Commencez par collecter des graines de soja sauvage, de S.Americanum et de la variété locale de citrouille. Semez les graines dans de la vermiculite à une profondeur d’un centimètre et arrosez-les abondamment. Cultivez-les dans une chambre de croissance à environ 70% d’humidité relative.
Retirez la souche K599 d’A. rhizogenes du congélateur à 80 degrés Celsius et activez-la sur un milieu LB solide à 28 degrés Celsius pendant 48 heures. Ensuite, sélectionnez un seul clone de la souche K599 et cultivez-le dans un millilitre d’antibiotique liquide contenant un milieu LB pendant 12 heures. Étaler 500 microlitres de la suspension bactérienne uniformément sur un antibiotique solide contenant un milieu LB et incuber à 28 degrés Celsius pendant 24 heures.
Après sept jours, lorsque les cotylédons de semis sont dépliés, utilisez un scalpel pointu stérilisé pour couper environ 0,5 à un centimètre de l’hypocotyle. Jeter la racine primaire et une partie de l’hypocotyle. Enduire l’incision hypocotyle de bactéries K599.
Plantez les semis dans de la vermiculite humide et infectez 30 plantes de chaque espèce en utilisant la transformation racinaire velue médiée par A. rhizogenes. Arrosez ensuite les plantes avec cinq millilitres de suspension bactérienne K599 remise en suspension dans un milieu de base Gamborg B5 quart de résistance. Couvrez les pots avec un sac en plastique transparent et placez-les dans une chambre de croissance.
Cultivez les plantes pendant environ 12 jours après l’inoculation. À ce stade, de nouvelles racines velues devraient être générées au site d’incision, atteignant généralement des longueurs de deux à cinq centimètres. À l’aide d’un système d’imagerie par luminescence CAMI avec une lumière d’excitation verte à 540 nanomètres et une émission à 600 nanomètres, détectez l’expression du gène rapporteur DsRed2.
Les racines de plantes composites de soja sauvage, de S.Americanum et de citrouille sous une lumière d’excitation naturelle et verte sont visualisées.
