Commencez par injecter des cellules de gliome C6 dans les zones cérébrales superficielles des souris pour créer un modèle murin de glioblastome. Fixez ensuite une barre de tête dans la fenêtre crânienne et laissez les souris récupérer. Ensuite, injectez des nanoparticules marquées fluorescentes par voie intraveineuse dans la souris pour effectuer une imagerie à deux photons dans le cerveau.
Allumez immédiatement le laser Ti :sapphire et l’interrupteur principal du système. Lancez ensuite le logiciel Prairie View. Maintenant, immobilisez la souris sous le microscope à deux photons sur une platine personnalisée.
Placez l’animal en position couchée sur un coussin chauffant et fixez-le avec le ruban adhésif sans serrer le thorax. Ajoutez une goutte d’eau à la fenêtre crânienne et ajustez la mise au point. Pour surveiller le rythme cardiaque et l’oxygénation du sang de l’animal, positionnez le capteur sur la patte arrière.
Ajustez la position de la tête. À l’aide du filtre RFP, localisez le champ d’imagerie souhaité. Une fois l’orientation de l’échantillon et le champ à voir déterminés, passez du mode grand champ au mode microscopie à balayage optique.
Assurez-vous que le laser Ti :sapphire est verrouillé en mode à 920 nanomètres et ouvrez tous les obturateurs. Ajustez les tensions PMT de halètement à 500 à 600 volts. Appuyez sur l’image en direct dans le logiciel pour démarrer l’imagerie.
Après avoir obtenu une image claire, utilisez le logiciel et la platine motorisée pour définir le haut et le bas d’une pile d’images dans le logiciel. Augmentez lentement le gain de pockels ou de PMT pour compenser l’obscurité à des profondeurs croissantes. Définissez un chemin d’enregistrement et démarrez la série Z.
Une fois la pile terminée, utilisez la lecture pour vérifier la qualité de la pile. Une fois l’imagerie terminée, déplacez l’animal dans une cage de récupération. Quittez la vue Prairie, assurez-vous que toutes les données sont enregistrées et transférées, puis éteignez l’ordinateur et tout le matériel.
Un nombre limité de particules ont subi une extravasation et sont visibles à proximité des cellules tumorales 10 minutes après l’administration de nanoparticules. Cependant, 24 heures après l’administration de nanoparticules, une abondance de particules est visible dans le glioblastome, suggérant une extravasation.
