Ajoutez environ 0,75 milligramme de levure sèche à 200 microlitres de solution saline équilibrée Hanks', ou HBSS, contenant des ions calcium et magnésium. Ensuite, incubez le mélange dans un ThermoMixer à 100 degrés Celsius et 500 tr/min pendant au moins 15 minutes. Après incubation, transvaser cinq microlitres de suspension de levure dans 45 microlitres de colorant bleu de trypan à 0,2 %.
Comptez les cellules de levure à l’aide d’une chambre Neubauer. Ajustez la concentration de la suspension initiale à 33 000 cellules de levure par microlitre en utilisant HBSS avec du calcium et du magnésium. Ensuite, mélangez et transférez délicatement cinq microlitres de polynutrophiles activés préalablement préparés à cinq microlitres de suspension de cellules de levure dans un nouveau tube de microcentrifugation stérile.
Transférez immédiatement six microlitres de neutrophiles polymorphonucléaires et de suspension de levure dans trois puits d’une lame de verre propre, de deux microlitres chacun, et incubez la lame dans une chambre humidifiée pendant 40 minutes. Après la coloration avec un panoptique rapide, observez les cellules au microscope. Bien que le FMLP à 100 nanomolaires et le peptide antimicrobien à 16 micromolaires aient induit une augmentation de l’engloutissement de levures, la différence n’était pas statistiquement significative jusqu’à la double stimulation, qui a considérablement amélioré la phagocytose par rapport au groupe témoin.
