Commencez par ajouter 50 microlitres de cellules électrocompétentes d’Agrobacterium tumefaciens dans un Q-vet pré-refroidi de 0,1 millimètre. Ajoutez deux microlitres de pCAMBIA1302 au Q-vet. Utilisez maintenant un électroporateur à 2 400 volts pour électroporer les cellules.
Ajoutez immédiatement un millilitre de milieu LB dans le Q-vet et pipetez la solution de haut en bas pour mélanger doucement. Ensuite, transférez les cellules remises en suspension dans un microtube de 1,5 millilitre. Ensuite, incubez-le à 24 à 30 degrés Celsius pendant au moins une heure pour récupérer.
Maintenant, plaquez les cellules sur une tarière LB supplémentée en antibiotiques. Incubez les plaques à 28 à 30 degrés Celsius pendant deux à trois jours. Enfin, inoculez une seule colonie dans du bouillon LB.
Laissez la culture se développer du jour au lendemain. Ensuite, cryoconservez la souche contenant du plasmide avec une solution de glycérol à 50 % à 80 degrés Celsius pour une utilisation future.
