Pour commencer, préchauffez une quantité adéquate de milieux de culture stériles pendant que le prétraitement à la dexaméthasone de 48 heures de l’explant des membres postérieurs murins est sur le point de se terminer. Une fois le prétraitement terminé, déplacez les explants prétraités vers l’enceinte de sécurité biologique. Pour le groupe déchargé, aspirer le milieu de prétraitement et transférer les explants dans des boîtes de Pétri fraîches.
Ajoutez 70 millilitres de milieux de culture dans chaque boîte avant de les remettre dans l’incubateur. Pour préparer les plates-formes d’explant pour le groupe de tension de base et d’impact statique, découpez des morceaux de papier de verre pour qu’ils correspondent à la taille des plateaux de préhension. Pour le groupe d’impact statique, coupez des morceaux de fil tressé et faites un nœud plat lâche à mi-chemin de la longueur.
Déchirez des morceaux de papier d’aluminium pour couvrir chaque bain d’acrylique et vaporisez-les avec 70% d’éthanol. Transférez les composants préparés dans l’enceinte de sécurité biologique. Disposez les composants tels que le bain acrylique, la base, les inserts de réduction de volume, le clip et les poignées pour l’assemblage de la plate-forme.
Placez les composants de la plate-forme à l’intérieur de récipients secondaires d’un volume suffisant pour contenir toute fuite potentielle de milieux de culture. Plongez les récipients dans une solution contenant au moins 10 % d’eau de Javel pendant au moins une heure. Rincez les solutions d’eau de Javel à l’eau du robinet.
Après avoir transféré les composants rincés dans l’enceinte de sécurité biologique, utilisez des vis M3 et des ressorts de compression pour fixer les plateaux aux poignées. Fixez solidement les poignées à la base à l’aide d’une vis M5 et insérez les vis M6 jusqu’à ce qu’elles entrent en contact avec les plateaux. Améliorez la fonctionnalité des plateaux en fixant du papier de verre à l’aide de ruban adhésif double face.
Fermez les poignées pour faciliter l’adhérence du papier de verre sur les plateaux. Pour charger une plate-forme, ouvrez complètement les poignées et utilisez des pinces pour positionner soigneusement le haut de la jambe et le genou entre les plateaux. Fermez doucement les poignées pour maintenir le membre en place.
Utilisez une pince pour saisir la tête ou le pied fémoral exposé et ajustez l’angle de flexion du genou, tout en fermant progressivement la pince pour la maintenir en place. Pour le groupe de tension de base, étendez l’articulation du genou tout en fermant les poignées. Dans le cas du groupe d’impact statique, fléchissez l’articulation du genou tout en fermant les poignées.
Pour le groupe d’impact statique, placez le nœud plat de la ficelle autour de la patte distale et serrez-le fermement. Acheminez la ficelle à travers une fente dans la base sous l’explant et à travers le trou de l’attache. Positionnez la base dans la baignoire en acrylique et fixez le clip au bord supérieur de la baignoire.
Pour fléchir dorsivement le pied, tirez sur la corde jusqu’à ce qu’elle atteigne au moins 110 degrés par rapport au tibia. Utilisez un marqueur permanent pour marquer la corde à la sortie du clip. Prenez une photographie de l’explant dans cette position de flexion dorsale pour une quantification future de l’angle de dorsiflexion.
Retirez la base de la configuration et fixez l’insert de réduction de volume en le faisant glisser le long d’un rail sur la base. Replacez la base dans la baignoire acrylique et repositionnez le clip sur le bord supérieur. Utilisez la chaîne marquée comme guide.
Tirez-le pour redonner au pied son angle de dorsiflexion d’origine et fixez la corde à l’extérieur de la baignoire à l’aide de ruban adhésif pour maintenir une position statique en flexion dorsale. Pour le groupe de tension de base, une fois que l’explant est positionné entre les poignées, prenez une photo pour quantifier l’angle de dorsiflexion. Faites ensuite glisser l’insert de réduction de volume sur la base et placez-le dans le bain acrylique.
Ajoutez 125 millilitres de milieux de culture préchauffés à chaque plate-forme pour immerger les explants. Après avoir recouvert le dessus de la baignoire de papier d’aluminium, placez l’ensemble de l’installation dans un récipient secondaire. Déplacez le récipient secondaire dans l’incubateur et cultivez-le pendant sept jours.
