Après avoir autoclavé deux plaques de silicone, dans des conditions stériles, retirez les plaques du sac de l’autoclave et placez-les dans des plaques de 150 millimètres. Ajoutez 400 microlitres de solution de fibronectine dans chaque puits des plaques de silicone. Ensuite, remettez en suspension les cellules stromales mésenchymateuses induites par la scléraxie positive dans le milieu MSC et comptez les cellules viables à l’aide d’un compteur de cellules automatisé.
Calculez le volume de suspension cellulaire nécessaire pour obtenir 1,25 fois 10 à quatre cellules par centimètre carré. Retirez ce volume de milieu étirable MSC du tube conique de 15 millilitres et ajoutez le volume requis de suspension de cellules stromales mésenchymateuses induites par la scléraxie positive. Inverser le tube pour l’homogénéité de la nouvelle suspension cellulaire.
Ajoutez 400 microlitres de suspension cellulaire à chaque puits des deux plaques de silicone. Remettez le couvercle sur les plaques de 150 millimètres et incubez les plaques à 37 degrés Celsius pendant 24 heures. Pour une tension uniaxiale, rincez l’appareil d’étirement avec de l’eau doublement distillée, puis de l’éthanol à 70 %.
Essuyez l’appareil, placez-le dans la hotte de culture cellulaire et exposez-le à la lumière ultraviolette pendant 15 minutes. Ensuite, placez une plaque dans l’incubateur comme contrôle statique. Placez la deuxième plaque de silicone assise dans l’appareil d’étirement en alignant les vis avec les trous de la plaque de silicone.
Placez ensuite le couvercle sur l’appareil. Fixez l’appareil avec la plaque de silicone assise à la source électronique et placez-le dans l’incubateur à 37 degrés Celsius. Réglez le programme d’étirement cyclique sur une contrainte sinusoïdale de 4 % en 0,5 hertz pendant deux heures par jour.
Lancez l’étirement en appuyant sur le bouton de démarrage. Lors de la charge mécanique des cellules stromales mésenchymateuses induites par la scléraxie positive, des densités de semis trop élevées ont conduit à une contraction cellulaire prématurée et à une mort cellulaire précoce. Après plusieurs jours d’étirement, un certain degré d’organisation cellulaire a été observé dans le groupe étiré des cellules stromales mésenchymateuses induites par la scléraxie, par rapport à l’organisation cellulaire aléatoire dans le groupe statique.
La coloration à la phalloïdine des filaments d’acton a montré que les cellules se développaient perpendiculairement à la direction d’étirement, contrairement à l’organisation cellulaire aléatoire observée dans les plaques statiques. L’analyse de l’expression génique a révélé une régulation positive significative des gènes ténogènes à trois et sept jours, par rapport aux IMSC au jour zéro. Le dépôt de collagène dans le milieu après sept jours d’étirement était significativement plus élevé dans le groupe étiré des cellules stromales mésenchymateuses induites par la scléraxie positive par rapport à tous les autres groupes.