Commencez par placer les embryons disséqués de la souris femelle enceinte euthanasiée de deux à six mois dans un milieu froid complet avec 1% de sérum bovin fœtal. Après avoir retiré le tissu endométrial, le placenta et le sac vitellin de l’embryon sous grossissement 5X, disséquez les progéniteurs cardiaques de la région cardiaque embryonnaire à l’aide de forceps. Tirez toutes les régions cardiaques disséquées de cinq embryons de souris dans un tube microcentrifuge de 1,5 millilitre et centrifugez-les dans un seau oscillant, pré-refroidi à quatre degrés Celsius.
Retirez le surnageant et lavez le tissu avec un millilitre de PBS de qualité culture tissulaire. Centrifuger les tubes à 300G pendant une minute à quatre degrés Celsius. Ensuite, retirez le surnageant et répétez deux lavages avec un millilitre de PBS.
Une fois cela fait, remplacez le PBS par 0,05% de trypsine-EDTA. Centrifuger et répéter deux lavages avec 0,05% de trypsine-EDTA. Pour digérer le tissu, ajoutez 50 microlitres de trypsine-EDTA à 0,05% et faites chauffer pendant 10 minutes à 37 degrés Celsius.
Ensuite, appliquez une légère dissociation mécanique après cinq minutes en aspirant la suspension de haut en bas à l’aide d’un embout filtrant à large orifice. Inactiver l’activité de digestion de la trypsine en ajoutant 350 microlitres de milieu complet aux cellules dissociées. Passez la suspension cellulaire à travers une crépine cellulaire de 40 micromètres.
Préparer les cellules à la congélation en centrifugeant la suspension cellulaire fraîchement dissociée. Retirez délicatement le surnageant et remettez le granulé en suspension dans un millilitre de milieu de congélation réfrigéré. Transférer la suspension cellulaire dans un flacon cryogénique pré-refroidi et placer le flacon cryogénique dans un récipient de congélation pré-refroidi.
Placez le récipient de congélation à moins 80 degrés Celsius pendant quatre à huit heures avant de le transférer à l’azote liquide pour les expériences de séquençage.
