Commencez par ajouter 500 microlitres du tampon de lyse à la pastille de cellule A2780 précédemment obtenue, et mélangez doucement à l’aide d’une pointe coupée d’un diamètre d’ouverture minimal de deux millimètres. Ajouter 20 microgrammes par millilitre de RNase fraîchement préparée et mélanger par inversion douce. Incuber à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes.
À la fin de l’incubation, ajouter la protéinase K jusqu’à une concentration finale de 100 microgrammes par millilitre et retourner doucement 10 fois. Incuber à nouveau à 55 degrés Celsius pendant une heure en inversant le tube toutes les 10 minutes. Pipeter 500 microlitres de réactif phénol:chloroforme:alcool isoamylique dans le tube et retourner doucement le tube environ 20 fois.
Centrifuger à 9, 391 G pendant 15 minutes à température ambiante. Pipeter la couche visqueuse aqueuse supérieure dans un nouveau tube. Ajouter un volume égal de chloroforme et mélanger par inversion douce.
Après avoir centrifugé le tube une fois, recueillir la couche aqueuse. Ajouter une quantité appropriée de cinq molaires de chlorure de sodium dans le tube pour augmenter la concentration de 0,2 mole. Ajouter deux volumes d’éthanol à 100% dans le tube et l’inverser doucement 20 fois.
Centrifuger à 15 871 g pendant cinq minutes à température ambiante. Après avoir jeté le surnageant, ajoutez 500 microlitres d’éthanol à 70%. Centrifuger à nouveau dans le même état, puis jeter le surnageant.
Une fois la pastille séchée à l’air, ajoutez 50 microlitres d’eau stérile sans nucléase et laissez-la se réhydrater. Ensuite, mélangez l’ADN en pipetant à l’aide de l’embout coupé. Utilisez la spectrophotométrie UV pour mesurer la concentration d’ADN.
Après avoir digéré l’ADN, séparez-le à l’aide d’agarose à 0,8%. Plonger le gel d’agarose dans une solution d’acide chlorhydrique 0,25 molaire pendant 10 minutes à température ambiante en agitant doucement. Ensuite, rincez le gel deux fois avec de l’eau distillée.
Pour dénaturer l’ADN, immergez le gel dans une solution d’hydroxyde de sodium et de chlorure de sodium. Ensuite, rincez le gel deux fois avec de l’eau distillée. Pour neutraliser l’ADN comme démontré, submerger le gel dans une solution d’acide chlorhydrique 0,5 molaire et trois molaires de chlorure de sodium à pH sept.
L’ADN génomique de l’extracteur a montré une bonne intégrité, indiquant son utilisation pour le traitement ultérieur en aval des fragments de restriction des télomères.
