Pour commencer, préparez une aiguille papillon 23G en coupant son manchon de protection en plastique, de manière à ce que l’extrémité de l’aiguille nue soit exposée de 7 millimètres. Ensuite, connectez l’aiguille papillon avec le tube en polymère à une seringue de 1 millilitre. Placez un rat anesthésié sur un cadre stéréotaxique et maintenez l’anesthésie à l’aide d’un masque facial.
Ensuite, retirez la fourrure sur l’arrière de la tête et du cou du rat. Fixez la tête du rat avec des barres auriculaires. Déplacez la barre nasale du cadre stéréotaxique pour abaisser la tête de l’animal d’environ 45 degrés verticalement.
Retrouver une surface légèrement déprimée à l’arrière de la tête avec l’aspect d’un losange entre la protubérance occipitale et l’épine de l’atlas. Frottez la surface avec 70% d’éthanol. Pour le prélèvement du LCR, insérez l’aiguille papillon verticalement au centre de la surface déprimée en forme de losange dans la citerne jusqu’à ce que le mouvement soit bloqué par la protection du manchon en plastique de l’aiguille.
Tirez doucement sur le piston de la seringue afin de laisser le LCR s’écouler lentement à travers l’aiguille. Recueillir environ 100 microlitres de LCR dans un tube en polymère. Pincez le tube en polymère très près de l’aiguille papillon et coupez le tube à ce stade.
Prélevez l’échantillon transparent dans la seringue. Expulsez l’échantillon dans le microtube stérile de 0,2 millilitre et conservez-le sur de la glace jusqu’à une heure. Désinfectez le site de retrait du LCR sur la tête de l’animal.
Retirez le rat du cadre stéréotaxique et remettez-le dans sa cage. Mettez de côté 2 microlitres de l’échantillon pour le contrôle de la qualité et conservez le reste à 80 degrés Celsius pour une analyse plus approfondie. Le sevrage répété du LCR a été effectué pendant cinq jours dans trois groupes expérimentaux de rats et exprimé en pourcentage de retraits réussis qui ont entraîné un LCR clair.
Chez les rats dotés d’implants à double tête canulés pour le retrait du LCR, le taux de réussite était de 71,1 %, ce qui indique que la canule sur la tête de l’animal peut interférer avec des prélèvements répétés de LCR. En revanche, lorsque le prélèvement du LCR a été effectué par ponction de la citerne magna chez des animaux attachés ou implantés à des électrodes de télémétrie, le taux de réussite était de 86,7 % et 88,9 %Ces résultats suggèrent que la technique de ponction est plus adaptée aux prélèvements multiples de LCR chez les animaux implantés à l’électrode.
