Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Commencez par ajuster la concentration de suspension de cellules souches adipeuses murines décongelées à l’aide de PBS avec du sérum bovin fœtal à 5 %. Aliquote 100 microlitres de la suspension contenant 100 000 cellules dans un tube à centrifuger de 1,5 millilitre. Ajouter les quantités appropriées d’anti-CD105 AF594 et d’anti-CD31 AF680 selon les instructions du fabricant.

Incuber pendant 20 minutes dans l’obscurité à quatre degrés Celsius. Enlevez l’excès de tache en lavant avec PBS / FBS et centrifugez à 250 x g pendant cinq minutes. Remettez les cellules en suspension dans 300 microlitres de formol à 1%.

Créez un graphique à points en cliquant sur le symbole du polygone pour sélectionner la sous-population d’intérêt et exclure les zones de débris à l’aide du point de contrôle FSC-A par rapport au point de contrôle SSC-A. Ensuite, cliquez sur le symbole du polygone pour générer un nouveau diagramme à points et exclure les duplex et les cellules multiples en utilisant SSC-H par rapport à SSC-A suivi de FSC-H et FSC-A. Utilisez Y610-mCHERRY pour les détecteurs AF594 et R660 APC-A pour les fluorophores AF680, respectivement.

Cliquez sur le symbole du quadrant et définissez le seuil de chaque détecteur pour les cellules d’autofluorescence. Sélectionner des échantillons marqués avec CD105 et population positive à montrer sur Q1LR. Ensuite, choisissez des échantillons étiquetés avec CD31 et population positive à montrer sur Q1LR.

L’immunophénotypage a montré que 98,7% de la population cellulaire était positive pour CD105, tandis que seulement 5,88% exprimaient le marqueur CD31.