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Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging

Cardiac myocytes isolated from adult hearts are widely accepted as a model somewhere half way between embryonic and neonatal muscle cells on one side and ...

Universty of Saarland

&#x5E8F;&#x5217;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 170 (S170) &#x7684;&#x7389;&#x7C73; (&#x7389;&#x7C73; L.)SUS1 &#x8517;&#x7CD6;&#x5408;&#x6210;&#x9176; (SUS) &#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x53EF;&#x80FD;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;&#x7389;&#x7C73;&#x53F6;&#x7247;&#x6240;&#x8F7D;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x6709;&#x7279;&#x8272;&#x7684;&#x8517;&#x7CD6;&#x9499;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x975E;&#x53D1;&#x9175; 1 (SNF1)-&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x3002;&#x65B0;&#x578B; S170 &#x548C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 15 (S15) &#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x80BD;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5728;&#x5229;&#x7528;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7279;&#x5F02;&#x6297;&#x4F53;&#x7684; SUS1 &#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; S170 &#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x78F7;&#x9178;&#x7684;&#x5316;&#x3002;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; S170 &#x548C; S15&#xFF0C;&#x800C;&#x9650;&#x4E8E; S15 SNF1 &#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x9499;&#x4F9D;&#x8D56;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x4ECB;&#x5BFC; S170 &#x548C; S15 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x662F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x53CA;&#x7A81;&#x53D8;&#x578B; SUS1 &#x57FA;&#x8D28;&#x4E2D;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5;&#x6FC0;&#x9176;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; S170 &#x4E09;&#x500D;&#x4F4E;&#x4E8E; S15&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x8BE5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; S170 &#x523A;&#x6FC0;&#x4E86;&#x5728; S15 &#x7F51;&#x7AD9;&#x4E8B;&#x5148;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7F16;&#x7801;&#x7531;&#x65E9;&#x671F; nodulin 40 (ENOD40) &#x7684; SUS &#x7ED1;&#x5B9A;&#x80BD;&#x4E0D;&#x60A6;&#x4F53;&#x5916; S170 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; S170 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; SUS &#x9488;&#x5BF9;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x964D;&#x89E3;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x652F;&#x6301;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#xFF0C;SUS &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF1A; (i) &#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#xFF0C;&#x5E76;&#x62E5;&#x6709;&#x8F83;&#x9AD8;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;-S170 (pS170) &#x5316;&#x5B66;&#x8BA1;&#x91CF;&#x5B66; &#xFF1B;(ii) &#x5728;&#x7A7A;&#x95F4;&#x4E0A;&#x91CD;&#x5408;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x5185;&#x53D1;&#x5C55;&#x53F6; &#xFF1B;(iii) co &#x6C89;&#x6DC0;&#x4E0E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5168;&#x957F; pS170 SUS &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x6BD4; S170 SUS &#x4E2D;&#x57F9;&#x517B;&#x53F6;&#x6BB5;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x7A33;&#x5B9A;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;PS170 &#x4FC3;&#x8FDB;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x901A;&#x8FC7; SUS &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x53CA;&#x5176;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x63A7;&#x5236;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F34;&#x968F;&#x6C47;&#x5230;&#x6E90;&#x8F6C;&#x578B;&#x53D1;&#x5C55;&#x7389;&#x7C73;&#x53F6;&#x7247;&#x7684; SUS &#x4E30;&#x5EA6;&#x5177;&#x4F53;&#x548C;&#x663E;&#x8457;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;

&#x8517;&#x7CD6;&#x5408;&#x9176;&#x5728; 170 &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#xFF1A; &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x7684;&#x53D1;&#x751F;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Sequence analysis identified serine 170 (S170) of the maize (Zea mays L.) SUS1 sucrose synthase (SUS) protein as a possible, second phosphorylation site. Maize leaves contained two calcium-dependent protein kinase activities and a calcium-independent kinase activity with characteristics of an sucrose non-fermenting 1 (SNF1)-related protein kinase. Phosphorylation of the novel S170 and the known serine 15 (S15) site by these protein kinases was determined in peptide substrates and detected in SUS1 protein substrates utilizing sequence- and phosphorylation-specific antibodies. We demonstrate phosphorylation of S170 in vitro and in vivo. The calcium-dependent protein kinases phosphorylated both S170 and S15, whereas SNF1-related protein kinase activity was restricted to S15. Calcium-dependent protein-kinase-mediated S170 and S15 phosphorylation kinetics were determined in wild-type and mutant SUS1 substrates. These analyses revealed that kinase specificity for S170 was threefold lower than that for S15, and that phosphorylation of S170 was stimulated by prior phosphorylation at the S15 site. The SUS-binding peptides encoded by early nodulin 40 (ENOD40) specifically antagonized S170 phosphorylation in vitro. A model wherein S170 phosphorylation functions as part of a mechanism targeting SUS for proteasome-mediated degradation is supported by the observations that SUS proteolytic fragments: (i) were detected and possessed relatively high phosphorylated-S170 (pS170) stoichiometry; (ii) were spatially coincident with proteasome activity within developing leaves; and (iii) co-sedimented with proteasome activity. In addition, full-length pS170-SUS protein was less stable than S170-SUS in cultured leaf segments and was stabilized by proteasome inhibition. Post-translational control of SUS protein level through pS170-promoted proteolysis may explain the specific and significant decrease in SUS abundance that accompanies the sink-to-source transition in developing maize leaves.

Phosphorylation of sucrose synthase at serine 170: occurrence and possible role as a signal for proteolysis.

L&#39;analyse des s&eacute;quences identifi&eacute;es s&eacute;rine 170 (S170) du ma&iuml;s (Zea mays L.) Prot&eacute;ines SUS1 saccharose synthase (SUS) une &eacute;ventuelle, deuxi&egrave;me site de phosphorylation. Feuilles de ma&iuml;s contenaient deux activit&eacute;s de kinase de prot&eacute;ine calcium-d&eacute;pendante et une activit&eacute; kinase calcium ind&eacute;pendant ayant des caract&eacute;ristiques d&#39;un saccharose non fermentant 1 (SNF1)-associ&eacute;s de la prot&eacute;ine kinase. La phosphorylation de la S170 roman et le site (S15) 15 de s&eacute;rine connues par ces prot&eacute;ines kinases a &eacute;t&eacute; d&eacute;termin&eacute;e en substrats peptidiques et d&eacute;tect&eacute;e en utilisant des anticorps sp&eacute;cifiques de la s&eacute;quence et de la phosphorylation des substrats de prot&eacute;ine SUS1. Nous d&eacute;montrons la phosphorylation de S170 in vitro et in vivo. Les kinases d&eacute;pendantes du calcium prot&eacute;ine phosphoryl&eacute;e S170 et S15, tandis que l&#39;activit&eacute; de la kinase prot&eacute;ine SNF1 se limitait &agrave; S15. On a d&eacute;termin&eacute; les d&eacute;pendants du calcium induite par la prot&eacute;ine-kinase S170 et S15 phosphorylation cin&eacute;tique dans des substrats SUS1 sauvage et les mutants. Ces analyses ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; cette sp&eacute;cificit&eacute; de la kinase pour S170 &eacute;tait trois fois plus faible que celle de S15, et que la phosphorylation de S170 est stimul&eacute;e par la phosphorylation pr&eacute;alable sur le site de S15. Les peptides de SUS-liaison cod&eacute;es par noduline d&eacute;but 40 (ENOD40) sp&eacute;cifiquement antagonisent S170 phosphorylation in vitro. Un mod&egrave;le dans lequel la phosphorylation S170 fonctionne comme partie d&#39;un m&eacute;canisme de ciblage SUS pour d&eacute;gradation induite par le prot&eacute;asome est soutenue par les observations que fragments prot&eacute;olytiques SUS: (i) ont &eacute;t&eacute; d&eacute;tect&eacute;s et ont poss&eacute;d&eacute; stoechiom&eacute;trie S170 phosphoryl&eacute;e (pS170) relativement &eacute;lev&eacute; ; (ii) ont &eacute;t&eacute; dans l&#39;espace qui co&iuml;ncide avec l&#39;activit&eacute; du prot&eacute;asome dans le d&eacute;veloppement des feuilles ; et (iii) co-s&eacute;dimentent avec l&#39;activit&eacute; du prot&eacute;asome. En outre, prot&eacute;ine de pleine longueur pS170-SUS est moins stable que S170-SUS en segments de feuilles de la culture et a &eacute;t&eacute; stabilis&eacute;e par l&#39;inhibition du prot&eacute;asome. Poteau-de translation contr&ocirc;le des teneurs en prot&eacute;ines SUS par prot&eacute;olyse promues par pS170 peut expliquer la diminution sp&eacute;cifique et significative de l&#39;abondance SUS qui accompagne la transition de l&#39;&eacute;vier &agrave; la source dans l&#39;&eacute;laboration de feuilles de ma&iuml;s.

La phosphorylation de la sucrose synth&eacute;tase &agrave; s&eacute;rine 170 : occurrence et possible tant qu&#39;un signal pour la prot&eacute;olyse.

Die Phosphorylierung von Saccharose-Synthase an Serin 170: Auftreten und die m&#xF6;gliche Rolle als Signal f&#xFC;r die Proteolyse.

Analisi di sequenza identificate serina 170 (S170) del mais (Zea mays L.) Proteina di SUS1 saccarosio sintasi (SUS) come un possibile, secondo sito di fosforilazione. Foglie di mais contenevano due attivit&agrave; della chinasi di proteina calcio-dipendente e un&#39;attivit&agrave; di chinasi calcio-indipendenti con le caratteristiche di un saccarosio non fermentazione 1 (SNF1)-related protein chinasi. Fosforilazione di S170 il romanzo e il noto serina 15 (S15) sito di queste chinasi di proteina &egrave; stata determinata in substrati peptidici e rilevata in substrati di proteine SUS1 utilizzando anticorpi specifici per sequenza e fosforilazione. Dimostriamo la fosforilazione di S170 in vitro e in vivo. La chinasi calcio-dipendente fosforilato S170 sia S15, considerando che l&#39;attivit&agrave; della chinasi SNF1-related protein &egrave; stato limitato a S15. Calcio-dipendente della proteina-chinasi-mediata S170 e S15 fosforilazione cinetica sono stati determinati in substrati SUS1 wild-type e mutanti. Queste analisi hanno rivelato che specificit&agrave; chinasi per S170 era triplice inferiore rispetto a quella per S15, e che la fosforilazione di S170 fu stimolata dalla fosforilazione preventiva presso il sito S15. I peptidi di SUS-associazione codificati da nodulin primi 40 (ENOD40) specificamente antagonizzato S170 fosforilazione in vitro. Un modello in cui la fosforilazione S170 funzioni come parte di un meccanismo di SUS di targeting per degradazione mediata dal proteasoma &egrave; supportata dalle osservazioni che frammenti proteolitici SUS: (i) sono stati rilevati e posseduto stechiometria relativamente alta fosforilato-S170 (pS170); (ii) erano spazialmente coincidente con l&#39;attivit&agrave; del proteasoma entro lo sviluppo di foglie; e (iii) co-sedimentato con attivit&agrave; del proteasoma. Inoltre, proteine pS170 full-length-SUS era meno stabile rispetto a S170-SUS in segmenti di foglia in coltura e fu stabilizzata da inibizione del proteasoma. Alberino-di traduzione controllo del livello di proteina SUS tramite proteolisi promosso pS170 pu&ograve; spiegare la diminuzione di specifica e significativa in abbondanza SUS che accompagna la transizione sink-source nello sviluppo di foglie di mais.

La fosforilazione di saccarosio sintasi a serina 170: occorrenza e possibile ruolo come un segnale per proteolisi.

&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5206;&#x6790;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 170 (S170) &#x30C8;&#x30A6;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B3;&#x30B7; (Zea mays l.) &#x306E;&#x8B58;&#x5225;SUS1 &#x30B9;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; (SUS) &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3001;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9650;&#x308A;&#x3001;&#x7B2C; 2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3002;&#x30C8;&#x30A6;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B3;&#x30B7;&#x306E;&#x8449;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x308B; 2 &#x3064;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x975E;&#x767A;&#x9175; 1 (SNF1&#xFF09;-&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3002;&#x5C0F;&#x8AAC; S170 &#x3057;&#x3001;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 15 &#xFF08;S15&#xFF09; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C3;&#x30C9;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;SUS1 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x57FA;&#x677F;&#x4E2D;&#x306B;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; S170 in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SNF1 &#x95A2;&#x9023;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F; S15 &#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; S170 &#x3068; S15&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; S170 &#x3068; S15 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x52D5;&#x614B;&#x306F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3068;&#x5909;&#x7570;&#x578B;&#x306E; SUS1 &#x57FA;&#x677F;&#x3067;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x305D;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7279;&#x7570; S170 S15 &#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082; 3 &#x500D;&#x4F4E;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; S170 S15 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x4E8B;&#x524D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x521D;&#x671F;&#x306E; nodulin 40 &#xFF08;ENOD40) &#x3092;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; SUS &#x7D50;&#x5408;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; S170 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; in vitro &#x304B;&#x3063;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x524D;&#x8A18; S170 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x89B3;&#x5BDF; SUS &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x304C;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9650;&#x308A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x305D;&#x306E; SUS &#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x89E3;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;: (i) &#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316; S170 (pS170) &#x5316;&#x5B66;&#x91CF;&#x8AD6;; &#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x4FDD;&#x6709;(ii) &#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8449;; &#x958B;&#x767A;&#x5185;&#x3067;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x4E00;&#x81F4;(&#x2172;) co &#x6C88;&#x6BBF;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; pS170 SUS &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; S170-SUS &#x306E;&#x8449;&#x7247;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3; pS170 &#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066; SUS &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x30C8;&#x30A6;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B3;&#x30B7;&#x306E;&#x8449;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3067;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AF; &#x30FB; &#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306B;&#x4F34;&#x3046; SUS &#x8C4A;&#x5BCC;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x3068;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 170 &#x3067;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;: &#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3068;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3002;

&#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 170 (S170) &#xC625;&#xC218;&#xC218; (Zea &#xBA54;&#xC774; &#xC2A4; L.)&#xC758; SUS1 &#xC790;&#xB2F9; synthase (SUS) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;. &#xC625;&#xC218;&#xC218; &#xC78E; &#xB450; &#xCE7C;&#xC298; &#xC758;&#xC874;&#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xC790;&#xB2F9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xBE44; &#xBC1C;&#xD6A8; 1 (SNF1)-&#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;. &#xC18C;&#xC124; S170 &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 15 (S15) &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC774;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; SUS1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; S170 &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298; &#xC758;&#xC874;&#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; kinases phosphorylated s170&#xC640; S15, &#xBC18;&#xBA74; SNF1 &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; s 15&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCE7C;&#xC298; &#xC758;&#xC874;&#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; s170&#xC640; S15 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC18D;&#xB3C4; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xBC0F; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; SUS1 &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB4E4;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; S170 S15, &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; &#xC0BC; &#xBC30;&#xB294; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; s170&#xC758; &#xADF8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; S15 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC804; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xD558; &#xB2C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788; &#xCD08;&#xAE30; nodulin 40 (ENOD40)&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; SUS &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xBC18;&#xAC10; S170 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; S170 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xAE30;&#xB2A5; SUS &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC911;&#xC7AC; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC9C0;&#xC815; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xAD00;&#xCE21;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xBAA8;&#xB378; SUS &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC870;&#xAC01;&#xC744; &#xADF8;: (i) &#xD588;&#xB2E4; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC720; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB192;&#xC740; phosphorylated-S170 (pS170) stoichiometry; (ii)&#xC740; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xC77C;&#xCE58; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC78E;; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; (iii) &#xACF5;&#xB3D9; sedimented&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xD65C;&#xB3D9;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; pS170-SUS &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; S170-SUS&#xC5D0; &#xB9AC;&#xD504; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xAD50;&#xC591; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC548;&#xC815;&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xC548;&#xC815; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. PS170 &#xD504;&#xB85C; &#xBAA8;&#xC158; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; SUS &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB2E2; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC625;&#xC218;&#xC218; &#xC78E;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC2F1;&#xD06C; &#xC18C;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; SUS &#xD48D;&#xBD80;&#xC758; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 170&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xB2F9; synthase&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;: &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBC0F; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;.

An&aacute;lisis de la secuencia identificado serina 170 (S170) del ma&iacute;z (Zea mays L.) SUS1 la prote&iacute;na de sacarosa sintasa (SUS) como un posible, segundo sitio de fosforilaci&oacute;n. Hojas de ma&iacute;z contuvieron dos actividades quinasa de prote&iacute;nas dependiente de calcio y una actividad de la quinasa calcio-independiente con caracter&iacute;sticas de una sacarosa 1 no fermentadores (SNF1)-relacionados con prote&iacute;na quinasa. Fosforilaci&oacute;n de la novela S170 y sitio (S15) 15 por estas prote&iacute;nas quinasas serina conocido fue determinada en sustratos de p&eacute;ptido y detectada en sustratos de prote&iacute;na SUS1 utilizando anticuerpos espec&iacute;ficos de la secuencia y de la fosforilaci&oacute;n. Demostramos la fosforilaci&oacute;n de S170 in vitro e in vivo. Las quinasas de prote&iacute;nas dependiente de calcio fosforila S170 tanto S15, mientras que la actividad de la cinasa de prote&iacute;na relacionada con la SNF1 se limit&oacute; a S15. Dependiente de calcio mediada por la prote&iacute;na-cinasa S170 S15 fosforilaci&oacute;n cin&eacute;tica y determinaron en sustratos de SUS1 de tipo salvaje y mutantes. Estos an&aacute;lisis revelaron esa especificidad quinasa S170 fue tres veces menor que para S15, y que la fosforilaci&oacute;n de S170 fue estimulada por fosforilaci&oacute;n previa en el sitio de S15. Los p&eacute;ptidos de SUS enlace codificados por principio nodC 40 (ENOD40) espec&iacute;ficamente contrari&oacute; S170 fosforilaci&oacute;n in vitro. Un modelo en donde S170 fosforilaci&oacute;n funciona como parte de un mecanismo dirigido a SUS degradaci&oacute;n mediada por proteasoma es apoyado por las observaciones que fragmentos SUS proteol&iacute;ticas: (i) fueron detectados y pose&iacute;do estequiometr&iacute;a de relativamente alta fosforila-S170 (pS170); (ii) fueron espacialmente coincidente con la actividad del proteasoma en desarrollo de hojas; y (iii) co-sedimentados con actividad del proteasoma. Adem&aacute;s, la prote&iacute;na integral pS170-SUS fue menos estable que S170-SUS en cultivados segmentos de hoja y se estabiliz&oacute; por la inhibici&oacute;n del proteasoma. Poste-de translaci&oacute;n control de nivel de la prote&iacute;na SUS a trav&eacute;s de prote&oacute;lisis promovida por pS170 puede explicar la disminuci&oacute;n significativa y espec&iacute;fica en la abundancia SUS que acompa&ntilde;a a la transici&oacute;n de fregadero-fuente en el desarrollo de hojas de ma&iacute;z.

Fosforilaci&oacute;n de la sacarosa sintasa en serina 170: ocurrencia y posible papel como una se&ntilde;al para la prote&oacute;lisis.

&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x4F7F;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x6539;&#x9020;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8F66;&#x53A2;&#x4E0E;&#x5149;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5982;&#x91C7;&#x7528;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x5149;&#x6F02;&#x767D;&#x540E;&#x7684;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x6539;&#x9020;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF1A; T &#x7BA1;&#x5F0F;&#x819C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x9010;&#x6E10;&#x8FF7;&#x5931;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x79F0;&#x4E3A;&quot;&#x5E8F;&#x8D2F;&#x6390;&#x6389;&quot;&#xFF0C;&#x5728;&#x5411;&#x5916;&#x65B9;&#x5411;&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x7C7B;&#xFF0C;&#x5F88;&#x5C0F; &#xFF08;0.9 microm &#x957F;&#x5EA6;&#xFF09;&#x3001; &#x4E2D;&#x578B;&#x957F; (1.8 microm&#xFF09; &#x6216;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6; &#xFF08;3.6 microm&#xFF09; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x968F;&#x7740;&#x57F9;&#x517B;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x9010;&#x6E10;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x6F02;&#x767D;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x900F;&#x9732;&#x663E;&#x7136;&#x5206;&#x79BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5CA9;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x7BA1;&#x901A;&#x8FC7;&quot;&#x96A7;&#x9053;&quot;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x96A7;&#x9053;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x968F;&#x7740;&#x57F9;&#x517B;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x4EA4;&#x53C9;&#x6761;&#x7EB9;&#x5B89;&#x6392;&#x5185;&#x8D28;/&#x808C;&#x6D46;&#x7F51;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x4E2D;&#x9010;&#x6E10;&#x4E27;&#x5931;&#x4E86;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6765;&#x3002;&#x5927;&#x91CF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x7ECF;&#x5206;&#x6790;&#x706B;&#x82B1;&#x7684;&#x89C6;&#x9891;&#x7387;&#x5171;&#x7126; 2D &#x626B;&#x63CF;&#x63ED;&#x793A;&#x91CD;&#x5927;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5C0F;&#x53D8;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E; SR-Ca(2+) &#x5185;&#x5BB9;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F11;&#x606F;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C0F;&#x5B66; SR-Ca(2+) &#x91CA;&#x653E;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6210;&#x4EBA;&#x7684;&#x5185;&#x5FC3;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x660E;&#x786E;&#x754C;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x6784;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x957F;&#x671F;&#x57F9;&#x517B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; Ca2 + &#x5904;&#x7406;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x3002;

It is well known that for cardiomyocytes, isolation and culturing induce largely unknown remodelling processes. We analysed changes in the structure of cell compartments with optical techniques such as confocal microscopy and fluorescence redistribution after photobleaching employing adenoviral-mediated transduction of targeted fluorescent proteins and small molecule dyes. We identified characteristic remodelling processes: the T-tubular membrane system was gradually lost by a process referred to as "sequential pinching off", in an outward direction. Mitochondria fell in one of three classes, very small (0.9 microm length), medium long (1.8 microm) or extended shape (3.6 microm) organelles. Over the culturing time mitochondria gradually fused. Bleaching of individual mitochondria revealed association between apparently separated mitochondria by "tunnelling" via sub-resolution organelle-tubes. This tunnelling process was increasing over the culturing time. A gradual loss of the cross-striation arrangement in the endoplasmic/sarcoplasmic reticulum was visualised. Analysis of large populations of Ca(2+) sparks by video-rate confocal 2D-scanning revealed significant albeit small changes of these elementary SR-Ca(2+) release events in adult cardiomyocytes that could be related to changes in SR-Ca(2+) content rather than resting Ca(2+) concentration. In conclusion, primary isolated cardiomyocytes from adult hearts undergo a well-defined, but reproducible subcellular remodelling during optimised long term culture.

Remodelling of Ca2+ handling organelles in adult rat ventricular myocytes during long term culture.

Il est bien connu que, pour les cardiomyocytes, l&#x26;#39;isolement et la culture induire des processus de remodelage en grande partie inconnus. Nous avons analys&#xE9; les changements dans la structure des compartiments cellulaires avec des techniques optiques telles que la microscopie confocale et la redistribution de fluorescence apr&#xE8;s photoblanchiment employant ad&#xE9;noviral-la transduction des prot&#xE9;ines fluorescentes cibl&#xE9;es et des colorants de petites mol&#xE9;cules. Nous avons identifi&#xE9; caract&#xE9;ristiques des processus de remodelage: le syst&#xE8;me de membrane T-tubulaire a &#xE9;t&#xE9; peu &#xE0; peu perdu par un processus appel&#xE9; &#x26;quot;pincement s&#xE9;quentielle off&#x26;quot;, dans une direction vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur. Les mitochondries est tomb&#xE9; dans l&#x26;#39;une des trois classes, tr&#xE8;s faible (0,9 microm&#xE8;tre de longueur), de longueur moyenne (1,8 microm&#xE8;tre) ou de la forme &#xE9;tendue (3,6 microm&#xE8;tre) organites. Au cours de la dur&#xE9;e de la culture mitochondries progressivement fusionn&#xE9;. Blanchiment de l&#x26;#39;individu association r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; mitochondries entre apparemment s&#xE9;par&#xE9;s mitochondries par &#x26;quot;tunneling&#x26;quot; via des sous-r&#xE9;solution des organites des tubes. Ce processus a &#xE9;t&#xE9; croissante tunnel sur le temps de culture. Une perte progressive de l&#x26;#39;accord inter-stries dans le r&#xE9;ticulum endoplasmique / sarcoplasmique a &#xE9;t&#xE9; visualis&#xE9;e. L&#x26;#39;analyse de grandes populations de Ca (2 +) des &#xE9;tincelles par vid&#xE9;o-taux confocale &#xE0; balayage a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; 2D-significatifs, mais de petits changements de ces &#xE9;l&#xE9;mentaire SR-Ca (2 +) des &#xE9;v&#xE9;nements de rel&#xE2;chement dans les cardiomyocytes adultes qui pourraient &#xEA;tre li&#xE9;s &#xE0; des changements dans Sr-Ca ( 2 + contenu) plut&#xF4;t que de se reposer Ca (2 +) de concentration. En conclusion, primaires cardiomyocytes isol&#xE9;s de coeurs adultes subissent un remodelage bien d&#xE9;fini, mais reproductible au cours subcellulaire optimis&#xE9; culture &#xE0; long terme.

Transformations de Ca2 + Manipulation Organelles dans myocytes ventriculaires de rat au cours de la culture &#xE0; long terme

Es ist bekannt, dass f&uuml;r Cardiomyocytes, Isolierung und Kultivierung weitgehend unbekannte Filialumbauten Prozesse ausl&ouml;sen. Analysieren wir Ver&auml;nderungen in der Struktur der Zelle Abteile mit optischen Techniken wie konfokale Mikroskopie und Fluoreszenz Umverteilung nach Photobleaching adenoviral-vermittelte Transduktion gezielte fluoreszierende Proteine und niedermolekularer Farbstoffe besch&auml;ftigt. Wir haben charakteristische Filialumbauten Prozesse identifiziert: die T-Membran R&ouml;hrensystem wurde nach und nach verloren, durch einen Prozess, genannt &quot;sequenzielle Kneifen Weg&quot;, nach au&szlig;en. Mitochondrien verliebte sich in eine der drei Klassen, sehr klein (0,9 Microm L&auml;nge), mittellang (1,8 Microm) oder erweiterter Form (3,6 Microm) Organellen. &Uuml;ber die Kultivierung Zeit Mitochondrien allm&auml;hlich verschmolzen. Bleichen von einzelnen Mitochondrien offenbart Assoziation zwischen scheinbar getrennte Mitochondrien durch &quot;Tunneling&quot; &uuml;ber Sub-resolution Organell-Leitungen. Tunnelling dabei war die culturing Zeit erh&ouml;hen. Ein allm&auml;hlicher Verlust der Kreuz-Rasterung Anordnung in den sarcoplasmic/endoplasmic Reticulum visualisiert wurde. Analyse von gro&szlig;en Populationen von Ca(2+) Funken von Video-konfokale 2D-Scan offenbarte erhebliche, wenn auch geringen Tarif&auml;nderungen dieser elementaren SR-Ca(2+) Freigabe-Ereignisse in den Erwachsenen Cardiomyocytes, die auf &Auml;nderungen der SR-Ca(2+) Inhalten anstatt Ruhe Ca(2+) Konzentration bezogen werden konnte. Abschlie&szlig;end werden prim&auml;re isolierte Cardiomyocytes von Erwachsenen Herzen eine klar definierte, aber reproduzierbare subzellulare Umbau w&auml;hrend optimierte langfristige Kultur unterzogen.

Umbau von Ca2 + Handhabung Organellen in den Erwachsenen Ratte ventrikul&auml;re Myocytes w&auml;hrend der langfristigen Kultur.

&Egrave; noto che per cardiomyocytes, isolamento e coltura indurre processi di rimodellamento in gran parte sconosciuti. Abbiamo analizzato i cambiamenti nella struttura dei compartimenti cellulari con tecniche ottiche come la ridistribuzione di fluorescenza e microscopia confocale dopo photobleaching impiegando trasduzione adenovirali-mediata delle proteine fluorescenti mirate e piccole molecole coloranti. Abbiamo identificato i processi di rimodellamento caratteristici: il sistema T-tubolare membrana gradualmente persa da un processo definito &quot;sequenziale intrappolandosi fuori&quot;, in una direzione verso l&#39;esterno. I mitocondri sono caduto in una delle tre classi, molto piccole (lunghezza 0,9 microm), medio lungo (1,8 microm) o organelli di forma estesa (3,6 microm). Sopra la coltura tempo mitocondri gradualmente fuse. Sbiancamento di singoli mitocondri rivelato associazione tra mitocondri apparentemente separati da &quot;tunnel&quot; via sub-resolution organello-tubi. Questo processo tunnel stava aumentando il tempo di coltura. Una perdita graduale della disposizione striatura trasversale nel reticolo sarcoplasmatico/endoplasmic &egrave; stata visualizzata. Analisi di grandi popolazioni di Ca(2+) scintille da video-tasso confocali scansione 2D rivelati seppur piccoli cambiamenti significativi di questi eventi di rilascio SR-Ca(2+) elementari in cardiomiociti adulti che potrebbero essere correlati ai cambiamenti di contenuto piuttosto che di riposo la concentrazione di Ca(2+) SR-Ca(2+). In conclusione, primarie cardiomiociti isolati dai cuori adulti subiscono sottocellulari ben definiti, ma riproducibile rimodellamento durante la cultura ottimizzata a lungo termine.

Rimodellamento di Ca2 + gestione degli organelli nel ratto adulto miociti ventricolari durante la cultura di lungo termine.

&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x96E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x57F9;&#x990A;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x7D5E;&#x3063;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8272;&#x7D20;&#x306E;&#x63A1;&#x7528;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5A92;&#x4ECB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x5149;&#x9000;&#x8272;&#x5F8C;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x914D;&#x5E03;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30BB;&#x30EB;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x6027;&#x6539;&#x9020;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;T-&#x7BA1;&#x72B6;&#x819C;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x5916;&#x5074;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x3001; &#x26;quot;&#x9806;&#x6B21;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x30D5;&#x26;quot;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x3001;&#xFF08;0.9&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#xFF09;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x9577;&#x3044;&#x57F9;&#x5730;&#xFF08;1.8&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x62E1;&#x5F35;&#x5F62;&#xFF08;3.6&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#xFF09;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3001;3&#x3064;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x57F9;&#x990A;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x7D4C;&#x904E;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x304C;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3001;&#x30B5;&#x30D6;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; &#x26;quot;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x26;quot;&#x3067;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x5354;&#x4F1A;&#x306E;&#x6F02;&#x767D;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C8;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xB7;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x7D4C;&#x904E;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;/&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x914D;&#x7F6E;&#x304C;&#x5F90;&#x3005;&#x306B;&#x640D;&#x5931;&#x304C;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; SR-Ca&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x5B66;&#x6821;SR-Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;Ca&#x306E;&#x5927;&#x96C6;&#x56E3;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;2&#x6B21;&#x5143;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x706B;&#x82B1;&#xFF08; 2 +&#xFF09;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x4F11;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5185;&#x5BB9;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x5FC3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9577;&#x671F;&#x57F9;&#x990A;&#x4E2D;&#x306B;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CA2&#x306E;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;+&#x9577;&#x671F;&#x57F9;&#x990A;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x6210;&#x4F53;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x6271;&#x3044;

&#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB294; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xBC30;&#xC591; &#xC720;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xC7AC;&#xBC30;&#xD3EC; photobleaching &#xD0C0;&#xAC9F; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; adenoviral &#xC911;&#xC7AC; &#xCC44;&#xC6A9; &#xD6C4; &#xAC19;&#xC740; &#xAD11;&#xD559; &#xAE30;&#xC220;&#xB85C; &#xC140; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;. &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC2DD;&#xBCC4;: T &#xAD00; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &quot;&#xC21C;&#xCC28; &#xACE4;&#xB780; &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC838;&quot;, &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC783; &#xC5C8; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; 3 &#xC544;&#xC8FC; &#xC791;&#xC740; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; (0.9 microm &#xAE38;&#xC774;), &#xBCF4;&#xD1B5; &#xAE34; (1.8 microm) &#xB610;&#xB294; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; &#xBAA8;&#xC591; (3.6 microm) organelles &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC5D0; &#xBE60;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xBC30;&#xC591;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xB97C; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC735;&#xD569;. &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; &#xD45C;&#xBC31; sub-resolution &#xD2B8;&#xB294; &#xD29C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &quot;&#xD130;&#xB110;&#xB9C1;&quot; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; &#xAD6C;&#xBD84; &#xB41C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC0AC;&#xC774; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD130;&#xB110;&#xB9C1; &#xACFC;&#xC815; &#xC790;&#xB780; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. Endoplasmic sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC2ED;&#xC790;&#xAC00;-&#xC904;&#xBB34;&#xB2AC; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC758; &#xC810;&#xC9C4;&#xC801; &#xC0C1;&#xC2E4; visualised &#xD588;&#xB2E4;. Ca(2+)&#xC758; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xBE44;&#xB514;&#xC624; &#xC18D;&#xB3C4; confocal 2D &#xAC80;&#xC0AC; &#xACC4;&#xC2DC; &#xB098; &#xB9C8; &#xC791;&#xC740; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; SR-Ca(2+) Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xD734;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB300;&#xC2E0; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; &#xBCC0;&#xACBD; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC131;&#xC778; cardiomyocytes&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD08;&#xB4F1; SR-Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xBD88;&#xAF43;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC131;&#xC778; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xACA9;&#xB9AC; cardiomyocytes&#xB294; &#xC798; &#xC815;&#xC758; &#xB41C;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC7AC;&#xD604; subcellular &#xAC1C;&#xC7A5; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBB38;&#xD654; &#xC911; &#xBC1B; &#xB2E4;.

&#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xBB38;&#xD654; &#xC911; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 + &#xCC98;&#xB9AC; organelles&#xC758; &#xAC1C;&#xC7A5;.

Es bien sabido que para cardiomiocitos, el aislamiento y cultivo de inducir procesos de remodelaci&#xF3;n en gran parte desconocidos. Se analizaron los cambios en la estructura de los compartimentos celulares con t&#xE9;cnicas &#xF3;pticas tales como la microscop&#xED;a confocal y redistribuci&#xF3;n de fluorescencia despu&#xE9;s de photobleaching empleando adenov&#xED;rico mediada por transducci&#xF3;n de prote&#xED;nas fluorescentes espec&#xED;ficas y tintes de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as. Se identificaron caracter&#xED;sticas de los procesos de remodelaci&#xF3;n: el sistema de membrana T-tubular se fue perdiendo por un proceso conocido como &#x26;quot;pellizcos secuencial off&#x26;quot;, en una direcci&#xF3;n externa. Las mitocondrias cay&#xF3; en una de las tres clases, muy peque&#xF1;o (0,9 micras de longitud), de largo mediano (1,8 micras) o de forma prolongada (3,6 micras) org&#xE1;nulos. Durante el tiempo de cultivo mitocondrias gradualmente fusionados. El blanqueamiento de los individuos de asociaci&#xF3;n entre la mitocondria revel&#xF3; mitocondrias aparentemente separados por el &#x26;quot;t&#xFA;nel&#x26;quot; a trav&#xE9;s de sub-resoluci&#xF3;n org&#xE1;nulos tubos. Este proceso fue aumentando con el t&#xFA;nel del tiempo de cultivo. Una p&#xE9;rdida gradual de la disposici&#xF3;n transversal estr&#xED;as en el ret&#xED;culo endoplasm&#xE1;tico / sarcopl&#xE1;smico se visualiz&#xF3;. An&#xE1;lisis de las grandes poblaciones de Ca (2 +) por las chispas de v&#xED;deo de tipo confocal de barrido 2D revel&#xF3; importantes aunque peque&#xF1;os cambios de estos elementales SR-Ca (2 +) eventos de liberaci&#xF3;n en cardiomiocitos adultos que podr&#xED;an estar relacionados a cambios en la SR-Ca ( 2 + contenidos) en lugar de descansar Ca (2 +) de concentraci&#xF3;n. En conclusi&#xF3;n, primaria cardiomiocitos aislados de corazones adultos someterse a una remodelaci&#xF3;n subcelular bien definido, pero reproducible en optimizar la cultura a largo plazo.

Remodelaci&#xF3;n de Ca2 + Manejo de org&#xE1;nulos en adultos miocitos ventriculares de rata Durante cultivo a largo plazo

QT &#x95F4;&#x671F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x90FD;&#x662F;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x5B89;&#x5168;&#x5BF9;&#x6240;&#x6709;&#x65B0;&#x7684;&#x836F;&#x54C1;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x52A8;&#x7269;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6216;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#x53EA;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x7535;&#x5BFC;&#x7387;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8868;&#x793A; hERG &#x901A;&#x9053;&#x5141;&#x8BB8;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x3002;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0D;&#x80FD;&#x7531;&#x81EA;&#x52A8;&#x7684;&#x819C;&#x7247;&#x94B3;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x5149;&#x7B5B;&#x67E5;&#x7684;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8BA1;&#x91CF;&#x6D4B;&#x91CF;&#x62A5;&#x544A;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5149;&#x5B66;&#x7535;&#x538B;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x90FD;&#x5F71;&#x54CD;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5F55;&#x5236;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5141;&#x8BB8;&#x5149;&#x5B66; QT &#x95F4;&#x671F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x7684;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x3002;

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7684; QT &#x5C4F;&#x5E55;&#x5149;&#x5B66;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x7B5B;&#x67E5;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

QT-interval screens are increasingly important for cardiac safety on all new medications. So far, investigations rely on animal experiments or cell-based screens solely probing for conductance alterations in heterologously expressed hERG-channels in cell lines allowing for a high degree of automation. Adult cardiomyocytes can not be handled by automated patch-clamp setups. Therefore optical screening of primary isolated ventricular myocytes is regarded as an alternative. Several optical voltage sensors have been reported for ratiometric measurements, but they all influenced the naÃ¯ve action potential. The aim of the present study was to explore the recording conditions and define settings that allow optical QT-interval screens.

Optical action potential screening on adult ventricular myocytes as an alternative QT-screen.

Intervalle QT &#xE9;crans sont de plus en plus important pour la s&#xE9;curit&#xE9; cardiaque sur tous les nouveaux m&#xE9;dicaments. Jusqu&#x26;#39;&#xE0; pr&#xE9;sent, les enqu&#xEA;tes s&#x26;#39;appuient sur l&#x26;#39;exp&#xE9;rimentation animale ou &#xE0; base de cellules &#xE9;crans uniquement de sondage pour les modifications de conductance dans h&#xE9;t&#xE9;rologue exprim&#xE9;es hERG-canaux dans des lign&#xE9;es cellulaires permettant un degr&#xE9; &#xE9;lev&#xE9; d&#x26;#39;automatisation. Cardiomyocytes adultes ne peuvent pas &#xEA;tre trait&#xE9;es par patch-clamp automatis&#xE9;s configurations. Par cons&#xE9;quent le d&#xE9;pistage optique de myocytes ventriculaires isol&#xE9;s primaires est consid&#xE9;r&#xE9;e comme une alternative. Plusieurs capteurs optiques de tension ont &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9;s pour les mesures ratiom&#xE9;triques, mais ils ont tous influenc&#xE9; le potentiel d&#x26;#39;action na&#xEF;ve. Le but de la pr&#xE9;sente &#xE9;tude &#xE9;tait d&#x26;#39;explorer les conditions d&#x26;#39;enregistrement et de d&#xE9;finir les param&#xE8;tres qui permettent optiques intervalle QT &#xE9;crans.

Action optique de d&#xE9;pistage potentiel sur les myocytes ventriculaires adultes comme alternative QT &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;cran

QT-Intervall-Bildschirme werden immer wichtiger f&uuml;r kardiale Sicherheit auf alle neuen Medikamente. Bisher Vertrauen Untersuchungen auf Tierversuche oder Zell-basierte Bildschirme hERG-Kan&auml;le in Zelllinien, die ein hohes Ma&szlig; an Automatisierung erm&ouml;glicht ausschlie&szlig;lich Sondierung f&uuml;r Leitwert &Auml;nderungen in heterologously ausgedr&uuml;ckt werden. Erwachsene Cardiomyocytes k&ouml;nnen nicht durch automatisierte Patch-Clamp-Konfigurationen behandelt werden. Daher gilt die optische &Uuml;berpr&uuml;fung der prim&auml;ren isolierten ventrikul&auml;ren Myozyten als Alternative. Mehrere optische Spannungssensoren ratiometrisch Messungen berichtet worden, aber sie alle beeinflusst die naiv-Aktionspotential. Ziel der vorliegenden Studie war zu erforschen die Aufnahmebedingungen und Einstellungen, mit denen optische QT-Intervall-Bildschirme zu definieren.

Optische Aktionspotential Screening auf Erwachsene ventrikul&auml;ren Myozyten als eine alternative QT-Bildschirm.

Intervallo QT schermi sono sempre pi&ugrave; importanti per la sicurezza cardiaca su tutti i nuovi farmaci. Finora, le indagini si basano su esperimenti sugli animali o basati su celle schermate unicamente di tastatura per alterazioni della conduttanza in heterologously espresso hERG-canali in linee cellulari consentendo un elevato grado di automazione. Cardiomiociti adulti non possono essere gestito da Setup automatizzato patch-clamp. Pertanto ottico screening dei miociti ventricolari isolate primario &egrave; considerato come un&#39;alternativa. Diversi sensori ottici di tensione sono stati segnalati per le misurazioni raziometrici, ma tutti hanno influenzato il potenziale di azione ingenua. Lo scopo del presente studio era di esplorare le condizioni di registrazione e definire le impostazioni che permettono di schermi ottici di intervallo QT.

Potenziale d&#39;azione ottica dello screening su miociti ventricolari adulti come un&#39;alternativo QT-schermo.

QT&#x9593;&#x9694;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x85AC;&#x3067;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x91CD;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x306B;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x81EA;&#x52D5;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7570;&#x7A2E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;hERG&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51E6;&#x7406;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5149;&#x96FB;&#x5727;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC; - &#x5168;&#x66F2;&#x7121;&#x6599;&#x8A66;&#x8074;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x8A18;&#x9332;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x63A2;&#x7D22;&#x3057;&#x3001;&#x5149;QT&#x9593;&#x9694;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

QT-&#x753B;&#x9762;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x306E;&#x5149;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;

QT &#xAC04;&#xACA9; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC740; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC57D;&#xD488;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC548;&#xC804;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC810;&#xC810; &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC870;&#xC0AC; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xD654;&#xBA74; hERG-&#xCC44;&#xB110;, &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; heterologously&#xC5D0; &#xC804;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C; &#xBE59;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874;. &#xC131;&#xC778; cardiomyocytes &#xC790;&#xB3D9;&#xB41C; &#xD328;&#xCE58; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC124;&#xCE58; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xAE30;&#xBCF8; &#xC808;&#xC5F0;&#xB41C;&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xB300; &#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC728; &#xD658;&#xC0B0; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAD11; &#xC804;&#xC555; &#xC13C;&#xC11C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBAA8;&#xB450; na&iuml; ve &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xB179;&#xC74C; &#xC870;&#xAC74; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xAD11;&#xD559; QT &#xAC04;&#xACA9; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xC815;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xAD11;&#xD559; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704; &#xB300;&#xCCB4; QT &#xD654;&#xBA74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC131;&#xC778; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC0AC;.

Intervalo QT-pantallas son cada vez m&#xE1;s importante para la seguridad card&#xED;aca de todos los medicamentos nuevos. Hasta ahora, las investigaciones se basan en experimentos con animales o pantallas a base de c&#xE9;lulas exclusivamente de sondeo para las alteraciones en la conductancia heter&#xF3;loga expresada hERG canales en l&#xED;neas celulares que permiten un alto grado de automatizaci&#xF3;n. Cardiomiocitos adultos no pueden ser manejados por automatizadas configuraciones de patch-clamp. Por lo tanto detecci&#xF3;n &#xF3;ptica de primarias miocitos ventriculares aislados se considera como una alternativa. Varios sensores &#xF3;pticos de tensi&#xF3;n se ha informado de las medidas ratiometric, pero todos ellos influyeron en el potencial de acci&#xF3;n ingenua. El objetivo del presente estudio fue explorar las condiciones de grabaci&#xF3;n y definir los ajustes que permiten a los &#xF3;pticos-pantallas del intervalo QT.

Acci&#xF3;n &#xF3;ptico de detecci&#xF3;n potencial en los miocitos ventriculares de adultos como alternativa de QT de pantalla

&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; cytochalasin D (CytoD) &#x636E;&#x62A5;&#x5145;&#x5F53;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5E72;&#x6270;&#x548C;&#x673A;&#x68B0;&#x89E3;&#x5076;&#x8054;&#x5242;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x7126;&#x548C;&#x8D85;&#x5206;&#x8FA8;&#x5F97;&#x94A2;&#x955C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; CytoD &#x4FDD;&#x7559;&#x6210;&#x5E74;&#x5927;&#x9F20;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x4E94;&#x767E;&#x5E74; nanomolar CytoD &#x662F;&#x6700;&#x4F73;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FC7;&#x7A0B; 3 &#x5929;&#x6587;&#x5316;&#x671F;&#x548C;&#x517B;&#x62A4;&#x7B49;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x7279;&#x70B9;&#x548C;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5355;&#x4E2A;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6536;&#x7F29;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; T &#x7BA1;&#x72B6;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; CytoD &#x52A0;&#x5165;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x786E;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210;&#x56FA;&#x4F53;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6A21;&#x578B;&#x4FDD;&#x7559;&#x65B0;&#x9C9C;&#x79BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F1A;&#x6CC4;&#x9732;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C; T &#x7BA1;&#x72B6;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x5B58;&#x5728;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x5728;&#x6CA1;&#x6709; CytoD &#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; T &#x5C0F;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CD;&#x5927; dyssynchronous Ca(2+) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E; &#xFF08;&#x51DD;&#x805A;&#xFF09;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B58;&#x5728; 0.5 &mu; M &#x7684;&#x635F;&#x5931; CytoD&#xFF0C;T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x53CA;&#x5747;&#x8D28;&#x51DD;&#x805A;&#x7B49;&#x88AB;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#xFF0C;T-&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x53CA;&#x540C;&#x6B65;&#x3001; &#x53EF;&#x9760;&#x52B1;&#x78C1;-&#x6536;&#x7F29;-&#x8026;&#x5408;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;T &#x94A2;&#x7BA1;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x7684;&#x9610;&#x660E;&#x4E86;&#x9644;&#x52A0;&#x5230;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x5FC3;&#x810F;&#x75BE;&#x75C5;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C06;&#x9AA8;&#x67B6;&#x6539;&#x5EFA;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x4FE1;&#x53F7;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x75C5;&#x7406;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x5F62;&#x6001;&#x4FDD;&#x5B58;&#x6587;&#x5316;&#x7684; sub micromolar cytochalasin D &#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8865;&#x5145;&#x3002;

In cardiac myocytes, cytochalasin D (CytoD) was reported to act as an actin disruptor and mechanical uncoupler. Using confocal and super-resolution STED microscopy, we show that CytoD preserves the actin filament architecture of adult rat ventricular myocytes in culture. Five hundred nanomolar CytoD was the optimal concentration to achieve both preservation of the T-tubular structure during culture periods of 3 days and conservation of major functional characteristics such as action potentials, calcium transients and, importantly, the contractile properties of single myocytes. Therefore, we conclude that the addition of CytoD to the culture of adult cardiac myocytes can indeed be used to generate a solid single-cell model that preserves both morphology and function of freshly isolated cells. Moreover, we reveal a putative link between cytoskeletal and T-tubular remodeling. In the absence of CytoD, we observed a loss of T-tubules that led to significant dyssynchronous Ca(2+)-induced Ca(2+) release (CICR), while in the presence of 0.5 Î¼M CytoD, T-tubules and homogeneous CICR were majorly preserved. Such data suggested a possible link between the actin cytoskeleton, T-tubules and synchronous, reliable excitation-contraction-coupling. Thus, T-tubular re-organization in cell culture sheds some additional light onto similar processes found during many cardiac diseases and might link cytoskeletal alterations to changes in subcellular Ca(2+) signaling revealed under such pathophysiological conditions.

Functional and morphological preservation of adult ventricular myocytes in culture by sub-micromolar cytochalasin D supplement.

Dans les myocytes cardiaques, la cytochalasine D (CytoD) a &#xE9;t&#xE9; signal&#xE9; &#xE0; agir comme un perturbateur d&#x26;#39;actine et de d&#xE9;coupleur m&#xE9;canique. Utilisation confocale et de super-r&#xE9;solution microscopie STED, nous montrons que CytoD pr&#xE9;serve l&#x26;#39;architecture filament d&#x26;#39;actine des myocytes ventriculaires de rat en culture. Cinq cents nanomolaire CytoD &#xE9;tait la concentration optimale pour atteindre &#xE0; la fois la pr&#xE9;servation de la structure tubulaire T-pendant les p&#xE9;riodes de culture de 3 jours et la conservation des principales caract&#xE9;ristiques fonctionnelles telles que les potentiels d&#x26;#39;action, les transitoires de calcium et, surtout, les propri&#xE9;t&#xE9;s contractiles des myocytes isol&#xE9;s. Par cons&#xE9;quent, nous concluons que l&#x26;#39;ajout de CytoD &#xE0; la culture de myocytes cardiaques adultes peuvent en effet &#xEA;tre utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer un solide cellule unique mod&#xE8;le qui pr&#xE9;serve &#xE0; la fois la morphologie et la fonction de cellules isol&#xE9;es fra&#xEE;chement. En outre, nous r&#xE9;v&#xE8;lent un lien pr&#xE9;sum&#xE9; entre le remodelage du cytosquelette et T-tubulaire. En l&#x26;#39;absence de CytoD, nous avons observ&#xE9; une perte de T-tubules qui a conduit &#xE0; dyssynchronous significative Ca (2 +)-induite par le Ca (2 +) communiqu&#xE9; (CICR), tandis que dans la pr&#xE9;sence de 0,5 uM CytoD, T-tubules et homog&#xE8;ne ICRC ont &#xE9;t&#xE9; conserv&#xE9;s majorly. Ces donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent un lien possible entre le cytosquelette d&#x26;#39;actine, T-tubules et synchrone, fiable excitation-contraction de couplage. Ainsi, T-tubulaire r&#xE9;organisation en culture cellulaire jette une certaine lumi&#xE8;re suppl&#xE9;mentaire sur des processus similaires trouv&#xE9;es au cours de nombreuses maladies cardiaques et pourrait relier les modifications du cytosquelette &#xE0; des changements dans subcellulaire Ca (2 +) de signalisation a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; dans ces conditions physiopathologiques.

Pr&#xE9;servation fonctionnelle et morphologique des myocytes ventriculaires adultes dans la culture par le Sous-micromolaire cytochalasine D Suppl&#xE9;ment

Im kardialen Myozyten wurde Cytochalasin D (CytoD) berichtet, als ein Aktin-Disruptor und mechanischen Entkuppler. Konfokale verwenden und superaufl&ouml;sende STED-Mikroskopie, zeigen wir, dass CytoD die Aktin-Filament-Architektur der Erwachsene Ratte ventrikul&auml;ren Myozyten in Kultur bewahrt. F&uuml;nfhundert Nanomolar CytoD war die optimale Konzentration beider Erhaltung der T-tubul&auml;re Struktur w&auml;hrend der Kultur Perioden von 3 Tagen und Erhaltung der wichtigsten funktionellen Eigenschaften wie Aktionspotentiale, Kalzium-Transienten und allem der kontraktilen Eigenschaften der einzelnen Myocytes zu erreichen. Daher schlie&szlig;en wir, dass der Zusatz von CytoD zur Kultur der Erwachsenen kardialen Myozyten tats&auml;chlich verwendet werden kann, ein Volumenmodell einzellige generieren, die Morphologie und Funktion des frisch isolierten Zellen bewahrt. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir einen vermeintlichen Zusammenhang zwischen Zytoskelett und T-tubul&auml;re Umbau. Ohne CytoD, wir beobachteten einen Verlust von T-Tubuli, die zu erheblichen Dyssynchronous Ca(2+) Ca(2+)-induzierte Freisetzung (CICR), in Gegenwart von 0,5 &mu;M gef&uuml;hrt CytoD, T-Tubuli und homogene CICR majorly beibehalten wurden. Solche Daten vorgeschlagen, einen m&ouml;glichen Zusammenhang zwischen der Aktin-Zytoskeletts, T-Tubuli und synchrone, zuverl&auml;ssige Erregung-Kontraktion-Kopplung. Also T-Pellets Reorganisation in der Zellkultur zus&auml;tzliche beleuchtet auf &auml;hnliche Prozesse bei vielen Herzerkrankungen gefunden und Zytoskelett &Auml;nderungen mit &Auml;nderungen in subzellul&auml;ren Ca(2+) Signalisierung offenbart unter pathophysiologischen Bedingungen verkn&uuml;pfen.

Funktionelle und morphologische Erhaltung der Erwachsenen ventrikul&auml;ren Myozyten in der Kultur von Sub-micromolar Cytochalasin D erg&auml;nzen.

Nei miociti cardiaci, citocalasina D (CytoD) &egrave; stato segnalato per agire come un disgregatore di actina e sono meccanico. Utilizzando confocale e microscopia di STED Super-risoluzione, mostriamo che CytoD conserva l&#39;architettura di filamenti di actina dei miociti ventricolari ratto adulto nella cultura. Cinquecento nanomolari CytoD era la concentrazione ottimale per raggiungere sia conservazione della struttura tubolare T durante periodi di 3 giorni di cultura e conservazione delle caratteristiche funzionali principali quali potenziali d&#39;azione, transitori di calcio e, soprattutto, le propriet&agrave; contrattili dei singoli miociti. Pertanto, possiamo concludere che l&#39;aggiunta di CytoD per la coltura dei miociti cardiaci adulto infatti pu&ograve; essere utilizzato per generare un modello solido a cella singola che preserva la morfologia e la funzione delle cellule appena isolate. Inoltre, ci rivelano un putativo link tra il rimodellamento del citoscheletro e T-tubolare. In assenza di CytoD, abbiamo osservato una perdita dei tubuli T che ha portato a significativi dyssynchronous Ca(2+) Ca(2+)-induced release (CICR), mentre in presenza di 0,5 &mu;M CytoD, tubuli T e omogeneo CICR majorly furono conservate. Tali dati ha suggerito un possibile legame tra il citoscheletro di actina, tubuli T e sincrono, affidabile di eccitazione-contrazione-accoppiamento. Cos&igrave;, T-tubolare riorganizzazione in coltura cellulare getta qualche luce supplementare sui processi simili trovati nel corso di molte malattie cardiache e potrebbe linkare cambiamenti nella sottocellulari Ca(2+) segnalazione ha rivelato in tali condizioni patofisiologiche alterazioni del citoscheletro.

Conservazione morfologica e funzionale dei miociti ventricolari adulti nella cultura di sub-micromolare citocalasina D supplemento.

&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30E9;&#x30B7;&#x30F3;D&#xFF08;CytoD&#xFF09;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x304B;&#x304F;&#x4E71;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x8131;&#x5171;&#x5F79;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x8D85;&#x89E3;&#x50CF;STED&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;CytoD&#x306F;&#x3001;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6210;&#x4F53;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x4E94;&#x767E;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB;CytoD&#x306F;3&#x65E5;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x7279;&#x6027;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x4FDD;&#x5168;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x671F;&#x9593;&#x4E2D;&#x306B;T-&#x7BA1;&#x72B6;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4FDD;&#x5168;&#x306E;&#x4E21;&#x7ACB;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x304C;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;CytoD&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x78BA;&#x304B;&#x306B;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x56FA;&#x4F53;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;T-&#x7BA1;&#x72B6;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; CytoD&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x306F;&#x3001;0.5&#x3BC;MCytoD&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x5747;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x91CD;&#x8981;dyssynchronous CA&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x8A98;&#x767A;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#xFF08;CICR&#xFF09;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;CICR&#x306F;&#x3059;&#x304E;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3001;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x3068;&#x540C;&#x671F;&#x3001;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;T-&#x7D30;&#x7BA1;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5FC3;&#x75BE;&#x60A3;&#x4E2D;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E0A;&#x306B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5149;&#x3092;&#x6295;&#x3052;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B5;&#x30D6;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30E9;&#x30B7;&#x30F3;D&#x30B5;&#x30D7;&#x30EA;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x6210;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x5BA4;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F62;&#x614B;&#x4FDD;&#x5B58;

&#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; cytochalasin D (CytoD) &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC29;&#xD574;&#xC640; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; uncoupler &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xCD08;&#xC810; &#xB808;&#xC774;&#xC800;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC288;&#xD37C; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; STED &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;, &#xC6B0;&#xB9AC; CytoD &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC758; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC9C0; &#xB428;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. 5 &#xBC31; nanomolar Cytod&#xB294; 3 &#xC77C;&#xC758; &#xBB38;&#xD654; &#xAE30;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC561;&#xC158; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;, &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4; &#xAC19;&#xC740; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874; &#xBC0F; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xB2E8;&#xC77C; myocytes&#xC758; &#xC218;&#xCD95; &#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xC131; &#xC911; T &#xAD00; &#xAD6C;&#xC870;&#xC758; &#xB450; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCD5C;&#xC801; &#xB18D;&#xB3C4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Cytod&#xC758; &#xC131;&#xC778; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes &#xBB38;&#xD654; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD615;&#xD0DC;&#xC640; &#xAC13; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, cytoskeletal &#xBC0F; T &#xAD00; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1; &#xB9C1;&#xD06C;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; dyssynchronous Ca(2+) &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; (CICR), 0.5 &mu; M &#xC55E;&#xC5D0; T tubules &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; Cytod&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;, CytoD, T tubules &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADE0;&#xC9C8; CICR majorly &#xBCF4;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; T tubules &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB3D9;&#xAE30;, &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xC6D0; &#xACF5;&#xAE09;-&#xC218;&#xCD95;-&#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xC0AC;&#xC774; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, T &#xAD00; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC870;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC9C8;&#xD658; &#xC911;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xCD94;&#xAC00; &#xBE5B;&#xC774; &#xB098; &#xACE0; pathophysiological &#xAC19;&#xC740; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1D;&#xD600; subcellular Ca(2+) &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD654; cytoskeletal &#xBCC0;&#xACBD; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC131;&#xC778; &#xC2EC; &#xC2E4; myocytes &#xBB38;&#xD654; &#xD558;&#xC704; micromolar cytochalasin D&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xBC0F; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBCF4;&#xC874; &#xBCF4;&#xC644;.

En los miocitos card&#xED;acos, citocalasina D (CytoD) se inform&#xF3; de actuar como un disruptor de actina y desacoplador mec&#xE1;nico. Usando confocal y microscop&#xED;a de super-resoluci&#xF3;n STED, nos muestran que CytoD conserva la arquitectura de filamentos de actina de los adultos miocitos ventriculares de rata en cultivo. Quinientos nanomolar CytoD fue la concentraci&#xF3;n &#xF3;ptima para lograr tanto la preservaci&#xF3;n de la estructura tubular de T-durante los per&#xED;odos de cultivo de 3 d&#xED;as y de conservaci&#xF3;n de las principales caracter&#xED;sticas funcionales, tales como los potenciales de acci&#xF3;n, transitorios de calcio y, sobre todo, las propiedades contr&#xE1;ctiles de miocitos individuales. Por lo tanto, se concluye que la adici&#xF3;n de CytoD a la cultura de adultos miocitos card&#xED;acos de hecho puede ser utilizado para generar un s&#xF3;lido de una sola c&#xE9;lula modelo que conserva la morfolog&#xED;a y la funci&#xF3;n de c&#xE9;lulas reci&#xE9;n aisladas. Por otra parte, nos revelan un v&#xED;nculo entre la supuesta remodelaci&#xF3;n del citoesqueleto y T tubular. En ausencia de CytoD, se observ&#xF3; una p&#xE9;rdida de t&#xFA;bulos T-que llev&#xF3; a importantes Ca asincr&#xF3;nica (2 +) inducida por Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n (CICR), mientras que en presencia de 0,5 mM CytoD, T de t&#xFA;bulos y homog&#xE9;nea CICR se han conservado mayormente. Estos datos sugieren un posible v&#xED;nculo entre el citoesqueleto de actina, los t&#xFA;bulos T y sincr&#xF3;nica, fiable acoplamiento excitaci&#xF3;n-contracci&#xF3;n. Por lo tanto, T-tubular de reorganizaci&#xF3;n en el cultivo celular arroja alguna luz adicional en los procesos similares que se encuentran en muchas de las enfermedades card&#xED;acas y alteraciones del citoesqueleto podr&#xED;a vincular a los cambios en subcelular Ca (2 +) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n revel&#xF3; bajo tales condiciones fisiopatol&#xF3;gicas.

Anke Scholz

Institute for Molecular Cell Biology

Universty of Saarland

Isolation and Genetic Manipulation of Adult Cardiac Myocytes for Confocal Imaging