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Résumé

Le présent protocole décrit la caractérisation échocardiographique de la morphologie et de la fonction ventriculaires droites dans un modèle d’hypertension artérielle pulmonaire chez le rat.

Résumé

L’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une maladie progressive causée par la vasoconstriction et le remodelage des petites artères dans les poumons. Ce remodelage entraîne une augmentation de la résistance vasculaire pulmonaire, une détérioration de la fonction ventriculaire droite et une mort prématurée. Les traitements actuellement approuvés pour l’HTAP ciblent en grande partie les voies vasodilatatrices pulmonaires; cependant, les récentes modalités thérapeutiques émergentes sont axées sur d’autres nouvelles voies impliquées dans la pathogenèse de la maladie, y compris le remodelage du ventricule droit (RV). Les techniques d’imagerie qui permettent l’évaluation longitudinale de nouveaux traitements sont très utiles pour déterminer l’efficacité de nouveaux médicaments dans les études précliniques. L’échocardiographie transthoracique non invasive reste l’approche standard pour évaluer la fonction cardiaque et est largement utilisée dans les modèles de rongeurs. Cependant, l’évaluation échocardiographique du RV peut être difficile en raison de sa position anatomique et de sa structure. En outre, il n’existe pas de lignes directrices normalisées pour l’échocardiographie dans les modèles précliniques de rongeurs, ce qui rend difficile une évaluation uniforme de la fonction du rotavirus dans les études menées dans différents laboratoires. Dans les études précliniques, le modèle de lésion monocrotaline (MCT) chez le rat est largement utilisé pour évaluer l’efficacité des médicaments pour le traitement de l’HTAP. Ce protocole décrit l’évaluation échocardiographique du rotavirus chez les rats HAP naïfs et induits par le TCM.

Introduction

L’HTAP est une maladie évolutive définie comme une pression artérielle pulmonaire moyenne au repos supérieure à 20 mmHg1. Les changements pathologiques dans l’HTAP comprennent le remodelage de l’artère pulmonaire (AP), la vasoconstriction, l’inflammation et l’activation et la prolifération des fibroblastes. Ces changements pathologiques entraînent une augmentation de la résistance vasculaire pulmonaire et, par conséquent, un remodelage ventriculaire droit, une hypertrophie et une défaillance2. L’HTAP est une maladie complexe qui implique la diaphonie entre plusieurs voies de signalisation. Les médicaments actuellement approuvés pour le traitement de l’HTAP ciblent principalement les voies vasodilatateurs, y compris la voie oxyde nitrique-guanosine monophosphate cyclique, la voie de la prostacycline et la voie de l’endothéline. Les traitements ciblant ces voies ont été utilisés à la fois en monothérapie et en combinaison 3,4. Malgré les progrès réalisés dans le traitement de l’HTAP au cours de la dernière décennie, les résultats du registre américain REVEAL montrent un faible taux de survie à 5 ans pour les patients nouvellement diagnostiqués5. Plus récemment, les modalités thérapeutiques émergentes se sont concentrées sur les agents modificateurs de la maladie qui peuvent avoir un impact sur la physiopathologie multifactorielle du remodelage vasculaire survenant dans l’HTAP dans l’espoir de perturber la maladie6.

Les modèles animaux d’HTAP sont des outils précieux pour évaluer l’efficacité des nouveaux traitements médicamenteux. Le modèle de rat HAP induit par MCT est un modèle animal largement utilisé caractérisé par un remodelage des vaisseaux artériels pulmonaires, ce qui entraîne à son tour une augmentation de la résistance vasculaire pulmonaire et une hypertrophie et un dysfonctionnement ventriculaires droits 7,8. Pour évaluer l’efficacité des nouveaux traitements, les chercheurs se concentrent normalement sur l’évaluation terminale de la pression du rotavirus sans tenir compte de l’évaluation longitudinale de la pression PA, de la morphologie du rotavirus et de la fonction du rotavirus. L’utilisation de techniques d’imagerie non invasives et non terminales est cruciale pour un examen complet de la progression de la maladie dans des modèles animaux. L’échocardiographie transthoracique reste l’approche standard pour évaluer la morphologie et la fonction cardiaques dans les modèles animaux en raison de son faible coût et de sa facilité d’utilisation par rapport à d’autres modalités d’imagerie, telles que l’imagerie par résonance magnétique. Cependant, l’évaluation échocardiographique du RV peut être difficile en raison du positionnement du RV sous l’ombre du sternum, de sa trabéculation bien développée et de sa forme anatomique, ce qui rend difficile la délimitation de la bordure endocardique 9,10,11.

Cet article vise à décrire un protocole complet pour évaluer les dimensions, les aires et les volumes du rotavirus, ainsi que la fonction systolique et diastolique chez les HAP naïfs et induits par le TCM chez les rats Sprague Dawley (SD). De plus, ce protocole détaille une méthode pour évaluer les dimensions échocardiographiques dans l’oreillette droite normale et dilatée.

Protocole

Toutes les expériences de ce protocole ont été réalisées conformément aux directives de soins aux animaux du comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Université de l’Illinois à Chicago. Les rats mâles Sprague Dawley (SD) pesaient entre 0,200 et 0,240 kg au moment de l’injection de TCM; Cependant, le protocole décrit dans cet article peut être utilisé avec une gamme de poids corporel plus large. Les animaux ont été obtenus d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux).

1. Plan d’étude

  1. Animaux
    1. Procurez-vous des rats SD mâles et laissez-les s’acclimater pendant 4 à 7 jours. Regroupez les rats par le groupe expérimental dans des cages propres et gardez-les dans une pièce maintenue à 20-26 ° C (68-79 ° F) et éclairée avec des lumières fluorescentes chronométrées pour donner une lumière de 14 heures, 10 heures de cycle d’obscurité.
    2. Donnez aux rats ad libitum l’accès à un régime alimentaire standard et à l’eau du robinet pendant toute la durée de l’expérience.
  2. Administration du TCM
    1. Le jour d’étude 0, administrer aux rats une dose sous-cutanée (3,0 mL/kg) de TCM (60 mg/kg en HCl/NaOH, pH 7,4; voir le tableau des matières; Groupe MCT) ou véhicule (eau désionisée, pH 7,4; Groupe témoin).
      REMARQUE : En raison des précautions de manipulation associées à l’administration du TCM, tous les rats devraient recevoir le traitement le jour d’étude 0 dans une salle de logement présentant un risque chimique et y être logés jusqu’au jour d’étude 7.
    2. Le jour d’étude 7, transférez les rats dans une salle de logement générale pour la durée de l’étude.
  3. Observations cliniques
    1. Effectuer des observations du côté de la cage pour la santé générale et l’apparence une fois par jour. Observez les animaux pour détecter la mortalité et les signes de douleur et de détresse.
    2. Consigner toutes les observations inhabituelles notées pendant toute la durée de l’étude dans le carnet de données brutes.
  4. Poids corporel
    1. Enregistrer le poids corporel le jour 0 de l’étude (prédose), chaque semaine tout au long de l’étude et le jour de l’échocardiographie.

2. Échocardiographie

  1. Préparation
    1. Le jour 23 suivant l’administration du TCM, anesthésier les rats avec de l’isoflurane à raison de 2 % à 3 %, entraîné par 100 % d’oxygène (1 L/min) dans une chambre à induction (voir le tableau des matériaux).
    2. Retirer les rats de la chambre une fois que la conscience a été perdue et les transférer à la plate-forme animale de la station d’imagerie (voir Tableau des matériaux) dans une position de décubitus dorsal. Administrer l’isoflurane à l’aide d’un cône nasal relié à un vaporisateur qui fournit 1 % à 2 % d’isoflurane alimenté à 100 % d’oxygène (1 L/min).
    3. Appliquez du gel d’électrode sur chaque patte et fixez les pattes dans les plaques de plomb d’électrocardiogramme de la plate-forme animale.
    4. Enlevez la fourrure en rasant la poitrine et en utilisant un agent d’épilation (voir le tableau des matériaux). Fixez une sonde de température rectale (voir le tableau des matériaux) en place. Placez des rouleaux de coton sur les côtés droit et gauche de l’animal et fixez-les avec du ruban adhésif pour maintenir la position de l’animal lorsque la plate-forme est inclinée.
  2. Surveillance
    1. Surveillez la température corporelle et la fréquence cardiaque (FC) au moyen du système d’imagerie par ultrasons (voir le tableau des matériaux) tout au long de la procédure.
    2. Maintenez la température corporelle à 37 ± 0,5 °C et maintenez la FC à 350 bpm ou plus, si possible. Utilisez la table chauffante et une lampe chauffante pour maintenir la température.
  3. Acquisition d’images
    1. Effectuer l’échocardiographie transthoracique à l’aide d’un système d’imagerie par ultrasons à haute fréquence équipé d’un transducteur à ultrasons à matrice à semi-conducteurs (voir le tableau des matériaux).
      NOTE: Toutes les directions notées dans les méthodes échocardiographiques se réfèrent à la droite ou à la gauche de l’échographiste.
    2. Vue du long axe parasternal (PLAX) ventriculaire gauche (VG)
      1. Avec les rats en position de décubitus dorsal, inclinez la plate-forme vers la gauche et abaissez-la caudalement d’environ 10°.
      2. Placez le transducteur dans le support en position semi-verrouillée avec l’encoche pointant dans la direction caudale. Déplacez le transducteur de sorte qu’il pointe vers la ligne parasternale gauche. Faites pivoter le transducteur dans le sens inverse des aiguilles d’une montre d’environ 30°-45° et inclinez-le légèrement crânienne le long de l’axe y (axe latéral du transducteur).
      3. Appliquez du gel à ultrasons chaud (voir le tableau des matériaux) sur la poitrine du rat et abaissez le transducteur jusqu’à ce qu’il soit en contact avec le gel.
      4. Déplacez la plate-forme vers la droite ou la gauche pour obtenir une vue de l’ensemble du LV au centre de l’écran. Ajustez la profondeur de l’image si nécessaire et déplacez la zone focale vers la paroi postérieure.
      5. Effectuez des ajustements fins dans la position de la plate-forme pour vous assurer que l’aorte et l’apex sont dans le même plan horizontal et que le tube de sortie du BT est visible.
      6. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer les données. Des exemples de vues PLAX des images LV sont présentés à la figure 1A.
        REMARQUE: L’imagerie du VG permet de se familiariser avec la position du cœur dans la poitrine. Un VR dilaté peut déplacer le LV.
    3. Vue PLAX modifiée de la voie d’écoulement ventriculaire droite
      1. Inclinez la plate-forme vers la droite d’environ 10°-15° et abaissez-la caudally d’environ 5°.
      2. Déplacez le transducteur pour pointer vers la ligne parasternale droite du rat. Faire pivoter le transducteur dans le sens inverse des aiguilles d’une montre à environ 30°.
      3. Appliquez le gel à ultrasons sur la poitrine du rat et abaissez le transducteur jusqu’à ce qu’il soit en contact avec le gel.
      4. Déplacez la plate-forme vers la gauche ou la droite jusqu’à ce que le VR soit en vue. Dans cette vue PLAX modifiée, la paroi du VR et le septum interventriculaire (IVS) sont clairement visibles, comme le montre la figure 1B.
      5. Faites pivoter le transducteur dans le sens inverse des aiguilles d’une montre si nécessaire pour vous assurer que l’aorte et la valve mitrale sont visibles.
      6. Déplacez la zone focale vers la région de mur libre de VR pour améliorer la définition de la bordure endocardique et ajuster le gain si nécessaire.
      7. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer les données.
      8. Placez la ligne de volume d’échantillon en mode M à la région où le VR est le plus large et ajustez la porte pour englober le VR et le BT. La ligne de volume de l’échantillon est généralement placée entre l’ombre de deux vertèbres contiguës chez le rat.
      9. Appuyez sur Mettre à jour , puis sur Cine Store pour enregistrer les données. Des exemples d’images en mode M à la vue PLAX modifiée sont présentés à la figure 1C, et ces images sont utilisées pour analyser le diamètre interne du VR pendant la diastole (RVIDd), le diamètre interne du VR pendant la systole (RVID) et l’épaisseur de la paroi libre du VR (RVFWT).
      10. Soulevez le transducteur et repositionnez-le de sorte qu’il ne soit que légèrement incliné vers la ligne parasternale droite du rat. Déplacez la plate-forme dans une position légèrement inclinée vers la droite.
      11. Abaissez le transducteur jusqu’à ce qu’il soit en contact avec le gel.
      12. Déplacez la plate-forme vers la queue et vers la droite ou la gauche jusqu’à ce que la voie d’écoulement du VR soit visible et que la valve pulmonaire (PV) soit mise au point et clairement visible.
      13. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer les données. Des exemples de mode B à la vue PLAX modifiée au niveau des images du tube de sortie ventriculaire droit sont présentés à la figure 2A; ces images sont utilisées pour analyser le diamètre PV.
      14. En conservant le même emplacement d’image en mode B, appuyez sur Couleur pour faciliter l’identification du flux à travers le PV. Ajustez la vitesse pour optimiser le repliement afin que le point de vitesse le plus élevé soit visible. Augmentez la fréquence d’images, si nécessaire, en diminuant la taille de la boîte d’image Doppler couleur.
      15. Appuyez sur PW (onde pulsée) pour quantifier le spectre du flux sanguin. Augmentez la taille de la porte de volume d’échantillon au maximum.
      16. Ajustez la vitesse de base et le gain Doppler, si nécessaire, afin que le flux soit visible.
      17. Alignez l’angle PW parallèlement à la direction de l’écoulement à travers le PV. Placer le volume de l’échantillon à la vitesse la plus élevée (point de repliement) ou à l’extrémité de la notice PV.
      18. Appuyez sur Mise à jour pour afficher les vitesses pulmonaires.
      19. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer les données. Des exemples d’images Doppler PV PW sont présentés à la figure 2B; ces images sont utilisées pour analyser le temps d’éjection pulmonaire (TEP), le temps d’accélération pulmonaire (PAT), la vitesse systolique maximale pulmonaire (PV PSV), le débit cardiaque (PV CO), le volume de l’AVC (PV SV), la FC et la durée du cycle cardiaque (CL).
    4. Vue apicale à quatre chambres axée sur le RV
      1. Inclinez la plate-forme vers le coin gauche et descendez crânièrement aussi loin que possible.
      2. Faites pivoter le transducteur de 30°-45° dans le sens inverse des aiguilles d’une montre et déplacez le transducteur de manière à ce qu’il pointe vers l’épaule ou l’oreille droite de l’animal.
      3. Abaissez le transducteur jusqu’à ce qu’il soit en contact avec le gel. Cette position permet une vue typique à quatre chambres où le BT et les oreillettes gauches (LA) sont visibles, mais l’ombre du sternum est au-dessus du mur libre du VR.
      4. Ajustez la vue apicale à quatre chambres pour acquérir la vue focalisée RV en plaçant le transducteur légèrement latéral au sommet vrai. Faites des ajustements fins jusqu’à ce que le plan maximal soit obtenu. Déplacez la plate-forme légèrement caudale si nécessaire. Dans cette vue, l’ombre du sternum est positionnée dans le septum et le mur libre de VR est clairement visible.
      5. Assurez-vous que le VR, l’oreillette droite (RA) et la valve tricuspide (TV) sont visibles dans la fenêtre acoustique.
        REMARQUE: Si la chambre RV est très dilatée, la chambre BT peut ne pas être complètement visible. Tenir le transducteur manuellement permet un réglage fin de l’angle du transducteur pour améliorer la visualisation du VR.
      6. Assurez-vous que le VR n’est pas raccourci et que la voie d’écoulement du BT n’est pas ouverte.
      7. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer les données. Des exemples d’images en mode B à quatre chambres focalisées sur le RV sont présentés à la figure 3A, B; ces images sont utilisées pour analyser la zone auriculaire droite (RAA), la zone diastolique terminale du RV (RVEDA) et la zone systolique terminale du RV (RVESA).
      8. Placez le curseur en mode M à travers l’anneau tricuspide au niveau de la paroi libre du VR. Assurez-vous d’avoir une orientation optimale de l’image pour éviter la sous-estimation des vitesses. Appuyez sur Mise à jour et Cine Store pour enregistrer les données.
        REMARQUE : Des exemples d’images de mouvement de l’anneau tricuspide sont présentés à la figure 4A, B; ces images sont utilisées pour analyser l’excursion systolique du plan annulaire tricuspide (TAPSE).
      9. Appuyez sur Mode B, puis sur Couleur pour faciliter l’identification du flux à travers le téléviseur. Ajustez la vitesse pour optimiser le repliement afin que le point de vitesse le plus élevé soit visible. Augmentez la fréquence d’images en diminuant la taille de la zone d’image Doppler couleur.
      10. Appuyez sur PW pour quantifier le spectre du flux sanguin. Augmentez la taille de la porte de volume d’échantillon au maximum.
      11. Ajustez la vitesse de base et le gain Doppler si nécessaire.
      12. Alignez l’angle PW parallèlement à la direction de l’entrée du VR. Placer le volume de l’échantillon à la vitesse la plus élevée (point de crénelage) ou à l’extrémité de la notice tricuspide.
        REMARQUE: L’imagerie des vitesses d’entrée tricuspides peut être difficile; Un réglage fin de la position du transducteur peut être nécessaire.
      13. Appuyez sur Mise à jour pour afficher les vitesses d’entrée tricuspides.
      14. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer les données. Des exemples d’images Doppler PW tricuspides sont présentés à la figure 5A, B; ces images sont utilisées pour analyser la vitesse du flux sanguin à travers le téléviseur pendant le remplissage diastolique précoce (E), la vitesse du flux sanguin à travers le téléviseur pendant le remplissage diastolique tardif (A), le temps ouvert de fermeture tricuspide (TCO) et le temps d’éjection (ET).
      15. Revenez au mode B et appuyez sur Tissue. Ajustez légèrement la plate-forme pour vous assurer que l’anneau tricuspide est clairement visible et placez la porte de volume de l’échantillon Doppler tissulaire à l’anneau tricuspide de la paroi libre du VR. Augmentez la porte du volume d’échantillon à la largeur maximale.
      16. Ajustez la vitesse de base et le gain Doppler si nécessaire.
      17. Appuyez sur Mise à jour pour afficher l’image Doppler tissulaire.
      18. Appuyez sur Cine Store pour enregistrer les données. Des exemples d’images Doppler tissulaires sont présentés à la figure 6A,B; ces images sont utilisées pour analyser la vitesse annulaire tricuspide à la diastole précoce (E'), la vitesse annulaire tricuspide à la diastole tardive (A') et la vitesse annulaire tricuspide à systole (S').
        REMARQUE: Le TAPSE et le Doppler tissulaire sont toujours mesurés à la paroi libre du VR et non au septum interventriculaire.
  4. Analyse d’images
    1. Effectuez une analyse d’image hors ligne à l’aide du logiciel compatible avec les instruments (voir le tableau des matériaux).
    2. Évitez les zones où l’inspiration se produit pour toutes les mesures et prenez toujours au moins trois mesures pour chaque paramètre à analyser.
    3. Vue parasternale à grand axe modifiée du mode M ventriculaire droit
      1. Sélectionnez une image obtenue à partir de la vue parasternale longue axe modifiée du mode M ventriculaire droit et analysez le RVIDd (mm), les RVIDs (mm) et le RVFWT (mm).
      2. Sélectionnez Profondeur dans les outils de mesure génériques.
      3. Tracez le diamètre interne de la chambre RV à la diastole et à la systole (Figure 1C) et étiquetez les mesures comme RVIDd et RVID, respectivement.
      4. Sélectionnez l’outil Profondeur pour mesurer l’épaisseur de la paroi libre du VR. Alignez le curseur sur le pic de l’onde R de l’ECG et tracez la paroi à la diastole terminale (Figure 1C). Exclure les trabéculations de rotavirus et le muscle papillaire de la bordure endocardique du rotavirus, le cas échéant, afin de mesurer avec précision l’épaisseur de la paroi du rotavirus. Exclure également la graisse épicardique, si elle est présente, pour éviter des mesures erronées.
        REMARQUE: Les trabéculations de VR et les muscles papillaires apparaissent comme des lignes abandonnées qui suivent le mouvement de la paroi du VR. Les mesures RVIDd, RVID et RVFWT seront affichées dans le rapport sous la section des paquets génériques. Lorsqu’il y a un épaississement important du péricarde, la mesure de la paroi du VR peut être difficile; Ainsi, sélectionnez soigneusement le domaine d’analyse.
    4. PV en mode B
      1. Sélectionnez une image obtenue à partir du mode PV B et analysez le diamètre PV (mm).
      2. Sélectionnez RV and PV Function (Fonction VR et PV) dans le menu déroulant de l’emballage cardiaque.
      3. Sélectionnez PV diam et choisissez un cadre dans lequel la vanne est ouverte. Au niveau de la vanne, tracez la distance d’une paroi à l’autre, en évitant l’anneau de la vanne (Figure 2A).
        NOTE: Les mesures seront affichées dans le rapport sous la section Fonction RV et PV.
    5. PV PW Doppler
      1. Sélectionnez une image obtenue à partir du Doppler PV PW pour analyser la TEP (ms), la PAT (ms), la PV PSV (mm/s), la FC (battements par minute), la CL (ms), le rapport PAT/PET, le débit cardiaque (PV CO; mL/min), le volume de course (PV SV; μL) et le rapport PAT/CL.
      2. Sélectionnez RV et PV Function dans le menu déroulant de l’emballage cardiaque et choisissez au moins trois vitesses PA représentatives.
      3. Sélectionnez PAT et tracez la vitesse d’écoulement PA à partir du point d’accélération et se terminant au pic de vitesse.
      4. Sélectionnez PET et commencez la mesure à partir du point d’accélération et terminez-la lorsque le signal atteint la ligne de base.
      5. Sélectionnez PV peak vel, placez le curseur sur le point de vitesse le plus élevé et cliquez avec le bouton gauche de la souris.
      6. Pour obtenir la mesure intégrale temps de vitesse PV (PV VTI), choisissez l’option négative sous l’outil Vevo de crête.
        REMARQUE : La sensibilité de détection peut être modifiée, mais une valeur constante doit être maintenue tout au long de l’étude.
      7. Sélectionnez PV VTI dans le menu déroulant. Commencez la mesure en cliquant avec le bouton gauche de la souris sur le début du pic et terminez-la en cliquant avec le bouton droit de la souris à la fin du pic pour terminer la mesure. Ajustez le contour du pic en déplaçant les lignes si nécessaire.
      8. Placez le curseur sur une mesure PV VTI et cliquez avec le bouton droit de la souris pour sélectionner Propriétés, puis activez la mesure HR dans l’option des paramètres. Répétez cette étape pour les trois mesures PV VTI.
      9. Sélectionnez Temps dans les outils de mesure génériques et tracez le temps depuis le point d’accélération d’un cycle jusqu’au point d’accélération du cycle suivant pour calculer le CL (Figure 2B).
        NOTE: Les mesures seront affichées dans le rapport sous la section Fonction RV et PV. Le rapport PAT/PET, PV CO et PV SV sont calculés par le logiciel de l’instrument.
    6. Vue apicale à quatre chambres axée sur RV en mode B
      1. Sélectionnez une image obtenue à partir du mode B de vue apicale à quatre chambres focalisé sur le RV pour analyser le changement de surface fractionnaire RAA (mm 2), RVEDA (mm2), RVESA (mm2) et RV [RVFAC = (RVEDA-RVESA)/RVEDA, %].
      2. Sélectionnez SAX (axe court parasternal) dans le menu déroulant de l’emballage cardiaque.
      3. Choisissez une image en mode B à la fin de la diastole à partir de la vue apicale à quatre chambres axée sur le RV. Assurez-vous que tout le VR est dans la vue, y compris le sommet et la paroi latérale.
      4. Sélectionnez ENDOarea;d et tracez l’endocarde RV depuis l’anneau, le long de la paroi libre jusqu’à l’apex, puis revenez à l’anneau le long du septum interventriculaire, à l’exclusion des trabéculations si elles sont présentes.
      5. Choisissez une image en mode B à la fin de la systole, sélectionnez ENDOarea;s dans la fenêtre déroulante SAX B-mode et répétez la trace du RV. À l’aide de la même image, sélectionnez la zone 2D dans les outils de mesure génériques et tracez le RA en suivant l’endocarde et en excluant la veine cave et l’appendice RA. La zone située entre les feuillets valvulaires tricuspides et l’anneau est également exclue (Figure 3).
      6. Répétez la mesure de surface ENDO à la diastole et à la systole et la mesure de surface RA dans deux images supplémentaires.
        REMARQUE: Les mesures de la zone RV à la diastole et à la systole seront affichées dans le rapport sous la section mode SAX-B. La zone RA sera affichée sous les mesures génériques de l’emballage. Le RVFAC est calculé à l’aide de la formule RVFAC = (RVEDA-RVESA)/RVEDA10.
    7. Mode M à la partie latérale de l’anneau tricuspide
      1. Sélectionnez une image en mode M obtenue à partir de la partie latérale de l’anneau tricuspide pour analyser le TAPSE (mm).
      2. Sélectionnez Profondeur parmi les outils de mesure génériques et choisissez une région d’au moins trois sites cardiaques consécutifs exempts d’interférences inspiratoires.
      3. Tracer la distance entre la diastole terminale et la systole maximale du segment annulaire RV en trois cycles cardiaques consécutifs (Figure 4).
        REMARQUE: Les mesures seront affichées dans le rapport sous la section générique de l’emballage.
    8. TV PW Doppler
      1. Sélectionnez une image obtenue à partir du doppler PW TV pour analyser l’indice de performance myocardique E (mm/s), A (mm/s), TCO (ms), ET (ms) et RV [RVMPI = (TCO-ET)/ET]11.
      2. Sélectionnez TV Flow dans le menu déroulant de l’emballage cardiaque et choisissez au moins trois vitesses TV représentatives.
      3. Sélectionnez TV E (remplissage précoce tricuspide), placez le curseur au point de vitesse le plus élevé de l’onde E et cliquez avec le bouton gauche de la souris; Une ligne est tracée à partir de la vitesse la plus élevée jusqu’à la ligne de base. De même, sélectionnez TV A (remplissage tardif tricuspide), placez le curseur à la vitesse la plus élevée de l’onde A et cliquez avec le bouton gauche de la souris; une autre ligne est tracée à partir de la vitesse la plus élevée jusqu’à la ligne de base (figure 5).
      4. Pour mesurer le temps d’éjection (ET), sélectionnez l’outil Temps parmi les outils de mesure génériques et mesurez le temps entre le début (bord d’attaque) et l’arrêt (bord de fuite) de l’entrée tricuspide (une zone où l’écoulement s’éjecte). Étiquetez les mesures comme ET (Figure 5).
      5. Pour mesurer le temps TCO, sélectionnez l’outil Temps et tracez le temps depuis la fin de l’onde A tricuspide d’un cycle jusqu’au début de l’onde E tricuspide du cycle suivant. Étiquetez les mesures comme TCO (Figure 5).
        REMARQUE: Les mesures de TV E et TV A seront affichées dans le rapport sous la section TV Flow. Les mesures ET et TCO seront affichées sous les mesures génériques de l’emballage. RVMPI est calculé comme suit : (TCO-ET)/ET11. E, ET et TCO sont mesurés avec un intervalle R-R constant pour minimiser les erreurs. Les mesures ET peuvent également être effectuées du bord central au bord de fuite; La cohérence dans la façon dont la mesure est acquise tout au long de l’analyse est la plus importante.
    9. RV tissu de l’anneau tricuspide latéral Doppler
      1. Sélectionnez une image obtenue à partir du Doppler tissulaire de l’anneau tricuspide latéral RV pour analyser le rapport E' (mm/s), A' (mm/s), S'(mm/s) et E/E'.
      2. Sélectionnez TV Flow dans le menu déroulant de l’emballage cardiaque et choisissez au moins trois vitesses représentatives des tissus muraux libres.
      3. Sélectionnez TV LW E, placez le curseur au point de vitesse le plus élevé de l’onde E' et cliquez avec le bouton gauche de la souris; Une ligne est tracée à partir de la vitesse la plus élevée jusqu’à la ligne de base. De même, sélectionnez TV LW A, placez le curseur au point de vitesse le plus élevé de l’onde A' et cliquez avec le bouton gauche de la souris; une autre ligne est tracée à partir de la vitesse la plus élevée jusqu’à la ligne de base (figure 6).
      4. Sélectionnez MV Flow dans le menu déroulant de l’emballage cardiaque et sélectionnez S WAVE.
      5. Placez le curseur à la vitesse systolique la plus élevée pendant la phase d’éjection, sans trop gagner l’enveloppe Doppler, et cliquez avec le bouton gauche de la souris; une ligne est tracée à partir de la vitesse la plus élevée jusqu’à la ligne de base (figure 6).
        REMARQUE: Les mesures seront affichées dans le rapport sous les sections TV Flow et MV Flow. Le rapport E/E' est calculé manuellement.
  5. Nécropsie
    1. Euthanasier les rats par exsanguination en cas de surdosage d’isoflurane le jour de l’étude 24 après l’administration du TCM suivant le protocole approuvé par l’établissement.
    2. Retirez le bloc cœur-poumon et infuser doucement via le système vasculaire avec une solution saline glacée jusqu’à ce que le perfusat soit clair. Séparez le cœur et les poumons et retirez l’excès de solution saline.
    3. Pesez chaque organe séparément.
    4. Retirez les oreillettes et jetez-les.
    5. Séparez le VG avec le septum (LV + S) du RV et pesez les ventricules séparément.
    6. Retirez le tibia gauche et séparez-le des tissus mous.
    7. Obtenir une mesure longitudinale du tibia à l’aide d’un pied à coulisse numérique (voir le tableau des matériaux).
    8. Jetez le cœur, les poumons et le tibia disséqués avec le reste de la carcasse.
      REMARQUE: Le poids cardiaque (HW), le poids pulmonaire (LW), le poids LV + S et le poids RV sont normalisés par la longueur du tibia (TL). L’hypertrophie du RV est évaluée par l’indice de Fulton, où le poids du RV est normalisé par le poids LV+S [indice de Fulton = RV/(LV+S)]12.

Résultats

Dans cette étude, des rats traités par MCT ont été utilisés comme modèle de HAP. L’analyse échocardiographique a été effectuée le jour 23 de l’étude après l’administration du TCM, et toutes les mesures et tous les calculs représentaient des moyennes de trois cycles consécutifs. Les paramètres échocardiographiques obtenus à partir de rats témoins (véhicule : eau désionisée) et traités au TCM (60 mg/kg) sont présentés au tableau 1.

Des images repré...

Discussion

L’évaluation échocardiographique du rotavirus est un outil de découverte précieux pour le criblage de l’efficacité de nouveaux traitements dans des modèles animaux d’HTAP. Une caractérisation approfondie de la structure et de la fonction du VR est nécessaire car de nouvelles cibles dans le traitement de l’HTAP traitent le remodelagedu RV 4,14. Cette étude décrit un protocole détaillé qui permet de caractériser avec succès la structure et la ...

Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par NHLBI K01 HL155241 et AHA CDA849387 décerné à l’auteur P.C.R.

matériels

NameCompanyCatalog NumberComments
0.9% sodium cloride injection USPBaxter2B1324
Braided cotton rolls4MD Medical SolutionsRIHD201205
Depilating agentWallgreensNair Hair Remover 
Electrode gelParker Laboratories 15-60
High frequency ultrasound image system and imaging stationFUJIFILM VisualSonics, Inc.Vevo 2100
IsofluraneMedVetRXISO-250
Male sprague Dawley ratsCharles River LaboratoriesCD 001CD IGS Rats (Crl:CD(SD))
Monocrotaline (MCT)Sigma-AldrichC2401
Rectal temperature probe  Physitemp RET-3
Sealed induction chambersScivena ScientificRES644 3 L size
Solid-state array ultrasound transducerFUJIFILM VisualSonics, Inc.Vevo MicroScan transducer MS250S
Stainless steel digital calipersVWR Digital Calipers62379-531
Ultrasound gel Parker Laboratories 11-08
Vevo Lab softwareFUJIFILM VisualSonics, Inc.Verison 5.5.1

Références

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