Pour exécuter le protocole de test de cisaillement unicellulaire, utilisez l’appareil de cisaillement préassemblé consistant en une chambre d’écoulement microfluidique ajustée placée sur une boîte de Pétri contenant les cellules d’intérêt. Placez l’ensemble de la configuration sur un microscope inversé avec un objectif suffisamment haut et un moniteur d’affichage. Concentrez l’objectif du microscope, en assurant un contraste adéquat et des bords cellulaires distincts.
Déplacez l’étage du microscope pour vous assurer que les cellules sont clairement visibles sur le moniteur d’affichage et sont des images en direct. Sélectionnez une cellule ou plusieurs cellules distinctes dans l’imagerie ou le chemin d’écoulement de la chambre d’écoulement ajustée et de la boîte de Pétri. Pour maintenir un flux continu et uniforme des milieux visqueux, sélectionnez des taux de perfusion et de retrait similaires.
Assurer un écoulement laminaire correct du fluide ayant un nombre de Reynold ou RE inférieur à 100. Cliquez sur Exécuter sur la pompe de cisaillement pour injecter et retirer le fluide de cisaillement à un débit continu. Assurez-vous qu’il n’y a pas de bulles pendant la perfusion de liquide.
Commencez à enregistrer une vidéo en cliquant sur Enregistrer dans le logiciel avant que le fluide de cisaillement infusé n’entre en contact avec la cellule d’intérêt sous le microscope. Continuez à enregistrer pendant sept minutes ou pendant la durée souhaitée de l’exposition au stress ou jusqu’à ce que la cellule d’intérêt cisaille le fond de la boîte. Cliquez sur Arrêter l’enregistrement dans le logiciel du microscope lorsque l’exécution est terminée comme vous le souhaitez.
Le logiciel enregistre automatiquement les images et les vidéos qui peuvent être collectées à l’aide de lecteurs flash pour une analyse plus approfondie. Extrayez les images sous forme de fichiers TIFF, de préférence à une image par seconde pour faciliter l’analyse.
