Commencez par maintenir les cellules TMPRSS2 HEK-293T ACE2 dans du DMEM contenant du FBS activé chauffé, de la pénicilline et de la streptomycine dans une fiole T75. Pour le comptage cellulaire, mélanger 20 microlitres de suspension cellulaire avec 20 microlitres de solution Trypan Blue. Ajoutez 20 microlitres de suspension cellulaire mélangée à un colorant dans la chambre de comptage des cellules et comptez le nombre de cellules par millilitre.
Semez 2,5 fois 10 à la puissance de quatre cellules de TMPRSS2 HEK-293T ACE2 dans 50 microlitres de milieu DMEM complet dans chaque puits d’une plaque de 96 puits. Incuber les cellules dans un incubateur de dioxyde de carbone pendant la nuit à 37 degrés Celsius. Le lendemain, remplacez les 50 microlitres de DMEM par 50 microlitres de suspension virale et incubez pendant 18 heures à 37 degrés Celsius.
Après l’incubation, ajoutez 7,5 microlitres de tampon de lyse cellulaire dans chaque puits et mélangez sur un agitateur orbital pendant deux minutes. Une fois les cellules lysées, ajoutez une solution de test luciférase fraîchement préparée et mélangez-les sur un agitateur orbital pendant une minute. Analysez l’activité de la luciférase à l’aide d’un lecteur de microplaques de luciférase commercial.
Pour le test d’anticorps neutralisants, ensemencez les cellules HEK-293T dans 50 microlitres de DMEM complet comme démontré précédemment. Dans une plaque de 96 puits, ajoutez huit microlitres d’anticorps neutralisants de 27 VB et effectuez des dilutions en série avec six microlitres de DMEM sans sérum. Ajoutez 54 microlitres de particules virales Ha-CoV-2 à l’anticorps dilué en série et mélangez la suspension.
Incuber pendant une heure à 37 degrés Celsius dans 5% de dioxyde de carbone. Ajoutez ensuite 50 microlitres de suspension virale dans les puits contenant des cellules HEK-293T. Pour les témoins, ajoutez 50 microlitres de milieu DMEM complet dans les puits contenant uniquement des cellules HEK-293T.
Placez l’assiette dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant 18 heures. Après avoir lysé les cellules comme démontré précédemment, ajoutez une solution de test de luciférase fraîchement préparée et mélangez en agitant orbitalement pendant une minute. Analysez l’activité de la luciférase à l’aide d’un lecteur de microplaques de luciférase commercial.
Les variants Ha-CoV-2 Omicron et Omicron ont généré un signal quatre à dix fois plus élevé que le Ha-CoV-2 de type sauvage, ce qui suggère une infectiosité plus élevée. L’anticorps 27 BV a démontré une activité neutralisante contre les variants Delta et Omicron. L’ID50 de 27 BV pour Omicron était environ 10 fois moins puissant que l’ID50 pour le type sauvage et Delta.
