Commencez par ouvrir le programme et initialisez la pompe d’injection en cliquant sur le contrôle du distributeur, puis sélectionnez Pompe 2, puis cliquez sur Init. Pour rincer le tube avec l’eau ionisée, cliquez sur Rincer, puis appuyez sur Suivant. Sélectionnez Pompe 2 et réglez le support de pointe sur l’embout souhaité.
Cliquez ensuite à nouveau sur Suivant. Cliquez sur Démarrer pour commencer le rinçage du tube. Répétez le rinçage au méthanol.
Pendant ce temps, préparez une solution de substrat de travail en diluant le substrat de 1 à 100. Enfin, rincez le tube avec la dilution de travail du substrat dans du PBS. Chargez la plaque dans le lecteur de plaques.
Et puis, dans Paramètres de mesure, choisissez l’ouverture à l’ouverture de luminescence US de la plaque 384, suivie de la distance entre la plaque et le détecteur à 0,6 millimètre et le temps de mesure à 0,5 seconde. Une fois les paramètres de mesure définis, dans l’onglet Protocole-Paramètres généraux, sélectionnez le type de plaque 384 Nunc, puis choisissez l’option bidirectionnelle Par colonnes comme mode de mesure. Entrez 1 dans l’onglet Nombre de répétitions de test.
Maintenant, dans l’onglet Distribution, sélectionnez la mesure de distribution souhaitée. Réglez ensuite le temps de mesure pour chaque puits à une seconde et sélectionnez la pompe d’occasion souhaitée. Vitesse de distribution de 200 microlitres par seconde.
Et le volume de distribution à 50 microlitres. Choisissez Volume de distribution comme volume de remplissage de la seringue pour la pompe 2. Et puis réglez le numéro Commencer à distribuer à la mesure sur 1.
Dans l’onglet Sélection de puits, utilisez le menu déroulant Ajouter/supprimer des échantillons et choisissez le type d’échantillon souhaité, puis sélectionnez les puits à mesurer. Après cela, démarrez la mesure en cliquant sur Exécuter. Le signal de luminescence basale du DMSO est vu dans la colonne 1, et la diminution du signal de luminescence sur la présence de l’inhibiteur de l’ATG4B, FMK-9a, est vue dans la colonne 24.
