Procédure chirurgicale pour la préparation du modèle murin orthotopique de glioblastome

Pour commencer, préparez la souris à la chirurgie et positionnez-la sur le cadre stéréotaxique. Ensuite, soulevez la peau du crâne et tenez les ciseaux entre l’œil droit et l’oreille pour créer une incision. Coupez vers le côté gauche du crâne, en suivant les marques d’incision et retirez le lambeau de peau rond résultant.

À l’aide d’une lame de scalpel ou d’une micro curette, grattez doucement la surface du crâne pour retirer le périoste. Utilisez une solution saline et un aspirateur pour garder la zone chirurgicale propre des débris. Grattez le périoste pour assurer une meilleure adhérence à la colle cyanoacrylate et à un ciment dentaire.

Ensuite, à l’aide d’un crayon autoclave, marquez la position de la fenêtre crânienne. Tenez la perceuse dans la main dominante et une seringue ou une pince dans la main non dominante. Appliquez une solution saline froide sur le calvarium pour éviter la surchauffe et garder la vue chirurgicale propre.

Pendant le perçage, placez la lamelle de protection en verre sur le dessus du crâne pour confirmer qu’elle s’insère exactement à l’intérieur de la fenêtre crânienne. Une fois qu’il est possible d’enfoncer le lambeau du crâne, utilisez une pince pour retirer soigneusement le fragment du champ opératoire. En cas de saignement mineur, utilisez une éponge hémostatique pour l’application topique d’une solution saline glacée avec une légère pression pour aider à réduire la perte de sang.

Prélever les cellules de gliome C6 cultivées pour l’implantation. Aspirer un microlitre de suspension cellulaire dans une seringue étanche au gaz. Ensuite, positionnez la seringue à l’intérieur du cadre stéréotaxique.

Pour implanter des cellules pour l’imagerie à deux photons, injectez 0,5 microlitre de suspension cellulaire, à 0,8 millimètre de profondeur dans la zone superficielle du cerveau. Après l’injection, rétractez l’aiguille et sortez du tissu cérébral. Maintenant, déplacez la barre de tête et le couvercle en verre de l’alcool vers une solution saline et utilisez un embout à vide ou une pince pour faire naviguer ces composants vers le site chirurgical.

Placez la lamelle de protection en verre à l’intérieur de la fenêtre crânienne et appliquez une petite quantité de colle cyanoacrylate. Enlevez tout déversement de colle sur la lamelle en verre avec un applicateur à embout en coton ou en la grattant doucement avec un scalpel. Fixez la lamelle de protection en verre dans la fenêtre crânienne et appliquez la barre de tête.

Mélangez le ciment dentaire, positionnez la barre de tête et appliquez du ciment sur la zone environnante. Nettoyez tout ciment superflu avec une pointe de seringue, un scalpel ou une pointe de foret. Après avoir scellé la fenêtre crânienne, vérifiez les zones du crâne exposées.