Préparer l’échantillon pour la culture de perfusion à l’aide du bioréacteur imprimé en 3D. Dans une armoire à flux laminaire, placer les échantillons isolés de l’artère carotide porcine dans des milieux de transport froid. À l’aide d’une lame de scalpel, retirez l’excès de tissu conjonctif et coupez les extrémités du tissu.
Lavez ensuite le mouchoir deux fois dans un milieu de transport froid. Ensuite, placez le tissu dans un milieu de transport sur un agitateur orbital pendant au moins 30 minutes pour un lavage final complet. Après cela, connectez un segment non ramifié de l’artère lavée au système de bioréacteur fabriqué à l’aide de deux connexions de leurre barbelées.
Et fixez-le à l’aide d’une liaison vasculaire faite d’attaches vasculaires en silicone. À l’aide d’une petite seringue fixée à la première connexion du leurre, faites couler doucement le milieu dans l’artère pour assurer sa perméabilité. Après avoir fixé l’artère à l’insert fabriqué, remplissez l’espace de réaction avec un milieu de perfusion.
Ensuite, remplissez soigneusement la boucle de circulation luminale avec du média, en éliminant tout air restant du système. Enfin, connectez l’espace de réaction au système de perfusion assemblé, complétant ainsi la circulation. Pour effectuer la culture de perfusion, placez le système de perfusion dans un incubateur.
Après l’avoir connecté à une pompe péristaltique, connectez tous les systèmes d’acquisition supplémentaires, tels que les capteurs de pression. Laissez le système s’équilibrer pendant la nuit avec un faible débit de fluide d’environ 10 à 15 millilitres par minute. Le lendemain, augmentez progressivement le débit jusqu’à ce qu’un débit final de 35 millilitres par minute soit atteint.
Tous les trois jours, remplacez 50 % du milieu en connectant une seringue avec un milieu neuf à l’orifice d’échange de milieu plus proche de la pompe et une seringue vide à l’orifice le plus proche du réservoir pour recueillir le milieu usé. Après l’expérience, à l’aide de ciseaux chirurgicaux stériles, prélever le tissu de la chambre de réaction en coupant les extrémités des tissus reliés au bioréacteur. L’imagerie confocale à l’aide de marqueurs endothéliaux et spécifiques des muscles lisses a révélé que la structure normale d’une artère était bien préservée et maintenue tout au long de la grossesse, depuis le moment de la récolte jusqu’au nettoyage et au traitement, et même après la culture de perfusion.
Cependant, une manipulation incorrecte pendant le traitement a entraîné la perte de l’endothélium avant la culture, et l’application de conditions de culture non physiologiques telles que l’initiation brutale d’un débit élevé a montré des dommages luminaux. L’évaluation histologique du tissu à l’aide d’une coloration à l’hématoxyline et à l’éosine et d’une coloration par immunofluorescence au moment du prélèvement et après sept jours de culture par perfusion a révélé que la morphologie et la distribution globale des cellules dans la paroi vasculaire étaient maintenues tout au long de la prélèvement.
