Pour commencer, pesez trois grammes de poudre de Rhodiola crenulata et transférez-la dans une bouteille conique de 100 millilitres. À l’aide d’une grande pipette à bol, ajoutez 25 millilitres de méthanol dans le flacon. Placez le flacon dans l’instrument à ultrasons.
Réglez la puissance sur 250 watts, la fréquence sur 40 kilohertz, le temps sur 30 minutes et démarrez l’ultrasonication. Ensuite, rincez l’extérieur de la bouteille à l’eau courante jusqu’à ce qu’elle atteigne la température ambiante. Filtrez la solution à travers une membrane microporeuse de 0,22 micron.
À l’aide d’une seringue d’un millilitre, aspirer 800 microlitres de liquide de la bouteille et prélever 400 microlitres de la solution intermédiaire dans un flacon d’échantillon chromatographique. Mesurez et ajoutez un milligramme de salidroside, 0,5 milligramme de tyrosol et 0,5 milligramme d’acide gallique dans trois fioles jaugées distinctes d’un millilitre. Ensuite, remplissez chaque flacon jusqu’à l’échelle marquée au méthanol.
Soniquer les échantillons dans l’instrument à ultrasons en utilisant les conditions décrites précédemment. Après l’échographie, aspirer 800 microlitres de liquide de la fiole. Filtrer la solution à travers une membrane microporeuse de 0,22 micromètre et recueillir 400 microlitres de filtrat dans la bouteille.
Ajouter le trichlorométhane, l’acétate d’éthyle, le méthanol et l’acide formique sur un côté du cylindre de chromatographie à double réservoir. Secouez le cylindre pour mélanger uniformément le contenu et couvrir la culasse supérieure. Disposez les solutions étalons d’acide gallique, de salidroside, de tyrosol et notre solution de crénulata sur le support d’échantillons dans les positions A1 à A4. Placez une feuille de silicone de 5x10 centimètres sur la table d’échantillonnage.
Allumez la machine d’échantillonnage automatique et ouvrez la vanne de contrôle d’air. Appuyez sur le bouton Continuer pour l’échantillonnage automatique. Après l’échantillonnage, éteignez la machine et la vanne d’air.
Retirez la feuille de silicone de la machine. Placez la feuille de silicone de l’autre côté du cylindre de chromatographie à double réservoir. Couvrir la culasse supérieure et pré-saturer pendant 20 minutes.
Ensuite, utilisez une pince à épiler pour maintenir l’extrémité supérieure de la plaque de couche mince et placez rapidement la feuille de silicone dans l’agent de développement. Une fois le solvant organique évaporé, vaporisez la feuille de silicone avec une solution chromogène. L’analyse chromatographique sur couche mince a montré que l’échantillon de R. crenulata apparaissait dans des taches de la même couleur, correspondant aux étalons d’acide gallique, de salidroside et de tyrosol.
