Dissection et isolement de tissu pulmonaire décellularisé spécifique à une région

Résumé

Un protocole pour l’isolement du tissu pulmonaire décellularisé régional est présenté ici. Ce protocole fournit un outil puissant pour étudier les complexités de la matrice extracellulaire et des interactions cellule-matrice.

Résumé

La transplantation pulmonaire est souvent la seule option pour les patients aux derniers stades d’une maladie pulmonaire grave, mais elle est limitée à la fois en raison de l’approvisionnement en poumons de donneurs appropriés et du rejet aigu et chronique après la transplantation. Il est impératif de déterminer de nouvelles approches de bio-ingénierie pour le remplacement des poumons malades afin d’améliorer la survie des patients et d’éviter les complications associées aux méthodologies actuelles de transplantation. Une approche alternative implique l’utilisation de poumons entiers décellularisés dépourvus de constituants cellulaires qui sont généralement la cause du rejet aigu et chronique. Étant donné que le poumon est un organe si complexe, il est intéressant d’examiner les composants de la matrice extracellulaire de régions spécifiques, y compris le système vasculaire, les voies respiratoires et le tissu alvéolaire. Le but de cette approche est d’établir des méthodes simples et reproductibles par lesquelles les chercheurs peuvent disséquer et isoler des tissus spécifiques à une région à partir de poumons entièrement décellularisés. Le protocole actuel a été conçu pour les poumons de porc et d’homme, mais peut également être appliqué à d’autres espèces. Pour ce protocole, quatre régions du tissu ont été spécifiées: les voies respiratoires, le système vasculaire, les alvéoles et le tissu pulmonaire en vrac. Cette procédure permet d’obtenir des échantillons de tissus qui représentent plus précisément le contenu du tissu pulmonaire décellularisé par opposition aux méthodes traditionnelles d’analyse en vrac.

Introduction

Les maladies pulmonaires, y compris la bronchopneumopathie chronique obstructive (MPOC), la fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) et la fibrose kystique (FK), demeurent actuellement sans remède 1,2,3,4. La transplantation pulmonaire est souvent la seule option pour les patients à un stade avancé, mais cela reste une option limitée à la fois en raison de l’approvisionnement en poumons de donneurs appropriés et du rejet aigu et chronique après la transplantation ^3,5,6....

Protocole

Toutes les études animales ont été réalisées conformément à l’IACUC de l’Université du Vermont (UVM). Tous les poumons humains ont été acquis auprès des services d’autopsie UVM et des études connexes ont été réalisées conformément aux directives de l’IRB de l’UVM.

NOTE: La décellularisation des poumons de porc et humain a déjà été décrite par notre groupe 7,8,9,10,21. En bref, les lobes pulmonaires entiers sont décellularisés par perfusion séquentielle des voies respiratoires et ....

Discussion

Les tissus décellularisés provenant d’humains et d’autres espèces sont fréquemment utilisés comme biomatériaux pour étudier la composition de la MEC ainsi que les interactions cellule-MCE dans des modèles de culture ex vivo, y compris les hydrogels 3D^12,13. À l’instar d’autres organes, les poumons décellularisés ont déjà été utilisés pour déterminer les différences de composition de la MCE dans les poumons sains par rapport aux .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bonn Scissors	Fine Science Tools	14184-09
Dumont #5 - Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-02
Forceps, Curved, S/S, Blunt, Serrated - 130mm	CellPath	N/A
Hardened Fine Scissors	Fine Science Tools	14090-11
Moria Iris Forceps	Fine Science Tools	11373-22
Pyrex Glass Casserole Dish	Cole-Parmer	3175-10