Pour commencer, enduisez une aiguille papillon et son tube d’une solution d’EDTA à 1% de potassium. Coupez le tube juste derrière l’aiguille afin de recueillir le sang goutte à goutte. Placez un rat anesthésié sur le cadre stéréotaxique tout en maintenant l’anesthésie à travers un masque facial.
Placez un coussin chauffant sous l’animal, en gardant une partie de sa queue en contact direct avec le coussin. Déplacez les animaux vers l’arrière de manière à ce qu’ils soient tournés vers le côté et que la nervure latérale de la queue soit visible en haut. Trempez la queue dans de l’eau tiède pour dilater la nervure latérale.
Essuyez ensuite la queue avec 70% d’éthanol. Mettez une lumière chaude sur la queue à l’aide d’une ampoule à incandescence ordinaire. Insérez l’aiguille papillon 21G dans la veine caudale latérale à un angle de 20 degrés à une profondeur de cinq millimètres.
Ensuite, prélevez du sang dans un tube de collecte sous vide de 500 microlitres contenant cinq milligrammes d’EDTA de potassium comme anticoagulant. Retirez l’aiguille et arrêtez l’écoulement du sang en exerçant une pression sur le site de ponction. Ramenez le rat dans sa cage d’origine.
Ensuite, retournez doucement le tube 10 fois pour mélanger l’anticoagulant dans le sang. Faites des trous de 1,5 centimètre de profondeur dans la glace et placez-y les tubes verticalement. Dans l’heure qui suit le prélèvement, centrifugez l’échantillon de sang dans une centrifugeuse réfrigérée pour séparer le plasma.
Ensuite, aspirez environ 200 microlitres de plasma, en évitant la couche de globules rouges et blancs. Placez le plasma prélevé dans un microtube stérile de 0,2 millilitre. Mettez de côté cinq microlitres de l’échantillon pour le contrôle de la qualité et conservez l’échantillon restant à moins 80 degrés Celsius jusqu’à l’analyse.
Le sang a été prélevé sur les rats à cinq moments en utilisant différentes méthodes, telles que la technique du vide au jour 52, la traite de la queue au jour 55 et les techniques de chute aux jours 58 à 64. La qualité des échantillons de plasma évalués à l’aide de la spectrophotométrie UV a montré que le plasma était de couleur rose avec une valeur d’absorbance moyenne de 0,647 lors de l’utilisation de la technique du vide. De même, la technique de traite de la queue a permis d’obtenir un plasma de couleur rose avec une absorbance moyenne de 0,620.
En revanche, avec le système de retrait de goutte activé par gravité, des échantillons de plasma clair ont été obtenus avec des valeurs moyennes d’absorbance plasmatique significativement réduites, ce qui suggère que cette procédure est optimale pour obtenir des échantillons de haute qualité pour les analyses.
