dna-transfection-mammalian-skeletal-muscles-using-vivo

DNA Transfection of Mammalian Skeletal Muscles using <em>In Vivo</em> Electroporation

 A growing interest in cell biology is to express transgenically modified forms of essential proteins (e.g. fluorescently tagged constructs and/or mutant ...

David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles

Ca(2)(+) &#x77AC;&#x6001;&#x8BF1;&#x53D1;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x6D4B;&#x91CF;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528; MagFluo-4&#xFF0C;&#x5728; 20-22 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5728;&#x5B8C;&#x6574;&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x9176;&#x8131;&#x79BB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x5E74;&#x9F84; &#xFF08;7&#x3001; 10&#x3001; 15&#x3001; 42 &#x5929;&#xFF09;&#x3002;&#x77AC;&#x6001; &#xFF08;&#x65F6;&#x95F4;&#x4ECE; 10 &#x5230; 90%&#x7684;&#x5CF0;&#x503C;&#xFF09; &#x4E0A;&#x5347;&#x65F6;&#x95F4;&#x5206;&#x522B;&#x4E3A; 2.4 &#x548C; 1.1 &#x7855;&#x58EB; 7-&#x548C; 42 &#x65E5;&#x9F84;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x3002;&#x53CC;&#x6307;&#x6570;&#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E38;&#x6570;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x3001; 1.8 &#x548C; 16.4 ms &#x548C; 4.6 &#x548C; 105 ms &#x5728; 7 &#x65E5;&#x9F84;&#x52A8;&#x7269;&#x4E0E;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x77AC;&#x6001;&#x8870;&#x51CF;&#x3002;&#x5206;&#x6570; 10 ms&#xFF0C;F(2(10))/F(1)&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x8109;&#x51B2;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x540E;&#x7684;&#x77AC;&#x65F6;&#x5CF0;&#x503C;&#x632F;&#x5E45;&#x7684;&#x590D;&#x82CF;&#x662F; 0.53 &#x6210;&#x4EBA;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x53CA;&#x4ECB;&#x4E4E; 0.03 &#x81F3; 0.60 &#x5728; 7 &#x65E5;&#x9F84;&#x52A8;&#x7269;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E4B;&#x95F4;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5927;&#x5DEE;&#x5F02;&#x53EF;&#x80FD;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x706D;&#x6D3B;&#x7684; Ca(2)(+) &#x7248;&#x672C;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x5170;&#x5C3C;&#x78B1;&#x53D7;&#x4F53;&#x7EC4;&#x6210;&#x9752;&#x5E74;&#x548C;&#x8001;&#x4EBA;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x9636;&#x6BB5; 7 &#x548C; 10 &#x5929;&#xFF0C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x56DE;&#x5E94; Ca(2) (+)-&#x514D;&#x8D39;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x5177;&#x6709;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x8DCC;&#x5E45;&#x5728;&#x77AC;&#x6001;&#x5CF0;&#x503C;&#x632F;&#x5E45; (25%&#x548C; 11%&#x6210;&#x4EBA;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;)&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8868;&#x660E; Ca(2)(+) &#x6D8C;&#x5165;&#x5230; Ca(2)(+) &#x77AC;&#x6001;&#x5E74;&#x8F7B;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x5706;&#x5F27;&#x5076;&#x6C2E;&#x9178; (1 &#x5988;&#x5988;&#xFF09;&#xFF0C;&#x808C;&#x6D46;&#x7F51; (SR) &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242; Ca(2) (+)-ATPase&#xFF0C;&#x5E9F;&#x9664; Ca(2)(+) 7 &#x548C; 10 &#x5929;-&#x5C81;&#x52A8;&#x7269;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x7684;&#x77AC;&#x6001;&#x8870;&#x51CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x5176;&#x7387;&#x8D8A;&#x8001;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;Ca(2)(+) &#x53BB;&#x9664;&#x6A21;&#x578B;&#x4E0E;&#x7535;&#x6D8C;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x7ED3;&#x679C;&#x7B26;&#x5408;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8D21;&#x732E;&#x7684; SR Ca(2)(+) &#x6CF5;&#x548C; myoplasmic Ca(2)(+) &#x4E2D;&#x7684;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x7684;&#x9752;&#x5E74;&#x4E0E;&#x65E7;&#x52A8;&#x7269;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4F4E;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x9F20;&#x6807;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x9499;&#x77AC;&#x53D8;&#x3002;

Ca(2)(+) transients elicited by action potentials were measured using MagFluo-4, at 20-22 degrees C, in intact muscle fibres enzymatically dissociated from mice of different ages (7, 10, 15 and 42 days). The rise time of the transient (time from 10 to 90% of the peak) was 2.4 and 1.1 ms in fibres of 7- and 42-day-old mice, respectively. The decay of the transient was described by a double exponential function, with time constants of 1.8 and 16.4 ms in adult, and of 4.6 and 105 ms in 7-day-old animals. The fractional recovery of the transient peak amplitude after 10 ms, F(2(10))/F(1), determined using twin pulses, was 0.53 for adult fibres and ranged between 0.03 and 0.60 in fibres of 7-day-old animals This large variance may indicate differences in the extent of inactivation of Ca(2)(+) release, possibly related to the difference in ryanodine receptor composition between young and old fibres. At the 7 and 10 day stages, fibres responded to Ca(2)(+)-free solutions with a larger decrease in the transient peak amplitude (25% versus 11% in adult fibres), possibly indicating a contribution of Ca(2)(+) influx to the Ca(2)(+) transient in younger animals. Cyclopiazonic acid (1 mum), an inhibitor of the sarcoplasmic reticulum (SR) Ca(2)(+)-ATPase, abolished the Ca(2)(+) transient decay in fibres of 7- and 10-day-old animals and significantly reduced its rate in older animals. Analysis of the transients with a Ca(2)(+) removal model showed that the results are consistent with a larger relative contribution of the SR Ca(2)(+) pump and a lower expression of myoplasmic Ca(2)(+) buffers in fibres of young versus old animals.

Calcium transients in developing mouse skeletal muscle fibres.

Ca(2)(+) transitoires induites par les potentiels d&#39;action ont &eacute;t&eacute; mesur&eacute;s &agrave; l&#39;aide de MagFluo-4, &agrave; 20-22 degr&eacute;s C, dans les fibres musculaires intactes enzymatiquement dissoci&eacute;es de souris de diff&eacute;rents &acirc;ges (7, 10, 15 et 42 jours). Le temps de mont&eacute;e du transitoire (temps de 10 &agrave; 90 % du PIC) &eacute;tait de 2,4 et 1,1 ms dans les fibres des souris &acirc;g&eacute;es de 7 et 42 jours, respectivement. La d&eacute;sint&eacute;gration du transitoire a &eacute;t&eacute; d&eacute;crite par une fonction exponentielle double, avec des constantes de temps de 1,8 &agrave; 16,4 ms chez les adultes et de 4,6 et 105 ms chez les animaux &acirc;g&eacute;s de 7 jours. Le recouvrement fractionn&eacute; de l&#39;amplitude de cr&ecirc;te transitoire apr&egrave;s 10 ms, F(2(10))/F(1), d&eacute;termin&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;impulsions jumelles, &eacute;tait 0,53 pour les fibres de l&#39;adultes et se situait entre 0,03 et 0,60 en fibres d&#39;animaux &acirc;g&eacute;s de 7 jours cet &eacute;cart important peut indiquer des diff&eacute;rences dans le degr&eacute; d&#39;inactivation de la lib&eacute;ration de Ca(2)(+), peut-&ecirc;tre en relation avec la diff&eacute;rence de composition de r&eacute;cepteurs de ryanodine entre jeunes et vieux de fibres. Aux &eacute;tapes 7 &agrave; 10 jours, les fibres a r&eacute;pondu &agrave; Ca(2) (+)-gratuit&eacute; des solutions avec une baisse plus importante de l&#39;amplitude de cr&ecirc;te transitoire (25 % contre 11 % en fibres de l&#39;adultes), ce qui indique peut-&ecirc;tre une contribution de l&#39;afflux de Ca(2)(+) &agrave; Ca(2)(+) transitoire chez les animaux plus jeunes. L&#39;acide cyclopiazonique (1 maman), un inhibiteur du r&eacute;ticulum sarcoplasmique (SR) Ca(2) (+)-ATPase, aboli la d&eacute;croissance transitoire de Ca(2)(+) dans les fibres des animaux &acirc;g&eacute;s de 7 et 10 jours et a consid&eacute;rablement r&eacute;duit ses chez les animaux plus &acirc;g&eacute;s. Analyse des transitoires avec un mod&egrave;le de suppression de Ca(2)(+) a montr&eacute; que les r&eacute;sultats sont coh&eacute;rents avec une plus grande contribution relative de la pompe SR Ca(2)(+) et une expression inf&eacute;rieure de tampons Ca(2)(+) myoplasmique dans les fibres des jeunes contre les vieux animaux.

Transitoires de calcium dans le d&eacute;veloppement des fibres musculaires squelettiques de souris.

Calcium-&#xDC;berg&#xE4;nge bei der Entwicklung der Maus Skelettmuskelfasern.

CA(2)(+) transitori elicitate da potenziali d&#39;azione sono stati misurati utilizzando MagFluo-4, a 20-22 gradi C, nelle fibre muscolari intatto enzimaticamente dissociati da topi di diversa et&agrave; (7, 10, 15 e 42 giorni). Il tempo di salita di transitori (tempo da 10 a 90% del picco) era 1.1 e 2.4 ms in fibre di topi 7 - e 42 giorni di et&agrave;, rispettivamente. Decadimento del transitorio &egrave; stato descritto da una doppia funzione esponenziale, con costanti di tempo di 1,8 e 16,4 ms nell&#39;adulto e di 4,6 e 105 ms in 7-giorno-vecchi animali. Il recupero frazionale di ampiezza peak transitoria dopo 10 ms, F(2(10))/F(1), determinato utilizzando impulsi gemelli, era 0,53 per adulti fibre e variava tra 0,03 e 0.60 in fibre animali 7-giorno-vecchio questa grande varianza pu&ograve; indicare le differenze nella misura di inattivazione di rilascio Ca(2)(+), possibilmente correlato alla differenza nella composizione del recettore rianodinico tra vecchie e giovani fibre. Nelle fasi di giorno 7 e 10, fibre ha risposto a Ca(2) (+)-gratis soluzioni con una pi&ugrave; grande diminuzione l&#39;ampiezza di picco transitorio (25% contro 11% in fibre adulti), indicando forse un contributo di afflusso di Ca(2)(+) per la Ca(2)(+) transitori in animali pi&ugrave; giovani. Acido Cyclopiazonic (1 mamma), un inibitore del reticolo sarcoplasmico (SR) Ca(2) (+)-ATPasi, abolito il decadimento temporaneo Ca(2)(+) in fibre animali 7 e 10-giorni di et&agrave; e riduce significativamente il tasso negli animali pi&ugrave; vecchi. Analisi dei transitori con un modello di rimozione Ca(2)(+) ha mostrato che i risultati sono coerenti con un pi&ugrave; grande contributo relativo della pompa SR Ca(2)(+) e una bassa espressione di buffer Ca(2)(+) mioplasmico in fibre di giovani contro vecchi animali.

Transitori di calcio nello sviluppo di fibre muscolari scheletriche del mouse.

&#xFF08;7&#x3001;10&#x3001;15&#x3001;42 &#x65E5;&#x9593;) &#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x89E3;&#x96E2;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x7B4B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5E74;&#x9F62;&#x3001;Ca(2)(+) &#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x3088;&#x308B; MagFluo 4 20-22 &#x2103; &#x3067;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x904E;&#x6E21; &#xFF08;90 &#xFF05; &#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E; 10 &#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6642;&#x9593;) &#x306E;&#x7ACB;&#x4E0A;&#x308A;&#x6642;&#x9593;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C; 2.4 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 1.1 &#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E; ms 7 &#x3068; 42 &#x65E5;&#x9F62;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x975E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x6642;&#x5B9A;&#x6570;&#x3068; 4.6 &#x3068; 105 &#x306E; ms 7 &#x65E5;&#x9F62;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x306E;&#x6210;&#x4EBA;&#x3001;1.8 &#x3068; 16.4 ms &#x3068;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x6307;&#x6570;&#x95A2;&#x6570;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;10 &#x30C4;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A; ms&#x3001;F(2(10))/F(1) &#x5F8C;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x306E;&#x5206;&#x5225;&#x56DE;&#x53CE;&#x30A2;&#x30C0;&#x30EB;&#x30C8;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E; 0.53 &#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;0.03 &#xFF5E; 7 &#x65E5;&#x9F62;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3067; 0.60 &#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5206;&#x6563;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x30EA;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B8;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x7D44;&#x6210;&#x8001;&#x82E5;&#x7537;&#x5973;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x9593;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306B;&#x95A2;&#x9023; Ca(2)(+) &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;7 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 10 &#x65E5;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x7E4A;&#x7DAD; Ca(2) (+) &#x306B;&#x7B54;&#x3048;&#x305F;-&#x7121;&#x6599;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; (&#x30A2;&#x30C0;&#x30EB;&#x30C8;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3067; 11% &#x5BFE; 25%) &#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x6E1B;&#x5C11;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027; Ca(2)(+) &#x6D41;&#x5165;&#x82E5;&#x3044;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Ca(2)(+) &#x904E;&#x6E21;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D4;&#x30A2;&#x30BE;&#x30F3;&#x9178; (1 &#x30DE;&#x30DE;&#xFF09;&#x3001;&#x7B4B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; &#xFF08;SR&#xFF09; &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264; Ca(2) (+)-ATPase, Ca(2)(+) &#x975E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x6E1B;&#x8870; 7 &#x304A;&#x3088;&#x3073; 10 &#x65E5;&#x53E4;&#x3044;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3067;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x53E4;&#x3044;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ca(2)(+) &#x9664;&#x53BB;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x904E;&#x6E21;&#x73FE;&#x8C61;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x7D50;&#x679C;&#x304C; SR Ca(2)(+) &#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3068;&#x82E5;&#x5E74;&#x8005;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x53E4;&#x3044;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3067;&#x9AA8;&#x683C; Ca(2)(+) &#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x306E;&#x4F4E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3002;

Ca(2)(+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xB3D9;&#xC791; &#xC804;&#xC704;&#xB85C; elicited &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; MagFluo-4, 20-22&#xB3C4; C&#xC5D0; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;, enzymatically&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xB9AC; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xB098;&#xC774; (7, 10, 15 &#xBC0F; 42 &#xC77C;). &#xACFC;&#xB3C4; (&#xD53C;&#xD06C;&#xC758; 90%&#xC5D0;&#xC11C; 10 &#xC2DC;&#xAC04;)&#xC758; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xC2DC;&#xAC04; &#xAC01;&#xAC01; 7-&#xACE0; 42 &#xC77C; &#xB41C; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; 2.4 &#xBC0F; 1.1 ms&#xB294;. &#xACFC;&#xB3C4;&#xC758; &#xBD80;&#xD328; &#xC131;&#xC778;, 1.8 &#xBC0F; 16.4 ms&#xC640; 7-&#xD558;&#xB8E8;-&#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; 4.6&#xC640; 105 ms&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xC218;&#xC640; &#xC774;&#xC911; &#xC9C0; &#xC218; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. 10 Ms, F(2(10))/F(1), &#xD2B8;&#xC708; &#xD384;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD6C4; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xD53C;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC758; &#xC18C;&#xC218; &#xBCF5;&#xAD6C; 0.53 &#xC131;&#xC778; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC5C8;&#xACE0;, 7-&#xD558;&#xB8E8;-&#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xB294; 0.60 0.03&#xC640; &#xC6D0;&#xAC70;&#xB9AC;&#xC774; &#xD070; &#xCC28;&#xC774; Ca(2)(+) &#xCD9C;&#xC2DC;, &#xC5B4;&#xCA4C;&#xBA74; &#xC80A;&#xACE0; &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xC12C;&#xC720; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; ryanodine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC131;&#xBD84;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 7 &#xBC0F; 10 &#xC77C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; Ca(2) (+)-&#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xD53C;&#xD06C; &#xC9C4;&#xD3ED; (&#xC131;&#xC778; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; 11% &#xB300; 25%)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xD070; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xBB34;&#xB8CC; &#xAC00;&#xB2A5; Ca(2)(+) &#xC720;&#xC785; &#xC80A;&#xC740; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2)(+) &#xACFC;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. Cyclopiazonic &#xC0B0; &#xC131; (1 &#xC5C4;&#xB9C8;) sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (SR)&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; Ca(2) (+)-ATPase, 7 &#xBC0F; 10-&#xC77C; &#xB41C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; Ca(2)(+) &#xBCC0;&#xC774; &#xBD80;&#xD328;&#xB97C; &#xD3D0;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2)(+) &#xC81C;&#xAC70; &#xBAA8;&#xB378; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; SR Ca(2)(+) &#xD38C;&#xD504;&#xC758; &#xB354; &#xD070; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB3C4;&#xC640; &#xC624;&#xB798; &#xB41C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xB300; &#xC80A;&#xC740; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; myoplasmic Ca(2)(+) &#xBC84;&#xD37C;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xC2DD; &#xC77C;&#xCE58; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;.

&#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xCE7C;&#xC298; &#xACFC;&#xB3C4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CA(2)(+) transitorios sacados por los potenciales de acci&oacute;n se midieron con MagFluo-4, a 20-22 grados C, en fibras de m&uacute;sculo intacto enzim&aacute;ticamente disociadas de ratones de diferentes edades (7, 10, 15 y 42 d&iacute;as). El tiempo de subida de la transitoria (tiempo de 10 a 90% del pico) fue ms 2.4 y 1,1 en fibras de ratones 7 y 42 d&iacute;as de edad, respectivamente. El decaimiento de la transitoria fue descrito por una funci&oacute;n exponencial doble, con constantes del tiempo de 1,8 y 16,4 ms en adulto y de 4,6 y 105 ms en animales de 7 d&iacute;as de edad. La recuperaci&oacute;n fraccional de la amplitud de pico transitoria a 10 ms, F(2(10))/F(1), determinado usando dos pulsos, fue 0.53 para adultos fibras y oscil&oacute; entre 0,03 y 0.60 en fibras de animales de 7 d&iacute;as de edad este gran varianza puede indicar diferencias en el grado de inactivaci&oacute;n de liberaci&oacute;n Ca(2)(+), posiblemente relacionado con la diferencia en la composici&oacute;n del receptor de rianodina entre fibras j&oacute;venes y viejas. En las fases de d&iacute;a 7 y 10, fibras respondieron a Ca(2) (+)-libre soluciones con una disminuci&oacute;n m&aacute;s grande en la amplitud de pico transitoria (25% frente al 11% en fibras para adultos), posiblemente indicando una contribuci&oacute;n de afluencia de Ca(2)(+) a la Ca(2)(+) transitoria en animales m&aacute;s j&oacute;venes. Cyclopiazonic &aacute;cido (1 mam&aacute;), un inhibidor del ret&iacute;culo sarcopl&aacute;smico (SR) Ca(2) (+)-ATPasa, aboli&oacute; el decaimiento transitorio Ca(2)(+) en fibras de animales de 7 y 10 d&iacute;as de edad y reducido considerablemente su tasa en animales m&aacute;s viejos. El an&aacute;lisis de los transitorios con un modelo de eliminaci&oacute;n de Ca(2)(+) demostr&oacute; que los resultados son consistentes con una mayor contribuci&oacute;n relativa de la bomba del SR Ca(2)(+) y una menor expresi&oacute;n de b&uacute;feres de Ca(2)(+) de myoplasmic en fibras de j&oacute;venes contra viejos animales.

Transitorios del calcio en el desarrollo de fibras de m&uacute;sculo esquel&eacute;tico de rat&oacute;n.

&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5FAE;&#x7535;&#x6781;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x8C03;&#x67E5;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D7;&#x635F;&#x7684;&#x5174;&#x594B;-&#x6536;&#x7F29;&#x5076;&#x8054;&#x5728;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684; mdx &#x8001;&#x9F20;&#xFF0C;&#x5047;&#x80A5;&#x5927;&#x578B;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x75BE;&#x75C5;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x7535;&#x4F4D;&#x6307;&#x6807;&#x8BA1;&#x7B97;&#x6A2A;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF; &#xFF08;T-&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF09; &#x7684;&#x4F5C;&#x7528; di 8 ANEPPS &#x548C;&#x808C;&#x6D46;&#x7F51; (SR) Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x6D4B;&#x5B9A; Ca2 + &#x77AC;&#x53D8;&#x7535;&#x538B;&#x94B3;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B; EGTA &#x9AD8;&#x6D53;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x6709;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C;&#x6307;&#x793A;&#x5668;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; T &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x5DEE;&#x5F02;&#x548C; T &#x7CFB;&#x7EDF;&#x7535;&#x6C14;&#x7E41;&#x6B96;&#x4E0D;&#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x548C; mdx &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x3002;&#x800C;&#x6700;&#x5927;&#x7684; Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7535;&#x538B;&#x8109;&#x51B2;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x5927;&#x7EA6; 67%&#x5728; mdx &#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x83B7;&#x5F97;&#x4F7F;&#x7528; AP &#x523A;&#x6FC0;&#x3001; SR Ca2 + &#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x662F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728; mdx &#x9F20;&#x6807;&#x6539;&#x53D8;&#x91CA;&#x653E; Ca2 + &#x808C;&#x6D46;&#x7F51;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x5728;&#x6A2A;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x9499;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x548C; mdx &#x9F20;&#x6807;&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F20;&#x64AD;&#x3002;

Using a two-microelectrode voltage clamp technique, we investigated possible mechanisms underlying the impaired excitation-contraction coupling in skeletal muscle fibres of the mdx mouse, a model of the human disease Duchenne muscular dystrophy. We evaluated the role of the transverse tubular system (T-system) by using the potentiometric indicator di-8 ANEPPS, and that of the sarcoplasmic reticulum (SR) Ca2+ release by measuring Ca2+ transients with a low affinity indicator in the presence of high EGTA concentrations under voltage clamp conditions. We observed minimal differences in the T-system structure and the T-system electrical propagation was not different between normal and mdx mice. Whereas the maximum Ca2+ release elicited by voltage pulses was reduced by approximately 67% in mdx fibres, in agreement with previous results obtained using AP stimulation, the voltage dependence of SR Ca2+ release was identical to that seen in normal fibres. Taken together, our data suggest that the intrinsic ability of the sarcoplasmic reticulum to release Ca2+ may be altered in the mdx mouse.

Propagation in the transverse tubular system and voltage dependence of calcium release in normal and mdx mouse muscle fibres.

En utilisant une technique de deux micro&#xE9;lectrode pince, nous avons &#xE9;tudi&#xE9; les m&#xE9;canismes possibles de l&#x26;#39;alt&#xE9;ration de couplage excitation-contraction dans les fibres musculaires squelettiques de la souris mdx, un mod&#xE8;le de la dystrophie de Duchenne maladie humaine musculaire. On &#xE9;valu&#xE9; le r&#xF4;le du syst&#xE8;me tubulaire transversal (T-syst&#xE8;me) en utilisant l&#x26;#39;indicateur potentiom&#xE9;trique di-8 ANEPPS, et que du r&#xE9;ticulum sarcoplasmique (SR) lib&#xE9;ration de Ca 2 + en mesurant Ca 2 + transitoires avec un indicateur de faible affinit&#xE9; en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;&#xE9;lev&#xE9;e EGTA concentrations dans des conditions de serrage de tension. Nous avons observ&#xE9; des diff&#xE9;rences minimes dans la structure T-syst&#xE8;me et la propagation T-syst&#xE8;me &#xE9;lectrique n&#x26;#39;&#xE9;tait pas diff&#xE9;rente entre les souris normales et mdx. Alors que la lib&#xE9;ration de Ca 2 + maximale induite par des impulsions de tension a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;duite d&#x26;#39;environ 67% dans les fibres mdx, en accord avec les r&#xE9;sultats ant&#xE9;rieurs obtenus en utilisant une stimulation AP, la d&#xE9;pendance de tension de lib&#xE9;ration de Ca 2 + SR est identique &#xE0; celle observ&#xE9;e dans les fibres normales. Pris dans leur ensemble, nos donn&#xE9;es sugg&#xE8;rent que la capacit&#xE9; intrins&#xE8;que du r&#xE9;ticulum sarcoplasmique de lib&#xE9;rer Ca2 + peut &#xEA;tre modifi&#xE9; chez la souris mdx.

Propagation dans le syst&#xE8;me tubulaire transversal et fonction de la tension de la lib&#xE9;ration de calcium dans les fibres normales et mdx muscle de souris

Die Ausbreitung in der Querrichtung Rohrsystem und Spannungsabh&#xE4;ngigkeit der Calcium-Freisetzung in der normalen und mdx-Maus Muskelfasern.

Usando una tecnica di morsetto tensione due microelettrodo, abbiamo studiato possibili meccanismi sottostanti l&#39;alterata eccitazione-contrazione giunto nelle fibre muscolari scheletriche del mouse mdx, un modello della malattia umana distrofia muscolare di Duchenne. Abbiamo valutato il ruolo del sistema tubulare trasverso (sistema T) utilizzando l&#39;indicatore potenziometrico di-8 ANEPPS e che il reticolo sarcoplasmico (SR) Ca2 + release misurando Ca2 + transitori con un indicatore di bassa affinit&agrave; in presenza di alte concentrazioni di EGTA in condizioni di tensione pinza. Abbiamo osservato differenze minime nella struttura T-system e la propagazione di T-sistema elettrica non era diversa tra topi normali e mdx. Considerando che il massima Ca2 + release elicitata da impulsi di tensione &egrave; stato ridotto di circa il 67% in fibre di mdx, in accordo con precedenti risultati ottenuti mediante stimolazione di AP, la dipendenza della tensione di SR Ca2 + release era identica a quello visto in fibre normali. Presi insieme, i nostri dati suggeriscono che la capacit&agrave; intrinseca del reticolo sarcoplasmico di liberare Ca2 + pu&ograve; essere alterata nel topo mdx.

Propagazione nel sistema tubulare trasverso e dipendenza dalla tensione del rilascio di calcio nel normale e mdx fibre muscolari di topo.

&#x4E8C;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x96FB;&#x6975;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x30C7;&#x30E5;&#x30B7;&#x30A7;&#x30F3;&#x30CC;&#x578B;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x8208;&#x596E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x9023;&#x95A2;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x4F4D;&#x5DEE;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30B8;-8 ANEPPS&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6A2A;&#x884C;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7CFB;&#xFF08;T-&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#xFF09;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x7B4B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#xFF08;SR&#xFF09;&#x9AD8;EGTA&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x4F4E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58;&#x3067;&#x306E;Ca 2 +&#x904E;&#x6E21;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x96FB;&#x5727;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;T-&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6700;&#x5C0F;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;T-&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x306E;&#x4F1D;&#x64AD;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x3068;mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5DEE;&#x306F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x96FB;&#x5727;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6700;&#x5927;&#x306E;Ca2 +&#x653E;&#x51FA;&#x304C;MDX&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x7D04;67&#xFF05;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;AP&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3001;SR&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304C;+&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x4E00;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;Ca2 +&#x3092;&#x653E;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x7B4B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x30CE;&#x30FC;&#x30DE;&#x30EB;&#x3068;mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x6A2A;&#x884C;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x96FB;&#x5727;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x4F1D;&#x64AD;

2 Microelectrode &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAE30;&#xBCF8; mdx &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;, &#xC778;&#xAC04; &#xC9C8;&#xBCD1; Duchenne &#xADFC; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC218;&#xCD95; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; potentiometric &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC00;&#xB85C; &#xAD00; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (T &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB514;-8 ANEPPS &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; Ca2 + &#xACFC;&#xB3C4; &#xC804;&#xC555; &#xD074;&#xB7A8;&#xD504; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; EGTA &#xB18D;&#xB3C4; &#xC874;&#xC7AC; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (SR) Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC758;. &#xC6B0;&#xB9AC; T &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0; T &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC804;&#xAE30; &#xC804;&#xD30C;&#xB294; &#xBCF4;&#xD1B5; &#xBC0F; mdx &#xC950; &#xC0AC;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978;. &#xBC18;&#xBA74; &#xCD5C;&#xB300; Ca2 + &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB85C; elicited &#xC804;&#xC555; &#xD384;&#xC2A4; &#xC774;&#xC804; &#xACB0;&#xACFC; AP &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC00;&#xC838;&#xC628;&#xC640; mdx &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D; 67%&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;, SR Ca2 + &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC804;&#xC555; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xC77C;&#xBC18; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB3D9;&#xC77C;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xCD9C;&#xC2DC; Ca2 + sarcoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xB2A5;&#xB825; mdx &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC00;&#xB85C; &#xAD00; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBC0F; &#xC804;&#xC555; &#xC758;&#xC874;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC815;&#xC0C1; &#xBC0F; mdx &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC758; &#xC804;&#xD30C;.

Usando una t&#xE9;cnica de tensi&#xF3;n de dos microelectrodos pinza, se investig&#xF3; los posibles mecanismos que subyacen a la alteraci&#xF3;n de acoplamiento excitaci&#xF3;n-contracci&#xF3;n en las fibras musculares esquel&#xE9;ticas del rat&#xF3;n mdx, un modelo de la enfermedad humana distrofia muscular de Duchenne. Se evalu&#xF3; la funci&#xF3;n del sistema transversal tubular (T-sistema) mediante el indicador potenciom&#xE9;trica di-8 ANEPPS, y la del ret&#xED;culo sarcopl&#xE1;smico (SR) Ca2 + liberaci&#xF3;n mediante la medici&#xF3;n de Ca2 + transitorios con un indicador de baja afinidad en presencia de alta EGTA concentraciones en condiciones de fijaci&#xF3;n de voltaje. Se observaron diferencias m&#xED;nimas en la estructura de T-sistema y la propagaci&#xF3;n de T-sistema el&#xE9;ctrico no fue diferente entre los ratones normales y mdx. Considerando que el m&#xE1;ximo de Ca2 + liberaci&#xF3;n inducida por impulsos de tensi&#xF3;n se redujo en aproximadamente un 67% en fibras mdx, de acuerdo con los resultados anteriores obtenidos mediante la estimulaci&#xF3;n de AP, la dependencia del voltaje de la SR Ca2 + liberaci&#xF3;n era id&#xE9;ntica a la observada en las fibras normales. En conjunto, nuestros datos sugieren que la capacidad intr&#xED;nseca del ret&#xED;culo sarcopl&#xE1;smico para liberar Ca2 + puede ser modificado en el rat&#xF3;n mdx.

Propagaci&#xF3;n en el sistema transversal tubular y dependencia de voltaje de la liberaci&#xF3;n de calcio en las fibras musculares normales y mdx Rat&#xF3;n

&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8DB3;&#x591F;&#x6570;&#x91CF;&#x548C;&#x8D28;&#x91CF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x662F;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x4E00;&#x9879;&#x91CD;&#x5927;&#x6311;&#x6218;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x9650;&#x5236;&#x59A8;&#x788D;&#x5176;&#x7528;&#x4E8E;&#x5927;&#x91CF;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x8FD9;&#x5C06;&#x521B;&#x5EFA;&#x57FA;&#x4E8E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x660E;&#x786E;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8BE5;&#x6210;&#x5E74;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x3001; &#x4F53;&#x5185;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8D28;&#x7C92; DNA &#x8F6C;&#x67D3;&#x3001; &#x662F;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x5F02;&#x79CD;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8868;&#x660E;&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E86;&#x51E0;&#x5929;&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x771F;&#x5B9E;&#x526F;&#x672C;&#x3002;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x7EA6; 1 mg/g &#x662F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x83B7;&#x53D6;&#x3001; &#x5AB2;&#x7F8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x6210;&#x5E74;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4FDD;&#x8BC1;&#x9002;&#x5F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x52A0;&#x5DE5;&#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x73AF;&#x5883;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F18;&#x52BF;&#x8865;&#x5145;&#x662F;&#x666E;&#x904D;&#x83B7;&#x5F97;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x8C03;&#x67E5;&#x5458;&#x548C;&#x6613;&#x4E8E;&#x5B9E;&#x73B0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5916;&#x6E90;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;

The production of mammalian proteins in sufficient quantity and quality for structural and functional studies is a major challenge in biology. Intrinsic limitations of yeast and bacterial expression systems preclude their use for the synthesis of a significant number of mammalian proteins. This creates the necessity of well-identified expression systems based on mammalian cells. In this paper, we demonstrate that adult mammalian skeletal muscle, transfected in vivo by electroporation with DNA plasmids, is an excellent heterologous mammalian protein expression system. By using the fluorescent protein EGFP as a model, it is shown that muscle fibers express, during the course of a few days, large amounts of authentic replicas of transgenic proteins. Yields of approximately 1mg/g of tissue were obtained, comparable to those of other expression systems. The involvement of adult mammalian cells assures an optimal environment for proper protein folding and processing. All these advantages complement a methodology that is universally accessible to biomedical investigators and simple to implement.

Quantitative evaluation of mammalian skeletal muscle as a heterologous protein expression system.

La production de prot&#xE9;ines de mammif&#xE8;res en quantit&#xE9; suffisante et de qualit&#xE9; pour des &#xE9;tudes structurales et fonctionnelles est un d&#xE9;fi majeur en biologie. Limitations intrins&#xE8;ques de la levure et des syst&#xE8;mes d&#x26;#39;expression bact&#xE9;riens emp&#xEA;cher leur utilisation pour la synth&#xE8;se d&#x26;#39;un nombre important de prot&#xE9;ines de mammif&#xE8;res. Cela cr&#xE9;e la n&#xE9;cessit&#xE9; de syst&#xE8;mes d&#x26;#39;expression, bien identifi&#xE9;s, bas&#xE9;s sur des cellules de mammif&#xE8;res. Dans cet article, nous d&#xE9;montrons que les muscles des mammif&#xE8;res adultes squelettique, transfect&#xE9;es in vivo par &#xE9;lectroporation avec des plasmides d&#x26;#39;ADN, est un excellent syst&#xE8;me de mammif&#xE8;re h&#xE9;t&#xE9;rologue expression de la prot&#xE9;ine. En utilisant la EGFP prot&#xE9;ine fluorescente comme un mod&#xE8;le, il est d&#xE9;montr&#xE9; que les fibres musculaires exprimer, au cours de quelques jours, de grandes quantit&#xE9;s de r&#xE9;pliques authentiques de prot&#xE9;ines transg&#xE9;niques. Les rendements d&#x26;#39;environ 1 mg / g de tissu ont &#xE9;t&#xE9; obtenus, comparables &#xE0; ceux des autres syst&#xE8;mes d&#x26;#39;expression. L&#x26;#39;implication des cellules de mammif&#xE8;res adultes assure un environnement optimal pour le repliement des prot&#xE9;ines et un bon traitement. Tous ces avantages se compl&#xE8;tent d&#x26;#39;une m&#xE9;thodologie qui soit universellement accessible aux chercheurs biom&#xE9;dicaux et simple &#xE0; mettre en &#x153;uvre.

Evaluation quantitative de muscle squelettique de mammif&#xE8;re comme un syst&#xE8;me expression de prot&#xE9;ines h&#xE9;t&#xE9;rologues

Die Produktion von S&auml;ugetierproteine in ausreichender Menge und Qualit&auml;t f&uuml;r strukturelle und funktionelle Studien ist eine gro&szlig;e Herausforderung in der Biologie. Immanente Grenzen der Hefe und bakterieller Expressionssysteme entgegen, deren Verwendung f&uuml;r die Synthese einer betr&auml;chtlichen Anzahl von S&auml;ugetierproteine. Dadurch entsteht die Notwendigkeit, verhaltensauff&auml;llig Expressionssysteme basierend auf S&auml;ugetier-Zellen. In diesem Papier wir zeigen, dass Erwachsene S&auml;ugetier-Skelettmuskulatur, transfected durch Elektroporation mit DNA Plasmide in-vivo, eine ausgezeichnete heterologe S&auml;ugetier-Protein-Expressionssystem. Mithilfe der fluoreszierenden Proteins EGFP als Modell nachgewiesen wird, dass Muskelfasern, im Laufe von wenigen Tagen Ausdr&uuml;cken, gro&szlig;e Mengen an authentischen Repliken von transgenen Proteinen. Ertr&auml;ge von etwa 1 mg/g Gewebe waren erhalten, vergleichbar mit denen der anderen Systeme. Die Beteiligung der Erwachsenen S&auml;ugetierzellen sichert ein optimales Umfeld f&uuml;r richtige Protein Falt- und Verarbeitung. All diese Vorteile erg&auml;nzen eine Methodik, die universell f&uuml;r biomedizinische Forscher zug&auml;nglich und einfach zu implementieren ist.

Quantitative Bewertung des S&auml;ugetier-Skelettmuskulatur als heterologe Protein Ausdruck System.

La produzione delle proteine dei mammiferi in sufficiente quantit&agrave; e qualit&agrave; per gli studi strutturali e funzionali &egrave; una sfida importante in biologia. Limitazioni intrinseche del lievito e sistemi di espressione batterica precludono loro uso per la sintesi di un numero significativo di proteine dei mammiferi. Questo crea la necessit&agrave; di sistemi di espressione ben definiti basati su cellule di mammifero. In questa carta, dimostrare quello muscolo scheletrico mammifero adulto, transfected in vivo di elettroporazione con i plasmidi di DNA, &egrave; un sistema di espressione eccellente proteina eterologa dei mammiferi. Utilizzando la proteina fluorescente EGFP come un modello, &egrave; dimostrato che fibre muscolari esprimere, nel corso di pochi giorni, grandi quantit&agrave; di autentiche repliche di proteine transgeniche. Rendimenti di circa 1 mg/g di tessuto sono stati ottenuti, paragonabili a quelli di altri sistemi di espressione. Il coinvolgimento delle cellule di mammiferi adulti assicura un ambiente ottimale per la proteina corretta piegatura e lavorazione. Tutti questi vantaggi si completano una metodologia universalmente accessibile ai ricercatori biomedici e semplice da implementare.

Valutazione quantitativa del muscolo scheletrico dei mammiferi come un sistema di espressione della proteina eterologa.

&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x91CF;&#x3068;&#x8CEA;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x8AB2;&#x984C;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x3084;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x7CFB;&#x306E;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x9650;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x8B58;&#x5225;&#x767A;&#x73FE;&#x7CFB;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DNA&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;in vivo&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x304C;&#x3001;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x7570;&#x7A2E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x7CFB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;EGFP&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x304C;&#x3001;&#x6570;&#x65E5;&#x306E;&#x7D4C;&#x904E;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x672C;&#x7269;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AB;&#x3092;&#x5927;&#x91CF;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x7D04;1mg&#x306E;/ g&#x306E;&#x53CE;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x7CFB;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x304C;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x51E6;&#x7406;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306B;&#x533B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3057;&#x3001;&#x7C21;&#x5358;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x3092;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7570;&#x7A2E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x767A;&#x73FE;&#x7CFB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x8A55;&#x4FA1;

&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC218;&#xB7C9;&#xACFC; &#xD488;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xC694; &#xB3C4;&#xC804; &#xC774;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8; &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD55C;&#xACC4; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xC218; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBC30;&#xC81C;. &#xC774; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; well-identified &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC885;&#xC774;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xC131;&#xC778; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; electroporation DNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD398;, &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4;, &#xBA87; &#xC77C;&#xAC04;&#xC758; &#xACFC;&#xC815; &#xB3D9;&#xC548; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB378; EGFP &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xB7C9;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBCF8;&#xACA9;&#xC801;&#xC778; &#xBCF5;&#xC81C;&#xBCF8;. &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC57D; 1 mg/g&#xC758; &#xC218;&#xC728; &#xD68D;&#xB4DD;, &#xADF8; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBE44;&#xAD50; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC778; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB294; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD3F4;&#xB529; &#xBC0F; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC7A5;&#xC810;&#xC744; &#xBCF4;&#xC644; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218;&#xC640; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD6C;&#xD604;&#xD560; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860;.

&#xBD84;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xD604; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC778; &#xD3C9;&#xAC00;.

La producci&#xF3;n de prote&#xED;nas de mam&#xED;feros en la cantidad y calidad suficiente para los estudios estructurales y funcionales es un reto importante en la biolog&#xED;a. Limitaciones intr&#xED;nsecas de la levadura y los sistemas de expresi&#xF3;n bacterianos impedir su uso para la s&#xED;ntesis de un n&#xFA;mero significativo de las prote&#xED;nas de mam&#xED;feros. Esto crea la necesidad de sistemas de expresi&#xF3;n bien identificados basados &#x200B;&#x200B;en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero. En este trabajo se demuestra que los adultos del m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico de mam&#xED;feros, transfectadas in vivo mediante electroporaci&#xF3;n con pl&#xE1;smidos de ADN, es un excelente sistema de heter&#xF3;loga mam&#xED;feros expresi&#xF3;n de la prote&#xED;na. Mediante el uso de la EGFP prote&#xED;na fluorescente como un modelo, se muestra que las fibras musculares expresar, durante el curso de unos pocos d&#xED;as, grandes cantidades de copias aut&#xE9;nticas de prote&#xED;nas transg&#xE9;nicas. Los rendimientos de aproximadamente 1 mg / g de tejido se obtuvieron, comparables a los de otros sistemas de expresi&#xF3;n. La participaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros adultos asegura un ambiente &#xF3;ptimo para el plegamiento de prote&#xED;nas adecuada y el tratamiento. Todas estas ventajas se complementan de una metodolog&#xED;a que sea de acceso universal a los investigadores biom&#xE9;dicos y f&#xE1;cil de implementar.

Evaluaci&#xF3;n cuantitativa de m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico de mam&#xED;feros como un sistema de prote&#xED;na Expresi&#xF3;n heter&#xF3;loga

&#x4E24;&#x4E2A;&#x6DF7;&#x5408;&#x7535;&#x538B;&#x611F;&#x5E94;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x819C;&#x6F5C;&#x5728;&#x66F4;&#x6539;&#x8BB0;&#x5F55;&#x5728;&#x6A2A;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF; (TTS) &#x548C;&#x6210;&#x5E74;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x3002;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; Farnesylated &#x6216; ECFP (&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-F &#x548C; ECFP F) &#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E0D;&#x52A8;&#x97F3;&#x54C1;&#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x548C;&#x975E;&#x8367;&#x5149; (dipicrylamine [&#x653F;&#x6CBB;&#x90E8;]&#xFF09; &#x6216;&#x8367;&#x5149;&#x706F; (oxonol &#x67D3;&#x6599; DiBAC(4)(5)) &#x4EB2;&#x8102;&#x6027;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50;&#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x79FB;&#x52A8;&#x80FD;&#x6E90;&#x53D7;&#x4F17;&#x3002;&#x5C48;&#x808C;&#x8171;&#x77ED; (FDB) &#x808C;&#x808C;&#x8089;&#x88AB;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;-F &#x548C; pECFP F.&#x4F53;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x8F6C;&#x67D3;Farnesylated &#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684; TTS &#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#xFF0C;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x5149;&#x5B66;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECE;&#x4EE3;&#x987F;&#x548C;&#x5E73;&#x534F;&#x5B9A; &#x300B; &#x88AB;&#x547D;&#x540D;&#x4E3A; QRET &#x77AC;&#x53D8;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x533A;&#x522B;&#x4E8E;&#x97F3;&#x54C1;&#x77AC;&#x53D8;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4F7F;&#x7528; DiBAC(4)(5)&#x3002;DeltaF/F QRET &#x77AC;&#x6001;&#x8BF1;&#x53D1;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x671F;&#x662F;&#x4E24;&#x500D;&#x5927;&#x5149;&#x7EA4;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-F &#xFF08;3.6%&#x4E0E; 7.1%&#xFF09; &#x8868;&#x793A; ECFP F &#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5728;&#x97F3;&#x54C1;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x793A;&#x8303;&#x3002;&#x7535;&#x538B;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x7684; QRET &#x548C;&#x97F3;&#x54C1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x88AB;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E3A;&#x5BF9;&#x5E94;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x5E26;&#x7535;&#x7684;&#x53D7;&#x4F17;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5F53;&#x524D;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4E2D;&#x7684;&#x975E;&#x7EBF;&#x6027;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6E05;&#x5355;&#x3002;&#x4E3A;&#x53D1;&#x5C55;&#x5BA1;&#x6279;&#x5730;&#x533A;&#x56FE;&#xFF0C;&#x7535;&#x6C14;&#x548C; QRET &#x6570;&#x636E;&#x7531;&#x7535;&#x8377;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E38;&#x6570;&#x5728;&#x5F55;&#x5F97;&#x6CBE; DiBAC(4)(5) &#x5C55;&#x89C8; DeltaF/F &#x632F;&#x5E45;&#x9AD8;&#x8FBE; 28%&#xFF0C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684; 0.6 &#x5973;&#x58EB;&#x97F3;&#x54C1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x5F84;&#x5411;&#x7535;&#x7F06;&#x6A21;&#x578B;&#x6A21;&#x62DF;&#x9884;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x4E0A;&#x5347;&#x9636;&#x6BB5;&#x662F;&#x6BD4;&#x90A3;&#x4E9B; QRET &#x4FE1;&#x53F7;&#x901F;&#x5EA6;&#x6162;&#x3002;&#x6A21;&#x578B;&#x6A21;&#x62DF;&#x7535;&#x8377;&#x79FB;&#x4F4D;&#x7684; 1.6 ms &#x4E3A;&#x4E86;&#x9884;&#x6D4B;&#x5F53;&#x524D;&#x548C;&#x70E6;&#x607C;&#x6570;&#x636E;&#x9700;&#x8981;&#x65F6;&#x95F4;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x5FEB;&#x901F;&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x7684; TTS &#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x8BD5;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4EB2;&#x8102;&#x6027;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x7528;&#x9014;&#x63D0;&#x4F9B;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

&#x7535;&#x538B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x52A8;&#x6001;&#x97F3;&#x54C1;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4ECE;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x6A2A;&#x5411;&#x795E;&#x6548;&#x3002;

Two hybrid voltage-sensing systems based on fluorescence resonance energy transfer (FRET) were used to record membrane potential changes in the transverse tubular system (TTS) and surface membranes of adult mice skeletal muscle fibers. Farnesylated EGFP or ECFP (EGFP-F and ECFP-F) were used as immobile FRET donors, and either non-fluorescent (dipicrylamine [DPA]) or fluorescent (oxonol dye DiBAC(4)(5)) lipophilic anions were used as mobile energy acceptors. Flexor digitorum brevis (FDB) muscles were transfected by in vivo electroporation with pEGFP-F and pECFP-F. Farnesylated fluorescent proteins were efficiently expressed in the TTS and surface membranes. Voltage-dependent optical signals resulting from resonance energy transfer from fluorescent proteins to DPA were named QRET transients, to distinguish them from FRET transients recorded using DiBAC(4)(5). The peak DeltaF/F of QRET transients elicited by action potential stimulation is twice larger in fibers expressing ECFP-F as those with EGFP-F (7.1% vs. 3.6%). These data provide a unique experimental demonstration of the importance of the spectral overlap in FRET. The voltage sensitivity of QRET and FRET signals was demonstrated to correspond to the voltage-dependent translocation of the charged acceptors, which manifest as nonlinear components in current records. For DPA, both electrical and QRET data were predicted by radial cable model simulations in which the maximal time constant of charge translocation was 0.6 ms. FRET signals recorded in response to action potentials in fibers stained with DiBAC(4)(5) exhibit DeltaF/F amplitudes as large as 28%, but their rising phase was slower than those of QRET signals. Model simulations require a time constant for charge translocation of 1.6 ms in order to predict current and FRET data. Our results provide the basis for the potential use of lipophilic ions as tools to test for fast voltage-dependent conformational changes of membrane proteins in the TTS.

Voltage-dependent dynamic FRET signals from the transverse tubules in mammalian skeletal muscle fibers.

Deux hybrides tension de d&#xE9;tection des syst&#xE8;mes bas&#xE9;s sur le transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance de fluorescence (FRET) ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour enregistrer les modifications du potentiel de membrane dans le syst&#xE8;me tubulaire transversal (TTS) et des membranes de surface de souris adultes des fibres musculaires squelettiques. Farn&#xE9;syl&#xE9;e EGFP ou ECFP (EGFP-F et-F ECFP) ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s comme immobile FRET donateurs, et soit non-fluorescente (dipicrylamine [DPA]) ou fluorescent (oxonol colorant DiBAC (4) (5)) anions lipophiles ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es comme mobile accepteurs d&#x26;#39;&#xE9;nergie. Court fl&#xE9;chisseur des orteils (FDB) des muscles ont &#xE9;t&#xE9; transfect&#xE9;es par &#xE9;lectroporation in vivo avec pEGFP-F et-F pECFP. Farn&#xE9;syl&#xE9;e prot&#xE9;ines fluorescentes ont &#xE9;t&#xE9; efficacement exprim&#xE9;e dans les TTS et les membranes de surface. Voltage-d&#xE9;pendants des signaux optiques r&#xE9;sultant du transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance parmi les prot&#xE9;ines fluorescentes &#xE0; la DPA ont &#xE9;t&#xE9; nomm&#xE9;s transitoires QRET, pour les distinguer des FRET transitoires enregistr&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide DiBAC (4) (5). Le pic DeltaF / F de transitoires QRET provoqu&#xE9; par la stimulation du potentiel d&#x26;#39;action est deux fois plus grande dans les fibres exprimant ECFP-F que ceux &#xE0; l&#x26;#39;EGFP-F (7,1% vs 3,6%). Ces donn&#xE9;es fournissent une d&#xE9;monstration exp&#xE9;rimentale unique de l&#x26;#39;importance du chevauchement spectral dans FRET. La sensibilit&#xE9; de tension de QRET et FRET signaux a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; &#xE0; correspondre &#xE0; la translocation d&#xE9;pendant de la tension des accepteurs charg&#xE9;es, qui manifeste en tant que composants non lin&#xE9;aires dans les enregistrements actuels. Pour DPA, les deux donn&#xE9;es &#xE9;lectriques et QRET ont &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;dits par des simulations de mod&#xE8;les radiaux de c&#xE2;bles dans lequel la dur&#xE9;e maximale constante de la translocation de charge &#xE9;tait de 0,6 ms. FRET signaux enregistr&#xE9;s en r&#xE9;ponse &#xE0; des potentiels d&#x26;#39;action dans les fibres color&#xE9;es avec DiBAC (4) (5) pr&#xE9;sentent DeltaF / F amplitudes aussi grand que 28%, mais leur phase de mont&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; plus lente que celles des signaux QRET. Les simulations du mod&#xE8;le n&#xE9;cessite une constante de temps pour la translocation de charge de 1,6 ms afin de pr&#xE9;dire actuelle et FRET donn&#xE9;es. Nos r&#xE9;sultats fournissent la base pour l&#x26;#39;utilisation potentielle des ions lipophiles comme des outils pour tester rapidement voltage-d&#xE9;pendants des changements de conformation des prot&#xE9;ines membranaires dans les TTS.

Voltage-d&#xE9;pendants dynamique FRET signaux en provenance des tubules transverses dans les fibres musculaires squelettiques de mammif&#xE8;res

Zwei Hybrid Spannung-sensing Systeme basierend auf Fluoreszenz Resonanz Energietransfer (FRET) wurden zur Membrane m&ouml;glichen Ver&auml;nderungen in der Querrichtung R&ouml;hrensystem (TTS) und Oberfl&auml;che Membranen der Erwachsenen M&auml;usen skelettartiger Muskel Fasern aufnehmen. Farnesylated EGFP oder ECFP (EGFP-F und ECFP-F) dienten als unbeweglich FRET-Geber, und nicht-fluoreszierender (Dipicrylamine [DPA]) oder fluoreszierende (Oxonol Farbstoff DiBAC(4)(5)) lipophile Anionen als mobile Energie Acceptors verwendet wurden. Musculus Flexor Digitorum Brevis (FDB) Muskeln wurden durch in-vivo Electroporation mit pEGFP-F und pECFP-F. transfected. Farnesylated fluoreszierende Proteine wurden effizient im TTS und Oberfl&auml;che Membranen ge&auml;u&szlig;ert. Spannung-abh&auml;ngigen optische Signale aufgrund Resonanz-Energie-&Uuml;bertragung aus fluoreszierende Proteine zu DPA hie&szlig;en QRET Transienten, zur Unterscheidung von FRET-Transienten mit DiBAC(4)(5) aufgezeichnet. Der Gipfel DeltaF/F von QRET Transienten hervorgerufen durch Aktionspotential Stimulation ist zweimal gr&ouml;&szlig;ere Fasern ECFP-F als diejenigen mit EGFP-F (7,1 % vs. 3,6 %) zum Ausdruck zu bringen. Diese Daten liefern eine einzigartige experimentelle Beweis f&uuml;r die Bedeutung der spektrale &Uuml;berlappung in FRET. Die Spannung-Empfindlichkeit von QRET und FRET Signalen wurde demonstriert, um die Spannung-abh&auml;ngige Translokation von den aufgeladenen Acceptors entsprechen, die als nichtlineare Komponenten in aktuellen Datens&auml;tze zu manifestieren. DPA beide elektrische und QRET Daten wurden durch radiale Kabel Modellsimulationen, in denen die maximale Dauer-Konstante der kostenlos Translokation 0,6 ms-FRET-Signale aufgezeichnet als Reaktion auf Aktionspotentiale in Fasern gef&auml;rbt mit DiBAC(4)(5) Ausstellung DeltaF/F Amplituden so gro&szlig; wie 28 war % vorhergesagt, aber ihre steigende Phase war langsamer als die der QRET Signale. Modellsimulationen erfordern eine Zeitkonstante f&uuml;r kostenlos Translokation von 1,6 ms um aktuelle Vorhersagen und FRET Daten. Unsere Ergebnisse bilden die Grundlage f&uuml;r die m&ouml;gliche Verwendung von lipophilen Ionen als Werkzeuge f&uuml;r schnelle Spannung-abh&auml;ngigen Konformationsver&auml;nderungen von Membranproteinen in der TTS zu testen.

Spannung-abh&auml;ngigen dynamische Signale FRET von transversalen Tubuli in S&auml;ugetier-Skelett Muskelfasern.

Due rilevazione tensione sistemi ibridi basati sulla fluorescenza resonance energy transfer (FRET) sono stati utilizzati per registrare la membrana potenziali modifiche nel sistema tubolare trasversa (TTS) e la superficie delle membrane delle fibre muscolari scheletriche topi adulti. Farnesylated EGFP o ECFP (F-EGFP ed ECFP-F) sono stati utilizzati come immobile FRET donatori e non fluorescenti (dipicrylamine [DPA]) o fluorescenti (tintura oxonol DiBAC(4)(5)) anioni lipofilici sono stati utilizzati come accettori di energia mobile. Muscoli flessori estensore brevis (FDB) erano transfected dall&#39;elettroporazione in vivo con pEGFP-F e pECFP-F. Le proteine fluorescenti Farnesylated erano efficacemente espressa nel TTS e la superficie delle membrane. Segnali ottici voltaggio-dipendenti, derivanti dal trasferimento di energia per risonanza da proteine fluorescenti a DPA sono stati nominati transitori QRET, per distinguerli dai transitori FRET registrati utilizzando DiBAC(4)(5). Il picco DeltaF/F transitori QRET provocata dalla stimolazione del potenziale d&#39;azione &egrave; due volte pi&ugrave; grande in fibre esprimendo ECFP-F come quelli con EGFP-F (7,1% vs. 3,6%). Questi dati forniscono una dimostrazione sperimentale unico dell&#39;importanza della sovrapposizione spettrale in FRET. La sensibilit&agrave; di tensione dei segnali QRET e FRET &egrave; stata dimostrata da corrispondere per la traslocazione di voltaggio-dipendenti di accettori di caricate, che si manifestano come componenti non lineari nel record corrente. Per DPA, entrambi elettrici e dati QRET erano previsto da simulazioni di modello cavo radiale in cui la costante di tempo massimo di traslocazione carica era 0,6 ms FRET segnali registrati in risposta al potenziale d&#39;azione nelle fibre colorate con DiBAC(4)(5) mostra ampiezze DeltaF/F grande come il 28%, ma la fase di lievitazione &egrave; stato pi&ugrave; lento rispetto a quelli dei segnali QRET. Modello simulazioni richiedono una costante di tempo per traslocazione carica di 1,6 ms al fine di prevedere la corrente e dati si corroda. I nostri risultati forniscono la base per l&#39;uso potenziale di ioni lipofilici come strumenti per il test di veloce voltaggio-dipendente cambiamenti conformazionali delle proteine di membrana in TTS.

Dipendente dalla tensione dinamica FRET segnali da tubuli trasversali nelle fibre del muscolo scheletrici dei mammiferi.

&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#xFF08;FRET&#xFF09;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;2&#x3064;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x96FB;&#x5727;&#x691C;&#x77E5;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x6A2A;&#x884C;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x306E;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x5909;&#x5316;&#xFF08;TTS&#xFF09;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x819C;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E0D;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;FRET&#x3001;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x975E;&#x86CD;&#x5149;&#xFF08;dipicrylamine [DPA]&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x86CD;&#x5149;&#xFF08;&#x30AA;&#x30AD;&#x30BD;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x8272;&#x7D20;DiBAC&#xFF08;4&#xFF09;&#xFF08;5&#xFF09;&#xFF09;&#x89AA;&#x6CB9;&#x6027;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x304C;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EB;&#x30CD;&#x30B7;&#x30EB;EGFP&#x307E;&#x305F;&#x306F;ECFP&#xFF08;EGFP-F&#x3068;ECFP-F&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3002;&#x77ED;&#x8DBE;&#x5C48;&#xFF08;FDB&#xFF09;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x306F;&#x3001;pEGFP-F&#x3068;pECFP-F&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;in vivo&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EB;&#x30CD;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;TTS&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x819C;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002; DPA&#x3078;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306F;&#x3001;DiBAC&#xFF08;4&#xFF09;&#xFF08;5&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;FRET&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;QRET&#x904E;&#x6E21;&#x547D;&#x540D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;QRET&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;DeltaF / F&#x306F;&#x3001;EGFP-F&#xFF08;3.6&#xFF05;&#x5BFE;7.1&#xFF05;&#xFF09;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;ECFP-F&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;2&#x500D;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;FRET&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x91CD;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x96FB;&#x5727;QRET&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3068;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;FRET&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x7DDA;&#x5F62;&#x6210;&#x5206;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x73FE;&#x308C;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30EC;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x5185;&#x306E;&#x8377;&#x96FB;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; DPA&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;QRET&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x8377;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x6642;&#x5B9A;&#x6570;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x6642;&#x9593;&#x306F;0.6&#x30DF;&#x30EA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E9;&#x30B8;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B1;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 28&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x5927;&#x304D;&#x3055;DiBAC&#xFF08;4&#xFF09;&#xFF08;5&#xFF09;&#x5C55;&#x793A;DeltaF / F&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3067;&#x67D3;&#x8272;&#x3057;&#x305F;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;FRET&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;QRET&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x9045;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3068;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;FRET&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;1.6 ms&#x306E;&#x96FB;&#x8377;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6642;&#x5B9A;&#x6570;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;TTS&#x306E;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x901F;&#x3044;&#x96FB;&#x5727;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x200B;&#x200B;&#x3057;&#x3066;&#x89AA;&#x6CB9;&#x6027;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x96FB;&#x4F4D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x52D5;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x6A2A;&#x7D30;&#x7BA1;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x3001;FRET

&#xB450; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xC804;&#xC555; &#xAC10;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET) &#xAC00;&#xB85C; &#xAD00; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (TTS)&#xC640; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB9C9; &#xBCC0;&#xD654; &#xAE30;&#xB85D; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. Farnesylated EGFP &#xB610;&#xB294; ECFP (EGFP-F&#xC640; ECFP F) &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xAE30; &#xD798; &#xB4DC;&#xB294; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC640; &#xBE44; &#xD615;&#xAD11; (dipicrylamine [DPA]) &#xB610;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; (oxonol &#xC5FC;&#xB8CC; &#xBE14;&#xB808;&#xBBF8;&#xC26C; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC218;&#xB77D;&#xC790;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; Dibac(4)(5))&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. PECFP F. pEGFP F&#xC640; in vivo electroporation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; flexor digitorum brevis (FDB) &#xADFC;&#xC721; &#xD398; &#xD588;&#xB2E4; Farnesylated &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; TTS&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. DPA &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xAD11; &#xC2E0;&#xD638; Dibac(4)(5)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xB85D; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xACFC;&#xB3C4; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; QRET &#xACFC;&#xB3C4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC120;&#xC815; &#xB410;&#xB2E4;. &#xD53C;&#xD06C;&#xC758; QRET &#xACFC;&#xB3C4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; elicited DeltaF/F ECFP F EGFP f 3.6% &#xB300; (7.1%)&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xB450; &#xBC88; &#xD07D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC911;&#xBCF5;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC758; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB370;&#xBAA8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xB808;&#xCF54;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBE44;&#xC120;&#xD615; &#xAD6C;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xCDA9;&#xC804;&#xB41C; &#xC218;&#xB77D;&#xC790; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xC804; &#xC88C;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; QRET &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xC555; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. DPA, &#xC704;&#xD574; &#xBAA8;&#xB450; &#xC804;&#xAE30; &#xBC0F; QRET &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xCDA9;&#xC804; &#xC804; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xC218;&#xB294; 0.6 &#xC591; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xC2E0;&#xD638; DiBAC(4)(5) &#xC804;&#xC2DC;&#xB85C; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC9C4; DeltaF/F &#xC9C4;&#xD3ED; 28% &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xC561;&#xC158; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; &#xBC29;&#xC0AC;&#xD615; &#xCF00;&#xC774;&#xBE14; &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; QRET &#xC2E0;&#xD638; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB290;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB378; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD604;&#xC7AC; &#xC608;&#xCE21; &#xD558; &#xACE0; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; 1.6 ms&#xC758; &#xCDA9;&#xC804; &#xC804; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xC218;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE60;&#xB978; &#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; TTS&#xC5D0; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC62E;&#xACA8;&#xC9C0;&#xB294; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;.

&#xC804;&#xC555; &#xC885;&#xC18D; &#xB3D9;&#xC801; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xAC00;&#xB85C; tubules&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638;.

Dos h&#xED;bridos de detecci&#xF3;n de voltaje de los sistemas basados &#x200B;&#x200B;en la transferencia de energ&#xED;a de resonancia fluorescente (FRET) se utiliza para registrar los cambios de membrana potenciales en el sistema tubular transversal (TTS) y de las membranas superficiales de ratones adultos fibras del m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico. Farnesylated EGFP o ECFP (EGFP-F y ECFP F-) fueron utilizados como inm&#xF3;vil FRET donantes, y, o bien no fluorescente (dipicrylamine [DPA]) o fluorescente (oxonol colorante DiBAC (4) (5)) aniones lipof&#xED;licos se utilizaron como m&#xF3;vil aceptores de energ&#xED;a. Flexor corto de los dedos (FDB), los m&#xFA;sculos fueron transfectadas por electroporaci&#xF3;n in vivo con pEGFP-F y F-pECFP. Farnesiladas prote&#xED;nas fluorescentes se expresaron de manera eficiente en el TTS y las membranas de superficie. Dependientes de voltaje se&#xF1;ales &#xF3;pticas que resultan de la transferencia de energ&#xED;a de resonancia de las prote&#xED;nas fluorescentes a DPA fueron nombrados transitorios QRET, para distinguirlos de FRET transitorios grabados con DiBAC (4) (5). El pico DeltaF / F de los transitorios QRET provocados por la estimulaci&#xF3;n del potencial de acci&#xF3;n es dos veces mayor en las fibras que expresan ECFP-F como aquellos con EGFP-F (7,1% vs 3,6%). Estos datos proporcionan una demostraci&#xF3;n &#xFA;nica experimental de la importancia de la superposici&#xF3;n del espectro en FRET. La sensibilidad de voltaje QRET y FRET se&#xF1;ales se demostr&#xF3; que corresponden a la translocaci&#xF3;n dependiente de la tensi&#xF3;n de los aceptores cargados, que se manifiestan como componentes no lineales en los registros actuales. Para DPA, tanto los datos el&#xE9;ctricos y QRET fueron predichas por las simulaciones de cables radiales modelo en el que el tiempo m&#xE1;ximo constante de desplazamiento de carga fue de 0,6 ms. FRET se&#xF1;ales registradas en respuesta a los potenciales de acci&#xF3;n en las fibras te&#xF1;idas con DiBAC (4) (5) presentan DeltaF / F amplitud tan grande como el 28%, pero su fase ascendente era m&#xE1;s lento que los de las se&#xF1;ales de QRET. Los modelos de simulaci&#xF3;n requieren una constante de tiempo para el desplazamiento de carga de 1,6 m con el fin de predecir la actual y FRET datos. Nuestros resultados proporcionan la base para el uso potencial de los iones lipof&#xED;licas como herramientas para poner a prueba para una r&#xE1;pida dependientes de voltaje cambios conformacionales de las prote&#xED;nas de membrana en el TTS.

Dependiente de la tensi&#xF3;n din&#xE1;mica de FRET se&#xF1;ales procedentes de los t&#xFA;bulos transversales de las fibras musculares esquel&#xE9;ticas de mam&#xED;feros

Ca(2+) &#x53D1;&#x5E03;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4ECE;&#x6B63;&#x5E38;&#x548C; mdx &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5C5E;&#x6027;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x70ED;&#x70B9;&#x63A2;&#x6D4B;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x7ECF;&#x6307;&#x6807;&#x5965;&#x5DE5;&#x8054; 5N &#x7528;&#x6765;&#x8BB0;&#x5F55;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D;&#x8BF1;&#x53D1;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x8FDE;&#x7EED;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x9694;&#x5F00; 200 &#x591A;&#x4E2A;&#x808C;&#x8282;&#x7684; FDB &#x7EA4;&#x7EF4;&#x6CBF; nm &#x52A0;&#x8F7D;&#x4E0E; 10-&#x548C; 30 &#x6BEB;&#x7C73; EGTA&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x77AC;&#x53D8;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4;&#x91CD;&#x5EFA;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9F20;&#x6807;&#x682A; Ca(2+) &#x91CA;&#x653E;&#x5730;&#x70B9;&#x5468;&#x56F4;&#x589E;&#x52A0;&#x8367;&#x5149;&#x5FAE;&#x533A;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x5728; mdx &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7ECF;&#x5FAE;&#x533A;&#x88AB;&#x5B9A;&#x671F;&#x95F4;&#x9694;&#x6CBF;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F74;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x770B;&#x5230;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5982;&#x6B64;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x5236;&#x5242;&#x88AB;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5728; 10 &#x6BEB;&#x7C73; EGTA &#x7ECF;&#x5FAE;&#x533A;&#x89C4;&#x6A21;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#xFF0C;&#x662F;&#x66F4;&#x5E7F;&#x7684; mdx &#x7EA4;&#x7EF4;&#x6BD4;&#x5728;&#x63A7;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5F55;&#x5F97;&#x7684; mdx &#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5185;&#x808C;&#x8282;&#x7684;&#x9009;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684; Ca(2+) &#x4F9D;&#x8D56;&#x8367;&#x5149;&#x77AC;&#x53D8;&#x4E86;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x66F4;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x4E5F;&#x6BD4;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x540C;&#x884C;&#x4E2D;&#x6B63;&#x5E38;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8F83;&#x6162;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728; 30 &#x6BEB;&#x7C73; EGTA &#x53D6;&#x6D88;&#x4E86;&#x8BB0;&#x5F55;&#x5728; mdx &#x548C;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5728;&#x7684;&#x632F;&#x5E45;&#x53CA;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5FAE;&#x533A;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x59CB;&#x7EC8;&#x8868;&#x660E; Ca(2+) &#x91CA;&#x653E;&#x901A;&#x91CF;&#x8BA1;&#x7B97;&#x4ECE; mdx &#x5149;&#x7EA4;&#x4E2D;&#x91CA;&#x653E;&#x7F51;&#x7AD9;&#x662F;&#x5173;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5747;&#x5300;&#x53D7;&#x635F;&#x3002;Ca(2+) &#x91CA;&#x653E;&#x51CF;&#x5C11;&#x662F;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x4F7F;&#x7528;&#x5168;&#x7403;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6280;&#x672F;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;

&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x6027;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x9499;&#x5FAE;&#x533A;&#x4E00;&#x7EA7;&#x663E;&#x793A;&#x6539;&#x5EFA;&#x3002;

The spatiotemporal properties of the Ca(2+)-release process in skeletal muscle fibers from normal and mdx fibers were determined using the confocal-spot detection technique. The Ca(2+) indicator OGB-5N was used to record action potential-evoked fluorescence signals at consecutive locations separated by 200 nm along multiple sarcomeres of FDB fibers loaded with 10- and 30-mM EGTA. Three-dimensional reconstructions of fluorescence transients demonstrated the existence of microdomains of increased fluorescence around the Ca(2+)-release sites in both mouse strains. The Ca(2+) microdomains in mdx fibers were regularly spaced along the fiber axis, displaying a distribution similar to that seen in normal fibers. Nevertheless, both preparations differed in that in 10-mM EGTA Ca(2+) microdomains had smaller amplitudes and were wider in mdx fibers than in controls. In addition, Ca(2+)-dependent fluorescence transients recorded at selected locations within the sarcomere of mdx muscle fibers were not only smaller, but also slower than their counterparts in normal fibers. Notably, differences in the spatial features of the Ca(2+) microdomains recorded in mdx and normal fibers, but not in the amplitude and kinetics of the Ca(2+) transients, were eliminated in 30-mM EGTA. Our results consistently demonstrate that Ca(2+)-release flux calculated from release sites in mdx fibers is uniformly impaired with respect to those normal fibers. The Ca(2+)-release reduction is consistent with that previously measured using global detection techniques.

Dystrophic skeletal muscle fibers display alterations at the level of calcium microdomains.

Les propri&#xE9;t&#xE9;s spatio-temporelles de la Ca (2 +) processus de lib&#xE9;ration dans les fibres musculaires squelettiques de fibres normales et mdx ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;termin&#xE9;s en utilisant la technique de d&#xE9;tection confocale place. Le Ca (2 +) indicateur de l&#x26;#39;OGB-5N a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour enregistrer des potentiels d&#x26;#39;action &#xE9;voqu&#xE9;s par les signaux de fluorescence &#xE0; des endroits successifs s&#xE9;par&#xE9;s par 200 nm le long sarcom&#xE8;res multiples de fibres FDB charg&#xE9;s avec 10 et 30 mM d&#x26;#39;EGTA-. Des reconstructions tridimensionnelles des transitoires de fluorescence ont d&#xE9;montr&#xE9; l&#x26;#39;existence de microdomaines de fluorescence accrue autour des (2 +) Ca lib&#xE9;ration des sites dans les deux souches de souris. Le Ca (2 +) dans les fibres mdx microdomaines ont &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;guli&#xE8;rement espac&#xE9;s le long de l&#x26;#39;axe des fibres, affichant une r&#xE9;partition similaire &#xE0; celle observ&#xE9;e dans les fibres normales. N&#xE9;anmoins, les deux pr&#xE9;parations diff&#xE8;rent en ce que dans 10 mM EGTA Ca (2 +) microdomaines eu plus petite amplitude et sont plus larges dans les fibres mdx que chez les t&#xE9;moins. En outre, Ca (2 +)-d&#xE9;pendantes transitoires de fluorescence enregistr&#xE9;s &#xE0; des emplacements choisis dans le sarcom&#xE8;re des fibres musculaires mdx &#xE9;taient non seulement plus petits, mais aussi plus lents que leurs homologues dans les fibres normales. Notamment, les diff&#xE9;rences dans les caract&#xE9;ristiques spatiales de la Ca (2 +) microdomaines enregistr&#xE9;es dans mdx et les fibres normales, mais pas dans l&#x26;#39;amplitude et la cin&#xE9;tique de la Ca (2 +) transitoires, ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;limin&#xE9;s en 30-mM EGTA. Nos r&#xE9;sultats montrent de fa&#xE7;on constante que les Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration de flux calcul&#xE9;es &#xE0; partir de sites de lib&#xE9;ration de fibres mdx est uniform&#xE9;ment alt&#xE9;r&#xE9;e par rapport &#xE0; ces fibres normales. Le Ca (2 +) &#xE0; lib&#xE9;ration de r&#xE9;duction est conforme &#xE0; celle mesur&#xE9;e pr&#xE9;c&#xE9;demment en utilisant des techniques de d&#xE9;tection mondiaux.

Dystrophiques fibres musculaires squelettiques Afficher alt&#xE9;rations au niveau des microdomaines calciques

Die raumzeitliche Eigenschaften der Ca(2+)-Releaseprozess skelettartiger Muskel Fasern aus Normal und Mdx-Fasern wurden mit der konfokalen-Spot Detection-Technik bestimmt. Der Ca(2+)-Indikator OGB-5N wurde verwendet, um das Aktionspotential hervorgerufen Fluoreszenzsignale an aufeinander folgenden Standorten durch 200 getrennt aufnehmen nm entlang mehreren Sarkomeren FDB Fasern geladen mit 10 und 30-mM-EGTA. Dreidimensionale Rekonstruktionen von Fluoreszenz Transienten bewiesen die Existenz von Microdomains erh&ouml;hte Fluoreszenz rund um die Ca(2+)-Version-Standorte in beide Maus-St&auml;mme. Die Ca(2+) Microdomains in Mdx-Fasern wurden regelm&auml;&szlig;ig entlang der Faserachse, Darstellung einer Distribution wie man bei normalen Fasern verteilt. Dennoch unterschied sich beide Pr&auml;parate, in dem in 10-mM-EGTA-Ca(2+) Microdomains kleinere Amplituden hatte und breiter in Mdx-Fasern als in Steuerelementen waren. Dar&uuml;ber hinaus wurden Ca(2+)-abh&auml;ngige Fluoreszenz Transienten an ausgew&auml;hlten Standorten innerhalb der Sarkomer Mdx Muskelfasern erfasst nicht nur kleinere, aber auch langsamer als ihre Gegenst&uuml;cke in normalen Fasern. Insbesondere wurden Unterschiede in der r&auml;umlichen Features von der Ca(2+) Microdomains aufgezeichnet in Mdx und normalen Fasern, aber nicht in die Amplitude und die Kinetik der transienten Ca(2+) in 30-mM-EGTA eliminiert. Unsere Ergebnisse zeigen durchweg, dass Ca(2+)-Freigabe-Flussmittel, gerechnet ab Ver&ouml;ffentlichung Websites in Mdx-Fasern in Bezug auf die normalen Fasern gleichm&auml;&szlig;ig beeintr&auml;chtigt wird. Die Reduzierung der Ca(2+)-Version entspricht, die zuvor mit globalen Erkennungsverfahren gemessen.

Dystrophische skelettartiger Muskel Fasern zeigen Ver&auml;nderungen auf der Ebene der Kalzium-Microdomains.

Le propriet&agrave; del processo Ca(2+)-rilascio nelle fibre muscolari scheletriche da fibre normali e mdx spatiotemporal sono state determinate utilizzando la tecnica di rilevazione confocal-spot. L&#39;indicatore Ca(2+) OGB-5N &egrave; stato utilizzato per registrare i segnali di fluorescenza di azione potenziale evocato in posizioni consecutive separate da 200 nm lungo pi&ugrave; sarcomeri di fibre FDB caricato con 10 e 30-mM EGTA. Ricostruzioni tridimensionali dei transitori di fluorescenza ha dimostrato l&#39;esistenza di microdomains di fluorescenza maggiore intorno ai siti Ca(2+)-rilascio in entrambi i ceppi del mouse. I microdomains Ca(2+) in mdx fibre erano regolarmente spaziati lungo l&#39;asse della fibra, mostrando una distribuzione simile a quello visto in fibre normali. Tuttavia, entrambi preparati differivano in quanto in 10 mM EGTA Ca(2+) microdomains aveva pi&ugrave; piccole ampiezze ed erano pi&ugrave; ampia in mdx fibre rispetto a controlli. Inoltre, transitori di fluorescenza Ca(2+)-dipendente registrati in localit&agrave; selezionate all&#39;interno del sarcomero delle fibre muscolari mdx erano non solo pi&ugrave; piccoli, ma anche pi&ugrave; lento rispetto alle loro controparti nelle fibre normali. In particolare, le differenze nelle caratteristiche spaziali dei microdomains Ca(2+) registrato in mdx e fibre normali, ma non in ampiezza e cinetica dei transienti Ca(2+), sono state eliminate da 30 mM EGTA. Costantemente i nostri risultati dimostrano che Ca(2+)-rilascio flusso calcolato da siti di rilascio in fibre mdx &egrave; compromessa in modo uniforme rispetto a quelle normali fibre. La riduzione di Ca(2+)-rilascio &egrave; coerenza con quella misurata in precedenza utilizzando tecniche di rilevamento globale.

Fibre del muscolo scheletrici distrofiche visualizzare alterazioni a livello del calcio microdomains.

&#x6B63;&#x5E38;&#x304A;&#x3088;&#x3073;MDX&#x7E4A;&#x7DAD;&#x304B;&#x3089;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30B9;&#x30DD;&#x30C3;&#x30C8;&#x691C;&#x51FA;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x304A;&#x3088;&#x3073;30 mM&#x306E;EGTA  -  CA&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;OGB-5N&#x306F;&#x3001;FDB 10&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7B4B;&#x7BC0;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;200nm&#x3067;&#x533A;&#x5207;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x9023;&#x7D9A;&#x3057;&#x305F;&#x5834;&#x6240;&#x3067;&#x6D3B;&#x52D5;&#x96FB;&#x4F4D;&#x8A98;&#x767A;&#x86CD;&#x5149;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x904E;&#x6E21;&#x73FE;&#x8C61;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5468;&#x56F2;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MDX&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5B9A;&#x671F;&#x7684;&#x306B;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x8EF8;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x9593;&#x9694;&#x3092;&#x3042;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;10 mM&#x306E;EGTA&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x70B9;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x304C;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x632F;&#x5E45;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;MDX&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;MDX&#x306E;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306E;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30E1;&#x30A2;&#x5185;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5834;&#x6240;&#x3067;&#x8A18;&#x9332;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x9045;&#x304F;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;MDX&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x632F;&#x5E45;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x306B;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;30 mM&#x306E;EGTA&#x306B;&#x6392;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;MDX&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304C;&#x5747;&#x4E00;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x306E;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x524A;&#x6E1B;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x691C;&#x51FA;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC815;&#xC0C1; &#xBC0F; mdx &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; spatiotemporal &#xC18D;&#xC131; confocal &#xC790;&#xB9AC; &#xD0D0;&#xC9C0; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;. Ca(2+) &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30; OGB 5N 200&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC804;&#xC704;&#xB97C; &#xAC16;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xAE30;&#xB85D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB530;&#xB77C; FDB &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; sarcomeres nm&#xC640; 10-&#xC640;-30mm EGTA &#xB85C;&#xB4DC;. &#xD615;&#xAD11; &#xACFC;&#xB3C4;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; reconstructions &#xB450; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xC790;&#xB8CC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC8FC;&#xC704; &#xC99D;&#xAC00; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; microdomains&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. Mdx &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) microdomains &#xC815;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC77C;&#xBC18; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF8; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC12C;&#xC720; &#xCD95; &#xAC04;&#xACA9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xB450; &#xC900;&#xBE44;&#xB294; 10 mM EGTA Ca(2+) microdomains &#xC791;&#xC740; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; &#xD558; &#xACE0; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; mdx &#xC12C;&#xC720; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB113;&#xC740; &#xD588;&#xB2E4; &#xB2EC;&#xB790;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, mdx &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;&#xC758;&#xB294; sarcomere &#xB0B4;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; Ca(2+) &#xC885;&#xC18D; &#xD615;&#xAD11; &#xACFC;&#xB3C4; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC791;&#xC740;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xC12C;&#xC720; &#xB4E4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB290;&#xB9B0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, mdx &#xBC0F; &#xC77C;&#xBC18; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC9C4;&#xD3ED;&#xACFC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4;&#xC758; &#xAE30;&#xB85D; &#xB41C; Ca(2+) microdomains&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; 30 m m EGTA&#xC5D0;&#xC11C; &#xD0C8;&#xB77D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xD50C;&#xB7ED;&#xC2A4; mdx &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACC4;&#xC0B0; &#xB41C; &#xADF8; &#xC77C;&#xBC18; &#xC12C;&#xC720;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xADE0;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xCE21;&#xC815; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Dystrophic &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720; &#xCE7C;&#xC298; microdomains &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las propiedades espacio-temporales de la Ca (2 +)-el proceso de liberaci&#xF3;n de fibras de m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico de las fibras normales y mdx se determinaron mediante la t&#xE9;cnica de detecci&#xF3;n confocal in situ. El Ca (2 +) indicador de OGB-5N se utiliza para registrar los potenciales de acci&#xF3;n evocada por las se&#xF1;ales de fluorescencia en los lugares consecutivos, separados por 200 millas n&#xE1;uticas a lo largo de varios sarc&#xF3;meros de las fibras de FDB cargados con 10 - y EGTA 30 mM. Reconstrucciones tridimensionales de los transitorios de fluorescencia demostr&#xF3; la existencia de microdominios de mayor intensidad de fluorescencia en torno a los Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n en los sitios de las dos cepas de rat&#xF3;n. El Ca (2 +) microdominios en fibras mdx estaban espaciados regularmente a lo largo del eje de la fibra, que muestra una distribuci&#xF3;n similar a la observada en las fibras normales. Sin embargo, ambos preparados difer&#xED;an en que en 10-mM EGTA Ca (2 +) microdominios ten&#xED;an menor amplitud y eran m&#xE1;s anchas en las fibras mdx que en los controles. Adem&#xE1;s, Ca (2 +)-que dependen de los transitorios de fluorescencia registrados en lugares seleccionados en el sarc&#xF3;mero de las fibras musculares mdx no s&#xF3;lo eran m&#xE1;s peque&#xF1;os, pero tambi&#xE9;n m&#xE1;s lento que sus contrapartes en las fibras normales. Notablemente, las diferencias en las caracter&#xED;sticas espaciales de la Ca (2 +) microdominios registrados en MDX y fibras normales, pero no en la amplitud y la cin&#xE9;tica de la Ca (2 +) transitorios, fueron eliminados en 30-mM EGTA. Nuestros resultados demuestran de forma consistente que el Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n flujo calculado a partir de sitios de liberaci&#xF3;n en las fibras mdx est&#xE1; uniformemente afectada con respecto a aquellas fibras normales. El Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n de reducci&#xF3;n es coherente con la que previamente midi&#xF3; utilizando t&#xE9;cnicas globales de detecci&#xF3;n.

Distr&#xF3;ficas las fibras musculares esquel&#xE9;ticas mostrar alteraciones en el &#xE1;mbito de microdominios de calcio

Utrophin &#x548C;&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x5254;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20; &#xFF08;utr(-/-)/mdx) &#x5DF2;&#x63D0;&#x51FA;&#x8981;&#x6BD4; mdx &#x9F20;&#x6807;&#x7684;&#x66F4;&#x597D;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5047;&#x80A5;&#x5927;&#x578B;&#x808C;&#x8425;&#x517B;&#x4E0D;&#x826F;&#x75C7; (DMD)&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x524D;&#x8005;&#x663E;&#x793A;&#x66F4;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x808C;&#x8089;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684; DMD &#x60A3;&#x8005;&#x3002;&#x5728;&#x52A8;&#x4F5C;&#x7535;&#x4F4D; (Ap) &#x548C;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x5355;&#x4E00;&#x3001; &#x91CD;&#x590D;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x6240;&#x8BF1;&#x53D1;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD9;&#x4EFD;&#x6587;&#x4EF6;&#x4E86;&#x89E3;&#x5174;&#x594B;-&#x6536;&#x7F29; (EC) &#x5076;&#x8054;&#x6539;&#x5EFA;&#x6307;&#x51FA;&#x4ECE; mdx &#x548C; utr(-/-)/mdx &#x5C0F;&#x9F20;&#x808C;&#x8089;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E2D;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E0E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4ECE;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x5C0F;&#x9F20;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684; AP &#x5DE5;&#x671F;&#x6BD4;&#x8F83;&#xFF0C;&#x4ECE; mdx &#x548C; utr(-/-)/mdx &#x5C0F;&#x9F20;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5206;&#x4E3A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#xFF1A; &#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E0E; WT &#x6837; Ap (1 &#x7EC4;) &#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E0E;&#x957F;&#x5F97; Ap (&#x7B2C; 2 &#x7EC4;)&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC4; 2 &#x4E2D;&#x6240;&#x5360;&#x7684;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x8F83;&#x5927;&#x7684; utr(-/-)/mdx &#xFF08;36%&#xFF09; &#x6BD4;&#x5728; mdx &#x9F20; (27%)&#xFF0C;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x5355;&#x4E2A;&#x523A;&#x6FC0;&#x627E;&#x6765;&#x540C;&#x6837;&#x4F1A;&#x90C1;&#x95F7; (32-38%&#xFF09;&#xFF0C;&#x5728; utr(-/-)/mdx &#x548C; mdx &#x7EA4;&#x7EF4;&#x4E0E;&#x5316;&#x7EA4;&#x96C6;&#x56E2;&#x65E0;&#x8BBA; WT &#x540C;&#x884C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;100 Hz &#x523A;&#x6FC0;&#x900F;&#x9732;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4ECE; utr(-/-)/mdx &#x9F20;&#xFF0C;&#x7EC4; 1 &#x7EA4;&#x7EF4;&#x5F97;&#x4EE5;&#x7EF4;&#x6301;&#x8D85;&#x8FC7;&#x663E;&#x793A;&#x7A81;&#x7136;&#x9650;&#x5236;&#x751A;&#x81F3;&#x5728;&#x706B;&#x8F66;&#x7684;&#x4E00;&#x5F00;&#x59CB;&#x7684;&#x7B2C; 2 &#x7EC4;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5728;&#x7EC4; 1 &#x548C; 2 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x5DEE;&#x5F02;&#x6210;&#x4E3A;&#x5728; 50 Hz &#x523A;&#x6FC0;&#x51E0;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x660E;&#x663E;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4ECE; utr(-/-)/mdx &#x5C0F;&#x9F20;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x6BD4; mdx &#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x8026;&#x5408;&#xFF0C;&#x6559;&#x7EDF;&#x4F1A;&#x5728;&#x663E;&#x793A;&#x66F4;&#x6301;&#x4E45;&#x7684;&#x6539;&#x5EFA;&#x3002;

&#x5728; mdx &#x548C; utrophin/&#x6297;&#x808C;&#x840E;&#x7F29;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x53CC;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5174;&#x594B;&#x6536;&#x7F29;&#x5076;&#x8054;&#x6539;&#x5EFA;&#xFF1A; &#x6BD4;&#x8F83;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

The double knockout mouse for utrophin and dystrophin (utr(-/-)/mdx) has been proposed to be a better model of Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) than the mdx mouse because the former displays more similar muscle pathology to that of the DMD patients. In this paper the properties of action potentials (APs) and Ca(2+) transients elicited by single and repetitive stimulation were studied to understand the excitation-contraction (EC) coupling alterations observed in muscle fibers from mdx and utr(-/-)/mdx mice. Based on the comparison of the AP durations with those of fibers from wild-type (WT) mice, fibers from both mdx and utr(-/-)/mdx mice could be divided in two groups: fibers with WT-like APs (group 1) and fibers with significantly longer APs (group 2). Although the proportion of fibers in group 2 was larger in utr(-/-)/mdx (36%) than in mdx mice (27%), the Ca(2+) release elicited by single stimulation was found to be similarly depressed (32-38%) in utr(-/-)/mdx and mdx fibers compared with WT counterparts regardless of the fiber's group. Stimulation at 100 Hz revealed that, with the exception of those from utr(-/-)/mdx mice, group 1 fibers were able to sustain Ca(2+) release for longer than group 2 fibers, which displayed an abrupt limitation even at the onset of the train. The differences in behavior between fibers in groups 1 and 2 became almost unnoticeable at 50 Hz stimulation. In general, fibers from utr(-/-)/mdx mice seem to display more persistent alterations in the EC coupling than those observed in the mdx model.

Excitation-contraction coupling alterations in mdx and utrophin/dystrophin double knockout mice: a comparative study.

La souris knock-out double pour l&#x26;#39;utrophine et la dystrophine (UTR (- / -) / MDX) a &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9; pour &#xEA;tre un meilleur mod&#xE8;le de la myopathie de Duchenne (DMD) de la souris mdx, car les anciens &#xE9;talages musculaires plus semblable &#xE0; celle de la pathologie de la DMD patients. Dans cet article, les propri&#xE9;t&#xE9;s de potentiels d&#x26;#39;action (PA) et Ca (2 +) transitoires provoqu&#xE9; par la stimulation unique et r&#xE9;p&#xE9;titif ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;es pour comprendre l&#x26;#39;excitation-contraction (CE) de couplage alt&#xE9;rations observ&#xE9;es dans les fibres musculaires de souris mdx et UTR (- / -) / souris mdx. Bas&#xE9; sur la comparaison des dur&#xE9;es de l&#x26;#39;AP avec celles des fibres de type sauvage (WT) les souris, les fibres de deux mdx et UTR (- / -) et les souris mdx peuvent &#xEA;tre divis&#xE9;es en deux groupes: les fibres avec WT-PA, comme (le groupe 1) et de fibres avec beaucoup plus de temps les points d&#x26;#39;acc&#xE8;s (groupe 2). Bien que la proportion de fibres dans le groupe 2 &#xE9;tait plus importante dans utr (- / -) / MDX (36%) que chez la souris mdx (27%), le Ca (2 +) communiqu&#xE9; provoqu&#xE9; par la stimulation seule a &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9;e de la m&#xEA;me d&#xE9;pression ( 32-38%) dans utr (- / -) / MDX et les fibres mdx rapport &#xE0; leurs homologues WT peu importe le groupe de la fibre. Stimulation &#xE0; 100 Hz a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que, &#xE0; l&#x26;#39;exception de ceux de utr (- / -) / souris mdx, le groupe 1 des fibres &#xE9;taient en mesure de soutenir Ca (2 +) communiqu&#xE9; pour plus de 2 groupes de fibres, qui ont fait preuve d&#x26;#39;une limitation brutale, m&#xEA;me &#xE0; l&#x26;#39;apparition du train. Les diff&#xE9;rences de comportement entre les fibres dans les groupes 1 et 2 est devenu presque imperceptible &#xE0; 50 Hz de stimulation. En g&#xE9;n&#xE9;ral, les fibres de utr (- / -) / souris mdx semblent afficher des alt&#xE9;rations les plus persistants dans le couplage CE que celles observ&#xE9;es dans le mod&#xE8;le mdx.

Modifications couplage excitation-contraction dans MDX et utrophine / dystrophine souris knock-out double: une &#xE9;tude comparative

Die Doppel-ko-Maus f&uuml;r Utrophin und Dystrophin (utr(-/-)/mdx) hat ein besseres Modell der Duchenne-Muskeldystrophie (DMD) als die Mdx-Maus zu sein, denn das ehemalige &auml;hnlicher Muskel-Pathologie der DMD-Patienten zeigt vorgeschlagen worden. In diesem Papier werden die Eigenschaften der Aktionspotentiale (APs) und Ca(2+)-Transienten, hervorgerufen durch Einzel- und repetitive Stimulation studierte waren zu verstehen, die Erregung-Kontraktion (EG) &Auml;nderungen Kopplung in Muskelfasern von Mdx und Utr(-/-)/Mdx M&auml;usen beobachtet. Basierend auf dem Vergleich der AP dauern mit denen der Fasern vom Wildtyp (WT) M&auml;use, werden die Fasern von Mdx und Utr(-/-)/Mdx-M&auml;usen konnte in zwei Gruppen unterteilt: Fasern mit WT-wie APs (Gruppe 1) und Fasern mit deutlich l&auml;ngeren APs (Gruppe 2). Obwohl der Anteil der Fasern in Gruppe 2 in Utr(-/-)/Mdx (36 %) als in Mdx-M&auml;use (27 %) gr&ouml;&szlig;er war, wurde die Freigabe des Ca(2+) hervorgerufen durch einzelne Stimulation gefunden, ebenso deprimiert (32-38 %) in Utr(-/-)/Mdx und Mdx-Fasern, die im Vergleich mit WT-Kollegen unabh&auml;ngig von der Faser-Gruppe sein. Anregung bei 100 Hz ergab, dass, mit Ausnahme von Utr(-/-)/Mdx-M&auml;usen, Gruppe 1 Fasern k&ouml;nnen Ca(2+) Ver&ouml;ffentlichung l&auml;nger als Gruppe 2 Fasern, die eine abrupte Einschr&auml;nkung sogar zu Beginn des Zuges angezeigt. Die Unterschiede im Verhalten zwischen Fasern in den Gruppen 1 und 2 wurde fast unmerklich bei 50Hz Stimulierung. Im allgemeinen anscheinend Fasern aus Utr(-/-)/Mdx-M&auml;use, um anhaltende Ver&auml;nderungen in der EG, die Kupplung als diejenigen in der Mdx-Modell beobachtet.

Erregung-Kontraktion Kupplung &Auml;nderungen in Mdx und Utrophin/Dystrophin Doppel-ko-M&auml;usen: eine vergleichende Studie.

Il topo knockout doppie per utrophin e distrofina (utr(-/-)/mdx) &egrave; stato proposto di essere un modello migliore di distrofia muscolare di Duchenne (DMD) rispetto al topo mdx, perch&eacute; l&#39;ex Visualizza patologia muscolare pi&ugrave; simile a quella dei pazienti DMD. In questo documento sono state studiate le propriet&agrave; dei potenziali di azione (APs) e transitori Ca(2+) provocate dall&#39;unico e ripetitivo stimolo per capire l&#39;eccitazione-contrazione (CE) accoppiamento alterazioni osservate nelle fibre muscolari da topi mdx e utr(-/-)/mdx. Basato sul confronto delle durate AP con quelli di fibre da topi di wild-type (WT), fibre da topi mdx sia utr(-/-)/mdx potrebbero essere divisi in due gruppi: fibre con WT-come APs (gruppo 1) e fibre con APs significativamente pi&ugrave; lungo (gruppo 2). Anche se la percentuale di fibre nel gruppo 2 era pi&ugrave; grande in utr(-/-)/mdx (36%) rispetto a topi mdx (27%), il rilascio di Ca(2+) ha suscitato dalla sola stimolazione &egrave; stato trovato essere similmente depresso (32-38%) in fibre utr(-/-)/mdx e mdx, confrontato con le controparti WT indipendentemente dal gruppo di fibra. Stimolazione a 100 Hz ha rivelato che, ad eccezione di quelle da topi utr(-/-)/mdx, fibre del gruppo 1 sono stati in grado di sostenere il rilascio Ca(2+) per pi&ugrave; di fibre di gruppo 2, che mostrava un&#39;improvvisa limitazione anche all&#39;esordio del treno. Le differenze di comportamento tra fibre nei gruppi 1 e 2 &egrave; diventato quasi impercettibile a 50 Hz stimolazione. In generale, fibre da utr(-/-)/mdx topi sembrano visualizzare pi&ugrave; persistenti alterazioni nella CE accoppiamento rispetto a quelli osservati nel modello mdx.

Alterazioni accoppiamento eccitazione-contrazione mdx e utrophin/distrofina topi knockout doppio: uno studio comparativo.

&#x30E6;&#x30FC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x3068;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x306E;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08;UTR&#xFF08; -  /  - &#xFF09;/ MDX&#xFF09;&#x306F;mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x30C7;&#x30E5;&#x30B7;&#x30A7;&#x30F3;&#x30CC;&#x578B;&#x7B4B;&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;DMD&#xFF09;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;DMD&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x75C5;&#x7406;&#x985E;&#x4F3C;&#x7B4B;&#x8089;&#x524D;&#x8005;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x60A3;&#x8005;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x672C;&#x8AD6;&#x6587;&#x3067;&#x306F;&#x96FB;&#x4F4D;&#xFF08;AP&#xFF09;&#x3068;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x904E;&#x6E21;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x53CD;&#x5FA9;&#x7684;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;MDX&#x3068;UTR&#x304B;&#x3089;&#x7B4B;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8208;&#x596E;&#x53CE;&#x7E2E;&#xFF08;EC&#xFF09;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;/ mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;AP&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#xFF08;WT&#xFF09;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MDX&#x3068;UTR&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x304B;&#x3089;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x6301;&#x7D9A;&#x6642;&#x9593;/ mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x5206;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#xFF1A;WT-&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;AP&#x3092;&#xFF08;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;1&#xFF09;&#x3068;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x9577;&#x3044;&#x306E;AP&#xFF08;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;2&#xFF09;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;2&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F;UTR&#x306E;&#x65B9;&#x304C;&#x5927;&#x304D;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#xFF08;27&#xFF05;&#xFF09;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;/ MDX&#xFF08;36&#xFF05;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x6291;&#x3046;&#x3064;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#xFF08;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;WT&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#xFF09;/ MDX MDX&#x3068;&#x7E4A;&#x7DAD; -  /  -  UTR&#xFF08;&#x306E;32&#x304B;&#x3089;38&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF09;&#x3002; &#xFF08; -  /  - &#xFF09;100 Hz&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x3001;UTR&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;/ mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;1&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306F;&#x3001;Ca&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x3055;&#x3048;&#x3067;&#x7A81;&#x7136;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;2&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x9577;&#x3044;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x5217;&#x8ECA;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;1&#x3068;2&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x9593;&#x306E;&#x52D5;&#x4F5C;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;50 Hz&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3067;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x76EE;&#x7ACB;&#x305F;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;UTR&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7E4A;&#x7DAD;&#xFF08; -  /  - &#xFF09;/ mdx&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;MDX&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x3001;EC&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x3002;

MDX&#x3068;&#x30E6;&#x30FC;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;/&#x30B8;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x8208;&#x596E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x9023;&#x95A2;&#x306E;&#x6539;&#x9020;&#xFF1A;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7814;&#x7A76;

Utrophin &#xBC0F; dystrophin &#xC774;&#xC911; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; (utr(-/-)/mdx) &#xC804; DMD &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xADFC;&#xC721; &#xBCD1; &#xB9AC; &#xD45C;&#xC2DC; mdx &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xB098;&#xC740; &#xBAA8;&#xB378; Duchenne &#xADFC; &#xC704;&#xCD95; &#xC99D; (DMD)&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC561;&#xC158; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; (Ap) &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; elicited Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;&#xC774; &#xC2E0;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC790;&#xADF9;-&#xC218;&#xCD95; (EC) &#xBCC0;&#xACBD; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; mdx &#xBC0F; utr(-/-)/mdx &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADFC;&#xC721; &#xC12C;&#xC720;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; AP &#xAE30;&#xAC04;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, mdx &#xBC0F; utr(-/-)/mdx &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC12C;&#xC720; &#xB450; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xD560; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;: WT &#xAC19;&#xC740; Ap (&#xADF8;&#xB8F9; 1)&#xC640; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xAE34; Ap (&#xADF8;&#xB8F9; 2)&#xC640; &#xC12C;&#xC720; &#xC12C;&#xC720;. &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xB8F9; 2&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC740; utr(-/-)/mdx (36%) &#xBCF4;&#xB2E4; mdx &#xC950; (27%)&#xC5D0; &#xB354; &#xD070;, &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; elicited Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C; &#xC6B0;&#xC6B8;&#xB41C; (32-38%) utr(-/-)/mdx mdx &#xC12C;&#xC720; &#xC12C;&#xC720;&#xC758; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; WT &#xB300;&#xC751;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC83; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. 100 Hz&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xADF9; &#xACF5;&#xAC1C; utr(-/-)/mdx &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C;, 1 &#xC870; &#xC12C;&#xC720;, &#xC5F4;&#xCC28;&#xC758; &#xBC1C;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xAC11;&#xC791;&#xC2A4;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xC81C;&#xD55C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xADF8;&#xB8F9; 2 &#xC12C;&#xC720; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC12C;&#xC720; &#xADF8;&#xB8F9; 1&#xACFC; 2 &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xAC70;&#xC758; unnoticeable 50hz &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; utr(-/-)/mdx &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC12C;&#xC720; mdx &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; EC&#xC5D0; &#xB354; &#xC601;&#xAD6C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD45C;&#xC2DC; &#xAC83; &#xAC19;&#xB2E4;.

Mdx &#xBC0F; utrophin/dystrophin &#xB354;&#xBE14; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC218;&#xCD95; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xBCC0;&#xACBD;: &#xBE44;&#xAD50; &#xC5F0;&#xAD6C;.

El rat&#xF3;n knockout doble para utrofina y la distrofina (UTR (- / -) / MDX) se ha propuesto ser un mejor modelo de distrofia muscular de Duchenne (DMD) que en el rat&#xF3;n mdx, porque las pantallas anteriores musculares m&#xE1;s una patolog&#xED;a similar a la de la DMD los pacientes. En este trabajo las propiedades de los potenciales de acci&#xF3;n (AP) y Ca (2 +) los transitorios provocados por la estimulaci&#xF3;n individual y repetitivo fueron estudiados para comprender la excitaci&#xF3;n-contracci&#xF3;n (CE) de acoplamiento alteraciones observadas en las fibras musculares de MDX y UTR (- / -) / ratones mdx. Sobre la base de la comparaci&#xF3;n de la duraci&#xF3;n de AP con los de las fibras de tipo salvaje (WT), fibras de los ratones de ambos mdx y UTR (- / -) o ratones mdx puede ser dividido en dos grupos: las fibras con WT-como puntos de acceso (grupo 1) y fibras con significativamente m&#xE1;s largo AP (grupo 2). Aunque la proporci&#xF3;n de fibras en el grupo 2 fue mayor en UTR (- / -) / MDX (36%) que en los ratones mdx (27%), el Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n inducida por estimulaci&#xF3;n solo se encontr&#xF3; que era similar deprimido ( 32-38%) en UTR (- / -) / MDX y fibras mdx en comparaci&#xF3;n con sus hom&#xF3;logos WT independientemente del grupo de la fibra. La estimulaci&#xF3;n a 100 Hz revel&#xF3; que, con la excepci&#xF3;n de los de UTR (- / -) / ratones mdx, grupo 1 fibras fueron capaces de sostener Ca (2 +) de liberaci&#xF3;n durante m&#xE1;s de 2 grupos fibras, que muestran una limitaci&#xF3;n brusca incluso a la aparici&#xF3;n del tren. Las diferencias en el comportamiento entre las fibras de los grupos 1 y 2 se convirti&#xF3; casi imperceptible en la estimulaci&#xF3;n de 50 Hz. En general, las fibras de la UTR (- / -) / ratones mdx parecen mostrar alteraciones m&#xE1;s persistentes en el acoplamiento CE a los observados en el modelo MDX.

Joana Capote

Department of Physiology

David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles

DNA Transfection of Mammalian Skeletal Muscles using In Vivo Electroporation

Joana Capote

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Physiology

David Geffen School of Medicine, University of California, Los Angeles

DNA Transfection of Mammalian Skeletal Muscles using In Vivo Electroporation

Department of Physiology