Pour commencer, obtenir 80% de cellules hépatocytes bovines cultivées et remplacer le milieu de culture par du DMEM contenant de l’acide linoléique. Incuber les cellules à 37 degrés Celsius dans 5% de dioxyde de carbone pendant 24 heures pour accumuler les LD. Ensuite, retirez le milieu de culture et lavez les cellules d’adhérence avec du PBS.
Ajouter la sonde fluorescente neutre BODIPY dans les cellules et incuber dans l’obscurité pendant 30 minutes. Après trois lavages de PBS, ajoutez du DMEM contenant de l’acide linoléique aux cellules. Placez la capsule de culture dans la rainure du microscope de la station cellulaire vivante et allumez le microscope et l’ordinateur.
Exécutez le logiciel NIS-Elements. Trouvez le champ de vision à un grossissement de 4x. Ajustez-le ensuite sur le 40x, activez PFS, reconcentrez-le et sélectionnez le champ de vision approprié.
Pour la série de tests, définissez l’heure et les canaux appropriés. Appuyez ensuite sur Exécuter maintenant pour prendre des photos des échantillons pendant une minute. Pour l’expérience, dans l’onglet Temps, définissez l’intervalle de temps de cinq minutes et la durée de prise de vue de six heures, définissez les canaux fluorescents et en champ clair, puis appuyez sur Exécuter maintenant pour prendre les échantillons.
Choisissez ensuite Fichier suivi du format Enregistrer sous et Fichier image AVI pour exporter les données vers une vidéo au format AVI. Les grands TA ont été formés par la fusion de petits TA. Au cours des 15 premières minutes, il y avait des TA plus petits.
Au bout de 20 minutes, ils ont commencé à fusionner et ont été complètement fusionnés en LDS plus grands en 35 minutes.
