Obtaining Wildtype and Transgenic Zebrafish Larvae and WildType Whole Larvae Dissociation

Commencez par obtenir les œufs de poisson-zèbre de type sauvage et transgénique de l’installation d’élevage respective. Prenez une boîte de Pétri de 15 centimètres contenant du milieu E3 ou E3 tamponné HEPES. Et collectez la quantité appropriée d’œufs fécondés dans la configuration d’élevage de poissons-zèbres souhaitée. Incuber les œufs fécondés en E3 à 28 degrés Celsius avec un cycle de lumière et d’obscurité approprié.

Un jour après la fécondation ou le dpf, retirez tous les ovules non fécondés et laissez les ovules fécondés se développer jusqu’à cinq dpf. Sélectionner les larves de poisson-zèbre transgéniques à un dpf. Avant de procéder à la dissociation des larves entières, anesthésier les cinq larves de type sauvage dpf en utilisant 0,016 % de tricaïne et transférer 30 larves anesthésiées dans une boîte de Pétri contenant un millilitre de solution de trypsine-EDTA 10x.

Ensuite, à l’aide d’une lame de rasoir, coupez les larves en petits morceaux dans la boîte de Pétri. Transférez les larves hachées dans un microtube à centrifuger avec deux millilitres de solution de trypsine-EDTA 10x et laissez le tube sur de la glace pendant trois heures. Pipetez le contenu de haut en bas avec une pipette P1000 toutes les heures pour stimuler la dissociation.