Pour commencer l’impression 3D des constructions d’hydrogel photoaccordables, placez la seringue en verre avec la bio-encre hydrogel contenant des fibroblastes dans la tête d’impression et fixez les composants de la tête d’impression tout en assurant un assemblage solide pour l’impression. Ensuite, à l’aide des flèches directionnelles du logiciel Pronterface, ajustez manuellement et soigneusement la position de l’aiguille d’extrusion dans la boue du bain de support au centre du puits de la plaque de puits. Laissez au moins un millimètre de boue sous la pointe de l’aiguille.
Une fois la pointe de l’aiguille correctement placée, appuyez sur le bouton d’impression du logiciel Pronterface et attendez que l’impression soit terminée. Répétez les étapes précédemment démontrées jusqu’à ce que le nombre souhaité de constructions bio-imprimées soit obtenu. Après l’impression, laissez la plaque de puits avec les constructions recouvertes à température ambiante dans l’enceinte de sécurité biologique pendant une heure.
Cela permet une polymérisation catalysée par la base avec la bio-encre hydrogel photoréglable. Placez ensuite la plaque de puits avec les constructions bioimprimées en 3D dans un incubateur stérile à 37 degrés Celsius pendant 12 à 18 heures pour faire fondre la boue du bain de support. Ensuite, à l’intérieur d’une enceinte de sécurité biologique, changez le support entourant les constructions bio-imprimées.
Pour ce faire, retirez manuellement le média et le bain de support de gélatine fondue des puits sans perturber les constructions. Ajoutez ensuite un volume approprié de milieu à faible teneur en sérum dans chaque puits. Encore une fois, 24 heures avant le point de temps de raidissement souhaité, remplacez les milieux dans les puits par des milieux à faible teneur en sérum complétés par du LAP stérile de 2,2 millimolaires.
Au moment de durcissement souhaité, retirez la moitié du média des puits à rigidifier et placez la plaque sans couvercle sous la lumière ultraviolette ou UV d’un OmniCure. Allumez la lumière UV avec un filtre passe-bande de 365 nanomètres pour rigidifier les constructions pendant cinq minutes. Une fois raidi, retirez le milieu restant de ces puits avant d’ajouter un nouveau milieu à faible teneur en sérum dans chaque puits.
Remettez la plaque dans l’incubateur jusqu’à ce que l’étude d’activation des fibroblastes soit effectuée au moment souhaité, La combinaison d’une bio-encre acide et d’une boue de bain de support basique a facilité la polymérisation des constructions bio-imprimées en 3D et a maintenu les structures cylindriques. La microscopie de l’hydrogel marqué par fluorescence a montré des pores à l’intérieur de l’hydrogel induits par des microparticules de gélatine dans le bain de support. La microscopie confocale a montré un raidissement excessif du contrôle spatial en 3D.
Les tests de viabilité des fibroblastes ont révélé que les constructions avec une épaisseur de paroi de 300 microns et 4 millions de cellules par millilitre surpassaient toutes les autres conditions à chaque point de temps. La viabilité a atteint son apogée le septième jour, avec environ 91 % des cellules colorées vivantes, et au 14e jour, 85 % étaient encore viables.
