In Vitro Drug Validation to Assay Ion Channel Function in Cancer Cells

Pour commencer, plaquez les cellules dans 75 microlitres par puits de milieu sans antibiotique sans tampon HEPES pour déterminer la CI50. Le deuxième jour, préparer la solution témoin et les solutions d’essai en effectuant des dilutions en série de solutions mères à forte concentration. Après avoir ajouté des solutions de contrôle et de test aux cellules, incuber les cellules à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone dans un environnement humidifié pendant 48 heures.

Commencez l’essai de prolifération cellulaire en faisant d’abord tourbillonner le réactif MTS pour dissoudre complètement tout réactif précipité avant l’utilisation le troisième jour de l’expérience pour transférer les réactifs MTS décongelés dans un réservoir de réactif stérile de 25 millilitres. Pipeter 20 microlitres de réactif MTS dans chaque puits de la plaque de 96 puits contenant des échantillons et 100 microlitres de milieu de culture. Incuber la plaque à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone dans un environnement humidifié pendant une à quatre heures.

Ensuite, centrifugez la plaque à température ambiante pour éliminer les bulles qui pourraient interférer avec la lecture de l’absorbance. Mesurez l’absorbance à 490 nanomètres avec un lecteur de microplaques ou un spectrophotomètre. Une plaque de 96 puits montrant les résultats calorimétriques d’un essai MTS avec des concentrations croissantes de médicament est présentée.

La courbe dose-réponse a montré que l’agent d’essai altère la viabilité des cellules cancéreuses d’une manière dose-dépendante.