Les auteurs tiennent à remercier Adriane Mosley et Libuse Jerabek (Stanford) pour l&#39;assistance à la technique chirurgicale.

Toutes les études sur les animaux ont été réalisés selon les directives de protection des animaux et l&#39;utilisation du comité de l&#39;UCLA et les National Institutes of Health Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire. La durée de la procédure décrite ci-dessous est d&#39;environ 45 à 60 min, du début à la fin. Une. Préparation du champ opératoire <ol><li> Exécuter la procédure dans une salle de chirurgie des animaux propres. </li><li> Équipement: isoflurane vaporisateur, Gaymer T Pompe avec coussin chauffant. </li><li> Outils stériles: deux pinces, ciseaux courbes fines, porte-aiguille. </li><li> Des gants stériles doivent être utilisés au cours de toute la procédure. </li></ol> 2. Préparation des animaux <ol><li> Placez deux souris mâles ou femelles, de même fond génétique, de poids et de taille similaire dans la même cage et surveiller pendant au moins deux semaines afin d&#39;assurer une cohabitation harmonieuse. Des souris femelles sont préférés en raison de leur comportement moins agressif. </li><li> Anesthésier les animaux parl&#39;aide d&#39;un vaporisateur à l&#39;isoflurane. La place les souris dans une chambre d&#39;induction Posi-Seal connectés au vaporisateur isoflurane (4-5% v / v). Une fois anesthésie est induite, transférer l&#39;animal vers la zone de rasage de la fourrure et de maintenir l&#39;anesthésie pendant toute la procédure par l&#39;intermédiaire d&#39;un cône de nez relié à l&#39;isoflurane (1,5 à 2% v / v). Appliquer une pommade ophtalmique avec un Q-tip pour éviter la sécheresse des yeux. </li><li> Placez l&#39;animal sur la position couchée. Bien raser le côté gauche de la souris placé sur la gauche et le côté droit de la souris placé sur la droite, en commençant à environ 1 cm au-dessus du coude à 1 cm au-dessous du genou. </li><li> Préparer de manière aseptique les zones rasées en essuyant soigneusement (2-3x) avec des lingettes de Betadine imbibé suivis par des tampons d&#39;alcool. Placez la souris sur un coussin chauffant recouvert par une compresse stérile. </li><li> Pour l&#39;analgésie, administrer Carprofen et buprénorphine par voie intrapéritonéale ou sous-cutanée à une dose de 10 mg / kg et 0,1 mg / kg respectivement. </li><li> Placez les animaux de leur côté, dos à dos, avec undjacent zones rasées vers le haut. Pour éviter toute contamination de la zone chirurgicale, couvrir les souris avec un champ stérile exposer uniquement la zone d&#39;opération. Créer une petite ouverture de champ à rester stérile lors de l&#39;exécution de la chirurgie. Nous avons fait la fenêtre de champ importante pour avoir une meilleure vue pendant l&#39;enregistrement vidéo. </li></ol> 3. Parabiose <ol><li> L&#39;utilisation d&#39;un ciseau tranchant, effectuer des incisions longitudinales de la peau sur les côtés rasés départ de chaque animal à 0,5 cm au-dessus du coude tout le chemin à 0,5 cm en dessous de l&#39;articulation du genou (figure 1). À la suite de l&#39;incision, détacher doucement la peau contre le fascia sous-cutané en maintenant la peau vers le haut avec une paire de forceps incurvés et séparer le fascia avec une deuxième paire de créer 0,5 cm de peau libre. Effectuez cette séparation le long de toute incision. </li><li> Commencez l&#39;assemblage en fixant l&#39;olécrane gauche d&#39;un animal à droite olécrane de l&#39;autre. Les deux olecranons et les articulations du genou sont clairement distingués e suivantee incision cutanée. Pour faciliter l&#39;assemblage, plier le coude de la première souris et passer l&#39;aiguille de l&#39;3-0 suture non résorbable sous l&#39;olécrane. De même, plier le coude de la deuxième souris et passer le même suture dessous. Fixez solidement joints par un noeud chirurgical double. </li><li> Raccorder les articulations du genou suivant la même procédure. </li><li> Après la fixation des joints, relier la peau des deux animaux avec un absorbable 5-0 Vicryl surjet partir le ventre du coude vers le genou. Pour éviter une rupture de la peau et de la séparation effectuer une fermeture étanche de suture de la peau dans la zone autour des coudes et les genoux. Une fois l&#39;attache ventral de la peau a été achevée, effectuer un noeud chirurgical double. Placez la souris en position couchée et continuer la dorsale de suture se terminant par un noeud chirurgical double. Vérifier la continuité du fil de suture et de confirmer l&#39;absence d&#39;ouvertures. </li><li> Administrer 0,5 ml de NaCl à 0,9% par voie sous cutanée à chaque souris pour empêcher déshyréhydratation. </li></ol> 4. Récupération postopératoire <ol><li> Gardez les animaux sur tapis chauffé jusqu&#39;à la guérison. </li><li> Après récupération, de fournir des analgésiques carprofène et la buprénorphine. Répéter par voie intrapéritonéale ou sous-cutanée toutes les 24 heures et 12, respectivement, pendant 48 heures aux mêmes doses décrites ci-dessus (étape 2.5). Surveillez les animaux des signes de douleur et de détresse telles que des tremblements, de la léthargie, de mâcher de la queue, dos voûté, absence de toilettage, etc jour pendant deux semaines. </li><li> Prophylactique, traiter des souris avec la suspension orale sulfaméthoxazole / triméthoprime dans leur bouteille d&#39;eau 2 mg sulfamide / ml 0,4 mg / ml les garnitures pendant 10 jours pour prévenir les infections bactériennes. </li><li> Maison chaque paire parabiotic dans une cage propre d&#39;une litière monolithique (par exemple, de serviettes en papier ou un tampon stérile absorbant) pour éviter l&#39;aspiration de litière. Remettre les animaux à une literie garni cage quand ils sont en mesure de maintenir décubitus sternal avec leur tête. Pour réduire au minimum la déformationd&#39;atteindre pour la nourriture tout en s&#39;adaptant à l&#39;existence parabiotic, placer les boulettes de nourriture humides sur le sol de la cage. Fournir du matériel de nidification. Dans 1-2 semaines souris parabiotic ont la possibilité de déambuler normalement antérieurs et membres postérieurs chirurgicalement appariés. </li><li> chimérisme de sang se produit 10-14 jours après la chirurgie. </li></ol> 5. Confirmation et de la procédure n º <ol><li> Après deux semaines prélever du sang à partir des veines de la queue de chaque souris pour l&#39;analyse de cytométrie de flux pour les chimérisme sanguin (Figure 3). </li><li> traitement de sang pour analyse par cytométrie de flux: diluer 2-3 gouttes de sang dans 500 ul de 10 mM d&#39;EDTA. Ajouter 500 ul de 2% de dextran (dilué dans du PBS), bien mélanger et incuber à 37 ° C pendant 30 min. Transférer le surnageant dans un nouveau tube, centrifugation à 1200 rpm pendant 5 min et remettre en suspension le culot cellulaire dans du PBS (tampon ou autre) aux fins d&#39;analyse par cytométrie en flux. </li><li> Selon la conception expérimentale, la paire parabiotic peut être séparée d&#39;unet points de temps ultérieurs. Dans notre expérience, nous avons maintenu paires parabiosed jusqu&#39;à 9 mois sans aucune complication. </li><li> Effectuer la procédure inverse sur une surface chirurgical stérile. Anesthésier les souris en les plaçant dans une chambre d&#39;induction reliée à un évaporateur de l&#39;isoflurane (4-5%) et de maintenir l&#39;anesthésie avec de l&#39;isoflurane 1,5 à 2%, comme décrit ci-dessus (étape 2.2). </li><li> Enlever les poils de la zone entourant le fil de suture initiale et de manière aseptique préparer les zones rasées tels que décrits ci-dessus (étapes 2.3, 2.4). </li><li> Pour l&#39;analgésie, d&#39;administrer le carprofène et buprénorphine par voie intrapéritonéale ou sous-cutanée à une dose de 10 mg / kg et 0,1 mg / kg, respectivement. </li><li> Couvrir zone chirurgicale avec un champ stérile comme décrit ci-dessus (étape 2.6). </li><li> Utilisation de ciseaux, séparer les souris à travers une incision longitudinale le long de la suture latérale et doucement détacher le fascia nouvellement formée entre les deux souris avec une paire de forceps incurvés. Pour séparer les articulations, couper les noeuds de la sutureles reliant. Coupez la peau le long de l&#39;incision pour atteindre des bords lisses et rattacher la peau avec un enduit continu 5-0 suture Vicryl absorbable. </li><li> Pour prévenir la déshydratation, à administrer 0,5 ml de NaCl à 0,9% par voie sous cutanée à chaque souris. Gardez les animaux sur tapis chauffé jusqu&#39;à la guérison. </li><li> Après la récupération, répéter l&#39;administration d&#39;analgésiques, carprofène (10 mg / kg) toutes les 24 heures et la buprénorphine (0,1 mg / kg) toutes les 12 heures pendant 48 heures. </li><li> Pour prévenir les infections bactériennes traitent souris avec la suspension orale sulfaméthoxazole / triméthoprime (2 mg sulfamide / ml 0,4 mg TRIM / ml) dans leur bouteille d&#39;eau pendant 10 jours. </li></ol>

<ol>
	<li>Bert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exp&#233;riences+et+consid&#233;rations+sur+la+greffe+animale.">Exp&#233;riences et consid&#233;rations sur la greffe animale.</a> Journal de l'Anatomie et de la Physiologie. 1, 69-87 .</li><li>Bunster, E., Meyer, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+methods+of+parabiosis.">Improved methods of parabiosis.</a> Anat. Rec. 57, 339-380 (1933).</li><li>Waskow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+parabiotic+mice+for+the+study+of+DC+and+DC+precursor+circulation.">Generation of parabiotic mice for the study of DC and DC precursor circulation.</a> Methods Mol. Biol. 595, 413-428 (2010).</li><li>Finerty, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parabiosis+in+physiological+studies.">Parabiosis in physiological studies.</a> Physiol. Rev. 32, 277-302 (1952).</li><li>Aicher, A., Heeschen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonbone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells:+what+is+their+exact+location.">Nonbone marrow-derived endothelial progenitor cells: what is their exact location.</a> Circ. Res. 101, e102 (2007).</li><li>Abe, S., Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cells+derived+from+the+circulation+contribute+to+the+repair+of+lung+injury.">Cells derived from the circulation contribute to the repair of lung injury.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 170, 1158-1163 (2004).</li><li>Donskoy, E., Goldschneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thymocytopoiesis+is+maintained+by+blood-borne+precursors+throughout+postnatal+life.+A+study+in+parabiotic+mice.">Thymocytopoiesis is maintained by blood-borne precursors throughout postnatal life. A study in parabiotic mice.</a> J. Immunol. 148, 1604-1612 (1992).</li><li>Powell, A. E., Anderson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusion+between+Intestinal+epithelial+cells+and+macrophages+in+a+cancer+context+results+in+nuclear+reprogramming.">Fusion between Intestinal epithelial cells and macrophages in a cancer context results in nuclear reprogramming.</a> Cancer Res. 71, 1497-1505 (2011).</li><li>Duyverman, A. M., Kohno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transient+parabiosis+skin+transplantation+model+in+mice.">A transient parabiosis skin transplantation model in mice.</a> Nat. Protoc. 7, 763-770 (2012).</li><li>Ajami, B., Bennett, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+self-renewal+can+sustain+CNS+microglia+maintenance+and+function+throughout+adult+life.">Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life.</a> Nat. Neurosci. 10, 1538-1543 (2007).</li><li>Weissman, I. L., Jerabek, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+the+H-Y+antigen:+Requirement+for+male+T+cells,+but+not+B+cells,+to+induce+tolerance+in+neonatal+female+mice.">Tolerance and the H-Y antigen: Requirement for male T cells, but not B cells, to induce tolerance in neonatal female mice.</a> Transplantation. 37, 3-6 (1984).</li></ol>

Les auteurs n&#39;ont aucun intérêt financier concurrents.

La méthode de parabiose discuté ici présente des difficultés et des résultats techniques minimales des taux de mortalité faibles. La fixation des articulations du genou et du coude constitue une amélioration importante de la technique et Bunster Meyer. Toutefois, la procédure invasive reste donc le maintien de conditions stériles pendant toute la chirurgie est impérative. Pour prévenir l&#39;infection du site chirurgical, il est important que les animaux reçoivent parabiosed une combinaison d&#39;antibiotiqu...

Parabiose, rejoindre le chirurgicale de deux organismes, a été décrite pour la première en 1864 par Paul Bert comme un moyen de développer un modèle pour étudier les systèmes circulatoires partagées et composée de l&#39;assemblage de la peau et des parois musculaires de deux rats 1. Parabiose favorise la formation de microvaisseaux au niveau du site de l&#39;inflammation et 3 a eu de nombreuses applications dans des études physiologiques, telles que la communication entre hormonal de la glande pituitaire et les gonades, ainsi que le rôle de l&#39;hypertension rénale chez 4. Il a été en outre utilisé pour étudier le recrutement et l&#39;intégration des cellules progénitrices dans la néovascularisation 5, la migration des cellules souches hématopoïétiques 6, et le trafic des lymphocytes 7, ainsi que le rôle et la cinétique de cellules circulantes inflammatoires ou souches dans la métastase de la tumeur 8,9, et les maladies neurodégénératives 10. Un avantage important du mensonge de parabioseen ce que les animaux en couple part antigènes circulants communs, ce qui permet la migration cellulaire et la néovascularisation, sans déclencher une réaction immunologique. Fait important, Weissman et al. Ont montré que parabiose entre les souris mâles et femelles ne conduit pas à la formation d&#39;anticorps dirigés contre HY 11. Dans le protocole original décrit par Paul Bert les deux animaux ont été réunis par le raccordement de la peau et des parois musculaires 1. Toutefois, cette méthode a provoqué souche importante pour les animaux et a abouti à une forte mortalité due à une infection de la plaie. Depuis lors, la technique de parabiose a été révisé par plusieurs groupes avec le plus prédominant étant le protocole proposé par Bunster et Meyer en 1933 2. Leur méthode a inclus l&#39;assemblage des joints de l&#39;omoplate, des cavités du corps et de la peau, ce qui permet un meilleur soutien et moins de douleur pour les animaux. Dans le même temps, la nouvelle méthode a donné lieu à des soins et signifi post-opératoire minimalsignificative diminution des taux de mortalité. Le protocole décrit ici est une modification de la technique Bunster Meyer et qui est moins invasive et permet de rejoindre plus ferme. À savoir, les souris sont reliés par des articulations du coude et du genou ainsi que la peau. Cette jonction empêche l&#39;extension de la peau et donc provoque moins de douleur et les complications. Nous décrivons ici la jonction d&#39;un type sauvage (WT) de souris adulte à une GFP constitutive exprimant la souris. Nous montrons que deux semaines après la chirurgie, nous pouvons réaliser 50% de chimérisme de sang démontrant l&#39;efficacité de cette procédure chirurgicale pour créer un système de circulation commun.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane-Phoenix</td>
			<td>Clipper</td>
			<td>NDC 57319-559-06</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Posi-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0530-SM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Anesthesia System</td>
			<td>Molecular Imaging Products</td>
			<td>AS-01-0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gaymer T Pump</td>
			<td>Gaymar Industries, Inc</td>
			<td>TP650</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming Blanket (Heating pad)</td>
			<td>Kent Scientific Corp</td>
			<td>TP-22G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5101</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>FST 14063-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>FST 12501-13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical shaver</td>
			<td>Oster</td>
			<td>Golden A5</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parabiosis in mice: a detailed protocol

Parabiose est une union chirurgicale de deux organismes permettant le partage de la circulation sanguine. Fixation de la peau de deux animaux favorise la formation de microvaisseaux au niveau du site de l&#39;inflammation. Partenaires Parabiotic partagent leurs antigènes circulants et sont donc libres de la réaction immunitaire indésirable. D&#39;abord décrit par Paul Bert en 1864 1, la chirurgie parabiose a été affinée par Bunster et Meyer en 1933 pour améliorer la survie des animaux 2. Dans le protocole courant, deux souris sont joints par voie chirurgicale suite à une modification de la technique et Bunster Meyer. Les animaux sont reliés par des articulations du coude et du genou, suivie par la fixation de la peau permettant un soutien ferme qui empêche de pression sur la peau suturée. Ici, nous décrivons en détail la parabiotic assemblage d&#39;un GFP omniprésent exprimant la souris à un type sauvage (WT) de la souris. Deux semaines après l&#39;intervention, la paire est séparée et les cellules positives à la GFP peut être détectée par analyse par cytométrie de flux circulant dans le sangion de la souris WT. Le chimérisme de sang permet d&#39;examiner la contribution des cellules circulantes d&#39;un animal à l&#39;autre.

Le résultat attendu de parabiose de deux organismes est la contribution égale de système circulatoire de chaque animal à une circulation sanguine commune (Figure 2). On peut facilement vérifier le succès de l&#39;équilibration du sang de l&#39;parabiosed des souris WT et positif GFP par analyse par cytométrie de flux. Ici, le sang veineux a été obtenue à partir des queues des deux parabionts à 2 semaines après l&#39;intervention chirurgicale et a été fractionné pour les cellules du sang ...

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Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiotic jonction de deux organismes entraîne le développement d&#39;un système de circulation commun. Dans ce protocole, nous décrivons les étapes chirurgicales pour former une connexion entre parabiotic une souris de type sauvage et une souris exprimant la GFP constitutive.

Parabiose chez la souris: un protocole détaillé

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

73.7K vues.  University of California, Los Angeles.  Parabiotic jonction de deux organismes entraîne le développement d'un système de circulation commun. Dans ce protocole, nous décrivons les étapes chirurgicales pour former une connexion entre parabiotic une souris de type sauvage et une souris exprimant la GFP constitutive. 

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The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting. Protocols that allow researchers to study the biological pathways of the stress response in health and disease are fundamental to the progress of research in stress and anxiety.1 Although numerous protocols exist for inducing stress response in the laboratory, many neglect to provide a naturalistic context or to incorporate aspects of social and psychological stress. Of psychological stress protocols, meta-analysis suggests that the Trier Social Stress Test (TSST) is the most useful and appropriate standardized protocol for studies of stress hormone reactivity.2 In the original description of the TSST, researchers sought to design and evaluate a procedure capable of inducing a reliable stress response in the majority of healthy volunteers.3 These researchers found elevations in heart rate, blood pressure and several endocrine stress markers in response to the TSST (a psychological stressor) compared to a saline injection (a physical stressor).3 Although the TSST has been modified to meet the needs of various research groups, it generally consists of a waiting period upon arrival, anticipatory speech preparation, speech performance, and verbal arithmetic performance periods, followed by one or more recovery periods. The TSST requires participants to prepare and deliver a speech, and verbally respond to a challenging arithmetic problem in the presence of a socially evaluative audience.3 Social evaluation and uncontrollability have been identified as key components of stress induction by the TSST.4 In use for over a decade, the goal of the TSST is to systematically induce a stress response in order to measure differences in reactivity, anxiety and activation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) or sympathetic-adrenal-medullary (SAM) axis during the task.1 Researchers generally assess changes in self-reported anxiety, physiological measures (e.g. heart rate), and/or neuroendocrine indices (e.g. the stress hormone cortisol) in response to the TSST. Many investigators have adopted salivary sampling for stress markers such as cortisol and alpha-amylase (a marker of autonomic nervous system activation) as an alternative to blood sampling to reduce the confounding stress of blood-collection techniques. In addition to changes experienced by an individual completing the TSST, researchers can compare changes between different treatment groups (e.g. clinical versus healthy control samples) or the effectiveness of stress-reducing interventions.1

This article describes a protocol for inducing psychological stress in participants, which enables researchers to measure psychological, physiological and neuroendocrine responses to stress within single participants or between groups.

Le protocole social Trèves Stress Test pour induire un stress psychologique

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Recherche

Médecine

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body temperature that is observed during fever. The use of hyperthermia as an adjuvant has emerged as a promising procedure for tumor regression in the field of cancer biology. For this purpose, the most important requirement is to have reliable and uniform heating protocols. We have developed a protocol for hyperthermia (whole body) in mice. In this protocol, animals are exposed to cycles of hyperthermia for 90 min followed by a rest period of 15 min. During this period mice have easy access to food and water. High body temperature spikes in the mice during first few hyperthermia exposure cycles are prevented by immobilizing the animal. Additionally, normal saline is administered in first few cycles to minimize the effects of dehydration. This protocol can simulate fever like conditions in mice up to 12-24 hr. We have used 8-12 weeks old BALB/Cj female mice to demonstrate the protocol.

This paper describes a protocol for whole body hyperthermia in mice that can stimulate fever like conditions up to 12-24 hr.

Protocole d&#39;hyperthermie Durée du corps entier long chez la souris

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Protocole de collecte des pancréas humain

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

Infusions de l&#39;artère carotide pour pharmacocinétiques et pharmacodynamiques Analyse des taxanes chez la souris

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

A Simple Critical-sized Femoral Defect Model in Mice

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all limb bone fractures fail to heal completely due to the extent of the trauma, disease, or age of the patient. Our ability to improve bone regenerative strategies is critically dependent on the ability to mimic serious bone trauma in test animals, but the generation and stabilization of large bone lesions is technically challenging. In most cases, serious long bone trauma is mimicked experimentally by establishing a defect that will not naturally heal. This is achieved by complete removal of a bone segment that is larger than 1.5 times the diameter of the bone cross-section. The bone is then stabilized with a metal implant to maintain proper orientation of the fracture edges and allow for mobility. 
Due to their small size and the fragility of their long bones, establishment of such lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. As such, long bone defect models are confined to rats and larger animals. Nevertheless, mice afford significant research advantages in that they can be genetically modified and bred as immune-compromised strains that do not reject human cells and tissue.
Herein, we demonstrate a technique that facilitates the generation of a segmental defect in mouse femora using standard laboratory and veterinary equipment. With practice, fabrication of the fixation device and surgical implantation is feasible for the majority of trained veterinarians and animal research personnel. Using example data, we also provide methodologies for the quantitative analysis of bone healing for the model.

Animal models are frequently employed to mimic serious bone injury in biomedical research. Due to their small size, establishment of stabilized bone lesions in mice are beyond the capabilities of most research groups. Herein, we describe a simple method for establishing and analyzing experimental femoral defects in mice.

Une simple critique de taille fémorale défauts modèle chez la souris

While bone has a remarkable capacity for regeneration, serious bone trauma often results in damage that does not properly heal. In fact, one tenth of all ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality of life when compared to dialysis. Although the last few decades have seen major improvements in patient outcomes following kidney transplantation, the increasing shortage of available organs represents a severe problem worldwide. To expand the donor pool, marginal kidney grafts recovered from extended criteria donors (ECD) or donated after circulatory death (DCD) are now accepted for transplantation. To further improve the postoperative outcome of these marginal grafts, research must focus on new therapeutic approaches such as alternative preservation techniques, immunomodulation, gene transfer, and stem cell administration.
Experimental studies in animal models are the final step before newly developed techniques can be translated into clinical practice. Porcine kidney transplantation is an excellent model of human transplantation and allows investigation of novel approaches. The major advantage of the porcine model is its anatomical and physiological similarity to the human body, which facilitates the rapid translation of new findings to clinical trials. This article offers a surgical step-by-step protocol for an autotransplantation model and highlights key factors to ensure experimental success. Adequate pre- and postoperative housing, attentive anesthesia, and consistent surgical techniques result in favorable postoperative outcomes. Resection of the contralateral native kidney provides the opportunity to assess post-transplant graft function. The placement of venous and urinary catheters and the use of metabolic cages allow further detailed evaluation. For long-term follow-up studies and investigation of alternative graft preservation techniques, autotransplantation models are superior to allotransplantation models, as they avoid the confounding bias posed by rejection and immunosuppressive medication.

Porcine models of organ transplantation provide an important platform to study mechanisms of organ preservation. This article describes a heterotopic porcine renal autotransplantation model, which allows investigating new approaches to improve the outcome of transplantation using marginal kidney grafts.

Hétérotopique rénale Autotransplantation dans un modèle porcin: Un protocole Step-by-Step

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

A l&#39;étape par le protocole de l&#39;étape pour la chirurgie sous-rétinienne chez les lapins

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

Création d&#39;abdominaux adhérences chez la souris

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the patients are unaware of such disorders or are having difficulty expressing their symptoms. Until now, several devices for perspiration monitoring have been developed; however, such devices tend to have a relatively large exterior, considerable power consumption, and/or less sensitivity.
Recently, we developed a small, wireless device for perspiration monitoring. The device consists of a temperature/relative humidity (T/RH) sensor, battery-driven small data logger, and silica gel as a desiccant in a small cylindrical exterior. The T/RH sensor is placed between the detection windows (through which the water vapor from the skin enters) and the silica gel. The underlying principle of the perspiration monitoring device is based on Fick&#39;s law of diffusion, which means that water vapor flux from the skin to the silica gel (i.e.&#160;transepidermal water loss and perspiration) can be captured by change in humidity at the T/RH sensor. In addition, a baseline subtraction method was adopted to distinguish perspiration and transepidermal water loss.
As shown in the previous report, the developed device can monitor the perspiration at any sites of the body in an easy, wireless manner. However, detailed methods of how to use the device have not been disclosed yet. In this article, therefore, we would like to show the point-by-point tutorials of how to use the device for perspiration monitoring, by showing the sympathetic activity test with the sympathetic skin response monitoring as an example.

Recently, we developed a small wireless device for perspiration monitoring. In this article, we present detailed protocols on how to use the device for perspiration monitoring with an example of the sympathetic activity test.

Un protocole détaillé pour Transpiration surveillance utilisant un roman, petit appareil sans fil

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

A Detailed Protocol for Physiological Parameters Acquisition and Analysis in Neurosurgical Critical Patients

Intracranial pressure (ICP) monitoring is now widely used in neurosurgical critical patients. Besides mean ICP value, the ICP derived parameters such as ICP waveform, amplitude of pulse (AMP), the correlation of ICP amplitude and ICP mean (RAP), pressure reactivity index (PRx), ICP and arterial blood pressure (ABP) wave amplitude correlation (IAAC), and so on, can reflect intracranial status, predict prognosis, and can also be used as guidance of proper treatment. However, most of the clinicians focus only on the mean ICP value while ignoring these parameters because of the limitations of the current devices. We have recently developed a multimodality monitoring system to address these drawbacks. This portable, user-friendly system will use a data collecting and storing device to continuously acquire patients&#39; physiological parameters first, i.e., ABP, ICP, and oxygen saturation, and then analyze these physiological parameters. We hope that the multimodality monitoring system will be accepted as a key measure to monitor physiological parameters, to analyze the current clinical status, and to predict the prognosis of the neurosurgical critical patients.

Recently, we have developed a portable multimodality monitoring system for the monitoring of various physiological parameters in neurosurgical critical patients. Detailed protocols on how to use this multimodality monitoring system are presented here.

Un protocole détaillé pour les paramètres physiologiques Acquisition et analyse chez les Patients critiques neurochirurgicaux

Intracranial pressure (ICP) monitoring is now widely used in neurosurgical critical patients. Besides mean ICP value, the ICP derived parameters such as ...