Pour commencer, administrez l’analgésie par voie sous-cutanée au rat anesthésié qui a été préalablement injecté par voie intracérébroventriculaire avec le cocktail de libération. Montez le rat sur le cadre stéréotaxique. Fixez la tête à l’aide de barres auriculaires, en veillant à ce que le mouvement de rotation vers l’avant et l’arrière ne soit pas obstrué.
Stabilisez la tête vers le bas à un angle de 40 degrés pour étendre correctement la nuque. Rasez la fourrure du cou à l’aide d’un rasoir et désinfectez la peau avec trois cycles alternés de povidone iodée à 10 % et d’alcool à l’aide de cotons-tiges stériles, en frottant dans différentes directions pendant trois à cinq secondes à chaque fois. Du bout du doigt, identifiez la zone dépressible de forme ronde entre la protubérance occipitale et la colonne vertébrale de l’atlas.
Marquez ce point à l’aide d’un marqueur. Fixez une seringue d’un millilitre au cadre stéréotaxique. Positionnez l’aiguille de manière à ce qu’elle entre en contact avec la peau au niveau de la marque.
À l’aide d’une pince, soulevez la peau tout en insérant la seringue à travers les couches de peau. Tirez doucement le piston vers l’arrière pour créer une pression négative à l’intérieur de la seringue. Insérez progressivement l’aiguille jusqu’à ce que le liquide céphalo-rachidien soit visible dans la seringue.
Maintenez l’aiguille fermement dans cette position et laissez l’écoulement lent du liquide céphalo-rachidien. Retirez lentement le liquide céphalo-rachidien jusqu’à 120 microlitres. Récupérez délicatement la seringue.
Administrer un millilitre de sérum normal par voie intrapéritonéale pour favoriser la reconstitution hydrique de l’animal de laboratoire. Combinez la biopsie liquide avec 400 microlitres de milieu de cellules souches neurales et conservez le microtube à centrifuger à quatre degrés Celsius pour une utilisation ultérieure. Transférez ensuite l’animal dans la zone de surveillance post-opératoire.
Les biopsies de traite ont donné lieu à des cultures de cellules souches neurales avec un potentiel de passage moyen de 3,17, atteignant même neuf passages. Les cellules collectées ont été plaquées sur des puits recouverts de poly-D-lysine où elles se sont développées à la fois en tant que monocouches adhérentes et plus rarement en tant que neurosphères. Les cellules fraîchement isolées qui étaient positives pour la GFAP étaient également immunopositives pour le marqueur quiescent ID3 et présentaient la caractéristique morphologique bipolaire NSE.
La comparaison immunocytochimique des cellules dérivées de la biopsie et des cellules post-mortem a montré que le profil des cellules prélevées était similaire à celui des cellules endogènes de la zone sous-épendymaire. Le facteur de croissance a entraîné une augmentation concomitante et significative des cellules SOX2 et une diminution des neuroblastes doublecortin-positifs dans les deux échantillons.
