Pour l’enrobage de paraffine des cellules, réglez la machine à paraffine à 58 degrés Celsius. À l’aide d’une pince, transférez les inserts de membrane dans les puits propres d’une plaque stérile à 24 puits. Ajoutez 500 microlitres de formol tamponné à 37 % et de PBS au-dessus du filtre et un millilitre en dessous du filtre.
Fermez le couvercle et laissez l’assiette dans une hotte pendant deux heures. Une fois que la lamina propria est détachée de l’insert membranaire, transférez la muqueuse intestinale dans un bécher contenant 25 millilitres d’éthanol à 35 % et incubez pendant 10 minutes. Après une déshydratation à des concentrations croissantes d’éthanol, placez les échantillons dans 50 millilitres de xylène ou un agent de clarification histologique pendant 10 à 20 minutes.
Une fois que les échantillons sont transparents, placez-les dans un porte-cassette de tissu métallique et plongez-les dans de la paraffine liquide à l’intérieur d’une machine chauffée. Après 45 minutes, utilisez un microtome pour couper des sections de quatre microns. Placez la section coupée sur les lames et séchez-les dans un four à 37 degrés Celsius pendant 24 heures.
Un modèle de muqueuse intestinale équivalent en 3D acceptable est constitué de cellules Caco-2 formées en une monocouche serrée et régulière au-dessus de la lamina probria riche en matrice extracellulaire. Les modèles inacceptables comprennent ceux qui montrent une croissance excessive, des couches épithéliales désorganisées, une malformation ou une absence de formation de couche épithéliale. L’effet pro-inflammatoire de la protéine de blé à haute teneur en gluten a perturbé la monocouche cellulaire et réduit l’épaisseur de la couche épithéliale par rapport au groupe témoin.
La teneur en protéines d’occludine était significativement plus élevée dans le groupe témoin que dans le groupe exposé à la protéine de gluten. La coloration CD14 et CD11b des monocytes U937 a montré que la protéine de blé à forte teneur en gluten activait les monocytes et induisait leur migration et leur différenciation en macrophages. Sous le défi des lipopolysaccharides, les cellules Caco-2 ont augmenté la production de mucus et la libération du marqueur inflammatoire midkine.
