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* Ces auteurs ont contribué à parts égales
Un protocole non-invasif pour l'évaluation transthoracique d'échocardiographie de l'anatomie cardiaque et de la fonction pour des rats adultes est présenté dans l'étude courante. Les valves cardiaques, les quatre chambres cardiaques et l'aorte ascendante, l'arc aortique et l'aorte descendante sont étudiées en détail.
L'utilisation de modèles animaux expérimentaux est devenue cruciale dans la science cardiovasculaire. La plupart des études utilisant des modèles de rongeurs sont axées sur l'imagerie bidimensionnelle pour étudier l'anatomie cardiaque du ventricule gauche et de l'écho du mode M afin d'évaluer ses dimensions. Toutefois, cela pourrait limiter une étude exhaustive. Ici, nous décrivons un protocole qui permet une évaluation de la taille de chambre de coeur, de la fonction ventriculaire gauche (systolique et diastolique) et de la fonction valvulaire. Une machine médicale conventionnelle d'ultrason a été employée dans ce protocole et différentes vues d'écho ont été obtenues par les fenêtres parasternal gauches, apical et suprasternal. Dans la fenêtre parasternale gauche, l'axe long et court ont été acquis pour analyser les dimensions gauches de chambre, le ventricule droit et les dimensions d'artère pulmonaire, et la fonction mitrale, pulmonaire et aortique de valve. La fenêtre apical permet la mesure des dimensions de la chambre cardiaque et l'évaluation des paramètres systoliques et diastoliques. Il permet également l'évaluation Doppler avec la détection et la quantification des perturbations valvulaires cardiaques (régurgitation ou sténose). Différents segments et murs du ventricule gauche sont visualisés tout au long de toutes les vues. Enfin, l'aorte ascendante, l'arc aortique et l'aorte descendante peuvent être représentés à travers la fenêtre suprasternale. Une combinaison de l'imagerie par ultrasons, du flux de Doppler et de l'évaluation de Doppler de tissu ont été obtenues pour étudier la morphologie et la fonction cardiaques. Cela représente une contribution importante pour améliorer l'évaluation de la fonction cardiaque chez les rats adultes ayant un impact pour la recherche à l'aide de ces modèles animaux.
Les maladies cardiovasculaires sont la principale cause de décès en Europe, responsables de plus de 4 millions de décès par an, malgré les progrès de la thérapie, du diagnostic et du suivi qui ont amélioré les résultats des patients ces dernières années. Une évolution technologique rapide a contribué aux progrès des soins cardiovasculaires aux patients. Dans ces outils de diagnostic, une attention particulière a été accordée à l'imagerie biomédicale, qui permet une évaluation anatomique et fonctionnelle d'une manière non invasive1,2,3. De même, la médecine bénéficie des résultats de la recherche biomédicale. Les modèles animaux expérimentaux sont très utiles pour tester des hypothèses issues du milieu clinique et pour développer des thérapies innovantes4,5.
L'utilisation de l'échocardiographie comme outil de recherche sur les modèles animaux expérimentaux suscite un intérêt croissant, ce qui permet l'acquisition de mesures multiples d'un seul animal dans le cadre d'études longitudinales. Il est important de noter qu'il y a certains avantages à utiliser des modèles de murine ou de rongeurs. La courte période de gestation, le faible coût de reproduction et de logement, la connaissance de leur génome et la possibilité de développer des animaux transgéniques sont les principaux avantages de ces espèces, ce qui les rend attrayantes pour étudier les mécanismes impliqués dans les maladies cardiovasculaires4,5,6,7,8,9. Bien que les modèles de rat et de souris montrent des avantages similaires, les rats sont le choix classique dans les études cardio-vasculaires en raison de leur plus grande dimension physique et la fréquence cardiaque inférieure qui fournit de meilleures images dans les études d'échocardiographie4,5,6,7,8,9,10.
Nous décrivons un protocole d'échocardiographie utilisant l'équipement médical conventionnel d'ultrason pour évaluer des chambres cardiaques et des valves cardiaques (anatomie et fonction) utilisant des rats de Wistar. Il s'agit d'un protocole concis et complet pour les images d'acquisition de temps court et les boucles qui permettent des mesures hors ligne, qui peuvent être révisées ultérieurement pour intégrer de nouvelles variables ou mesures au fil du temps.
Toutes les procédures animales ont été effectuées conformément à la directive 2010/63/UE. Les procédures ont été approuvées par l'organisme institutionnel de protection des animaux, agréé par la DGAV, l'autorité compétente portugaise pour la protection des animaux (numéro de licence 0421/000/000/2018).
REMARQUE : Des IgS femelles Wistar Han (Crl:WI(Han) des Laboratoires de Charles River (12-16 semaines) ont été utilisés. Ce protocole est spécifique pour les rats indépendamment de leur souche, âge ou sexe.
1. Préparation des rats pour l'échocardiographie : Protocole d'anesthésie et de réversion
2. Échocardiographie
REMARQUE : Les échocardiogrammes sont exécutés avec un équipement échocardiographique clinique conventionnel, avec une sonde cardiaque de 12 MHz, et incluent les images fixes acquises et les boucles dans le parasternal (long axe et vues courtes d'axe), apical (4, 5, 2 et 3 chambres) et vues suprasternales. Un électrocardiogramme est enregistré pour identifier le systole final et le diastole final, pour les procédures de mesure et l'acquisition de boucle (ECG déclenché)11,12. Un préensemble est utilisé pour maintenir la définition d'image stable entre les rats : fréquence 5-10 MHz, profondeur 2,5 cm, fréquence d'image 125 fps, échantillon Doppler 1,0 mm et couleur Doppler alias vitesse de 40 cm/s. Des boucles ont été enregistrées avec au moins 3 battements de coeur.
3. Mesures
La figure 1 montre la position de la sonde sur la poitrine pour afficher la vue de long axe de la fenêtre parasternale (Figure 2). Cette vue permet des mesures précises de la cavité et de l'épaisseur du ventricule gauche, de la fonction systolique (figure 3), du diamètre de sortie du ventricule gauche (à appliquer dans d'autres formules comme dans la sortie cardiaque), du diamètre croissant de l'aorte et du diamètre de l'oreillette gauche. Toutes les dimensions de chambre ont été indexées au poids corporel. La vue de long axe parasternal permet l'évaluation anatomique (avec 2D-Echo) et fonctionnelle (avec la formation image de Doppler de couleur) des valves aortiques et mitrales. Cette vue permet également l'identification et la mesure de l'effusion péricardique, si présent. M-Mode peut être utilisé pour les mesures ventriculaire sérologique gauche(figure 3):septum et les dimensions des parois postérieures, les dimensions ventriculaire gauche, la fonction systolique ventriculaire gauche et la masse ventriculaire gauche1,3,4,10,14.
La fonction systolique du ventricule gauche est évaluée par un raccourcissement fractionnaire et aussi par la visualisation de l'excursion et de l'épaississement des murs pendant le cycle cardiaque (évalué par l'ECG). La masse ventriculaire gauche est obtenue par la formule :
Masse LV 0,8 x 1,04 x [(IVS ' LVID ' PWT)3 - LVID3]
(IVS : épaisseur de septum interventriculaire ; LVID : diamètre interne de ventricule gauche ; PWT: épaisseur de la paroi postérieure, avec des mesures faites à la fin-diastole)1,3,4,10,14.
La figure 4 montre la position de la sonde sur la poitrine pour afficher la vue de l'axe court de la fenêtre parasternale. Cette vue permet la visualisation de la sortie ventriculaire droite, de la valve aortique, de la valve pulmonaire, de l'artère pulmonaire (figure 5), et de la taille ventriculaire gauche de la cavité moyenne (figure 6) et de la fonction (avec visualisation 2D de la contractilité segmentale)1,3,4,10,11.
La figure 7 montre la position de la sonde sur la poitrine pour afficher les vues apaïques. Dans la vue apical à quatre chambres (figure 8), toutes les dimensions à 4 chambres (zones de toutes les 4 chambres et le volume du ventricule gauche) et la fonction peuvent être évaluées. La caractérisation anatomique et fonctionnelle des valves mitrales et tricuspides peut également être évaluée. L'écoulement ventriculaire gauche, le flux de valve aortique et l'aorte ascendante ont été obtenus avec la vue apanique de 5-chambre. La vue apical à 2 chambres (figure 9) se concentre sur l'oreillette gauche et la taille et la fonction ventriculaires. Les vues apicales à 3 et 5 chambres permettent une valve aortique et une évaluation de sortie ventriculaire gauche. Toutes les vues combinées pour permettre l'évaluation des différents murs ventriculaires gauches et les segments et l'étude de différents paramètres de fonction systolique et diastolique1,3,4,10,11.
La fonction diastolique ventriculaire gauche peut être évaluée par la formation image pulsée de Doppler à la valve mitrale (figure 10),temps de relaxation isovolumetric du ventricule gauche, et formation image de Doppler de tissu à l'annulus mitral1,3,12. L'afflux mitral normal se compose du flux biphasique de l'oreillette gauche au ventricule gauche. Dans des conditions normales, le débit précoce coïncide avec l'onde E est plus élevé que le flux ultérieur qui se produit avec la contraction auriculaire (onde A).
La fonction diastolique ventriculaire gauche peut également être étudiée avec l'imagerie de Doppler de tissu, qui analyse des vitesses myocardiques (figure 11). Le tissu spectral Doppler imagerie étudie la fonction systolique et diastolique sur un cycle cardiaque et a 3 pics: un pic systolique positif (s'-onde) représentant la contraction myocardique et deux pics diastoliques négatifs (e'-onde de relaxation myocardique précoce et une onde de contraction auriculaire active en diastole tardive) évaluée au niveau annulaire mitral, de septal ou latéral annulus1,3,4,10,14.
La caractérisation de la fonction diastolique ventriculaire gauche par l'imagerie Pulsée Doppler à la valve mitrale et le tissu Doppler imagerie à l'annulus mitral devrait inclure les paramètres suivants: Vitesse E-onde, Vitesse A-onde, E / A rapport, e' vitesse, a' vitesse, E/ e' ratio et le temps de décélération de E-wave1,3,4,10,14.
La fonction systolique ventriculaire gauche peut être étudiée par la mesure d'excursion systolique d'avion annulaire mitral, le raccourcissement fractionnel (figure 3),la fraction d'éjection, le volume d'accident vasculaire cérébral, la sortie cardiaque, la vitesse systolique de tissu s'onde (figure 11) et la souche longitudinale globale par déformation myocardique avec la contrainte et l'analyse de taux de contrainte (Figure 12)1,3,4,4 ,10.
La fraction d'éjection est calculée avec des volumes par une méthode Simpson modifiée basée sur des tracés visuels de l'interface de sang et de tissu utilisant les vues apicales de 4 et 2 chambres. Au niveau de la valve basale ou mitrale, le contour est fermé en reliant les deux sections opposées de l'anneau mitral avec une ligne droite1,3,4,10. Le volume de sang qui forme la fraction d'éjection représente le volume de l'AVC. Si la valve mitrale est compétente, alors cela peut être multiplié par la fréquence cardiaque pour calculer la sortie cardiaque1,3,4. Le volume de l'AVC est basé sur les mesures du flux sanguin à travers le tractus ventriculaire gauche pendant le cycle cardiaque, en utilisant cette formule:
SV x (diamètre LVOT /2)2 x VTI (LVOT)
(LVOT : tract gauche de sortie de ventricule ; Le diamètre de LVOT est mesuré dans la vue de long axe parasternal. VTI(LVOT): temps de vitesse intégral tracé à partir de l'onde pulsée Doppler à LVOT dans la vue apical 5-chambre)1,3.
La mesure la plus couramment utilisée à base de souches de la fonction systolique globale LV est la souche longitudinale globale obtenue par déformation myocardique avec l'analyse des souches et des taux de contrainte1,3,4,10. Il est généralement évalué par échocardiographie de speckle-tracking, où le pic de la souche longitudinale globale décrit le changement relatif de longueur du myocarde de LV entre le fin-diastole et le fin-systole :
GLS(%) (MLs et MLd)/MLd
(MLs: longueur myocardique à la fin-systole; MLd: longueur myocardique à la fin-diastole).
Les mesures devraient commencer par la vue apicale à 3 chambres pour visualiser la fermeture de la valve aortique, en utilisant des clics d'ouverture et de fermeture de la valve aortique dans l'imagerie spectrale Doppler ou l'ouverture de la valve aortique et la fermeture sur l'imagerie m-mode1,3,4,10. Les points de vue apical de 4 et 2 chambres sont également évalués, et les mesures des trois vues sont moyennes. La fonction systolique ventriculaire droite est évaluée par l'excursion systolique d'avion annulaire tricuspid (TAPSE) et la formation image de Doppler de tissu à l'annulus tricuspid. Toutes les valves sont étudiées par imagerie doppler couleur, permettant la visualisation directe de la sténose ou la régurgitation (Figure 13). Si la régurgitation de valve aortique est présente, elle peut être étudiée et quantifiée par la contracta de véna et le temps de demi-pression avec l'imagerie continue de Doppler (figure 14)15. La figure 15 montre l'aorte ascendante, l'arc aortique et l'aorte descendante proximale visualisée en fenêtre suprasternale.
Figure 1 : Positionnement de la sonde pour vue à long axe parasternal. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 2 : vue à long axe parasternal 2D de l'oreillette gauche (LA), du ventricule gauche (LV), de la valve aortique, de l'aorte ascendante (Ao) et de la valve mitrale (MV). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 3 : Mode M du ventricule gauche avec des mesures, y compris l'épaisseur du septum interveniculaire dans le diastole (IVSd), le diamètre interne du ventricule gauche en diastole (LVIDd) et le systole (LVID), l'épaisseur postérieure du mur (LVIPWd), le raccourcissement fractionnel (%FS), la fraction d'éjecnement calculée avec Teichholz [méthode(EF) masse ventriculaire gauche (LVdMass), épaisseur pariétale (EPR) et masse de ventricule gauche avec calcul adapté au rongeur (SOURIS DE LVM). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 4 : Positionnement de la sonde pour la vue à axe court parasternal. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 5 : Vue à axe court parasternal 2D à la valve aortique (Ao), à l'oreillette gauche (LA), à l'oreillette droite (RA), au ventricule droit (RV) et à l'artère pulmonaire (AP). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 6 : Vue à axe court parasternal au niveau papillaire ventriculaire gauche. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 7 : Positionnement de la sonde pour une vue apical à 4 chambres. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 8 : 2D de vue à 4 chambres, y compris l'oreillette gauche (LA), le ventricule gauche (LV), l'oreillette droite (RA) et le ventricule droit (RV). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 9 : Écho 2D de la vue apical à 2 chambres, y compris l'oreillette gauche (LA), le ventricule (LV) et la valve mitrale (MV). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 10 : Doppler d'onde pulsée à la valve mitrale, montrant la vitesse de l'onde E - 0,49 m/s, la vitesse des ondes A - 0,33 m/s, le temps de décélération des ondes E de 35 met et le rapport E/A - 1,48. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 11 : Tissu Spectral Doppler à l'annulus mitral septal, montrant des ondes de tissu myocardique de diastole (e' et a') et de systole (s'). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 12 : Analyse de déformation myocardique avec souche longitudinale évaluée à la vue à 4 chambres. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 13 : Visualisation de la régurgitation aortique avec Color Doppler. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 14 : Doppler continu de valve aortique à la vue apical à 5 chambres, montrant la régurgitation au-dessus de la ligne de base avec un temps de demi-pression mesuré de 95 ms. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Figure 15 : Vue suprasternale de l'aorte ascendante (Asc), de l'arc aortique (Arche) et de la descente de l'aorte (Desc). Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de ce chiffre.
Ce protocole permet une étude échocardiographique complète à l'aide d'appareils d'échographie médicale conventionnels et d'une sonde à haute fréquence chez les rats adultes. Il s'agit d'un aspect important du protocole, puisque l'équipement d'échographie dédié aux petits animaux est coûteux et l'investissement n'est pas toujours justifiable.
Comme les études d'imagerie longitudinale exigent l'anesthésie répétée, une combinaison de medetomidine-midazolam-fentanyl a été proposée dans ce protocole puisqu'il est plus approprié pour l'usage en série une fois comparé à l'isoflurane ou à un mélange de kétamine-xylazine, chez les rats de Wistar. Cependant, le protocole échocardiographique proposé est compatible avec n'importe quel autre protocole d'anesthésie16. Comme décrit, notre protocole d'échocardiographie inclut l'évaluation de plusieurs paramètres qui permettent l'identification des changements cardiaques anatomiques et fonctionnels.
En se concentrant sur la caractérisation anatomique, il est possible d'évaluer les dimensions de toutes les chambres cardiaques et leurs dilatations, hypertrophie ventriculaire gauche, fibrose valvlaire ou calcifications. En ce qui concerne la fonction cardiaque, la fonction systolique ventriculaire gauche et diastolique et la fonction systolique ventriculaire droite peuvent être analysées1,3,4. En outre, l'anatomie et la fonction de la valve cardiaque sont étudiées, utilisant l'écho 2D pour la caractérisation anatomique (identification de la fibrose, de la calcification ou de l'ouverture anormale) et utilisant la formation image de Doppler pour la caractérisation fonctionnelle et la détection de la sténose ou des régurgitations. L'imagerie Color Doppler permet de détecter la direction du débit et les turbulences et les ondes spectrales Doppler permettent de mesurer les vitesses et les gradients1,3.
Une qualité d'image adéquate a été obtenue chez presque tous les rats (plus petit poids de 200 g), bien qu'en raison de différences inter-individuelles dans l'anatomie, les vues échocardiographiques ne peuvent pas être obtenues avec exactement la même définition entre les rats, qui peut avoir un impact dans les mesures de dimension de cavité. Il y a 5% de variabilité intra-observateur rapportée sur les mesures de mode M ventriculaire gauche17. En particulier, lors de l'utilisation de M-Mode pour les mesures ventriculaires gauches, les limitations suivantes peuvent exister : difficultés à obtenir un angle perpendiculaire ; y compris seulement les segments basaux (résultant en des mesures inexactes en présence d'hypertrophie asymétrique ou de dysfonctionnement systolique régional); et les hypothèses géométriques (considérant que le ventricule gauche est un ellipsoïde prolate avec un rapport long/court d'axe de 2:1 et la distribution symétrique de l'hypertrophie). En outre, l'inclusion de mesures en cubes peut avoir un impact sur la précision, puisque même une petite erreur dans les dimensions peut conduire à une masse surestimée1,3,10. Même lorsque vous utilisez des volumes et la fraction d'éjection calculée par la méthode de Simpson, il y a des inconvénients : l'apex est souvent raccourci; le décrochage endocardique peut biaiser la mesure et est aveugle pour façonner les distorsions non visualisées dans les vues apical 4 et 2-chambre1,3,10.
Fait important, ce protocole met en évidence l'utilisation de mesures et d'évaluations avancées, telles que la souche de ventricule gauche et le taux de tension, évalué par le suivi des taches, pour obtenir des informations plus complètes sur le comportement des fibres myocardiques1,3. Pour une évaluation plus précise du nombre de souches et de fréquences de contrainte, l'optimisation de la qualité de l'image, les maximisations du taux d'image et la minimisation du raccourcissement de l'apex sont nécessaires. Midwall souche longitudinale mondiale est utilisée car il est d'accord avec plus de données disponibles publiées et a été montré dans plusieurs études cliniques pour être robuste et reproductible10. La surveillance électrocardiographique intégrée dans l'équipement est très sujette aux artefacts, ce qui est une contrainte. En outre, il est très important d'indiquer que l'état cardiaque fonctionnel ou hémodynamique du rat peut dépendre de variables telles que la température, la tension artérielle et la fréquence cardiaque4,6,7,8,9,13,14,17.
Étant donné que la résolution est liée à la fréquence de la sonde, on s'attend à ce que les développements futurs développent des sondes à fréquence plus élevée et, par conséquent, une meilleure définition de la résolution et de l'image dans l'imagerie cardiovasculaire non invasive chez les petits animaux, avec ce type de Équipement. La normalisation des méthodes et des mesures est considérée comme essentielle dans ce domaine de recherche, atteignant un diagnostic échocardiographique plus précis des modèles expérimentaux de rats et aboutissant à une meilleure compréhension de la biologie moléculaire des maladies cardiovasculaires humaines. Maladies.
Les auteurs n'ont rien à révéler.
ARSP et ATP sont soutenus par les bourses SFRH/BD/121684/2016 et SFRH/BPD/123181/2016, respectivement, de Fundaçao para a Ciência e Tecnologia.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
12S-RS Probe | GE Medical Systems | H44901AB | |
Antisedan (5 mg/ml) | Esteve | P01B9003 | |
EKG monitoring unit | GE Medical Systems | N/A | |
Electrodes | FIAB | F9089/100 | |
Fentanilo (0.05 mg/ml) | B.Braun | BB3644960 | |
Flumazenilo (0.1 mg/ml) | Generis | MUEH5933080 | |
Insuline Syringe 1ml | SOL M | 1612912 | |
Lubrithal gel (10mg) | Dechra | NC519 | |
Medetor (1 mg/ml) | Vibarc | P01B0308 | |
Midazolan (5 mg/ml) | Labesfal | MUEH5506191 | |
Shaver Razor AESCULAP Isis GT608 | Braun | 90200714 | |
Small Animal Heated Pad 120volts | K&H Manufacturing inc. | 655199010608 | |
Ultrasound Gel | Parker Laboratories | REF 01-08 | |
Ultrasound machine | GE Medical Systems | VIVID T8 | |
Underpads | Henry Schein | 900-8132 |
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