Commencez par allumer l’instrument et sélectionnez le processus de transduction des lymphocytes T à partir de l’interface de l’écran tactile. Cliquez sur Exécuter pour lancer la procédure et suivez les instructions fournies à l’écran. Sur l’écran de saisie du périmètre, saisissez les initiales de l’opérateur, le jeu de tubes, le numéro de lot et la date d’expiration.
Ensuite, sélectionnez le processus complet sur l’écran de configuration du processus. Maintenant, choisissez deux flacons de réactif de sélection pour la méthode de sélection CD4, CD8. Installez l’ensemble de tubes, en vous assurant que toutes les connexions des leurres sont bien réglées et effectuez les tests d’intégrité supérieure et inférieure en suivant les instructions sur l’écran tactile.
Maintenant, fixez le milieu et les sacs tampons de traitement selon les instructions à l’écran et commencez l’amorçage automatique de l’ensemble de tubes. Une fois que l’écran de la cellule de transfert apparaît, transférez le produit de la cellule T décongelé dans un sac de transfert de 150 millilitres et soudez-le de manière stérile au sac d’application de l’ensemble de tubes. Ensuite, utilisez un sachet de contrôle de la qualité pour obtenir un échantillon du sac d’application et effectuez une numération cellulaire à l’aide d’un analyseur d’hématologie.
Connectez les flacons de réactifs CD4 et CD8 à l’ensemble de tubes et lancez le processus de sélection pour l’enrichissement des lymphocytes T. Après l’enrichissement, prélever un échantillon des cellules sélectionnées dans le sachet de contrôle de la qualité des sacs de réapplication. Entrez la concentration de cellules souhaitée et le numéro de départ.
Maintenant, attachez un flacon de réactif d’activation selon les instructions à l’écran. Ensuite, réglez la concentration de dioxyde de carbone à 5 % et la température de la chambre de culture à 39 degrés Celsius. Établissez la matrice d’activité en utilisant le protocole d’alimentation amélioré comme point de départ et modifiez les étapes individuelles en fonction de votre protocole optimisé spécifique.
Dans ce cas, réglez la durée de l’activité de transduction sur 24 heures après l’ensemencement et le lavage de culture sur 48 heures après la transduction. Réglez l’heure d’activation de l’agitateur pour qu’elle commence 30 minutes après le début du lavage de culture. Supprimez toutes les activités d’échange de sacs moyens et de sacs poubelles, car elles ne sont plus nécessaires.
Ensuite, appuyez sur OK sur l’écran pour lancer la culture. Laissez l’instrument pomper automatiquement le volume requis du sac de réapplication dans la chambre de culture. Décongeler et préparer le volume vectoriel calculé dans un sac de réactif de 20 millilitres avec un milieu froid pour atteindre un volume final de 10 millilitres.
Ajustez la matrice d’activité pour définir le temps de transduction sur deux minutes dans le futur et appuyez sur OK pour lancer l’activité de transduction. Soudez de manière stérile le sac vectoriel à l’ensemble de tubes en suivant les instructions à l’écran. Modifiez la matrice d’activité en fonction de l’heure réelle de début de la transduction, le lavage de culture étant programmé 48 heures après la transduction.
Programmez l’heure d’activation de l’agitateur à 30 minutes après le lavage de la culture. Enfin, assurez-vous que l’échange avec les médias a lieu dans l’après-midi à 14h00 le sixième jour. Appuyez sur le bouton de l’échantillon et suivez les instructions à l’écran pour obtenir un échantillon de contrôle de la qualité de la culture active.
Divisez l’échantillon en trois aliquotes d’un millilitre pour diverses analyses. Préparez le tampon de formulation final, en gardant une partie pour la préparation du cryoprotecteur plus tard. Ensuite, ajustez la matrice d’activité, en définissant la fin de la culture à deux minutes dans le futur.
Fixez le tampon de formulation finale à l’ensemble de tubes et commencez la récolte. Scellez et retirez le sac de la cellule cible. Ce sachet contient les cellules CAR-T prêtes pour la perfusion ou la cryoconservation.
Le nombre de cycles RT de l’essai clinique était de 46 %, ce qui indique que le processus TCT a efficacement favorisé l’expansion cellulaire. La viabilité cellulaire du produit final se situait entre 88 et 94 % et la pureté des lymphocytes T CD3 était de 89 à 93 %Les endotoxines, les mycoplasmes, la stérilité, les lentivirus compétents pour la réplication et les cellules leucémiques résiduelles n’étaient pas détectables.
