave; scavenging di emoglobina troncato, HbN, di Mycobacterium smegmatis.

&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3; (trHbs) HbN&#x3001;HbO&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x6297;&#x9178;&#x83CC;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7A2E;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x9060;&#x304F;&#x95A2;&#x9023;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x89E3;&#x660E;&#x3002;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068; nitrosative &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x9632;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; HbN &#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A; trHbs &#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B; HbN &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x6025;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5185;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;M. smegmatis HbN &#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x304C;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F; HbN &#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x3067;&#x3042;&#x308B; 12 &#x6B8B;&#x6E23;&#x6975;&#x914D;&#x5217;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x3001;N &#x672B;&#x7AEF;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x9818;&#x57DF;&#x304C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HbN &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9; M. smegmatis &#x306E;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x767A;&#x73FE;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3092; 12.8kD &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x304F; (P50 &#x7D04; 0.081 mm Hg) &#x3092;&#x5143;&#x306B;&#x623B;&#x305B;&#x308B;&#x72B6;&#x614B;&#x3068; autooxidizes &#x7D50;&#x6838; HbN &#x3088;&#x308A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; (fig3) &#x30D8;&#x30E0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3002;&#x5186;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; HbN M. smegmatis &#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x304C;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;hmp &#x5909;&#x7570;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;&#x7A92;&#x7D20;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x3092;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x5438;&#x53CE;&#x6D3B;&#x6027; M. smegmatis HbN HbN &#x7D50;&#x6838;&#x306E;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x30D8;&#x30E0;&#x5185;&#x5BB9;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x30B8;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (NOD) &#x6D3B;&#x52D5; M. smegmatis HbN &#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x304B;&#x3089; 1/3 &#x8FD1;&#x304F;&#x3092;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;M. smegmatis HbN&#x3001;&#x904B;&#x3076; hmp &#x5909;&#x7570;&#x30A8;&#x30B7;&#x30A7;&#x30EA;&#x30D2;&#x30A2;&#x5C5E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x307B;&#x307C; 10 &#x500D;&#x4F4E;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5B58; nitrosative &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x6D3B;&#x6027;&#x7A92;&#x7D20;&#x7A2E; HbN &#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x3092;&#x304B;&#x304F;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x540C;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;NO &#x4EE3;&#x8B1D;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306A;&#x3057;&#x306E;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B; M. smegmatis HbN &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7A92;&#x7D20;&#x306F;&#x7D50;&#x6838;&#x306E; HbN &#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x4F4E;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;M. smegmatis HbN &#x306A;&#x3044;&#x7D50;&#x6838; HbN &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7121;&#x5BB3;&#x5316;&#x306E;&#x4F4E;&#x3044;&#x52B9;&#x7387;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x6297;&#x9178;&#x83CC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x4E2D;&#x306B;&#x76F4;&#x9762;&#x3057;&#x3066;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x9732;&#x51FA;&#x3068; nitrosative &#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&#x9178;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x3068; HbN &#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x6E05;&#x6383;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB450; &#xBA3C; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; hemoglobins (trHbs), Hbn&#xC640; HbO, &#xB9CE;&#xC740; &#xC885;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; mycobacteria &#xB290;&#xB9B0; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD00;&#xB828;&#xC740; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xD0C8;&#xD53C;. &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; nitrosative &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138;&#xADE0; &#xBC29;&#xC5B4; Hbn&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; Trhbs&#xC758; &#xBCF4;&#xC874; &#xAE30;&#xB2A5; putative HbN &#xCCB4;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE09;&#xC131;&#xC7A5;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xC9C4; &#xADE0;, &#xC9C4; &#xADE0; smegmatis. M. smegmatis Hbn&#xC758; &#xC21C;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD45C;&#xC2DC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740; &#xD06C;&#xAE30;&#xC5D0; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC911; A &#xC9C0;&#xC5ED;, M. &#xACB0;&#xD575; Hbn&#xC5D0; 12 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xADF9; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xB4E4;&#xACE0; &#xBD80;&#xC871;. HbN M. smegmatis&#xC758; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; 12.8kd&#xB85C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; homodimeric heme &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xC18D; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; (P50 &#xC57D; 0.081 mm Hg)&#xACFC; &#xC5ED;&#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC640; autooxidizes M. &#xACB0;&#xD575; HbN &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xBE68;&#xB9AC;. &#xC6D0;&#xD615;&#xC774; &#xC0C9; &#xC131; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; HbN M. smegmatis M. &#xACB0;&#xD575;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;, &#xB300;&#xC0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC758; hmp &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; M. smegmatis HbN M. &#xACB0;&#xD575;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; Hbn&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC774;&#xD574; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; heme &#xCF58;&#xD150;&#xCE20;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C; M. smegmatis Hbn&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; dioxygenase (&#xB044; &#xB355;) &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC70;&#xC758; 1 / 3&#xC744; M. &#xACB0;&#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, M. smegmatis HbN, &#xC6B4;&#xBC18;&#xC758; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, hmp &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC70;&#xC758; 10 &#xB0AE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; nitrosative &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC; &#xD30C;&#xC0DD; M. &#xACB0;&#xD575; HbN &#xD488;&#xACE0; isogenic &#xBCC0;&#xD615;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC885;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xC5C6;&#xC74C; metabolizing &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xD638; M. smegmatis Hbn&#xC758; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xACF5; &#xBC0F; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xC9C8;&#xC18C; HbN M. &#xACB0;&#xD575; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB0AE;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. M. &#xACB0;&#xD575; Hbn&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC544;&#xBB34; &#xD574;&#xB3C5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; M. smegmatis Hbn&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC; &#xB3C4;&#xC911; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; mycobacteria &#xC9C1;&#xBA74; &#xB178;&#xCD9C; &#xBC0F; nitrosative &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0B0;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xC758; &#xC9C4; &#xADE0; smegmatis Hbn&#xC758; &#xCCAD;&#xC18C; &#xC18D;&#xC131;&#xC774; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Desintegraci&oacute;n de gen&oacute;mica microbiana datos ha indicado que dos distantes relacionadas con hemoglobinas truncados (trHbs), HbN y HbO, pueden ocurrir en muchas especies de micobacterias pat&oacute;genas de crecimiento lento. Se ha propuesto la participaci&oacute;n de HbN en bacteriana defensa contra el estr&eacute;s NO toxicidad y nitrosativo. Dentro de la secuencia del genoma de r&aacute;pido crecimiento se ha identificado un gen, que codifica un putativo hom&oacute;logo HbN con caracter&iacute;sticas conservadas del t&iacute;pico trHbs, mycobacterium, Mycobacterium smegmatis. An&aacute;lisis de la secuencia de M. smegmatis HbN indic&oacute; que es relativamente peque&ntilde;o en tama&ntilde;o y carece de la regi&oacute;n de pre-A N-terminal, con motivo de la secuencia polar 12-residuo que est&aacute; presente en HbN de M. tuberculosis. HbN gene codificaci&oacute;n de M. smegmatis fue expresado en e. coli como un 12.8kD prote&iacute;nas heme de homodim&eacute;ricas que se une con ox&iacute;geno reversible con alta afinidad (P50 aproximadamente 0,081 mmHg) y autooxidizes m&aacute;s r&aacute;pido que M. tuberculosis HbN. Los espectros de dicro&iacute;smo circular indican que HbN de M. smegmatis y M. tuberculosis son estructuralmente similares. Curiosamente, un mutante hmp de e. coli, incapaz de metabolizar el &oacute;xido n&iacute;trico, no exhibi&oacute; muy bajo ninguna actividad de absorci&oacute;n en presencia de M. smegmatis HbN en comparaci&oacute;n con HbN de M. tuberculosis. Sobre la base de contenido celular heme, espec&iacute;fico &oacute;xido n&iacute;trico dioxigenasa (cabeceo) actividad de M. smegmatis HbN fue casi un tercio de eso de M. tuberculosis. Adem&aacute;s, el mutante hmp de e. coli, llevando M. smegmatis HbN, exhibieron casi diez veces menor supervivencia de la c&eacute;lula bajo estr&eacute;s nitrosativo y nitrito hab&iacute;a derivado especies de nitr&oacute;geno reactivo en comparaci&oacute;n con la cepa isog&eacute;nicas albergar HbN de M. tuberculosis. Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que actividad metabolizante NO y la protecci&oacute;n proporcionan por M. smegmatis HbN contra la toxicidad del NO y nitr&oacute;geno reactivo es significativamente menor de HbN de M. tuberculosis. La baja eficiencia de M. smegmatis HbN NO desintoxicaci&oacute;n en comparaci&oacute;n con M. tuberculosis HbN se pudieron relacionar con diferente nivel de NO estr&eacute;s exposici&oacute;n y nitrosativo que enfrentan estas micobacterias durante su metabolismo celular.

Enlace de ox&iacute;geno y sin propiedades secuestradora de hemoglobina truncada, HbN, de Mycobacterium smegmatis.

&#x65E0;&#x8BBA;&#x8DDD;&#x79BB;&#x7684;&#x8FDC;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76F8;&#x5173;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;trHbs&#xFF09;&#x3001; &#x516D;&#x548C; HbO &#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x4E0D;&#x540C;&#x751F;&#x957F;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x6C27;&#x6C14;&#x548C;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E; (NO) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B; trHbs &#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E2D;&#x7684;&#x7ED3;&#x6838;&#x83CC;&#x5728;&#x7F3A;&#x6C27;&#x4E0B;&#x9002;&#x5E94;&#x5176;&#x91CD;&#x8981;&#x89D2;&#x8272;&#x548C; nitrosative &#x5F3A;&#x8C03;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x516D;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x5728;&#x652F;&#x6301;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x4E3B;&#x673A;&#xFF0C;&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x9488;&#x5BF9;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x53F7;&#x671F;&#x95F4;&#x63D0;&#x4F9B; HbO &#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x4F18;&#x52BF;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709;&#x654F;&#x611F;&#x53D1;&#x843D;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53; S.&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x7684;&#x5C55;&#x54C1;&#x51CF;&#x6BD2;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E86;&#x516D;&#x548C; HbO &#x7684;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7F16;&#x7801;&#x3002;&#x516D;&#x548C; HbO &#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x8D4B;&#x4E88;&#x4E0D;&#x540C;&#x6C27;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7A81;&#x53D8; S.&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x4E0D;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6267;&#x884C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x516D;&#x5C55;&#x51FA;&#x8FD1; 2-3 &#x6298;&#x9AD8;&#x65E0;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6BD4;&#x5728;&#x6709;&#x6C27;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x6709; HbO &#x7B49;&#x57FA;&#x56E0;&#x5E94;&#x53D8;&#x3002;&#x5F53;&#x6C27;&#x6C34;&#x5E73;&#x964D;&#x81F3;&#x5FAE;&#x6C27;&#x6761;&#x4EF6;&#x65F6;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5438;&#x6536;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x516D;&#x643A;&#x5E26;&#x7684;&#x4E00;&#x534A;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x88AB;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x5728;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5438;&#x6536;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; HbO &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7F3A;&#x6C27;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8; S.&#x529B;&#x5927;&#x5E45;&#x4E0B;&#x964D; (90%)&#x3002;&#x5F53;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8179;&#x8154;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#xFF0C;&#x516D;&#x643A;&#x5E26;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x51FA; 3 &#x548C; 4 &#x500D;&#x9AD8;&#x751F;&#x5B58;&#x76F8;&#x6BD4;&#x540C;&#x6837;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x5185;&#x5728; HbO &#x643A;&#x5E26;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x516D;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#x751A;&#x81F3;&#x5728;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; IFN-&gamma; &#x4E0B;, &#x540E;&#x6301;&#x7EED;&#x800C; HbO &#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x793A;&#x65E0;&#x654F;&#x611F;&#x53D1;&#x843D;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x6C99;&#x95E8;&#x83CC;&#x751F;&#x5B58;&#x4EA7;&#x751F;&#x4EFB;&#x4F55;&#x91CD;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x636E;&#x516D;&#x53CD;&#x5BF9; nitrosative &#x5E94;&#x529B;&#x5185;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8D4B;&#x4E88;&#x7684;&#x516D;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FDD;&#x62A4;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x9650;&#x4E8E;&#x4EC5;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x4E3B;&#x673A;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7684;&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x8FDB;&#x884C;&#x622A;&#x65AD;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

Two distantly related truncated hemoglobins (trHbs), HbN and HbO, are produced at different growth stages of Mycobacterium tuberculosis. Oxygen and nitric oxide (NO) binding properties of these trHbs suggest their vital role(s) in adaptation of tubercle bacillus under hypoxic and nitrosative stress conditions. Here, we have demonstrated that HbN of M. tuberculosis provides distinct advantage over HbO in supporting intracellular growth and survival of the heterologous host, Salmonella enterica serovar Typhimurium, during macrophage infection specifically against toxicity of NO. HbN and HbO encoding genes of M. tuberculosis have been expressed in a NO-sensitive hmp mutant of S. enterica serovar Typhimurium that exhibits attenuated growth within the macrophages. Presence of HbN and HbO conferred distinct oxygen dependent NO metabolizing activity to the mutant S. enterica serovar Typhimurium. However, the HbN carrying cells exhibited nearly 2-3-fold higher NO metabolizing activity than the isogenic strain having HbO under aerobic condition. More than half of the NO uptake activity of HbN carrying cells was retained when oxygen level dropped to microaerobic condition. In comparison, NO uptake activity of HbO carrying cells of mutant S. enterica dropped drastically (90%) under similar hypoxic conditions. When internalized by mice peritoneal macrophages, HbN carrying cells exhibited 3- and 4-fold higher survival compared to similarly bound and internalized HbO carrying and control cells, respectively. The protective effect of HbN persisted even after activation of macrophages in the presence of IFN-gamma, whereas, HbO did not show any significant effect on survival of the NO-sensitive hmp mutant of Salmonella. These results provide strong experimental evidence in support of the protective role of HbN against nitrosative stress inside macrophages and suggest that intracellular protection conferred by HbN of M. tuberculosis might not be restricted to its native host only.

Intracellular growth and survival of Salmonella enterica serovar Typhimurium carrying truncated hemoglobins of Mycobacterium tuberculosis.

Deux apparent&eacute; h&eacute;moglobines tronqu&eacute;s (trHbs), HbN et HbO, sont produits &agrave; diff&eacute;rents stades de Mycobacterium tuberculosis. L&#39;oxyg&egrave;ne et l&#39;oxyde nitrique (non) les propri&eacute;t&eacute;s de liaison de ces trHbs sugg&egrave;rent leur r&ocirc;le vital dans l&#39;adaptation du bacille tuberculeux sous hypoxique et nitrosative insister sur des conditions. Ici, nous avons d&eacute;montr&eacute; que HbN de M. tuberculosis apporte des avantages distincts sur HbO en soutenant la croissance intracellulaire et la survie de l&#39;h&ocirc;te h&eacute;t&eacute;rologue, Salmonella enterica serovar Typhimurium, durant l&#39;infection des macrophages sp&eacute;cifiquement contre la toxicit&eacute; de no HbN et HbO, codage de g&egrave;nes de M. tuberculosis ont &eacute;t&eacute; exprim&eacute;es dans un mutant de PGH non sensible de S. enterica serovar Typhimurium qui a att&eacute;nu&eacute; la croissance dans les macrophages. Pr&eacute;sence de HbN et HbO ne conf&eacute;r&eacute; distincte oxyg&egrave;ne d&eacute;pendant aucune activit&eacute; m&eacute;tabolisant pour le mutant S. enterica serovar Typhimurium. Toutefois, l&#39;HbN transportant des cellules expos&eacute;es pr&egrave;s 2 &agrave; 3 fois plus &eacute;lev&eacute; non m&eacute;tabolisant l&#39;activit&eacute; que la souche isog&eacute;nique avoir HbO sous condition a&eacute;robie. Plus de la moiti&eacute; de l&#39;activit&eacute; d&#39;absorption non de cellules transportant HbN est maintenu lorsque le niveau d&#39;oxyg&egrave;ne tombe &agrave; microa&eacute;robique condition. En comparaison, aucune activit&eacute; d&#39;absorption de HbO transportant des cellules de mutant S. enterica a chut&eacute; drastiquement (90 %) dans les m&ecirc;mes conditions hypoxiques. Lorsque int&eacute;rioris&eacute;es par les macrophages p&eacute;riton&eacute;aux de souris, HbN transportant des cellules expos&eacute;es 3 et 4 fois survie plus &eacute;lev&eacute;e par rapport &agrave; la m&ecirc;me ligot&eacute;s et int&eacute;rioris&eacute;es HbO transport et contr&ocirc;le cellules, respectivement. L&#39;effet protecteur de HbN a persist&eacute; m&ecirc;me apr&egrave;s l&#39;activation des macrophages en pr&eacute;sence de l&#39;IFN-gamma, tandis que, HbO n&#39;ont montr&eacute; aucun effet significatif sur la survie du mutant PGH non sensibles des salmonelles. Ces r&eacute;sultats fournissent des fortes preuves exp&eacute;rimentales pour soutenir le r&ocirc;le protecteur de HbN contre nitrosative le stress &agrave; l&#39;int&eacute;rieur des macrophages et sugg&egrave;rent qu&#39;intracellulaire protection conf&eacute;r&eacute;e par HbN de M. tuberculosis pourrait ne pas &ecirc;tre restreinte &agrave; ses h&ocirc;tes natifs uniquement.

Croissance intracellulaire et la survie de Salmonella enterica serovar Typhimurium transportant tronqu&eacute; h&eacute;moglobines de Mycobacterium tuberculosis.

Due tiepidi emoglobine troncate (trHbs), HbN e HbO, sono prodotte in fasi diverse di crescita del Mycobacterium tuberculosis. Ossigeno e ossido nitrico (NO) di propriet&agrave; di associazione di questi trHbs suggerire loro ruoli vitali nell&#39;adattamento del tubercolo bacillus sotto hypoxic e A&beta; in condizioni di stress. Qui, abbiamo dimostrato che HbN di M. tuberculosis fornisce un vantaggio distinto sopra HbO nel sostenere la crescita intracellulare e la sopravvivenza dell&#39;ospite eterologo, Salmonella enterica sierotipo Typhimurium, durante l&#39;infezione di macrofagi specificamente contro la tossicit&agrave; del n. HbN e HbO codifica geni di M. tuberculosis sono state espresse in un mutante hmp NO-sensibili di S. enterica sierotipo Typhimurium che esibisce attenuata crescita entro i macrofagi. Presenza di HbN e HbO non conferito distinto ossigeno dipendente nessuna attivit&agrave; metabolico per il mutante S. enterica sierotipo Typhimurium. Tuttavia, il HbN portando le cellule esposte quasi 2-3 volte superiore NO metabolizzare attivit&agrave; rispetto al ceppo isogeni avendo HbO sotto condizione aerobica. Pi&ugrave; della met&agrave; dell&#39;attivit&agrave; NO assorbimento delle cellule che trasportante HbN fu mantenuta quando il livello di ossigeno &egrave; sceso a condizioni microaerofile. In confronto, nessuna attivit&agrave; di assorbimento di HbO portando le cellule del mutante S. enterica &egrave; sceso drasticamente (90%) in simili condizioni ipossiche. Quando interiorizzato dai macrofagi peritoneali di topo, HbN portando le cellule esposte 3 - 4 volte maggiore sopravvivenza rispetto a interiorizzata e similmente legate HbO che trasportano e controllo celle, rispettivamente. L&#39;effetto protettivo di HbN mantenuto anche dopo l&#39;attivazione dei macrofagi in presenza di IFN-gamma, mentre, HbO non ha mostrato alcun effetto significativo sulla sopravvivenza del mutante hmp NO-sensibili di Salmonella. Questi risultati forniscono forti prove sperimentali a sostegno il ruolo protettivo dell&#39;HbN contro lo stress di A&beta; all&#39;interno dei macrofagi e suggeriscono che intracellulare tutela conferita da HbN di M. tuberculosis potrebbe non essere limitato al solo suo host nativo.

Crescita intracellulare e la sopravvivenza di Salmonella enterica sierotipo Typhimurium portando troncato emoglobine del Mycobacterium tuberculosis.

2 &#x3064;&#x306E;&#x9060;&#x304F;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3; (trHbs) HbN&#x3001;HbO&#x3001;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x80B2;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x751F;&#x7523;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x95A2;&#x9023;&#x3002;&#x9178;&#x7D20;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20; (NO) &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; trHbs &#x306E;&#x63D0;&#x6848;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x4E0B;&#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x3068;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6; nitrosative&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; HbN &#x7D50;&#x6838;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x6BD2;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x306B;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x611F;&#x67D3;&#x53F7;&#x539F;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x652F;&#x3048;&#x308B;&#x3067; HbO &#x3067;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;HbN&#x3001;HbO &#x7D50;&#x6838;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x306A;&#x3057;&#x654F;&#x611F;&#x306A; hmp &#x5909;&#x7570;&#xFF0C; &#x9D8F;&#x5375;&#x578B;&#x5F31;&#x6BD2;&#x6210;&#x9577;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185;&#x5C55;&#x793A;&#x578B;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HbN&#x3001;HbO &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306E;&#x9178;&#x7D20;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x5909;&#x7570;&#xFF0C; &#x9D8F;&#x5375;&#x578B;&#x578B;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3092;&#x6388;&#x4E0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x904B;&#x3076; HbN &#x307B;&#x307C; 2 &#x301C; 3 &#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x306A;&#x3057;&#x5C55;&#x793A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x597D;&#x6C17;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067; HbO &#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x540C;&#x8CEA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x3088;&#x308A;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HbN &#x904B;&#x3076;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; NO &#x5438;&#x53CE;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x534A;&#x5206;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x9178;&#x7D20;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x5FAE;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x843D;&#x3061;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x7DAD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3068;&#x308A;&#x3053;&#x307F;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x5909;&#x7570; enterica &#xFF08;90 &#xFF05;&#xFF09; &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x904B;&#x3076; HbO &#x306E;&#x3002;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8179;&#x8154;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x5185;&#x9762;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x904B;&#x3076; HbN &#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5185;&#x9762; HbO &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;, &#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; 3 &#xFF5E; 4 &#x500D;&#x9AD8;&#x3044;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;HbO &#x304C;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x306A;&#x3057;&#x654F;&#x611F;&#x306A; hmp &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;HbN &#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x52B9;&#x679C;&#x306E; IFN-&gamma; &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5F8C;&#x3082;&#x6C38;&#x7D9A;&#x5316;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; HbN &#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185; nitrosative &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7D50;&#x6838;&#x306E; HbN &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x4FDD;&#x8B77;&#x304C;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x307F;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x9D8F;&#x5375;&#x578B;&#x578B;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x7D50;&#x6838;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#xB450; &#xBA3C; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; hemoglobins (trHbs), Hbn&#xC640; HbO, &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC131;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD00;&#xB828;. &#xC0B0;&#xC18C;&#xC640; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; (NO) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xC131; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Trhbs&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC758; &#xC801;&#xC751;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC81C;&#xC548; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; nitrosative. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; HbN M. &#xACB0;&#xD575;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xBC88;&#xD638;&#xC758; &#xB3C5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;, &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; enterica serovar Typhimurium, &#xC0DD;&#xC874; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xC5D0; Hbo&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xC99D;&#xBA85; Hbn&#xC640; M. &#xACB0;&#xD575;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD558;&#xB294; Hbo&#xC758; S. enterica serovar &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC1E0; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; Typhimurium &#xC544;&#xB2C8; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; hmp &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hbn&#xC640; Hbo&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xBD80;&#xC5EC; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC758;&#xC874; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; S. enterica serovar Typhimurium metabolizing &#xC791;&#xC5C5; &#xC5C6;&#xC74C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; HbN &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB4E4;&#xACE0; &#xAC70;&#xC758;-2-3 &#xBC30; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC544;&#xB2C8;&#xC624;&#xB97C; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294;, &#xD638; &#xAE30;&#xC131; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; Hbo&#xB294; &#xB370; isogenic &#xAE34;&#xC7A5; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD654; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30;. HbN &#xC6B4;&#xBC18; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; NO &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC808;&#xBC18; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC218;&#xC900; microaerobic &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xB54C; &#xC720;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; hypoxic &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; S. enterica &#xB300;&#xD3ED; &#xAC10;&#xC18C; (90%)&#xB97C; &#xC6B4;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; Hbo&#xC758; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774;. &#xC950; &#xBCF5; &#xB9C9; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB0B4; &#xBA74;&#xD654; &#xB420; &#xB54C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB4E4;&#xACE0; HbN 3 &#xBC0F; 4 &#xBC30; &#xB192;&#xC740; &#xC0DD;&#xC874; &#xAC01;&#xAC01; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD558; &#xACE0; &#xB0B4; &#xBA74; HbO &#xC6B4;&#xBC18; &#xBC0F; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC804;&#xC2DC;. &#xBC18;&#xBA74;, Hbo&#xB294; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C;&#xC758; &#xB178; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; hmp &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; Hbn&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; &#xD6A8;&#xACFC; IFN &#xAC10;&#xB9C8;&#xC758; &#xBA74; &#xC804;&#xC5D0; &#xC11C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xBD80; nitrosative &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300;&#xD558;&#xC5EC; Hbn&#xC758; &#xBCF4;&#xD638; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC9C0; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; HbN M. &#xACB0;&#xD575;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218; &#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBCF4;&#xD638;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC744;.

&#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC758; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; enterica serovar Typhimurium &#xB4E4;&#xACE0; hemoglobins&#xB97C; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC758; &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Distante dos relacionadas con hemoglobinas truncados (trHbs), HbN y HbO, se producen en diferentes etapas de crecimiento de Mycobacterium tuberculosis. Ox&iacute;geno y &oacute;xido n&iacute;trico (NO) propiedades de enlace de estos trHbs sugieren su rol vital en la adaptaci&oacute;n del bacilo tuberculoso en hip&oacute;xico y nitrosativo condiciones de estr&eacute;s. Aqu&iacute;, hemos demostrado que HbN de M. tuberculosis proporciona una clara ventaja sobre HbO en crecimiento intracelular y supervivencia del hu&eacute;sped heter&oacute;logo, Salmonella enterica serovar Typhimurium, durante la infecci&oacute;n de macr&oacute;fagos espec&iacute;ficamente contra la toxicidad del NO. HbN y HbO codificaci&oacute;n de genes de M. tuberculosis se han expresado en un mutante de hmp NO sensibles de S. enterica serovar Typhimurium que exhibe crecimiento atenuado dentro de los macr&oacute;fagos. Presencia de HbN y HbO no atribuidas a distinto ox&iacute;geno dependiente ninguna actividad metabolizante para el mutante S. enterica serovar Typhimurium. Sin embargo, el HbN llevando las c&eacute;lulas exhibe casi 2-3-doble superior NO metaboliza la actividad que la cepa isog&eacute;nicas teniendo HbO bajo condiciones aer&oacute;bicas. M&aacute;s de la mitad de la actividad de absorci&oacute;n NO de c&eacute;lulas que lleva HbN fue retenido cuando el nivel de ox&iacute;geno cae a condici&oacute;n de microaerobic. En comparaci&oacute;n, ninguna actividad de absorci&oacute;n de HbO con c&eacute;lulas del mutante S. enterica reducido dr&aacute;sticamente (90%) en similares condiciones hip&oacute;xicas. Cuando interiorizado por los macr&oacute;fagos peritoneales de ratones, HbN llevando las c&eacute;lulas expuestas 3 y 4 veces mayor supervivencia en comparaci&oacute;n con semejantemente consolidadas e internalizadas HbO llevando y control c&eacute;lulas, respectivamente. El efecto protector de HbN persisti&oacute; incluso despu&eacute;s de la activaci&oacute;n de los macr&oacute;fagos en la presencia de IFN-gamma, mientras que HbO no mostraron ning&uacute;n efecto significativo sobre la supervivencia del mutante hmp NO sensibles de Salmonella. Estos resultados proporcionan evidencia experimental para apoyar el papel protector de HbN frente al estr&eacute;s nitrosativo dentro de los macr&oacute;fagos y sugieren que intracelular protecci&oacute;n conferida por HbN de M. tuberculosis no pudiera ser restringido al hospedador nativa.

Crecimiento intracelular y la supervivencia de Salmonella enterica serovar Typhimurium llevar truncan hemoglobinas de Mycobacterium tuberculosis.

&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x53EF;&#x6015;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x6210;&#x529F;&#x5728;&#x4E8E;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x5728;&#x5176;&#x80DE;&#x5185;&#x611F;&#x67D3;&#x3001; &#x5EF6;&#x8FDF;&#x548C;&#x6062;&#x590D;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x5229;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9632;&#x5FA1;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x6311;&#x6218;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;&#x622A;&#x65AD;&#x7684;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D; trHbN &#x548C; trHbO &#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x5728;&#x538B;&#x529B;&#x548C;&#x7F3A;&#x6C27;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6765;&#x63CF;&#x7ED8; M.&#x7ED3;&#x6838;&#x75C5;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x89C4;&#x5F8B;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x9020;&#x7684; glbN &#x548C; 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glbO &#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x5728;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x589E;&#x52A0;&#x8FD1; 1.5-fold trHb &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x90FD;&#x5728; nitrosative &#x548C;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x89C4;&#x5B9A;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FC7;&#x6E21;&#x91D1;&#x5C5E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x4F4E;&#x6C27;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684; glbN &#x548C; glbO &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x9636;&#x6BB5; &#xFF1B;glbO &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x88AB;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5927;&#x7EA6; 2.3-fold&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x6B64;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6700;&#x9AD8;&#x503C;&#x3002;&#x53E6;&#x5916;&#x7684;&#x94C1;&#x548C;&#x954D;&#x626D;&#x8F6C;&#x5728;&#x4E24;&#x79CD;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x611F;&#x5E94;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A; trHb &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E0E;&#x4F1A;&#x8005;&#x65F6;&#x751F;&#x957F;&#x4ECB;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x94C1;&#x6C34;&#x5E73;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x7528;&#x5C3D;&#x4E86;&#x94C1;&#x87AF;&#x5408;&#x5242;&#x7684;&#x52A0;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x542B;&#x94C1;/&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x6C27;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8C03;&#x5236;&#x7684; trHb &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6D3B;&#x52A8;&#x76F4;&#x63A5;&#x6216;&#x95F4;&#x63A5;&#x5730;&#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x89C4;&#x7BA1;&#x4E0D;&#x540C;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x5206;&#x679D;&#x548C;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC; H37Ra&#xFF0C;trHbs&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x5021;&#x5BFC;&#x8005;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D7;&#x5E38;&#x89C1;&#x5230;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;THP-1 &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x643A;&#x5E26; trHb &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x878D;&#x5408;&#x8868;&#x660E;&#x6709;&#x76F8;&#x5F53;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x65F6;&#x95F4;&#x8BFE;&#x7A0B;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x540E;&#x4E0D;&#x540C;&#x65F6;&#x671F;&#x8D77;&#x5230; 48 h &#x7531;&#x8367;&#x5149;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6392;&#x5E8F;&#x7684;&#x80DE;&#x5185; M.&#x80BA;&#x7ED3;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x793A; glbN &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x662F;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x7684;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BC4;&#x4F30;&#xFF0C;&#x800C; glbO &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x4ECD;&#x5728;&#x4E00;&#x79CD;&#x7A33;&#x5B9A;&#x72B6;&#x6001;&#x6C34;&#x5E73;&#x8FBE; 24 h&#xFF0C;&#x611F;&#x67D3;&#x540E;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x5927;&#x7EA6; 2 &#x6298;&#x540E; 48 h &#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;M.&#x7ED3;&#x6838;&#x75C5; trHb &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x6574;&#x4F53;&#x8C03;&#x63A7;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5173;&#x8054;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x4E0E;&#x8BE5;&#x5F3A;&#x8C03;&#x7ED3;&#x6838;&#x83CC;&#x662F;&#x540E;&#x5B83;&#x662F;&#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x9047;&#x5230;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4E0E;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F53;&#x524D;&#x7684;&#x77E5;&#x8BC6;&#xFF0C;&#x5176;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684; trHbs &#x8868;&#x8FBE;&#x5F3A;&#x70C8;&#x8868;&#x660E;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x56E0;&#x6B64;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5468;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x3002;M.&#x7ED3;&#x6838;&#x75C5;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x73B0;&#x72B6;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x652F;&#x6301;&#x5047;&#x8BF4;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; 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&#x5BF9;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x751F;&#x957F;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x521B;&#x529E;&#x4EBA;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;

The success of Mycobacterium tuberculosis as one of the dreaded human pathogens lies in its ability to utilize different defense mechanisms in response to the varied environmental challenges during the course of its intracellular infection, latency, and reactivation cycle. Truncated hemoglobins trHbN and trHbO are thought to play pivotal roles in the cellular metabolism of this organism during stress and hypoxia. To delineate the genetic regulation of the M. tuberculosis hemoglobins, transcriptional fusions of the promoters of the glbN and glbO genes with green fluorescent protein were constructed, and their responses were monitored in Mycobacterium smegmatis and M. tuberculosis H37Ra exposed to environmental stresses in vitro and in M. tuberculosis H37Ra after in vivo growth inside macrophages. The glbN promoter activity increased substantially during stationary phase and was nearly 3- to 3.5-fold higher than the activity of the glbO promoter, which remained more or less constant during different growth phases in M. smegmatis, as well as in M. tuberculosis H37Ra. In both mycobacterial hosts, the glbN promoter activity was induced 1.5- to 2-fold by the general nitrosative stress inducer, nitrite, as well as the NO releaser, sodium nitroprusside (SNP). The glbO promoter was more responsive to nitrite than to SNP, although the overall increase in its activity was much less than that of the glbN promoter. Additionally, the glbN promoter remained insensitive to the oxidative stress generated by H(2)O(2), but the glbO promoter activity increased nearly 1.5-fold under similar conditions, suggesting that the trHb gene promoters are regulated differently under nitrosative and oxidative stress conditions. In contrast, transition metal-induced hypoxia enhanced the activity of both the glbN and glbO promoters at all growth phases; the glbO promoter was induced approximately 2.3-fold, which was found to be the highest value for this promoter under all the conditions evaluated. Addition of iron along with nickel reversed the induction in both cases. Interestingly, a concentration-dependent decrease in the activity of both trHb gene promoters was observed when the levels of iron in the growth media were depleted by addition of an iron chelator. These results suggested that an iron/heme-containing oxygen sensor is involved in the modulation of the trHb gene promoter activities directly or indirectly in conjunction with other cellular factors. The modes of promoter regulation under different physiological conditions were found to be similar for the trHbs in both M. smegmatis and M. tuberculosis H37Ra, indicating that the promoters might be regulated by components that are common to the two systems. Confocal microscopy of THP-1 macrophages infected with M. tuberculosis carrying the trHb gene promoter fusions showed that there was a significant level of promoter activity during intracellular growth in macrophages. Time course evaluation of the promoter activity after various times up to 48 h by fluorescence-activated cell sorting analysis of the intracellular M. tuberculosis cells indicated that the glbN promoter was active at all time points assessed, whereas the activity of the glbO promoter remained at a steady-state level up to 24 h postinfection and increased approximately 2-fold after 48 h of infection. Thus, the overall regulation pattern of the M. tuberculosis trHb gene promoters correlates not only with the stresses that the tubercle bacillus is likely to encounter once it is in the macrophage environment but also with our current knowledge of their functions. The in vivo studies that demonstrated for the first time expression of trHbs during macrophage infection of M. tuberculosis strongly indicate that the hemoglobins are required, and thus important, during the intracellular phase of the bacterial cycle. The present study of transcriptional regulation of M. tuberculosis hemoglobins in vitro under various stress conditions and in vivo after macrophage infection supports the hypothesis that biosynthesis of both trHbs (trHbN and trHbO) in the native host is regulated via the environmental signals that the tubercle bacillus receives during macrophage infection and growth in its human host.

Responses of Mycobacterium tuberculosis hemoglobin promoters to in vitro and in vivo growth conditions.

Le succ&egrave;s de Mycobacterium tuberculosis comme l&#39;un des agents pathog&egrave;nes humains redout&eacute;s r&eacute;side dans sa capacit&eacute; &agrave; utiliser les diff&eacute;rents m&eacute;canismes de d&eacute;fense en r&eacute;ponse aux d&eacute;fis environnementaux vari&eacute;s au cours de son infection intracellulaire, la latence et cycle de r&eacute;activation. H&eacute;moglobines tronqu&eacute; trHbN et trHbO sont cens&eacute;s jouent un r&ocirc;le essentiel dans le m&eacute;tabolisme cellulaire de cet organisme au cours de stress et de l&#39;hypoxie. Pour d&eacute;limiter la r&eacute;gulation g&eacute;n&eacute;tique de l&#39;h&eacute;moglobine de la tuberculose M., fusions de transcriptional des promoteurs des g&egrave;nes glbN et glbO avec la prot&eacute;ine fluorescente verte ont &eacute;t&eacute; construites, et leurs r&eacute;ponses ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;s chez Mycobacterium smegmatis et M. tuberculosis H37Ra expos&eacute;s &agrave; des stress environnementaux in vitro et chez M. tuberculosis H37Ra apr&egrave;s la croissance in vivo &agrave; l&#39;int&eacute;rieur des macrophages. L&#39;activit&eacute; du promoteur glbN a consid&eacute;rablement augment&eacute; au cours de la phase stationnaire et &eacute;tait presque 3 &agrave; 3,5 fois plus &eacute;lev&eacute; que l&#39;activit&eacute; du promoteur glbO, qui est rest&eacute; plus ou moins constante au cours des diff&eacute;rentes phases de croissance chez M. smegmatis, ainsi que M. tuberculosis H37Ra. Dans les deux h&ocirc;tes de mycobact&eacute;ries, a induit l&#39;activit&eacute; du promoteur glbN 1,5 &agrave; 2 fois par l&#39;inducteur d&#39;effort nitrosative g&eacute;n&eacute;rales, nitrite, ainsi que le m&eacute;canisme de d&eacute;brayage non, nitroprussiate de sodium (SNP). Le promoteur de glbO &eacute;tait plus sensible aux nitrites qu&#39;au SNP, bien que l&#39;augmentation globale de son activit&eacute; &eacute;tait beaucoup moindre que celle du promoteur glbN. De plus, le promoteur glbN est rest&eacute; insensible au stress oxydatif g&eacute;n&eacute;r&eacute; par H(2)O(2), mais l&#39;activit&eacute; du promoteur glbO augment&eacute; de presque 1,5 fois dans des conditions similaires, ce qui sugg&egrave;re que le g&egrave;ne trHb promoteurs sont r&eacute;glement&eacute;s diff&eacute;remment dans des conditions de stress oxydatif et nitrosative. En revanche, hypoxie induite par le m&eacute;tal de transition a augment&eacute; l&#39;activit&eacute; des promoteurs de la glbN et le glbO &agrave; toutes les phases de croissance ; le promoteur glbO a induit environ 2,3, qui se trouvait &ecirc;tre la valeur la plus &eacute;lev&eacute;e pour ce promoteur dans toutes les conditions &eacute;valu&eacute;es. Ajout de fer et nickel invers&eacute; l&#39;induction dans les deux cas. Fait int&eacute;ressant, on a observ&eacute; une diminution de la concentration-d&eacute;pendante dans l&#39;activit&eacute; des deux promoteurs de g&egrave;nes de trHb lorsque les niveaux de fer dans les milieux de culture ont &eacute;t&eacute; &eacute;puis&eacute;es par l&#39;addition d&#39;un ch&eacute;lateur de fer. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent qu&#39;une sonde &agrave; oxyg&egrave;ne contenant du fer/h&egrave;me est impliqu&eacute;e dans la modulation de l&#39;activit&eacute; de promoteur de g&egrave;ne trHb directement ou indirectement en conjonction avec d&#39;autres facteurs cellulaires. Les modes de r&egrave;glement promoteur dans diff&eacute;rentes conditions physiologiques se sont av&eacute;r&eacute;s pour &ecirc;tre similaire pour les trHbs en M. smegmatis et M. tuberculosis H37Ra, indiquant que les promoteurs pourraient &ecirc;tre r&eacute;glement&eacute;es par les composants qui sont communs aux deux syst&egrave;mes. Microscopie confocale de THP-1 les macrophages infect&eacute;s par M. tuberculosis, transportant les fusions de promoteur de g&egrave;ne de trHb montr&eacute;es qu&#39;il existe un niveau significatif de l&#39;activit&eacute; du promoteur au cours de la croissance intracellulaire dans les macrophages. &Eacute;valuation du cours de l&#39;activit&eacute; du promoteur apr&egrave;s plusieurs fois vers le haut &agrave; 48 h par fluorescence-lanc&eacute;e de cellules analyse les cellules de la tuberculose M. intracellulaire de tri indique que le promoteur de la glbN &eacute;tait actif le temps du tout fois points &eacute;valu&eacute;s, alors que l&#39;activit&eacute; du promoteur glbO sont demeur&eacute;es &agrave; un &eacute;tat d&#39;&eacute;quilibre de niveau jusqu&#39;&agrave; 24 h postinfection et accru environ 2 fois apr&egrave;s 48 h d&#39;infection. Ainsi, le mod&egrave;le de r&egrave;glement global des promoteurs de g&egrave;nes de trHb de la tuberculose M. correspond non seulement avec le souligne que le bacille est susceptible de rencontrer une fois qu&#39;il est dans l&#39;environnement des macrophages, mais &eacute;galement avec nos connaissances actuelles de leurs fonctions. Les &eacute;tudes in vivo qui ont d&eacute;montr&eacute; pour la premi&egrave;re fois l&#39;expression de trHbs au cours de l&#39;infection des macrophages de M. tuberculosis indiquent fortement que les h&eacute;moglobines sont requis et donc important, au cours de la phase intracellulaire du cycle bact&eacute;rien. La pr&eacute;sente &eacute;tude de la r&eacute;gulation transcriptionnelle des h&eacute;moglobines de tuberculose M. in vitro, dans diverses conditions de stress et in vivo apr&egrave;s que infection des macrophages supporte l&#39;hypoth&egrave;se que la biosynth&egrave;se de ces deux trHbs (trHbN et trHbO) dans l&#39;accueil natif est r&eacute;glement&eacute;e via les signaux environnementaux que le bacille tuberculeux re&ccedil;oit durant l&#39;infection des macrophages et de la croissance chez son h&ocirc;te humain.

R&eacute;ponses des promoteurs de l&#39;h&eacute;moglobine Mycobacterium tuberculosis aux conditions de la croissance in vitro et in vivo.

Il successo del Mycobacterium tuberculosis come uno degli agenti patogeni umani temuti risiede nella sua capacit&agrave; di utilizzare diversi meccanismi di difesa, in risposta alle sfide ambientali varie durante il corso della sua infezione intracellulare, la latenza e il ciclo di riattivazione. Emoglobine troncate trHbN e trHbO sono pensa che giocano un ruolo fondamentale nel metabolismo cellulare di questo organismo durante lo stress e l&#39;ipossia. Per delineare la regolazione genetica di emoglobine di tubercolosi il M., sono stati costruiti transcriptional fusioni dei promotori dei geni glbN e glbO con la proteina fluorescente verde, e le loro risposte sono state monitorate in Mycobacterium smegmatis e M. tuberculosis H37Ra esposti a sollecitazioni ambientali in vitro e in M. tuberculosis H37Ra dopo la crescita in vivo all&#39;interno dei macrofagi. L&#39;attivit&agrave; di promotore glbN aumentato sostanzialmente durante la fase stazionaria ed &egrave; stato quasi 3 - a 3.5 volte superiore l&#39;attivit&agrave; del promotore della glbO, che &egrave; rimasto pi&ugrave; o meno costante durante le fasi di crescita diversi in M. smegmatis, cos&igrave; come in M. tuberculosis H37Ra. In entrambi gli host micobatterici, &egrave; stata indotta l&#39;attivit&agrave; di promotore glbN 1.5 - per 2 volte dall&#39;induttore di stress generale A&beta;, nitrito, come pure il releaser NO, nitroprussiato di sodio (SNP). Il promotore di glbO era pi&ugrave; sensibile ai nitriti rispetto al SNP, anche se l&#39;aumento globale nella sua attivit&agrave; fu molto inferiore a quella del promotore glbN. Inoltre, il promotore glbN rimase insensibile allo stress ossidativo generato da H(2)O(2), ma l&#39;attivit&agrave; di promotore glbO aumentato quasi 1.5-fold in condizioni simili, suggerendo che il gene trHb promotori sono regolati in modo diverso in condizioni di stress ossidativo e A&beta;. Al contrario, ipossia indotta da metalli di transizione rafforzata l&#39;attivit&agrave; dei promotori il glbN e il glbO in tutte le fasi di crescita; il promotore di glbO fu indotto circa 2.3-fold, che &egrave; stato trovato per essere il valore pi&ugrave; alto per questo promotore sotto tutte le condizioni valutate. Aggiunta di ferro e nichel invertito l&#39;induzione in entrambi i casi. &Egrave; interessante notare che, una diminuzione di concentrazione-dipendente dell&#39;attivit&agrave; dei due promotori del gene trHb &egrave; stata osservata quando i livelli di ferro nei media crescita erano esauriti tramite l&#39;aggiunta di un chelante del ferro. Questi risultati ha suggerito che un sensore di ossigeno contenenti ferro/eme &egrave; coinvolto nella modulazione dell&#39;attivit&agrave; di promotore del gene trHb direttamente o indirettamente in combinazione con altri fattori cellulari. Le modalit&agrave; del regolamento promotore in differenti condizioni fisiologiche sono state trovate per essere simile per la trHbs in M. smegmatis e M. tuberculosis H37Ra, indicando che i promotori potrebbero essere regolati da componenti che sono comuni ai due sistemi. Microscopia confocale della THP-1 macrofagi infettati con M. tuberculosis che trasportano le fusioni promotore del gene trHb ha dimostrate che c&#39;era un livello significativo di promotore attivit&agrave; durante la crescita intracellulare in macrofagi. Valutazione del corso dell&#39;attivit&agrave; di promotore, dopo varie volte fino a 48 h di fluorescenza-attivato delle cellule ordinamento analisi delle cellule di tubercolosi del M. intracellulare indicava che il promotore glbN era attivo il tempo a tutti i punti valutati il tempo, considerando che l&#39;attivit&agrave; del promotore glbO &egrave; rimasto in uno stato stabile livello fino a 24 h essenzialmente e aumentato circa 2 volte dopo 48 h di infezione. Cos&igrave;, lo schema di regolamento generale di promotori di gene di M. tuberculosis trHb correla con le sollecitazioni che il bacillus tubercolo &egrave; probabile incontrare una volta che &egrave; nell&#39;ambiente dei macrofagi, ma anche con la nostra attuale conoscenza delle loro funzioni. Gli studi in vivo che ha dimostrato per la prima volta espressione di trHbs durante l&#39;infezione di macrofagi di M. tuberculosis indicano fortemente che le emoglobine sono obbligatori e cos&igrave; importante, durante la fase intracellulare del ciclo batterica. Il presente studio di regolazione trascrizionale di emoglobine di tubercolosi M. in vivo e in vitro in varie condizioni di stress dopo infezione di macrofagi supporta l&#39;ipotesi che biosintesi di entrambi trHbs (trHbN e trHbO) in host nativo &egrave; regolato tramite i segnali ambientali che il bacillus tubercolo riceve durante l&#39;infezione di macrofagi e crescita nel suo ospite umano.

Risposte dei promotori di Mycobacterium tuberculosis emoglobina alle condizioni di crescita in vitro e in vivo.

&#x7D50;&#x6838;&#x6050;&#x308D;&#x3057;&#x3044;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6210;&#x529F;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x611F;&#x67D3;&#x3001;&#x5F85;&#x3061;&#x6642;&#x9593;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x518D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x904E;&#x7A0B;&#x3067;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x74B0;&#x5883;&#x8AB2;&#x984C;&#x3078;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x9632;&#x5FA1;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x6D3B;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3; trHbN &#x3068; trHbO &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3068;&#x4F4E;&#x9178;&#x7D20;&#x4E2D;&#x3067;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;M. &#x7D50;&#x6838;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6301;&#x3064; glbN &#x3068; glbO &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x304C;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x7D50;&#x6838;&#x306B; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;, &#x7D50;&#x6838; H37Ra &#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5F8C;&#x9732;&#x51FA; H37Ra &#x3067;&#x76E3;&#x8996;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;GlbN &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x4E2D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;, &#x7D50;&#x6838; H37Ra &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x591A;&#x304B;&#x308C;&#x5C11;&#x306A;&#x304B;&#x308C; M. smegmatis&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x80B2;&#x6BB5;&#x968E;&#x4E00;&#x5B9A; glbO &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x7D04; 3 &#x301C; 3.5 &#x500D;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6297;&#x9178;&#x83CC;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;glbN &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 1.5 &#xFF5E; 2 &#x500D;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A; nitrosative &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3001;&#x4E9C;&#x785D;&#x9178;&#x5869;&#x3001;&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC; &#x30CB;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30C9; &#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0; (SNP)&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x306F; glbN &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;glbO &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x785D;&#x9178; SNP &#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3067;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;glbN &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x30AB;&#x30BF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;glbO &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x7D04; 1.5 &#x500D;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B; nitrosative &#x3068;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; trHb &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x9077;&#x79FB;&#x91D1;&#x5C5E;&#x8A98;&#x8D77;&#x9178;&#x7D20; glbN &#x3068; glbO &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;glbO &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D04; 2.3 &#x500D;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8A55;&#x4FA1;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x6700;&#x9AD8;&#x5024;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x30CB;&#x30C3;&#x30B1;&#x30EB;&#x3068;&#x9244;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x8A98;&#x5C0E;&#x304C;&#x9006;&#x306B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9; trHb &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6E1B;&#x5C11;&#x6210;&#x9577;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E2D;&#x306E;&#x9244;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x3001;&#x9244;&#x30AD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5264;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x67AF;&#x6E07;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x304C;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9244;/&#x30D8;&#x30E0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9178;&#x7D20;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC; trHb &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x898F;&#x5236;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x5171;&#x901A;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x6574;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059; trHbs M. smegmatis, &#x7D50;&#x6838; H37Ra &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;.&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E; THP 1 &#x5927;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; trHb &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x7D50;&#x6838;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x3002;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6642;&#x9593;&#x3092; 48 h &#x86CD;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E; m. &#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048; glbN &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x6642;&#x9593;&#x8A55;&#x4FA1;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;glbO &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; 24 h &#x63A5;&#x7A2E;&#x3068;&#x5897;&#x52A0;&#x500D;&#x7D04; 48 &#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#xFF0C; &#x7D50;&#x6838; trHb &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x306F;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x5F8C;&#x306B;&#x906D;&#x9047;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x5FDC;&#x529B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30CA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x3092;&#x76F8;&#x4E92;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vivo &#x3067;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x611F;&#x67D3;&#x7D50;&#x6838;&#x306E; trHbs &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x611F;&#x67D3;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E; trHbs &#xFF08;trHbN &#x3068; trHbO&#xFF09; &#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5F8C;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C; &#x7D50;&#x6838;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x751F;&#x4F53;&#x5916;&#x3067;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x73FE;&#x72B6;&#x306F;&#x7D50;&#x6838;&#x83CC;&#x3092;&#x53D7;&#x4FE1;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x611F;&#x67D3;&#x3068;&#x6210;&#x9577;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x9593;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

In vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6761;&#x4EF6;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B3;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x6838;&#x306E;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;

&#xBB34;&#xC2DC; &#xBB34;&#xC2DC; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0; &#xC911; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAC10;&#xC5FC;, &#xB300;&#xAE30; &#xC2DC;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC7AC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xACFC;&#xC815; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD658;&#xACBD; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xC5B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; hemoglobins trHbN &#xBC0F; trHbO &#xC911; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC640; &#xC800; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC99D;&#xC774; &#xC720; &#xAE30;&#xCCB4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC911;&#xCD94;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. M. &#xACB0;&#xD575; hemoglobins&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xADDC;&#xCE59; &#xC724;&#xACFD;&#xC744; &#xADF8;&#xB9AC; &#xB2E4;, &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; Glbn&#xC640; glbO &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; transcriptional &#xC735;&#xD574; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;, &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;&#xC740; &#xC9C4; &#xADE0; smegmatis&#xC5D0; M. &#xACB0;&#xD575; H37Ra &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xBD80; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD6C4; &#xCCB4; &#xC678; &#xD658;&#xACBD; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD558; &#xACE0; M. &#xACB0;&#xD575; h37ra&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB178;&#xCD9C; &#xAC10;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. GlbN &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC815;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xAC70;&#xC758; 3-&#xB97C; 3.5 &#xBC30; M. &#xACB0;&#xD575; h37ra&#xC5D0;&#xC11C; M. smegmatis &#xB2E4;&#xB978; &#xC131;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB354; &#xB9CE;&#xAC70;&#xB098; &#xC801;&#xC740; &#xC0C1;&#xC218; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; glbO &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB192;&#xC774;. &#xB450; mycobacterial &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; glbN &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC720;&#xB3C4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; 1.5-&#xB97C; 2 &#xBC30; &#xC544;&#xB2C8; releaser, &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; nitroprusside (SNP) &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; nitrosative &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xB3C4;, &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;. GlbO &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC740; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; glbN &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xADF8;&#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xC801;&#xC740; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;, SNP &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC544; &#xC9C8;&#xC0B0;&#xC5FC;&#xC744; &#xB354; &#xBC18;&#xC751;. &#xB610;&#xD55C;, glbN &#xBAA8;&#xD130;, H(2)O(2)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; glbO &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; 1.5-fold &#xAC70;&#xC758; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; trHb &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; nitrosative&#xC640; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC774; &#xAE08;&#xC18D; &#xC720;&#xB3C4; hypoxia &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC131;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xACC4;;&#xC5D0;&#xC11C; glbN &#xBC0F; glbO &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;, glbO &#xBAA8;&#xD130; &#xC720;&#xB3C4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC57D; 2.3-fold&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xAC12;&#xC774; &#xB418;&#xB3C4;&#xB85D;. &#xB2C8;&#xCF08; &#xD568;&#xAED8; &#xCCA0;&#xC758; &#xB450; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC18;&#xC804;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xBAA8;&#xB450; trHb &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xC874; &#xAC10;&#xC18C; &#xC131;&#xC7A5; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xCCA0;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xCCA0; chelator&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xACE0;&#xAC08; &#xB410;&#xB2E4; &#xB54C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xCCA0;/heme &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC13C;&#xC11C; &#xAD00;&#xB828; trHb &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xC720;&#xC0AC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB450; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xACF5;&#xD1B5; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; M. smegmatis&#xC5D0; M. &#xACB0;&#xD575; H37Ra, Trhbs&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. THP 1 &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC131;&#xC7A5; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; trHb &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC735;&#xD574;&#xB97C; &#xB4E4;&#xACE0; M. &#xACB0;&#xD575; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC88;&#xC744; &#xD615;&#xAD11; &#xD65C;&#xC131; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; 48 h &#xBD84;&#xC11D; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; M. &#xACB0;&#xD575; &#xC140;&#xC758; &#xC815;&#xB82C; &#xD45C;&#xC2DC; glbN &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD588;&#xB358; &#xD6C4; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xACFC;&#xC815; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC810; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC2DC;&#xAC04;, &#xBC18;&#xBA74; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; glbO &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xB808;&#xBCA8; 24 h postinfection &#xBC0F; &#xC99D;&#xAC00; &#xC57D; 2-fold &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; 48 h &#xD6C4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, M. &#xACB0;&#xD575; trHb &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xADDC;&#xC815; &#xD328;&#xD134;&#xC740; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC740; &#xC77C;&#xB2E8; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. In vivo &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; M. &#xACB0;&#xD575;&#xC758; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; Trhbs&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xAC15;&#xD558;&#xAC8C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xB294; hemoglobins &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC138;&#xADE0; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; M. &#xACB0;&#xD575; hemoglobins&#xC758; transcriptional &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD6C4; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB450; trHbs (trHbN &#xBC0F; trHbO)&#xC758; &#xADF8; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xB294; &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC774; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC10;&#xC5FC; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xBC1B;&#xB294; &#xD658;&#xACBD; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB41C;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC9C4; &#xADE0; &#xACB0;&#xD575; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;.

El &eacute;xito de Mycobacterium tuberculosis como uno de los pat&oacute;genos humanos temidos radica en su capacidad para utilizar los diferentes mecanismos de defensa en respuesta a los diversos problemas ambientales durante el curso de su infecci&oacute;n intracelular, la latencia y el ciclo de reactivaci&oacute;n. Se cree que desempe&ntilde;an un papel fundamental en el metabolismo celular de este organismo durante estr&eacute;s e hipoxia hemoglobinas truncado trHbN y trHbO. Para delinear la regulaci&oacute;n gen&eacute;tica de las hemoglobinas de M. tuberculosis, se construyeron fusiones transcripcionales de los promotores de los genes glbN y glbO con la prote&iacute;na verde fluorescente, y sus respuestas fueron supervisadas en Mycobacterium smegmatis y M. tuberculosis H37Ra expuestas a estr&eacute;s ambiental in vitro y en M. tuberculosis H37Ra despu&eacute;s de crecimiento in vivo dentro de los macr&oacute;fagos. La actividad del promotor de glbN aumentado sustancialmente durante la fase estacionaria y era m&aacute;s alto que la actividad del promotor glbO, que se mantuvo m&aacute;s o menos constante durante las fases de crecimiento en M. smegmatis, as&iacute; como en M. tuberculosis H37Ra casi 3 a 3.5 veces. En ambos ej&eacute;rcitos micobacterias, fue inducida por la actividad del promotor de glbN 1.5 a 2 veces por el inductor de estr&eacute;s nitrosativo general, nitrito, as&iacute; como el liberador NO, nitroprusiato de sodio (SNP). El promotor del glbO era m&aacute;s sensible a nitrito que al SNP, aunque el incremento general de su actividad fue mucho menor que el promotor de la glbN. Adem&aacute;s, el promotor glbN permanec&iacute;a insensible al estr&eacute;s oxidativo generado por h, pero la actividad del promotor glbO aument&oacute; casi 1.5 bajo condiciones similares, lo que sugiere que el gen de la trHb promotores est&aacute;n regulados de manera diferente bajo condiciones de estr&eacute;s oxidativo y nitrosativo. Por el contrario, hipoxia inducida por metales de transici&oacute;n potenciar la actividad de los promotores de la glbN y el glbO en todas las fases de crecimiento; el promotor de glbO fue inducido aproximadamente 2.3-fold, que se encontr&oacute; el valor m&aacute;s alto para este promotor en todas las condiciones evaluadas. Adici&oacute;n de hierro junto con n&iacute;quel invierte la inducci&oacute;n en ambos casos. Curiosamente, se observ&oacute; una disminuci&oacute;n de dependiente de la concentraci&oacute;n en la actividad de ambos promotores de genes de trHb cuando los niveles de hierro en los medios de crecimiento fueron agotados por la adici&oacute;n de un quelante del hierro. Estos resultados sugirieron que un sensor de ox&iacute;geno que contiene el hierro/hemo est&aacute; implicado en la modulaci&oacute;n de las actividades de promotor del gen de trHb directa o indirectamente en conjunci&oacute;n con otros factores celulares. Los modos de regulaci&oacute;n de promotor en diferentes condiciones fisiol&oacute;gicas encontrados sean similares para el trHbs en M. smegmatis y M. tuberculosis H37Ra, indicando que los promotores pueden regularse por componentes que son comunes a los dos sistemas. Microscopia confocal de macr&oacute;fagos THP-1 infectadas con M. tuberculosis llevando las fusiones de promotor del gen trHb demostradas que hab&iacute;a un nivel significativo de la actividad del promotor durante el crecimiento intracelular en los macr&oacute;fagos. Tiempo de evaluaci&oacute;n del curso de la actividad del promotor despu&eacute;s varias veces para arriba a las 48 h por celular activado por fluorescencia clasificaci&oacute;n an&aacute;lisis de las c&eacute;lulas de tuberculosis M. intracelulares indic&oacute; que el promotor de glbN era activo en absoluto tiempo puntos evaluados, mientras que la actividad del promotor glbO permaneci&oacute; en un estado estacionario nivel hasta 24 h agentes y creciente aproximadamente 2 despu&eacute;s de 48 h de la infecci&oacute;n. As&iacute;, el patr&oacute;n general de regulaci&oacute;n de los promotores de genes de M. tuberculosis trHb se correlaciona con las tensiones que el bacilo tuberculoso es probable encontrar una vez que est&eacute; en el entorno del macr&oacute;fago, sino tambi&eacute;n con nuestros conocimientos actuales de sus funciones. Los estudios in vivo demostraron por primera vez la expresi&oacute;n de trHbs durante la infecci&oacute;n de macr&oacute;fagos de M. tuberculosis fuertemente indican que las hemoglobinas son necesarios y por lo tanto importante, durante la fase intracelular del ciclo bacteriana. El presente estudio de regulaci&oacute;n transcripcional de hemoglobinas de tuberculosis M. in vitro bajo diferentes condiciones de estr&eacute;s e in vivo despu&eacute;s de la infecci&oacute;n de macr&oacute;fagos apoya la hip&oacute;tesis eso bios&iacute;ntesis de ambos trHbs (trHbN y trHbO) en el host nativo se regula mediante las se&ntilde;ales ambientales que el bacilo tuberculoso recibe durante la infecci&oacute;n de macr&oacute;fagos y crecimiento en su anfitri&oacute;n humano.

Respuestas de promotores de Mycobacterium tuberculosis hemoglobina a condiciones de crecimiento in vitro e in vivo.

Mycobacterium tuberculosis tronqu&eacute; h&eacute;moglobine, HbN, est dot&eacute; d&#39;une activit&eacute; puissante d&#39;oxyde nitrique dioxyg&eacute;nase et a &eacute;t&eacute; trouv&eacute; pour soulager l&#39;effort nitrosative et d&#39;am&eacute;liorer la survie in vivo d&#39;un h&ocirc;te h&eacute;t&eacute;rologue, Salmonella enterica Typhimurium, dans les macrophages. Ces r&eacute;sultats impliquent la participation de HbN dans la d&eacute;fense de M. tuberculosis contre le stress nitrosative. La prot&eacute;ine comporte un syst&egrave;me de tunnel compos&eacute; d&#39;un short et une branche de long tunnel qui a &eacute;t&eacute; propos&eacute;e pour faciliter la migration de ligand diatomique de l&#39;h&egrave;me et un motif de pr&eacute;-A inhabituels &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale, qui ne contribue pas beaucoup &agrave; l&#39;int&eacute;grit&eacute; structurale de la prot&eacute;ine, comme il fait saillie hors du pli de la globine compact. &Eacute;tonnamment, suppression des pr&eacute;-A r&eacute;gion de M. tuberculosis HbN r&eacute;duit consid&eacute;rablement sa capacit&eacute; &agrave; ne pi&eacute;ger l&#39;oxyde nitrique (), tandis que son insertion &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; N terminale de pr&eacute;-A d&eacute;faut HbN de Mycobacterium smegmatis am&eacute;lior&eacute; son activit&eacute; dioxygenase d&#39;oxyde nitrique. La titration de l&#39;adduit oxyg&eacute;n&eacute; de HbN et ses mutants sans aucune montre que l&#39;oxydation stoechiom&eacute;trique de prot&eacute;ine est plusieurs fois plus lentement lorsque la r&eacute;gion pr&eacute;-A est supprim&eacute;e dans HbN. simulations de dynamique mol&eacute;culaire montrent que l&#39;excision des r&eacute;sultats de la pr&eacute;-A motif de nets changements dans la dynamique des prot&eacute;ines qui entra&icirc;nent l&#39;ouverture de la succursale de long tunnel pour &ecirc;tre pris au pi&egrave;ge dans une conformation ferm&eacute;e, ce qui fait obstacle migration des ligands diatomiques vers le site actif de l&#39;h&egrave;me. La pr&eacute;sente &eacute;tude, donc sans &eacute;quivoque illustre une fonction vitale de la r&eacute;gion pr&eacute;-A dans aucun nettoyage et d&eacute;noue son r&ocirc;le unique par lequel HbN pourrait atteindre sa capacit&eacute; non-d&eacute;toxication efficace.

R&ocirc;le du pr&eacute;-A motif en oxyde nitrique lessivage par tronqu&eacute; h&eacute;moglobine, HbN, de Mycobacterium tuberculosis.

&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x80BA;&#x7ED3;&#x6838;&#x622A;&#x65AD;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x516D;&#xFF0C;&#x5F97;&#x5929;&#x72EC;&#x539A;&#xFF0C;&#x62E5;&#x6709;&#x4E00;&#x53CC;&#x52A0;&#x6C27;&#x9176;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x70C8;&#x6027;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x51CF;&#x8F7B; nitrosative &#x538B;&#x529B;&#xFF0C;&#x589E;&#x5F3A;&#x4F53;&#x5185;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x5F02;&#x6E90;&#x4E3B;&#x673A;&#xFF0C;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x529B;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5728;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x7275;&#x8FDE;&#x516D;&#x53C2;&#x4E0E; nitrosative &#x5E94;&#x529B;&#x5BF9;&#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x9632;&#x5FA1;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x77ED;&#x548C;&#x957F;&#x957F;&#x7684;&#x96A7;&#x9053;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5206;&#x652F;&#xFF0C;&#x62DF;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x53CC;&#x539F;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5230;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x548C;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x7684; Pre-&#x4E00;&#x4E2A;&#x6BCD;&#x9898;&#x5728; N &#x603B;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x8D21;&#x732E;&#x4E0D;&#x5230;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#xFF0C;&#x5B83;&#x7A81;&#x51FA;&#x7D27;&#x51D1;&#x73E0;&#x86CB;&#x767D;&#x6298;&#x53E0;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x96A7;&#x9053;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5220;&#x9664;&#x7684; Pre-A &#x5730;&#x533A;&#x4ECE; M.&#x80BA;&#x7ED3;&#x6838;&#x516D;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x6E05;&#x9664;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E; (NO)&#xFF0C;&#x800C;&#x5176;&#x63D2;&#x5165; N &#x603B;&#x7AD9; Pre-A &#x7F3A;&#x4E4F;&#x516D;&#x7684;&#x5206;&#x679D;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x53CA;&#x5176;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x53CC;&#x52A0;&#x6C27;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6EF4;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x516D;&#x548C;&#x5176;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0D;&#x542B;&#x6C27;&#x52A0;&#x5408;&#x7269;&#x8868;&#x793A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66;&#x6C27;&#x5316;&#x662F; severalfold &#x6162; Pre-A &#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x88AB;&#x5220;&#x9664;&#x65F6;&#x516D;&#x3002; &#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x5207;&#x9664;&#x672F;&#x7684;&#x524D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6BCD;&#x9898;&#x7ED3;&#x679C;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5BFC;&#x81F4;&#x96A7;&#x9053;&#x957F;&#x7684;&#x5206;&#x652F;&#x88AB;&#x56F0;&#x5165;&#x5C01;&#x95ED;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x95E8;&#x4ECE;&#x800C;&#x963B;&#x788D;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x53CC;&#x539F;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53;&#x5F80;&#x8840;&#x7EA2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;&#x6BEB;&#x4E0D;&#x542B;&#x7CCA;&#x5730;&#x6F14;&#x793A;&#x5173;&#x952E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; Pre-A &#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x6E05;&#x7406;&#xFF0C;&#x5C31;&#x6765;&#x63ED;&#x5F00;&#x5176;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x516D;&#x53EF;&#x80FD;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5176;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x65E0;&#x89E3;&#x6BD2;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

Pre-&#x4E00;&#x4E2A;&#x6BCD;&#x9898;&#x4E2D;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x6E05;&#x9664;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x622A;&#x65AD;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x516D;&#x3001; &#x7ED3;&#x6838;&#x5206;&#x679D;&#x6746;&#x83CC;&#x3002;

Mycobacterium tuberculosis truncated hemoglobin, HbN, is endowed with a potent nitric-oxide dioxygenase activity and has been found to relieve nitrosative stress and enhance in vivo survival of a heterologous host, Salmonella enterica Typhimurium, within the macrophages. These findings implicate involvement of HbN in the defense of M. tuberculosis against nitrosative stress. The protein carries a tunnel system composed of a short and a long tunnel branch that has been proposed to facilitate diatomic ligand migration to the heme and an unusual Pre-A motif at the N terminus, which does not contribute significantly to the structural integrity of the protein, as it protrudes out of the compact globin fold. Strikingly, deletion of Pre-A region from the M. tuberculosis HbN drastically reduces its ability to scavenge nitric oxide (NO), whereas its insertion at the N terminus of Pre-A lacking HbN of Mycobacterium smegmatis improved its nitric-oxide dioxygenase activity. Titration of the oxygenated adduct of HbN and its mutants with NO indicated that the stoichiometric oxidation of protein is severalfold slower when the Pre-A region is deleted in HbN. Molecular dynamics simulations show that the excision of Pre-A motif results in distinct changes in the protein dynamics, which cause the gate of the tunnel long branch to be trapped into a closed conformation, thus impeding migration of diatomic ligands toward the heme active site. The present study, thus, unequivocally demonstrates vital function of Pre-A region in NO scavenging and unravels its unique role by which HbN might attain its efficient NO-detoxification ability.

Role of Pre-A motif in nitric oxide scavenging by truncated hemoglobin, HbN, of Mycobacterium tuberculosis.

Mycobacterium tuberculosis troncato emoglobina, HbN, &egrave; dotato di una potente ossido nitrico diossigenasi attivit&agrave; ed &egrave; stato trovato per alleviare lo stress A&beta; e migliorare la sopravvivenza in vivo di un ospite eterologo, enterica Salmonella Typhimurium, all&#39;interno i macrofagi. Questi risultati implicano il coinvolgimento di HbN nella difesa di M. tuberculosis contro lo stress A&beta;. La proteina trasporta un sistema di tunnel composto da un breve e un tunnel lungo ramo che &egrave; stato proposto per facilitare la migrazione di ligando biatomica l&#39;eme e un insolito motivo Pre-A presso il capolinea di N, che non contribuiscono in modo significativo per l&#39;integrit&agrave; strutturale della proteina, come si sporge fuori la piega della globina compatto. Sorprendentemente, eliminazione di Pre-una regione da M. tuberculosis HbN riduce drasticamente la capacit&agrave; di non scavenging ossido nitrico (), mentre il suo inserimento al capolinea N del Pre-A difettare HbN di Mycobacterium smegmatis migliorato la sua attivit&agrave; ossido nitrico diossigenasi. Titolazione dell&#39;addotto ossigenato HbN e suoi mutanti con NO ha indicato che l&#39;ossidazione stechiometrico della proteina &egrave; molteplicemente pi&ugrave; lento quando la regione Pre-A viene eliminata in simulazioni di dinamica molecolare mostrano che l&#39;escissione dei risultati Pre-un motivo in distinti cambiamenti nelle dinamiche della proteina, che causano il cancello del tunnel lungo ramo per essere intrappolati in una conformazione chiusa HbN., cos&igrave; impedendo la migrazione dei ligands biatomica verso il sito attivo dell&#39;eme. Il presente studio, quindi, inequivocabilmente dimostra la funzione vitale della regione Pre-A di NO lo scavenging e si dipana il suo ruolo unico che HbN potrebbe raggiungere la capacit&agrave; di disintossicazione non efficiente.

Ruolo del Pre-un motivo in ossido nitrico lo scavenging da troncato emoglobina, HbN, del Mycobacterium tuberculosis.

&#x7D50;&#x6838;&#x7D50;&#x6838;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x3001;HbN&#x3001;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x30B8;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x6075;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;nitrosative &#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3092;&#x89E3;&#x6D88;&#x3057;&#x3001;&#x7570;&#x7A2E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9; &#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x83CC;&#x3001;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x5185;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C; HbN &#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306E;&#x7D50;&#x6838; nitrosative &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9632;&#x885B;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x3068;&#x30D8;&#x30E0;&#x3068;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8; &#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3;&#x500D;&#x304B;&#x3089;&#x7A81;&#x304D;&#x51FA;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6574;&#x5408;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x306A;&#x3044; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3078;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x539F;&#x5B50;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x56FD;&#x5883;&#x306E;&#x9577;&#x3044;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x5206;&#x5C90;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x3001;&#x305D;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x633F;&#x5165;&#x306E;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B; HbN &#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x305D;&#x306E;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x30B8;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5411;&#x4E0A;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x7D50;&#x6838; HbN &#x304B;&#x3089;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20; &#xFF08;NO&#xFF09; &#x3092;&#x6E05;&#x6383;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HbN &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x9178;&#x7D20;&#x4ED8;&#x52A0;&#x7269;&#x306E;&#x6EF4;&#x5B9A; HbN &#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x7D50;&#x679C;&#x5207;&#x9664;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30ED;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D6;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C1;&#x306F;&#x9589;&#x3058;&#x305F;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9580;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x304C;&#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;&#x7684;&#x9178;&#x5316;&#x9045;&#x304F;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x78E8;&#x304B;&#x308C;&#x304C;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x539F;&#x5B50;&#x914D;&#x4F4D;&#x5B50;&#x30D8;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3078;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;, &#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x306A;&#x3044;&#x6E05;&#x6383;&#x3067;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x306E;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x89E3;&#x6BD2;&#x80FD;&#x529B; HbN &#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x89E3;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7A92;&#x7D20;&#x9178;&#x5316;&#x7269;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6E05;&#x6383;&#x3067;&#x4E8B;&#x524D;&#x306B;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3; HbN &#x7D50;&#x6838;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#xC9C4; &#xADE0; &#xACB0;&#xD575; &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;, HbN, &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; dioxygenase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC5EC; &#xBC0F; nitrosative &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD574;&#xC18C; &#xBC0F; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;, &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; enterica Typhimurium, &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; in vivo &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; nitrosative &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; M. &#xACB0;&#xD575;&#xC758; &#xBC29;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; Hbn&#xC758; &#xC5F0;&#xB8E8;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC6B4;&#xBC18; &#xC9E7;&#xACE0; 2 &#xC6D0;&#xC790; ligand &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD558;&#xB294; &#xD5E4; &#xACE0;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18C;&#xD615; globin &#xACB9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xCD9C; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC774; &#xD55C; &#xC804; A &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD558;&#xC5EC; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xAE34; &#xD130;&#xB110; &#xC9C0;&#xC810;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xD130;&#xB110; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, &#xC0AC;&#xC804; A &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; M. &#xACB0;&#xD575; Hbn&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC0AC;&#xC804; A &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC9C4; &#xADE0; HbN smegmatis&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC0BD;&#xC785;&#xC740; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; dioxygenase &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC1C;&#xC120; &#xBC18;&#xBA74; &#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C; (&#xC5C6;&#xC74C;)&#xC744; &#xCCAD;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. HbN &#xC5C6;&#xC774; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C; adduct &#xC801;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xB7C9; &#xB860; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; severalfold &#xB290;&#xB9B0; &#xC0AC;&#xC804; A &#xC9C0;&#xC5ED; HbN. &#xBD84;&#xC790; &#xB3D9;&#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB2EB;&#xD78C;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xAC07;&#xD600; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xD130;&#xB110; &#xB871; &#xBE0C;&#xB79C;&#xCE58; &#xAC8C;&#xC774;&#xD2B8; &#xC6D0;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xC0AC;&#xC804; A &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC808;&#xB2E8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB420; &#xB54C; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB530;&#xB77C;&#xC11C; heme &#xD65C;&#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; 2 &#xC6D0;&#xC790; ligands&#xC758; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xBC29;&#xD574;&#xD55C;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5C6;&#xB294; &#xCCAD;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC804; A &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; HbN &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC544;&#xB2C8; &#xD574;&#xB3C5; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; unravels.

&#xC9C8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCCAD;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC804; A &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48;&#xC744;, &#xACB0;&#xD575;&#xADE0;&#xC758; HbN &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mycobacterium tuberculosis truncado hemoglobina, HbN, est&aacute; dotada de una potente &oacute;xido n&iacute;trico dioxigenasa actividad y se ha encontrado para aliviar el estr&eacute;s nitrosativo y mejorar la supervivencia en vivo de un anfitri&oacute;n heter&oacute;logo, Salmonella enterica Typhimurium, dentro de los macr&oacute;fagos. Estos resultados implican la participaci&oacute;n de HbN en la defensa de M. tuberculosis frente al estr&eacute;s nitrosativo. La prote&iacute;na lleva un sistema de t&uacute;nel compuesto de un corto y una rama de largo t&uacute;nel que se ha propuesto facilitar la migraci&oacute;n de diat&oacute;mico ligando el heme y un motivo de Pre-A inusual en la terminal de N, que no contribuye significativamente a la integridad estructural de la prote&iacute;na, como sobresale fuera del pliegue compacto de la globina. Sorprendentemente, eliminaci&oacute;n de Pre-una regi&oacute;n de M. tuberculosis HbN reduce dr&aacute;sticamente su capacidad para no limpiar el &oacute;xido n&iacute;trico (), mientras que su inserci&oacute;n en la terminal N de Pre-A carecer HbN de Mycobacterium smegmatis mejor&oacute; su actividad de &oacute;xido n&iacute;trico dioxigenasa. Valoraci&oacute;n de la aducci&oacute;n oxigenada de HbN y sus mutantes no indic&oacute; que la oxidaci&oacute;n estequiom&eacute;trica de prote&iacute;na es repetida m&aacute;s lento cuando se elimina la regi&oacute;n Pre-A en simulaciones de Din&aacute;mica Molecular muestran que la supresi&oacute;n de resultados de Pre-A Adorno en distintos cambios en la din&aacute;mica de la prote&iacute;na, que causa la puerta de la sucursal de largo t&uacute;nel a quedar atrapado en una conformaci&oacute;n cerrada HbN., impidiendo as&iacute; la migraci&oacute;n de ligandos diat&oacute;micas hacia el sitio activo de heme. As&iacute;, el presente estudio, inequ&iacute;vocamente demuestra la funci&oacute;n vital de Pre-una regi&oacute;n en la NO eliminaci&oacute;n de registros obsoletos y revela su papel &uacute;nico por el cual HbN podr&iacute;a alcanzar su capacidad de desintoxicaci&oacute;n NO eficiente.

Funci&oacute;n de Pre-un motivo en la eliminaci&oacute;n de registros obsoletos de &oacute;xido n&iacute;trico por truncado hemoglobina, HbN, de Mycobacterium tuberculosis.

&#x4E0D;&#x654F;&#x611F; NsrR &#x6291;&#x5236;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x8FD0;&#x8F7D; [4Fe-4S] &#x7FA4;&#x96C6;&#xFF0C;&#x5728;&#x538C;&#x6C27;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x63A7;&#x5236;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684; nasD &#x548C;&#x53D1;&#x843D; (I &#x7C7B;&#x89C4;&#x4F8B;&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x53E6;&#x4E00;&#x7C7B;&#x7684; NsrR &#x8C03;&#x8282; (&#x4E8C;&#x89C4;&#x7C7B;)&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x66F4;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x96C6;&#x5408;&#x3002;&#x57FA;&#x5730;&#x66FF;&#x4EE3;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5; [4Fe-4S]-NsrR &#x627F;&#x8BA4;&#x5728;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x77E2;&#x5BF9;&#x79F0;&#x6211;&#x987A;&#x5F0F;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0E; A + T-&#x5BCC;&#x7C7B; II &#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7F51;&#x7AD9;&#x663E;&#x793A;&#x7684; NsrR &#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x653E;&#x5BBD;&#x5E8F;&#x5217;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC4;&#x7814;&#x7A76;&#x786E;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7C7B; II NsrR &#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x4E0B;&#x3002;&#x7C7B; II NsrR regulon &#x5305;&#x62EC;&#x63A7;&#x5236;&#x7531; AbrB &#x548C;&#x97E9;&#x56FD;&#x7684; repressors&#xFF0C;&#x4E5F;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230; A + T-&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x548C;&#x6BDB;&#x76AE;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x7C7B; II &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x662F;&#x5728;&#x538C;&#x6C27;&#x53D1;&#x9175;&#x589E;&#x957F;&#x4E0E;&#x4E19;&#x916E;&#x9178;&#x5728; nsrR &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x63D0;&#x5347;&#x3002;&#x867D;&#x7136; NsrR &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7C7B;&#x4E8C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7AD9;&#x70B9;&#x662F;&#x4F53;&#x5916;&#x6CA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x5927;&#x5C0F;&#x5199;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x7C7B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x9002;&#x5EA6;&#x5730;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7531;&#x6CA1;&#x6709;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x6D89;&#x53CA;&#x5230; NsrR &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x9547;&#x538B;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x7C7B;&#x4E8C;&#x3001; &#x9547;&#x538B;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x9006;&#x8F6C;&#x3002;&#x5728;&#x8FDB;&#x884C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x538B;&#x6291; NsrR &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;NsrR &#x6291;&#x5236;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x5E76;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x611F;&#x5E94;&#x6240;&#x9700;&#x53D1;&#x5E03;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x53D1;&#x5E03;&#x7814;&#x7A76;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x6709;&#x6C27;&#x548C;&#x65E0;&#x6C27;&#x547C;&#x5438;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x53D1;&#x5E03;&#x548C; NsrR &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x548C;&#x53D1;&#x73B0;&#x65B0;&#x53D1;&#x5E03;&#x548C;&#x5728;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528; NsrR B.&#x67AF;&#x8349;&#x6746;&#x83CC;&#x5728;&#x538C;&#x6C27;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;

&#x5168;&#x7403;&#x8F6C;&#x5F55;&#x63A7;&#x5236;&#x7684; NsrR &#x5728;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x3002;

The NO-sensitive NsrR repressor of Bacillus subtilis, which carries a [4Fe-4S] cluster, controls transcription of nasD and hmp (class I regulation) under anaerobic conditions. Here, we describe another class of NsrR regulation (class II regulation) that controls a more diverse collection of genes. Base substitution analysis showed that [4Fe-4S]-NsrR recognizes a partial dyad symmetry within the class I cis-acting sites, whereas NO-insensitive interaction of NsrR with an A+T-rich class II regulatory site showed relaxed sequence specificity. Genome-wide transcriptome studies identified genes that are under the control of the class II NsrR regulation. The class II NsrR regulon includes genes controlled by both AbrB and Rok repressors, which also recognize A+T-rich sequences, and by the Fur repressor. Transcription of class II genes was elevated in an nsrR mutant during anaerobic fermentative growth with pyruvate. Although NsrR binding to the class II regulatory sites was NO insensitive in vitro, transcription of class II genes was moderately induced by NO, which involved reversal of NsrR-dependent repression, suggesting that class II repression is also NO sensitive. In all NsrR-repressed genes tested, the loss of NsrR repressor activity was not sufficient to induce transcription as induction required the ResD response regulator. The ResD-ResE signal transduction system is essential for activation of genes involved in aerobic and anaerobic respiration. This study indicated coordinated regulation between ResD and NsrR and uncovered a new role of ResD and NsrR in transcriptional regulation during anaerobiosis of B. subtilis.

Global transcriptional control by NsrR in Bacillus subtilis.

Le r&eacute;presseur sensible non NsrR de Bacillus subtilis, qui transporte un cluster [4Fe-4 s], contr&ocirc;le la transcription de la nasD et hmp (r&egrave;glement de classe I) dans des conditions ana&eacute;robies. Nous d&eacute;crivons ici une autre cat&eacute;gorie de r&egrave;glement NsrR (classe R&egrave;glement II) qui contr&ocirc;le une collection plus diversifi&eacute;e des g&egrave;nes. Substitution de base analyse a montr&eacute; que [4Fe-4 s]-NsrR reconna&icirc;t une sym&eacute;trie dyade partielle au sein de la classe j&#39;ai intramol&eacute;culaires sites, alors que l&#39;interaction non insensible de NsrR avec un site riche en A + T classe II r&eacute;gulateur a montr&eacute; d&eacute;tendu sp&eacute;cificit&eacute; de s&eacute;quence. Genome-wide transcriptome &eacute;tudes identifi&eacute; des g&egrave;nes qui sont sous le contr&ocirc;le de la classe II NsrR r&egrave;glement. La classe II NsrR r&eacute;gulon comporte des g&egrave;nes contr&ocirc;l&eacute;es par des r&eacute;presseurs AbrB tant en R&eacute;publique de Cor&eacute;e, qui reconnaissent aussi les s&eacute;quences riches en A + T, et par le r&eacute;presseur de la fourrure. Transcription des g&egrave;nes de classe II a &eacute;t&eacute; &eacute;lev&eacute;e dans un mutant nsrR au cours de la croissance par fermentation ana&eacute;robie avec pyruvate. NsrR liaison aux sites r&eacute;glementation classe II n&#39;&eacute;tait pas insensible in vitro, transcription des g&egrave;nes de classe II a &eacute;t&eacute; mod&eacute;r&eacute;ment induite par non, qui a impliqu&eacute; inversion de r&eacute;pression NsrR-d&eacute;pendante, sugg&eacute;rant que la classe r&eacute;pression II n&#39;est &eacute;galement pas sensibles. Dans tous les g&egrave;nes r&eacute;prim&eacute;s NsrR test&eacute;s, la perte d&#39;activit&eacute; de r&eacute;presseur NsrR n&#39;&eacute;tait pas suffisante pour induire la transcription comme induction requis le r&eacute;gulateur de r&eacute;ponse BDEEC. Le syst&egrave;me de transduction de signal Bulletin-ResE est indispensable pour l&#39;activation de g&egrave;nes impliqu&eacute;s dans la respiration a&eacute;robie et ana&eacute;robie. Cette &eacute;tude indique une r&eacute;gulation coordonn&eacute;e entre BDEEC et NsrR et d&eacute;couvert un nouveau r&ocirc;le de bulletin et NsrR dans la r&eacute;gulation transcriptionnelle au cours de l&#39;ana&eacute;robiose de b. subtilis.

Global contr&ocirc;le transcriptionnel par NsrR chez Bacillus subtilis.

Il repressor NsrR NO-sensibili di Bacillus subtilis, che trasporta un cluster [4Fe-4S], controlla la trascrizione di nasD e hmp (regolamento di classe I) in condizioni anaerobiche. Qui, descriviamo un&#39;altra classe di NsrR regolamento (regolamento di II classe) che controlla una raccolta pi&ugrave; diversificata di geni. Sostituzione base analisi ha mostrato che [4Fe-4S]-NsrR riconosce una simmetria Diadi parziale all&#39;interno della classe I cis-acting siti, considerando che NO-insensibile interazione di NsrR con un A + T-classe II regolamentazione sito ricco ha mostrato rilassato specificit&agrave; di sequenza. Genome-wide transcriptome studi identificati geni che sono sotto il controllo della classe II NsrR regolamento. La classe II NsrR regulon include geni controllati da sia AbrB e Rok repressori, che riconoscono anche sequenze A + T-ricchi, e dal repressor di pelliccia. Trascrizione dei geni di classe II &egrave; stata elevata in un mutante di nsrR durante la crescita fermentativa anaerobica con piruvato. Sebbene non insensibili in vitro NsrR associazione per i siti di regolamentazione di II classe, trascrizione dei geni di classe II &egrave; stata moderatamente indotta da NO, che ha coinvolto l&#39;inversione di repressione NsrR-dipendente, suggerendo che la repressione di II classe non &egrave; anche sensibili. In tutti i repressi NsrR geni testati, la perdita di attivit&agrave; repressor NsrR non era sufficiente per indurre la trascrizione come induzione richiesto il regolatore di risposta ResD. Il sistema di trasduzione del segnale ResD-ResE &egrave; essenziale per l&#39;attivazione di geni coinvolti nella respirazione aerobica e anaerobica. Questo studio indicato regolamento coordinato tra ResD e NsrR e scoperto un nuovo ruolo di ResD e NsrR nella regolazione trascrizionale in anaerobiosi di b. subtilis.

Controllo di transcriptional globale di NsrR in Bacillus subtilis.

&#x3044;&#x3044;&#x3048;&#x654F;&#x611F;&#x306A; NsrR &#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC; [4 &#x9244;-4 s &#x306F;] &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x3001;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E; nasD hmp &#xFF08;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; I &#x898F;&#x5236;&#xFF09; &#x5ACC;&#x6C17;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1; NsrR &#x898F;&#x5236; (&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II &#x898F;&#x5236;) &#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5869;&#x57FA;&#x7F6E;&#x63DB;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x305D;&#x306E; [4 &#x9244; 4 &#x79D2;]-NsrR &#x8A8D;&#x8B58;&#x90E8;&#x5206;&#x30C0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30C9; &#x30FB;&#x5BFE;&#x79F0;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x5185;&#x79C1;&#x306F; cis &#x6F14;&#x6280;&#x306A;&#x3057;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044; NsrR &#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3001;A + T &#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II &#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x914D;&#x5217;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30FB; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x7814;&#x7A76;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II NsrR &#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0B;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II NsrR &#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; A + T &#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3082;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3001;&#x9069;&#x7528;&#x3068;&#x97D3;&#x56FD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x6BDB;&#x76AE;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306F; nsrR &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x30D4;&#x30EB;&#x30D3;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x767A;&#x9175;&#x6210;&#x9577;&#x4E2D;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3057;&#x305F;.NsrR &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II &#x898F;&#x5236;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B; in vitro &#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x5C0F;&#x6587;&#x5B57;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x304C;&#x9069;&#x5EA6;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F; NsrR &#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x6291;&#x5727;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II &#x306E;&#x5F3E;&#x5727;&#x3082;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x3002;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8; NsrR &#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;NsrR &#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x8A98;&#x5C0E; ResD &#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;ResD ResE &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7CFB;&#x306F;&#x3001;&#x597D;&#x6C17;&#x6027;&#x3068;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x547C;&#x5438;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; ResD &#x3068; NsrR &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5354;&#x8ABF;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3001;B. &#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x5ACC;&#x6C17;&#x4E2D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; ResD &#x3068; NsrR &#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; NsrR &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x3002;

[4Fe-4S] &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xC6B4;&#xBC18;, &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis&#xC758; NO&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; NsrR &#xC9C4;&#xC555; &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; nasD &#xBC0F; hmp (&#xD074;&#xB798;&#xC2A4; I &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;)&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; NsrR &#xADDC;&#xC81C; (&#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xADDC;&#xC81C;)&#xC758; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xB300;&#xCCB4; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8; [4Fe-4S]-NsrR &#xC778;&#xC2DD; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xB0B4;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; dyad &#xB300;&#xCE6D; &#xB098; cis &#xC5F0;&#xAE30; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;, &#xBC18;&#xBA74; A + T-&#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xADDC;&#xC81C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; Nsrr&#xC758; NO&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xD3B8;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC8C;&#xB188; &#xC804;&#xCCB4; transcriptome &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II NsrR &#xADDC;&#xC815;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II NsrR regulon &#xBAA8;&#xD53C; &#xC9C4;&#xC555;&#xB3C4; A + T &#xC11C;&#xC2DD; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD;, AbrB, &#xD55C;&#xAD6D; repressors&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; pyruvate &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xBC1C;&#xD6A8; &#xC131;&#xC7A5; &#xC911; nsrR &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC801;&#xB2F9;&#xD788; &#xC720;&#xB3C4; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; NsrR &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xADDC;&#xC81C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC544;&#xB2C8;, &#xC5EC;&#xB294; &#xAD00;&#xB828; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II &#xC5B5;&#xC555;&#xB3C4; &#xC5C6;&#xB294; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC81C;&#xC548; NsrR &#xC885;&#xC18D; &#xC5B5;&#xC555;&#xC758; &#xBC18;&#xC804;. &#xBAA8;&#xB4E0; NsrR &#xC5B5;&#xC555; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;, NsrR &#xC9C4;&#xC555; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; ResD &#xC751;&#xB2F5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ResD &#xC18C;&#xD504; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xD638; &#xAE30;&#xC131; &#xBC0F; &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xD638;&#xD761;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; Resd&#xC640; NsrR &#xC0AC;&#xC774; &#xC870;&#xC815;&#xB41C; &#xADDC;&#xC815; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC0F; B. subtilis&#xC758; anaerobiosis &#xB3D9;&#xC548; transcriptional &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; ResD &#xBC0F; Nsrr&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis&#xC5D0; Nsrr&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; transcriptional &#xC81C;&#xC5B4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El represor NO sensible NsrR de Bacillus subtilis, que lleva un cluster [4Fe-4S], controla la transcripci&oacute;n de la nasD y hmp (clase I regulaci&oacute;n) bajo condiciones anaer&oacute;bicas. Aqu&iacute;, describimos a otra clase de NsrR Reglamento (clase Reglamento II) que controla una colecci&oacute;n m&aacute;s diversa de genes. Substituci&oacute;n baja el an&aacute;lisis demostr&oacute; que [4Fe-4S]-NsrR reconoce una simetr&iacute;a Diada parcial dentro de la clase I acci&oacute;n cis sitios, mientras que la interacci&oacute;n NO insensible de NsrR con una ricas en A+T clase II sitio reglamentario mostr&oacute; relajado especificidad de secuencia. Estudios del genoma transcriptoma identifican genes que est&aacute;n bajo el control de la clase II NsrR Reglamento. La clase II NsrR regul&oacute;n incluye genes controlados por represores AbrB y Rok, que tambi&eacute;n reconocen secuencias ricas en A+T, y por el represor de la piel. Transcripci&oacute;n de los genes de clase II fue elevado en un mutante de nsrR durante el crecimiento fermentativo anaerobio con piruvato. Aunque NsrR enlace a los sitios regulatorios de clase II fue insensible NO in vitro, transcripci&oacute;n de los genes de clase II moderado fue inducida por el NO, que consist&iacute;a revocaci&oacute;n de represi&oacute;n NsrR-dependiente, sugiriendo que la clase represi&oacute;n II tambi&eacute;n no es sensibles. En los genes reprimidos NsrR probados, la p&eacute;rdida de actividad de represor NsrR no fue suficiente para inducir la transcripci&oacute;n como inducci&oacute;n requiri&oacute; el regulador de la respuesta de ResD. El sistema de transducci&oacute;n de se&ntilde;al ResD ResE es esencial para la activaci&oacute;n de genes implicados en la respiraci&oacute;n aerobia y anaerobia. Este estudio indica la regulaci&oacute;n coordinada entre ResD y NsrR y descubri&oacute; un nuevo papel de ResD y NsrR en la regulaci&oacute;n transcripcional durante la anaerobiosis de B. subtilis.

Global control transcripcional por NsrR en Bacillus subtilis.

Amicoumacin A &#x5C55;&#x54C1;&#x5F3A;&#x6297;&#x83CC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5BF9;&#x8010;&#x7532;&#x6C27;&#x897F;&#x6797;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC; (MRSA)&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x6211;&#x4EEC;&#x529B;&#x6C42;&#x63ED;&#x793A;&#x53CA;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC; COL amicoumacin A &#x54CD;&#x5E94;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7EC4;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x6539;&#x5EFA;&#x4E2D;&#x6307;&#x5B9A;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4FE1;&#x5C01;&#x8425;&#x4E1A;&#x989D;&#x3001; &#x8DE8;&#x819C;&#x8FD0;&#x8F93;&#x3001; &#x6BD2;&#x529B;&#x3001; &#x4EE3;&#x8C22;&#xFF0C;&#x4E00;&#x822C;&#x5E94;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x6700;&#x9AD8;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F; lrgA&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801; antiholin &#x4E4B;&#x7C7B;&#x7684;&#x4EA7;&#x54C1;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x53D7; &Delta;&psi; &#x7684;&#x5D29;&#x6E83;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6982;&#x5FF5;&#x7684; LrgA &#x8C03;&#x8282; murein &#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x751F;&#x957F;&#x5728; amicoumacin A &#x7684; COL &#x8868;&#x660E;&#x51CF;&#x5C11;&#x81EA;&#x6EB6;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x7531;&#x6C34;&#x89E3;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x8F83;&#x4F4E;&#x9020;&#x6210;&#x3002;&#x4E3A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6DF1;&#x5165;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x7406;&#x7684; amicoumacin A&#x3001; &#x91CE;&#x751F;&#x578B; COL &#x548C; amicoumacin &#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x6BD4;&#x8F83; A &#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x4E32;&#x884C;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x8FDB;&#x884C;&#x3002;&#x751F;&#x6210;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x66FF;&#x6362;&#x7684;&#x5355;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x65F6;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728; ksgA &#xFF08;&#x7F16;&#x7801; RNA dimethyltransferase&#xFF09;&#x3001; &#x30D5; &#x30B5; (&#x4F38;&#x957F;&#x7CFB;&#x6570; G)&#x3001; dnaG &#xFF08;primase&#xFF09;&#x3001; &#x62C9;&#x4E01;&#x7F8E;&#x6D32; &#xFF08;&#x5854;&#x683C;&#x7CD6; 1&#xFF0C;6-&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x919B;&#x7F29;&#x9176;&#xFF09;&#xFF0C;SACOL0611 &#xFF08;&#x5047;&#x5B9A;&#x7CD6;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;)&#x3002;&#x5BC6;&#x7801;&#x5B50;&#x66FF;&#x6362;&#x5728; EF G &#x4E8B;&#x4E1A; amicoumacin A &#x7535;&#x963B;&#x548C;&#x592B;&#x897F;&#x5730;&#x9178;&#x7535;&#x963B;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x57DF;&#x548C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5E26;&#x6765;&#x4EA4;&#x53C9;&#x8010;&#x836F;&#x6027;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;amicoumacin A &#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80FD;&#x91CF;&#x8017;&#x6563;&#x3002;&#x5305;&#x62EC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x548C; DNA &#x590D;&#x5236;&#x5728;&#x8010;&#x836F;&#x682A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x7387;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5141;&#x8BB8;&#x8981;&#x8865;&#x507F;&#x819C;&#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x751F;&#x5B58;&#x6027;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

Amicoumacin A.&#x5BF9;&#x8010;&#x7532;&#x6C27;&#x897F;&#x6797;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;

Amicoumacin A exhibits strong antimicrobial activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), hence we sought to uncover its mechanism of action. Genome-wide transcriptome analysis of S. aureus COL in response to amicoumacin A showed alteration in transcription of genes specifying several cellular processes including cell envelope turnover, cross-membrane transport, virulence, metabolism, and general stress response. The most highly induced gene was lrgA, encoding an antiholin-like product, which is induced in cells undergoing a collapse of Î”Ïˆ. Consistent with the notion that LrgA modulates murein hydrolase activity, COL grown in the presence of amicoumacin A showed reduced autolysis, which was primarily caused by lower hydrolase activity. To gain further insight into the mechanism of action of amicoumacin A, a whole genome comparison of wild-type COL and amicoumacin A-resistant mutants isolated by a serial passage method was carried out. Single point mutations generating codon substitutions were uncovered in ksgA (encoding RNA dimethyltransferase), fusA (elongation factor G), dnaG (primase), lacD (tagatose 1,6-bisphosphate aldolase), and SACOL0611 (a putative glycosyl transferase). The codon substitutions in EF-G that cause amicoumacin A resistance and fusidic acid resistance reside in separate domains and do not bring about cross resistance. Taken together, these results suggest that amicoumacin A might cause perturbation of the cell membrane and lead to energy dissipation. Decreased rates of cellular metabolism including protein synthesis and DNA replication in resistant strains might allow cells to compensate for membrane dysfunction and thus increase cell survivability.

Response of methicillin-resistant Staphylococcus aureus to amicoumacin A.

Amicoumacin A expositions forte activit&eacute; antimicrobienne contre methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), par cons&eacute;quent, nous avons voulu d&eacute;couvrir son m&eacute;canisme d&#39;action. Analyse du transcriptome de g&eacute;nome de S. aureus COL en r&eacute;ponse &agrave; amicoumacin A a montr&eacute; d&#39;alt&eacute;ration dans la transcription des g&egrave;nes sp&eacute;cifiant plusieurs processus cellulaires, y compris le renouvellement d&#39;enveloppe cellulaire, Croix-membrane transport, virulence, le m&eacute;tabolisme et r&eacute;ponse au stress g&eacute;n&eacute;ral. Le g&egrave;ne induit plus fortement a &eacute;t&eacute; lrgA, codant pour un produit antiholin-like, qui est induit dans les cellules subissant une chute de &Delta;&psi;. Compatible avec la notion que LrgA module l&#39;activit&eacute; d&#39;hydrolase mur&eacute;ine, COL cultiv&eacute;e en pr&eacute;sence d&#39;amicoumacin A a montr&eacute; r&eacute;duit l&#39;autolyse, qui a &eacute;t&eacute; principalement caus&eacute;e par une activit&eacute; plus faible hydrolase. Pour mieux comprendre le m&eacute;canisme d&#39;action de l&#39;amicoumacin A, une comparaison du g&eacute;nome entier de type sauvage COL et amicoumacin des mutants r&eacute;sistants A isol&eacute;s par une m&eacute;thode de passage de s&eacute;rie a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e. Seule point mutations g&eacute;n&eacute;rant des substitutions de codons ont &eacute;t&eacute; mis au jour &agrave; ksgA (encodage RNA dimethyltransferase), fusA (facteur d&#39;&eacute;longation G), dnaG (primase), DCL (tagatose 1, 6-bisphosphate aldolase) et SACOL0611 (une putatif glycosyl transf&eacute;rase). Les substitutions de codon en EF-G qui cause amicoumacin r&eacute;sistance de A et de la r&eacute;sistance acide fusidique r&eacute;sident en s&eacute;parent les domaines et ne pas apportent une r&eacute;sistance crois&eacute;e. Pris ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent qu&#39;amicoumacin A pourrait provoquer des perturbations de la membrane cellulaire et conduire &agrave; la dissipation d&#39;&eacute;nergie. Une diminution des taux de m&eacute;tabolisme cellulaire y compris la synth&egrave;se des prot&eacute;ines et la r&eacute;plication de l&#39;ADN dans les souches r&eacute;sistantes peuvent permettre aux cellules compenser le dysfonctionnement de membrane et ainsi augmenter les chances de survie cellulaire.

R&eacute;ponse de Staphylococcus aureus m&eacute;thicilline-r&eacute;sistant &agrave; l&#39;amicoumacin A.

Amicoumacin A esposizioni forte attivit&agrave; antimicrobica contro Staphylococcus aureus meticillino-resistente (MRSA), quindi abbiamo cercato di scoprire il suo meccanismo d&#39;azione. Genome-wide transcriptome analisi di S. aureus COL in risposta a amicoumacin A ha mostrato alterazione nella trascrizione dei geni specificando diversi processi cellulari, tra cui turnover cellulare busta, trasporto di membrana di croce, virulenza, metabolismo e risposta allo stress generale. Il gene pi&ugrave; altamente indotto era lrgA, codifica un prodotto simile a antiholin, che viene indotta in cellule subendo un crollo del &Delta;&psi;. Coerente con la nozione che LrgA modula attivit&agrave; idrolasi murein, COL coltivate in presenza di amicoumacin A ha mostrato ridotta autolisi, che &egrave; stata causata principalmente da bassa attivit&agrave; idrolasi. Per guadagnare ulteriore comprensione del meccanismo d&#39;azione dei amicoumacin A, un confronto dell&#39;intero genoma del selvaggio-tipo COL e amicoumacin mutanti resistenti A isolato da un metodo di passaggio seriale &egrave; stata effettuata. Singole mutazioni puntiformi generando le sostituzioni codone sono stati scoperti in ksgA (codifica RNA dimethyltransferase), fuser (fattore di allungamento G), dnaG (primasi), lacD (Tagatosio 1,6-bifosfato aldolasi) e SACOL0611 (una putativo glicosil transferasi). Le sostituzioni codone in EF-G che causa amicoumacin A resistenza e acido fusidico risiedono nel separano i domini e non portano cross-resistenza. Presi insieme, questi risultati suggeriscono che amicoumacin A potrebbe causare perturbazioni della membrana cellulare e portare a dissipazione di energia. Tassi di diminuzione del metabolismo cellulare, tra cui la sintesi proteica e la replicazione del DNA di ceppi resistenti potrebbero consentire alle cellule di compensare la disfunzione di membrana e quindi aumentare la sopravvivenza delle cellule.

Risposta di Staphylococcus aureus meticillino-resistente a amicoumacin A.

Amicoumacin&#x3001;&#x5C55;&#x793A;&#x5F37;&#x3044;&#x6297;&#x83CC;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC; &#xFF08;MRSA&#xFF09; &#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x305D;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x6C42;&#x3081;&#x305F;&#x3002;&#x8010;&#x6027;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC; COL amicoumacin A &#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x5E83;&#x57DF;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x30FC;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x5FDC;&#x7B54;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x9593;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3; &#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; &Delta;&psi; &#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3001;antiholin &#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;lrgA &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6982;&#x5FF5;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3001;LrgA murein &#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x4E0B;&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B; COL amicoumacin A &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7D99;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F; A &#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570; amicoumacin&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; COL &#x304A;&#x3088;&#x3073; amicoumacin &#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x751F;&#x6210;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x767A;&#x898B; (RNA dimethyltransferase &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;) ksgA&#x3001;&#x5E03;&#x4F50; &#xFF08;&#x4F38;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; G&#xFF09;&#x3001;dnaG (&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x30BC;)&#x3001;lacD (&#x30BF;&#x30AC;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9; 1, 6-&#x30D3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;) &#x3068; SACOL0611 (&#x63A8;&#x5B9A;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30EC;&#x30CF; &#x30ED;&#x30FC;&#x30B9; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF09;&#x3002;&#x539F;&#x56E0; amicoumacin A &#x62B5;&#x6297;&#x3068;&#x30D5;&#x30B7;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B; EF G &#x306E;&#x30B3;&#x30C9;&#x30F3;&#x7F6E;&#x63DB;&#x5225;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3084;&#x62B5;&#x6297;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x306B;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C; amicoumacin&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3057;&#x3001;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x6D88;&#x8CBB;&#x3092;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x3068; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x8010;&#x6027;&#x83CC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x901F;&#x5EA6;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x88DC;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Amicoumacin A. &#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30EA;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;

Amicoumacin A &#xC804;&#xC2DC; &#xAC15;&#xD55C; &#xD56D;&#xADE0; &#xD65C;&#xC131; &#xBA54; &#xD2F0; &#xC2E4;&#xB9B0; &#xB0B4;&#xC131; &#xD669;&#xC0C9; &#xD3EC;&#xB3C4;&#xC0C1;&#xAD6C;&#xADE0; (MRSA)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBC1D;&#xD788;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;&#xC11C; &#xB178;&#xB825;. Amicoumacin A&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBBF8; &#xADE0; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188; &#xC804;&#xCCB4; transcriptome &#xBD84;&#xC11D; &#xC140; &#xBD09;&#xD22C; &#xD68C;&#xC804;&#xC728;, &#xAC04; &#xB9C9; &#xC804;&#xC1A1;, &#xB3C5;&#xC131;, &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;, &#xBC0F; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xC720;&#xBC1C;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; lrgA, &Delta;&psi;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34;&#xB97C; &#xACAA;&#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; antiholin &#xAC19;&#xC740; &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;. &#xAD00;&#xB150;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418;&#xB294; LrgA &#xBCC0;&#xC870; murein &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;, COL amicoumacin A&#xC758; &#xBA74; &#xC804;&#xC5D0; &#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC8FC;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778; &#xD55C; &#xBB3C;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xC9C1;&#xB82C; &#xD1B5;&#xD589; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; A &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; amicoumacin A, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC5F4; &#xBC0F; amicoumacin&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188; &#xBE44;&#xAD50;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xB410;&#xB2E4;. Codon &#xB300;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC9C0;&#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; ksgA (RNA dimethyltransferase &#xC778;&#xCF54;&#xB529;), &#xB2E8;&#xCE35; (&#xC2E0;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; G), dnaG (primase), lacD (tagatose 1, 6-bisphosphate aldolase), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; sacol0611&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; (putative glycosyl &#xC804;&#xC774; &#xD6A8;&#xC18C;). &#xC6D0;&#xC778; amicoumacin A &#xC800;&#xD56D;&#xACFC; fusidic &#xC0B0; &#xC131; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; EF g codon &#xB300;&#xCCB4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xAD50;&#xCC28; &#xD558;&#xB294; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xC838; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xADF8; amicoumacin A &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xC12D; &#xB3D9;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC18C;&#xBE44;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0B4;&#xC131; &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; DNA &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC; &#xAC10;&#xC18C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Amicoumacin A. &#xBA54; &#xD2F0; &#xC2E4;&#xB9B0; &#xB0B4;&#xC131; &#xD669;&#xC0C9; &#xD3EC;&#xB3C4;&#xC0C1;&#xAD6C;&#xADE0;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;

La actividad antimicrobiana de la fuerte de la exposiciones de Amicoumacin A contra Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (MRSA), por lo tanto intentamos descubrir su mecanismo de acci&oacute;n. An&aacute;lisis de transcriptoma del genoma de S. aureus COL en respuesta a amicoumacin A mostraron alteraci&oacute;n en la transcripci&oacute;n de genes especificar varios procesos celulares, incluyendo el recambio de la envoltura celular, transporte de la membrana de la Cruz, virulencia, metabolismo y respuesta al estr&eacute;s general. El gen m&aacute;s altamente inducido fue lrgA, codificaci&oacute;n de un producto similar a antiholin, que se induce en las c&eacute;lulas que experimentan una ca&iacute;da de &Delta;&psi;. Consistente con la noci&oacute;n LrgA modula murein hidrolasa actividad, COL cultivada en presencia de amicoumacin A demostr&oacute; reducir autolisis, que fue causado principalmente por la menor actividad hidrolasa. Para obtener m&aacute;s informaci&oacute;n sobre el mecanismo de acci&oacute;n de amicoumacin A, una comparaci&oacute;n del genoma entero de tipo salvaje COL y amicoumacin A resistentes a mutantes aislados por un m&eacute;todo de paso serie se llev&oacute; a cabo. Mutaciones puntuales generando sustituciones cod&oacute;n fueron descubiertas en ksgA (codificaci&oacute;n RNA dimethyltransferase), fusA (factor de elongaci&oacute;n G), dnaG (primasa), lacD (tagatosa 1, 6-bifosfato aldolasa) y SACOL0611 (supuesta glicosil transferasa). Las sustituciones del cod&oacute;n en EF-G que causa amicoumacin A resistencia y resistencia al &aacute;cido fus&iacute;dico residen en separan dominios y no lograr cruzar la resistencia. Tomados juntos, estos resultados sugieren amicoumacin A podr&iacute;a causar perturbaci&oacute;n de la membrana celular y conducir a la disipaci&oacute;n de la energ&iacute;a. Las tasas de disminuci&oacute;n del metabolismo celular, incluyendo la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas y replicaci&oacute;n del ADN en las cepas resistentes podr&iacute;an permitir a las c&eacute;lulas compensar la disfunci&oacute;n de la membrana y as&iacute; aumentar la supervivencia de la c&eacute;lula.

Amrita Lama

Department of Molecular Microbiology & Immunology

Oregon Health & Science University

Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria

Amrita Lama

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular Microbiology & Immunology

Oregon Health & Science University

Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria

Department of Molecular Microbiology & Immunology