Hepatocellular Carcinoma Tissue Dissociation for Organoid Culture

Pour commencer la dissociation tissulaire, prélevez un à deux centimètres cubes de carcinome hépatocellulaire ou de tissu HTC chez des patients non traités. Placez ensuite le tissu dans la solution de conservation des tissus et maintenez-le à quatre degrés Celsius jusqu’au traitement. Maintenant, préchauffez les plaques de culture cellulaire de surface à fixation ultra-faible pendant une heure dans un incubateur réglé à 37 degrés Celsius.

Décongelez l’extrait de membrane basale pendant la nuit à quatre degrés Celsius. À l’aide de ciseaux chirurgicaux, coupez le tissu tumoral en petits morceaux sur une boîte de Pétri à l’intérieur d’une hotte à flux laminaire. Transférez ces morceaux dans un tube conique de 15 millilitres et ajoutez cinq à 10 millilitres de milieu basal.

À l’aide d’une pipette barotropique, éliminez le plus de sang possible. Laissez le mélange se déposer pendant une à deux minutes avant d’éliminer une partie du surnageant, y compris les cellules sanguines et les caillots de graisse flottants. Ensuite, centrifugez le mélange à 300 G pendant cinq minutes à température ambiante.

Ensuite, extrayez soigneusement le surnageant et ajoutez cinq millilitres de solution de digestion préchauffée au tissu paré. Placez le tube à 37 degrés Celsius dans un rotor pour une digestion optimale. Après 30 minutes de digestion initiale, utilisez un microscope pour rechercher de petits amas de cellules.

Pour arrêter la digestion, ajoutez cinq millilitres de milieu basal froid dans le tube. Utilisez ensuite un filtre cellulaire de 100 micromètres pour tamiser dans un nouveau tube de 50 millilitres. Remplissez le tube avec un milieu basal froid pour atteindre un volume total de 50 millilitres.

Ensuite, centrifugez les cellules à deux G pendant 10 minutes à huit degrés Celsius. Une fois terminé, retirez délicatement le liquide surnageant. Remettre la pastille en suspension dans 50 millilitres de milieu basal froid pour obtenir la pastille cellulaire pour le placage organoïde.