Commencez par placer un sous-sol ou un drapé propre sur la surface de travail. Collez le cône de nez d’un vaporisateur d’isoflurane à la surface, en vous assurant qu’il fait face à l’expérimentateur. Fixez une aiguille de calibre 27 de 10 millimètres de long avec un biseau de 45 degrés sur une seringue en verre de cinq microlitres.
Ajoutez un tube en silicone à l’aiguille, en laissant dépasser 3,5 millimètres de l’embout et fixez le tube avec du ruban adhésif de laboratoire au corps de la seringue. Ensuite, aspirez trois microlitres de milieu d’injection dans la seringue en verre en prélevant d’abord plus que nécessaire, puis en éjectant l’excédent jusqu’à ce qu’il ne reste plus que trois microlitres. Démarrez une minuterie de laboratoire en mode compte à rebours et positionnez-la pour qu’elle soit facilement visible pendant les injections.
Après s’être entraîné à déplacer une aiguille latéralement et caudalement, préparez la souris anesthésiée pour l’injection en nettoyant d’abord le site d’injection avec de l’iode, puis avec de l’alcool trois fois. Identifiez le site d’injection à l’aide d’une aiguille de calibre 18, en la faisant passer par le site de craniotomie. Pour injecter la souris, tenez d’abord fermement la tête de la souris avec la main non dominante.
Positionnez la tête à plat sur le plan de travail. Ensuite, placez l’aiguille de la seringue en verre dans le trou du crâne jusqu’à ce que le tube repose sur la peau de la souris. En tenant la seringue verticalement par rapport aux plans coronal et sagittal, injectez lentement le milieu pendant une minute.
Maintenez la seringue et l’aiguille pendant une minute supplémentaire pour minimiser le reflux. Ensuite, rétractez lentement l’aiguille. Retirez la souris du cône de nez.
Nettoyez tout sang du site d’injection à l’aide d’une gaze stérile et placez la souris dans une cage sur un chauffe-cage jusqu’à ce qu’elle soit réveillée. Une brève exposition à l’anesthésie gazeuse et l’injection de trois microlitres de liquide dans le système ventriculaire n’ont pas modifié la sécrétion de l’hormone lutéinisante pulsatile. Les voies d’injection étaient visibles dans le tissu neural et recoupaient le ventricule latéral.
