Commencez le protocole en préparant le fluide d’écoulement visqueux de l’essai de cisaillement. Pour ce faire, préchauffez le milieu de culture de base pendant environ 10 à 20 minutes à 60 à 70 degrés Celsius à l’aide d’un brassage magnétique ou d’une plaque chauffante. Tout en remuant continuellement le média, ajoutez-y doucement de la méthylcellulose pour aider les particules de méthylcellulose à se disperser rapidement sans coaguler.
Laisser ce processus se poursuivre pendant environ 15 à 24 heures pour assurer un mélange homogène clair de milieu et de cellulose. Pour installer l’appareil de cisaillement, fixez un joint en caoutchouc au chemin d’écoulement pour fixer la connexion entre la chambre d’écoulement et la boîte de Pétri et assurer un flux uniforme contrôlé de cellules individuelles. Le joint en caoutchouc est disponible en différentes tailles en fonction du profil d’écoulement souhaité et de la zone d’observation.
Ensuite, installez le système de test de cisaillement comprenant des seringues doubles de 60 ou 100 millilitres connectées à une pompe à seringue programmable pour la perfusion et le retrait du milieu de culture visqueux. Remplissez une seringue avec le fluide d’écoulement visqueux préparé et fixez la seringue remplie à son emplacement respectif sur la pompe à seringue. Ensuite, fixez une seringue vide à l’autre emplacement de la seringue sur la pompe à seringue.
À l’aide de tubes et de connecteurs de tubes de 1/16e de pouce, connectez les deux seringues à la chambre d’écoulement. Programmez la pompe pour qu’elle perfuse et retire un certain volume de liquide à une vitesse désignée, et sélectionnez les seringues correspondantes. Un exemple de programme est affiché à l’écran.
Aspirer les milieux de culture cellulaire de la boîte de Petri pour préparer le cisaillement. Ensuite, insérez et fixez la chambre d’écoulement avec le joint en caoutchouc sur la boîte de Petri contenant les cellules attachées. Placez la chambre d’écoulement microfluidique ajustée avec les cellules dans la parabole sur un microscope inversé connecté à un moniteur d’affichage.
La configuration est maintenant prête à appliquer une contrainte de cisaillement fluide sur une seule cellule et à surveiller optiquement la déformation cellulaire résultante.
