Rat Retina Excision and Mounting on Porous Membrane for Calcium Imaging

Deux à trois semaines avant l’imagerie, le vitré de l’œil d’un rat anesthésié est injecté avec les particules virales portant l’indicateur de calcium génétiquement codé. À l’aide du fond d’œil et de l’OCT, la structure rétinienne est examinée à la recherche d’effets indésirables de l’injection d’indicateur de calcium. Deux semaines après l’injection, la couche de cellules ganglionnaires ou GCL présentait une émission de fluorescence.

Ensuite, l’exérèse de la rétine du rat euthanasié est initiée. Prenez les yeux exprimant AAV2-CAG-GCaMP5G et retirez tous les tissus entourant le globe oculaire à l’aide de petites pinces incurvées et de ciseaux à ressort fins. Ensuite, prenez un morceau de papier filtre de trois centimètres sur trois.

Positionnez-le sur le couvercle d’une parabole de 3,5 centimètres et imbibez le papier filtre avec le médium AIMS. Positionnez le globe oculaire sur le papier avec le segment antérieur orienté vers l’opérateur. Utilisez une paire de pinces droites pour maintenir le globe oculaire à un angle d’environ 45 degrés par rapport à la surface de la parabole.

Utilisez l’espace entre les pinces droites pour guider une incision avec une lame. Plongez ensuite le globe oculaire dans le milieu AIMS. Utilisez des pinces droites et des ciseaux à ressort fins pour séparer les segments antérieur et postérieur de l’œil.

Retirez délicatement le cristallin à l’aide de deux paires de pinces droites et détachez la rétine de la sclérotique. À l’aide de ciseaux à ressort fins, faites une incision dans la sclérotique vers le nerf optique et coupez jusqu’à ce que la rétine ait été séparée avec succès de l’œilleton. Transférez le morceau excisé de la rétine sur la membrane de montage à l’aide d’une pipette en plastique à embout coupé.

Ensuite, utilisez une paire de pinces droites pour monter la rétine à plat, en veillant à ce que la couche de cellules ganglionnaires soit orientée vers le haut. Ensuite, utilisez une pipette en plastique munie d’un embout de pipette de 100 microlitres pour retirer le milieu, facilitant ainsi l’adhérence de la pièce de rétine à la membrane poreuse. Ensuite, retournez l’ensemble sur le réseau de micro-électrodes ou MEA, en positionnant le GCL sur le dessus des électrodes.

Remplissez ensuite le bain d’échantillon avec du milieu AIMS oxygéné.