Pour commencer, préparez un milieu de culture cellulaire DMEM contenant du FBS, de la pénicilline et de la streptomycine. Préparez également une solution mère de chlorure de cobalt de 100 millimolaires en ajoutant 1,30 milligramme de chlorure de cobalt à 100 microlitres de DMSO. Ensuite, semez un millilitre de cellules BEND3 dans une boîte de culture de 100 millilitres contenant un milieu DMEM et cultivez-le à 37 degrés Celsius dans une atmosphère humidifiée à 5 % de dioxyde de carbone.
Changez le milieu tous les deux à trois jours et faites une sous-culture des cellules deux fois par semaine. Une fois que les cellules BEND3 atteignent 80 % de confluence, digérez les cellules avec 0,25 % de trypsine pendant 30 secondes. Comptez les cellules à l’aide d’un compteur de cellules et faites une suspension de densité sept fois 10 à quatre cellules par millilitre.
Ensuite, semez 100 microlitres de cette suspension cellulaire dans une plaque à 96 puits pour l’adhésion cellulaire. Lavez ensuite les cellules avec du PBS et ajoutez 100 microlitres de milieu de culture contenant du chlorure de cobalt. Cultivez les cellules pendant 24 heures.
Après l’incubation, retirez le milieu et lavez avec du PBS. Ensuite, ajoutez 100 microlitres de solution CCK-8. Incuber les plaques à 37 degrés Celsius pendant une heure, puis mesurer l’absorbance à 450 nanomètres à l’aide d’un lecteur de microplaques.
Calculez la viabilité cellulaire induite par le chlorure de cobalt selon cette formule. Sélectionnez la concentration présentant une différence significative dans la réduction de la viabilité cellulaire par rapport au groupe témoin. La viabilité des cellules BEND3 traitées avec différentes concentrations de chlorure de cobalt a été analysée par CoCl2.
Les résultats ont indiqué que 300 micromolaires de chlorure de cobalt présentaient une cytotoxicité significative in vitro.
