Génération de lignées cellulaires knock-out Protein-E CENP-E^-/- associées au centromère à l’aide du système CRISPR/Cas9

La délétion génétique de la kinésine-7 et de la CENP entraîne généralement l’arrêt du cycle cellulaire et la mort cellulaire. La construction de lignées cellulaires stables du CENP est une question importante non résolue en biologie du CENP. Dans cette étude, nous avons généré des cellules HeLa knock-out CENP à l’aide d’un système CRISPR/Cas9 et établi trois stratégies de criblage optimisées.

Récemment, plusieurs technologies d’édition du génome, notamment les nucléases à doigts de zinc, les nucléases effectrices de type activateur de transcription et la façon dont nous fabriquons nos nucléases, ont été conçues pour cliver les génomes à une taille spécifique. La technologie d’inactivation des gènes CRISPR/Cas9 a révolutionné la biologie fondamentale, la biotechnologie et la médecine. Le CENP est essentiel pour fixer les kinétochores aux microtubules et aligner les chromosomes.

La perturbation de CENP, que ce soit par micro-injection d’anticorps, délétion d’ARNsg, inhibition chimique ou délétion génétique, entraîne un désalignement des chromosomes, des défauts mitotiques et souvent la mort cellulaire, compliquant l’étude des mécanismes protéiques CENP. Dans cette étude, trois stratégies de criblage optimisées basées sur le phénotype ont été établies, y compris le criblage des colonies cellulaires, l’alignement des chromosomes des phénotypes et les intensités fluorescentes des protéines CENP, ce qui a amélioré l’efficacité du criblage et le taux de réussite expérimentale. Il est important de noter que la délétion CENP entraîne un désalignement des chromosomes, la localisation anormale des protéines BubR1 et des défauts mitotiques.

Les modes d’interaction et les mécanismes moléculaires de CENP et de ses inhibiteurs sont des domaines de recherche importants en biologie cellulaire et en recherche sur le cancer. Dans cette étude, la lignée cellulaire HeLa knock-out CENP a été établie comme un outil précieux pour la validation de la spécificité et de la toxicité des inhibiteurs de CENP.