Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

University of California, Los Angeles

Recently, the side population (SP) phenotype has been introduced as a reliable marker to identify subpopulations of cells with stem/progenitor cell properties in various tissues. We and others have identified SP cells from postmitotic tissues, including adult myocardium, in which they have been suggested to contribute to cellular regeneration following injury. SP cells are identified and characterized by a unique efflux of Hoechst 33342 dye. Abcg2 belongs to the ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily and constitutes the molecular basis for the dye efflux, hence the SP phenotype, in hematopoietic stem cells. Although Abcg2 is also expressed in cardiac SP (cSP) cells, its role in regulating the SP phenotype and function of cSP cells is unknown. Herein, we demonstrate that regulation of the SP phenotype in cSP cells occurs in a dynamic, age-dependent fashion, with Abcg2 as the molecular determinant of the cSP phenotype in the neonatal heart and another ABC transporter, Mdr1, as the main contributor to the SP phenotype in the adult heart. Using loss- and gain-of-function experiments, we find that Abcg2 tightly regulates cell fate and function. Adult cSP cells isolated from mice with genetic ablation of Abcg2 exhibit blunted proliferation capacity and augmented cell death. Conversely, overexpression of Abcg2 is sufficient to enhance cell proliferation, although with a limitation of cardiomyogenic differentiation. In summary, for the first time, we reveal a functional role for Abcg2 in modulating the proliferation, differentiation, and survival of adult cSP cells that goes beyond its distinct role in Hoechst dye efflux.

Role of the ATP-binding cassette transporter Abcg2 in the phenotype and function of cardiac side population cells.

Cardiac resident stem/progenitor cells are critical to the cellular and functional integrity of the heart by maintaining myocardial cell homeostasis. Given their central role in myocardial biology, resident cardiac progenitor cells have become a major focus in cardiovascular research. Identification of putative cardiac progenitor cells within the myocardium is largely based on the presence or absence of specific cell surface markers. Additional purification strategies take advantage of the ability of stem cells to efficiently efflux vital dyes such as Hoechst 33342. During fluoresence activated cell sorting (FACS) such Hoechst-extruding cells appear to the side of Hoechst-dye retaining cells and have thus been termed side population (SP) cells. We have shown that cardiac SP cells that express stem cell antigen 1 (Sca-1) but not CD31 are cardiomyogenic, and thus represent a putative cardiac progenitor cell population. This chapter describes the methodology for the isolation of resident cardiac progenitor cells utilizing the SP phenotype combined with stem cell surface markers.

Isolation of resident cardiac progenitor cells by Hoechst 33342 staining.

Recent work in animal models and humans has demonstrated the presence of organ-specific progenitor cells required for the regenerative capacity of the adult heart. In response to tissue injury, progenitor cells differentiate into specialized cells, while their numbers are maintained through mechanisms of self-renewal. The molecular cues that dictate the self-renewal of adult progenitor cells in the heart, however, remain unclear.

Wnt signaling exerts an antiproliferative effect on adult cardiac progenitor cells through IGFBP3.

&#x9610;&#x91CA;&#xFF1A; &#x540E;&#x5FC3;&#x810F;&#x635F;&#x4F24;&#x5FC3;&#x810F;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x654F;&#x9510;&#x5730;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#xFF0C;&#x548C;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9;&#x79F0;&#x548C;&#x975E;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53F8;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x8865;&#x5145;&#x3002;&#x4E86;&#x89E3;&#x5206;&#x5B50;&#x7EBF;&#x7D22;&#x63A7;&#x5236;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#x548C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x627F;&#x8BFA;&#x662F;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E;&#x5229;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762; ATP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5361;&#x5E26; &#xFF08;ABC&#xFF09;-&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x3001; Abcg2&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x5FC3;&#x810F;&#x4FA7;&#x4EBA;&#x53E3; (CSP) &#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x867D;&#x7136;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x76EE;&#x6807;&#xFF1A; &#x786E;&#x5B9A;&#x53F8;&#x5728;&#x9F20;&#x6807; CSP &#x6A21;&#x5F0F;&#x548C; Abcg2 &#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x672C;&#x6587;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; CSP &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x3001; &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x548C; Abcg2 &#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; Abcg2 &#x89C4;&#x7BA1;&#x7531; FUCCI &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x6307;&#x6807;&#x3001; &#x4E13;&#x6CE8;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x9635;&#x5217;&#x548C;&#x5171;&#x7126;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; G1 S &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FC7;&#x6E21;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230;&#x8BE5;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7ED3;&#x679C;&#x4ECE;&#x5BF9;&#x79F0;&#x8FC7;&#x6E21;&#x5230;&#x975E;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53F8;&#x5728; CSP &#x7EC6;&#x80DE;&#x7F3A;&#x4E4F; Abcg2&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF1A; Abcg2 &#x8C03;&#x8282; CSP &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x548C;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x673A;&#x68B0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x519C;&#x7528;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8F66;&#x548C;&#x5FC3;&#x810F;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x66F4;&#x591A;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#xFF0C;&#x548C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x9A7B;&#x5730;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x5E73;&#x8861;&#x8C03;&#x8282;&#x6307;&#x5BFC;&#x5FC3;&#x810F;&#x518D;&#x751F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x672A;&#x6765;&#x53D1;&#x5C55;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

Abcg2 &#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x548C;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x53F8;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5FC3;&#x810F;&#x4FA7;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Rationale: Following cardiac injury, cardiac progenitor cells are acutely reduced, and are replenished in part by regulated self-renewal and proliferation, which occurs through symmetric and asymmetric cellular division. Understanding the molecular cues controlling progenitor cell self-renewal and lineage commitment is critical towards harnessing these cells for therapeutic regeneration. We have previously found that the cell surface ATP binding cassette (ABC)-transporter, Abcg2, influences the proliferation of cardiac side population (CSP) progenitor cells, though through unclear mechanisms. Objective: To determine the role of Abcg2 on cell cycle progression and mode of division in mouse CSP cells. Methods and Results: Herein, using CSP cells isolated from wild-type and Abcg2-knockout mice, we find that Abcg2 regulates G1-S cell cycle transition by FUCCI cell cycle indicators, cell cycle-focused gene expression arrays and confocal live cell fluorescent microscopy. Moreover, we find that modulation of cell cycle results in transition from symmetric to asymmetric cellular division in CSP cells lacking Abcg2. Conclusions: Abcg2 modulates CSP cell cycle progression and asymmetric cell division, establishing a mechanistic link between this surface transporter and cardiac progenitor cell function. Greater understanding of progenitor cell biology, and in particular the regulation of resident progenitor cell homeostasis, is vital for guiding the future development of cell-based therapies for cardiac regeneration.

Abcg2 Regulates Cell Cycle Progression and Asymmetric Division in Mouse Cardiac Side Population Progenitor Cells.

Justification: &agrave; la suite d&#39;une l&eacute;sion cardiaque, prog&eacute;niteurs cardiaques sont extr&ecirc;mement r&eacute;duites et sont reconstitu&eacute;es en partie r&eacute;glement&eacute; l&#39;auto-renouvellement et prolif&eacute;ration, qui se fait par division cellulaire asym&eacute;trique et sym&eacute;trique. Compr&eacute;hension mol&eacute;culaire cues contr&ocirc;le progenitor cell autorenouvellement et lign&eacute;e engagement est essentiel pour exploiter ces cellules th&eacute;rapeutiques r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration. Nous avons d&eacute;j&agrave; constat&eacute; que la cassette de liaison ATP surface de cellule (ABC)-transporteur, Abcg2, influe sur la prolif&eacute;ration des cellules prog&eacute;nitrices de c&ocirc;t&eacute; cardiaque population (CSP), bien que par le biais de m&eacute;canismes peu claire. Objectif : Pour d&eacute;terminer le r&ocirc;le de Abcg2 sur la progression du cycle cellulaire et le mode de division en souris CSP cellules. M&eacute;thodes et r&eacute;sultats : ci-apr&egrave;s, utilisant des cellules de CSP isol&eacute;es de type sauvage et Abcg2-souris, nous trouvons que Abcg2 r&eacute;gule transition cycle cellulaire G1-S par FUCCI cycle cellulaire indicateurs, tableaux d&#39;expression de g&egrave;ne ax&eacute;e sur le cycle cellulaire et les fluorescents microscopie confocal de cellules vivantes. En outre, nous trouvons que la modulation des r&eacute;sultats du cycle cellulaire dans la transition de sym&eacute;trique &agrave; la division cellulaire asym&eacute;trique dans les cellules CSP sans Abcg2. Conclusions : Abcg2 module la progression du cycle cellulaire CSP et la division cellulaire asym&eacute;trique, &eacute;tablissant un lien m&eacute;caniste entre ce transporteur de surface et la fonction des cellules souches cardiaques. Une meilleure compr&eacute;hension des prog&eacute;niteurs de biologie cellulaire, et en particulier la r&eacute;gulation de l&#39;hom&eacute;ostasie de cellules prog&eacute;nitrices r&eacute;sident, est essentiel pour orienter le d&eacute;veloppement futur des th&eacute;rapies &agrave; base de cellules pour la r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration cardiaque.

Abcg2 r&eacute;gule la Division asym&eacute;trique dans les cellules prog&eacute;nitrices Population souris c&ocirc;t&eacute; cardiaque et la Progression du Cycle cellulaire.

Justificaci&oacute;n: Despu&eacute;s de lesi&oacute;n cardiaca, c&eacute;lulas progenitoras cardiaco agudo se reducen y se reponen en parte por regulado auto renovaci&oacute;n y proliferaci&oacute;n, que se produce a trav&eacute;s de la divisi&oacute;n celular sim&eacute;trica y asim&eacute;trica. Entender el molecular se&ntilde;ales control progenitor celular auto renovaci&oacute;n y compromiso de linaje es cr&iacute;tico hacia el aprovechamiento de estas c&eacute;lulas para regeneraci&oacute;n terap&eacute;utica. Previamente hemos encontrado que las c&eacute;lulas superficial ATP binding cassette (ABC)-transportador, Abcg2, influye en la proliferaci&oacute;n de las c&eacute;lulas progenitoras de la parte cardiaca poblaci&oacute;n (CSP), aunque a trav&eacute;s de mecanismos claro. Objetivo: Para determinar el papel de Abcg2 en la progresi&oacute;n del ciclo celular y modo de divisi&oacute;n en rat&oacute;n CSP c&eacute;lulas. M&eacute;todos y resultados: en el presente, utilizando c&eacute;lulas CSP aisladas de tipo salvaje y ratones knockout-Abcg2, encontramos que Abcg2 regula la transici&oacute;n de G1-S ciclo celular por FUCCI indicadores del ciclo celular, matrices de expresi&oacute;n del gen centrada en ciclo celular y microscop&iacute;a fluorescente confocal de c&eacute;lulas vivas. Por otra parte, encontramos modulaci&oacute;n del ciclo celular resultados en transici&oacute;n de sim&eacute;trica a la divisi&oacute;n celular asim&eacute;trica en las c&eacute;lulas de la CSP que carec&iacute;an de Abcg2. CONCLUSIONES: Abcg2 modula la progresi&oacute;n del ciclo celular CSP y la divisi&oacute;n celular asim&eacute;trica, estableciendo un v&iacute;nculo mec&aacute;nico entre este transportador superficial y funci&oacute;n de la c&eacute;lula progenitora cardiaca. Biolog&iacute;a de la c&eacute;lula de una mayor comprensi&oacute;n del progenitor, y en particular la regulaci&oacute;n de la homeostasis celular de progenitoras residentes, es vital para guiar el futuro desarrollo de terapias basadas en c&eacute;lulas para regeneraci&oacute;n cardiaca.

Abcg2 regula la progresi&oacute;n del ciclo celular y divisi&oacute;n asim&eacute;trica en rat&oacute;n lado cardiaca poblaci&oacute;n c&eacute;lulas progenitoras.

Begr&uuml;ndung: Nach kardialen Sch&auml;digung, kardialen Vorl&auml;uferzellen sind akut reduziert und werden teilweise von geregelten Selbsterneuerung und Verbreitung, die durch symmetrische und asymmetrische Zellteilung Auftritt wieder aufgef&uuml;llt. Verst&auml;ndnis der molekularen Hinweise steuernde Stammvater Zelle Selbsterneuerung und Linie Engagement ist kritisch Nutzbarmachung dieser Zellen f&uuml;r therapeutische Regeneration. Wir haben bereits festgestellt, dass die Zelle Oberfl&auml;che ATP verbindliche Kassette (ABC)-Transporter, Abcg2, beeinflusst die Verbreitung von Progenitorzellen von kardialen Seite Bev&ouml;lkerung (CSP), obwohl durch unklare Mechanismen. Ziel: Die Rolle der Abcg2 auf Zellzyklusprogression und Modus der Division in CSP-Maus bestimmt Zellen. Methoden und Ergebnisse: hierin mit CSP-Zellen isoliert vom Wildtyp und Abcg2-Knockout-M&auml;use, wir finden, dass Abcg2 G1-S Zellzyklus &Uuml;bergang FUCCI Zellzyklus Indikatoren, Zellzyklus-Schwerpunkt Gen-Ausdruck-Arrays und konfokale Leben Lebendzell-Fluoreszenz-Mikroskopie regelt. Dar&uuml;ber hinaus finden wir die Modulation des Zellzyklus Ergebnisse im &Uuml;bergang vom symmetrischen zum asymmetrischen Zellteilung in CSP Zellen Abcg2 fehlt. Fazit: Abcg2 moduliert CSP Zellzyklusprogression und asymmetrische Zellteilung, eine mechanistische Verbindung zwischen dieser Oberfl&auml;che Transporter und kardialen Vorl&auml;uferzellen Zellfunktionen. Besseres Verst&auml;ndnis der Stammvater Zellbiologie und insbesondere die Regulierung der resident Stammvater Zelle Hom&ouml;ostase, ist entscheidend f&uuml;r die zuk&uuml;nftige Entwicklung der zellbasierte Therapien zur kardialen Regeneration F&uuml;hrung.

Abcg2 regelt die Zellzyklusprogression und asymmetrische Aufteilung in Maus kardiale Seite Bev&ouml;lkerung Vorl&auml;uferzellen.

Spiegazione logica: A seguito di lesioni cardiache, cellule progenitrici cardiache sono acutamente ridotti e vengono rifornite in parte regolamentato auto-rinnovamento e proliferazione, che avviene attraverso la divisione cellulare simmetrica e asimmetrica. Comprendere la molecolare spunti controllo progenitore cellula auto-rinnovamento e impegno di lignaggio &egrave; critico nei confronti di sfruttare queste cellule per rigenerazione terapeutica. In precedenza abbiamo scoperto che la cassetta delle cellule superficiale ATP binding (ABC)-transporter, Abcg2, influenza la proliferazione delle cellule progenitrici di lato cardiaco popolazione (CSP), anche se attraverso meccanismi poco chiari. Obiettivo: Determinare il ruolo della Abcg2 sulla progressione del ciclo cellulare e la modalit&agrave; di divisione in mouse CSP di celle. Metodi e risultati: nel presente documento, utilizzando cellule CSP isolate da wild-type e topi knockout Abcg2, troviamo che Abcg2 regola la transizione ciclo cellulare G1-S da FUCCI indicatori del ciclo cellulare, matrici di espressione genica orientato al ciclo cellulare e fluorescenti microscopia confocal cella dal vivo. Inoltre, troviamo tale modulazione del ciclo cellulare risultati nella transizione da simmetrica alla divisione cellulare asimmetrica in cellule CSP manca Abcg2. Conclusioni: Abcg2 modula progressione del ciclo cellulare CSP e divisione cellulare asimmetrica, stabilisce un legame tra questa superficie transporter e la funzione delle cellule progenitrici cardiache meccanicistico. Una maggiore comprensione del progenitore biologia cellulare, e in particolare la regolazione dell&#39;omeostasi delle cellule progenitrici residente, &egrave; di vitale importanza per orientare lo sviluppo futuro delle terapie cell-based per la rigenerazione cardiaca.

Abcg2 regola la progressione del ciclo cellulare e divisione asimmetrica in cellule progenitrici lato popolazione Mouse cardiaco.

&#x53C2;&#x8003;: &#x6B21;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x50B7;&#x5BB3;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x6025;&#x6027;&#x6E1B;&#x3089;&#x3057;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8907;&#x88FD;&#x3068;&#x5897;&#x6B96;&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x79F0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x88DC;&#x5145;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x5236;&#x5FA1;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x7406;&#x89E3;&#x3068;&#x30EA;&#x30CD;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E5;&#x306E;&#x30B3;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7642;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6D3B;&#x7528;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x3066;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x30BB;&#x30EB;&#x8868;&#x9762; ATP &#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8; (ABC) &#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F;-&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;Abcg2&#x3001;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3082;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x5FC3;&#x81D3;&#x5074;&#x4EBA;&#x53E3; (CSP) &#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76EE;&#x7684;: &#x30BB;&#x30EB;&#x306E; Abcg2 &#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x4E0A;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; CSP &#x3067;&#x90E8;&#x9580;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x7D50;&#x679C;: &#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Abcg2 &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F; CSP &#x7D30;&#x80DE;, Abcg2 FUCCI &#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x6307;&#x6A19;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x5F0F;&#x914D;&#x5217;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B; G1 S &#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x9077;&#x79FB;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x304B;&#x3089;&#x5BFE;&#x79F0;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3078;&#x306E;&#x79FB;&#x884C; Abcg2 &#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B; CSP &#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;: CSP &#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3068;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B; Abcg2 &#x3092;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x5C64;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7279;&#x306B;&#x5E38;&#x99D0;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x6CBB;&#x7642;&#x5FC3;&#x81D3;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Abcg2 &#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5FC3;&#x81D3;&#x5074;&#x4EBA;&#x53E3;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774;&#xC720;: &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC0C1;&#xD574;, &#xB2E4;&#xC74C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC870;&#xC0C1; &#xC140; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC790;&#xAE30; &#xAC31;&#xC2E0;&#xACFC; &#xB300;&#xCE6D; &#xBC0F; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xC0AC;&#xC5C5;&#xBD80;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xCDA9; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xD558;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xD574;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC790;&#xCCB4; &#xAC31;&#xC2E0; &#xBC0F; &#xD608;&#xD1B5; &#xD5CC;&#xC2E0; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC911;&#xC0DD;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; (ABC)&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;-&#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790;, Abcg2, &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBE44;&#xB85D; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xCABD; &#xC778;&#xAD6C; (CSP) &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA9;&#xC801;: &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; abcg2&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; CSP&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xB2E8;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC140;. &#xBC29;&#xBC95; &#xBC0F; &#xACB0;&#xACFC;: &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; Abcg2 g 1-S &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC804;&#xD658; FUCCI &#xC9C0;&#xD45C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9D1;&#xC911; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xBC30;&#xC5F4; &#xBC0F; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; confocal &#xD615;&#xAD11; &#xC131; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBC0F; Abcg2 &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; CSP &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; CSP &#xC140; Abcg2 &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xCE6D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xBD80;&#xBB38;&#xC73C;&#xB85C;&#xC758; &#xC804;&#xD658;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xACB0;&#xB860;: Abcg2 &#xBCC0;&#xC870; CSP &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589;&#xACFC; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC774; &#xD45C;&#xBA74; &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC5C5; &#xC790; &#xBC0F; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0AC;&#xC774; &#xAE30;&#xACC4; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC124;&#xC815;. &#xC2DC; &#xC870; &#xC774;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC8FC;&#xBBFC; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC870;&#xC808; &#xC548;&#xB0B4; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xC694;&#xBC95;&#xC758; &#xBBF8;&#xB798; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;.

Abcg2 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xCABD; &#xC778;&#xAD6C; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589; &#xC870;&#xC808;.

Investigation of cardiac progenitor cell proliferation and differentiation is essential for both the basic understanding of progenitor cell biology as well as the development of cellular therapeutics for tissue regeneration. Herein, we describe techniques used for the analysis of CSP cell proliferation, cell cycle status, and cardiomyogenic differentiation.

Konstantina-Ioanna Sereti

Department of Medicine-Division of Cardiology,
Eli and Edythe Broad Center of Regenerative Medicine and Stem Cell Research

University of California, Los Angeles

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Konstantina-Ioanna Sereti

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Medicine-Division of Cardiology,Eli and Edythe Broad Center of Regenerative Medicine and Stem Cell Research

University of California, Los Angeles

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Department of Medicine-Division of Cardiology,
Eli and Edythe Broad Center of Regenerative Medicine and Stem Cell Research