Pour préparer la solution d’encre bio, mélangez une quantité appropriée de suspension cellulaire C3A avec la solution stérilisée gelMA. Précolorer les sphéroïdes des cellules C3A avec une solution de suivi de cellules à deux micromolaires à 37 degrés pendant 20 minutes. Pour laver les cellules, retirez d’abord la supernatine par centrifugation, puis ajoutez un milieu de culture cellulaire frais.
Ajoutez au moins deux millilitres d’encre bio dans la chambre du dispositif acoustique stérilisé. Allumez le générateur de fonctions et l’amplificateur de puissance pour initier l’actionnement de chaque transducteur PZT afin de générer un réseau 3D d’agrégats de cellules. Réticulez l’encre bio à l’aide de la lumière bleue pendant 30 secondes pour créer des échafaudages en hydrogel 3D, encapsulant acoustiquement les agrégats cellulaires assemblés.
Ensuite, transférez soigneusement l’échafaudage d’hydrogel 3D de la chambre dans une boîte de Pétri. Coupez-le en petits morceaux à l’aide d’un rasoir propre, puis ajoutez le milieu de culture cellulaire dans la boîte de Pétri. Incuber les sphéroïdes cellulaires C3A à différents moments de culture dans un millilitre de PBS contenant un microlitre de calcium am et deux microlitres d’iodure de propidium pendant 15 minutes à 37 degrés Celsius.
Rincez l’échantillon incrusté dans des échafaudages en hydrogel deux fois avec du PBS. Pour les sphéroïdes récupérés, effectuez une centrifugation à 200 G pendant cinq minutes et lavez deux fois avec du PBS. À l’aide d’un microscope à fluorescence, observez les sphéroïdes et capturez les images.
Les agrégats de cellules ont été disposés selon le modèle régulier de réseau de points 3D avec un signal fluorescent vert. Les agrégats de gelMA C3A assemblés se sont progressivement intégrés et ont formé des sphéroïdes serrés au troisième jour, accompagnés d’une augmentation du diamètre du sphéroïde. La viabilité des sphéroïdes cellulaires est restée bonne avant le troisième jour, mais a légèrement diminué après une semaine de culture.
Les sphéroïdes libérés ont conservé une bonne morphologie sphérique avec une distribution de taille étroite ainsi qu’une viabilité et une expression souhaitables de l’albumine.
