À partir de la cuve du bioréacteur agitée, arrêtez temporairement le contrôle de la température, du pH et de l’oxygène dissous sur le contrôleur du bioréacteur et distribuez complètement tout le PBS de la cuve dans la bouteille de déchets. Soudez au module de filtration à usage unique à un orifice du sac de rangement à usage unique de 10 litres. Filtrez et transférez le milieu MSC complet sans sérum dans le sac de stockage.
Réglez la pompe à une vitesse à 300 tr/min. Et distribuez un litre de milieu du sac d’alimentation dans le récipient. Arrêtez la pompe.
Et recommencez la température pH et dissoute à l’OD à nouveau, selon les instructions du fabricant. Scellez et débranchez le tube reliant le retour d’information au tube d’alimentation. Soudez le tube de la bouteille de micro-supports dispersés au tube d’alimentation.
Et pompez tout le contenu de la bouteille dans le récipient. Ensuite, remettez en suspension 2,5 fois 10 aux huit HMC dans un milieu sans sérum et transférez-les dans le flacon vide contenant précédemment la suspension de micro-support. Ajoutez le milieu sans sérum à 500 millilitres au total à l’intérieur du flacon et mélangez la suspension cellulaire.
Pompez tout le contenu de la bouteille dans le récipient. Scellez et débranchez le tube reliant la bouteille au tube d’alimentation, puis soudez le sac d’alimentation. Ajustez les paramètres d’agitation sur le contrôleur pour initier l’inoculation des cellules aux micro-transporteurs.
Et mettre en place un régime automatisé de suppléments et d’échanges de supports. Soudez les sacs d’échantillonnage jetables au tube d’échantillonnage. Et collectez des échantillons aux moments souhaités.
Au moment de la récolte des cellules sur le contrôleur, réglez la vitesse d’agitation sur zéro pour que les micro-transporteurs se déposent. Et distribuer le surnageant dans le régime alimentaire, en laissant environ un litre de suspension de culture dans le récipient. Soudez le sac contenant 50 millilitres de solution digestive fraîchement préparée à 500 millilitres d’HBSS pour dilution.
Et pompez toute la solution dans le récipient, via le tube d’alimentation. Réglez la vitesse d’agitation entre 40 et 45 tr/min pour dissoudre les micro-transporteurs. Une fois que les micro-transporteurs se sont dissous dans les 40 à 60 minutes, soudez le sac de stockage jetable de trois litres au tube de récolte et pompez complètement la suspension cellulaire.
Allumez le système de traitement des cellules pendant la récolte des cellules. Et installez un kit de traitement des cellules jetables sur l’instrument, selon les instructions du fabricant. Soudez les sacs de suspension cellulaire, de tampon de lavage et de milieu de culture au kit.
Entrez les paramètres de fonctionnement et démarrez le processus automatisé de lavage et de remise en suspension. Prélever l’échantillon de cellules dans la chambre de la centrifugeuse comme indiqué par les systèmes de traitement cellulaire pour le calcul de la densité cellulaire. Après le comptage, réajustez la densité cellulaire à deux fois 10 à six cellules par millilitre, en utilisant le milieu complet sans sérum.
Pour le processus de formulation cellulaire dans un bioréacteur de 15 litres, utilisez un tampon de formulation pour remettre en suspension les cellules récoltées. Soudez 250 millilitres de cellules remises en suspension au remplissage des cellules. Assemblez le kit de consommables jetables de remplissage et de finition sur le système de remplissage de cellules.
Et allumez le système de pré-refroidissement, en suivant les instructions du fabricant avant que les cellules ne soient à nouveau suspendues. Suivez les instructions sur le système et réglez-le pour qu’il remplisse 30 millilitres par sac avec un total de 20 sacs par ensemble. Soudez le nouvel ensemble de 20 sacs de cryoconservation au kit de consommables jetables de remplissage et de finition et répétez le remplissage et la finition jusqu’à ce que toutes les cellules soient aliquotes.
Pour les CSMh, une expansion cumulée de 128 fois a été obtenue avec une viabilité cellulaire supérieure à 90 %L’apport en glucose a montré une corrélation négative avec l’expansion cellulaire, montrant un métabolisme associé à une croissance cellulaire saine. Les CSM fraîchement récoltées conservent des marqueurs phénotypiques classiques avec plus de 95 % d’expression pour les marqueurs positifs et moins de 2 % pour les marqueurs négatifs. Les cellules cryo-conservées ont montré une bonne adhérence, un comportement d’expansion normal et une forme de fuseau typique avec une croissance en spirale après décongélation et replacage sur des flacons 2D.
De plus, les cellules ont également conservé leur capacité à se différencier en lignées ostéogéniques, adipogéniques et chondrogéniques. Cette plate-forme peut également être adoptée pour cultiver d’autres cellules dépendantes de l’ancrage, telles que les cellules HEK293T et Vero. Après le processus de transfert B2B dans le bioréacteur de 15 litres, les cellules HEK293T ont atteint une concentration cellulaire maximale de 1,68 fois 10 des sept cellules par millilitre.
Alors que les cellules Vero ont atteint une concentration de 1,08 fois 10 aux sept cellules. Les deux types de cellules ont maintenu une viabilité élevée.
