Greffe organoïde du cerveau humain dans la membrane chorioallantoïde embryonnaire de poulet pour la modélisation neurovasculaire

Pour commencer, dériver des organoïdes cérébraux à partir de cellules souches embryonnaires H9 et obtenir des œufs de poule nouvellement fécondés. Le premier jour, nettoyez la surface de la coquille d’œuf avec de l’éthanol à 70 % et laissez-la sécher. Placez un pansement adhésif en papier chirurgical sur l’œuf.

À l’aide d’une lampe, détériorez la surface de la coquille d’œuf la plus mince à l’extrémité supérieure. Ensuite, avec une aiguille stérile, percez doucement la coquille d’œuf pour créer un trou dans la chambre à air sans déranger la caméra du poussin. Pour protéger l’embryon de l’environnement extérieur, couvrez le trou de la chambre à air avec un nouveau pansement et incubez l’œuf à 38 degrés Celsius.

Le septième jour, retirez le pansement et essuyez la surface de la coquille d’œuf avec de l’éthanol à 70 %. Placez ensuite un nouveau pansement plus gros recouvrant l’extension. Percez doucement la coquille d’œuf pour agrandir le trou en une fenêtre de greffe de deux centimètres de diamètre.

À l’aide d’une pince à épiler, retirez les bords de la fenêtre en coquille d’œuf et décollez le pansement pour enlever la poussière et les morceaux de coquille d’œuf restants. À l’aide d’une pointe stérile de grande jauge, prélevez l’organoïde dans 50 microlitres de PBS et transférez-le soigneusement dans la came opposée à l’emplacement de l’embryon. Ajoutez une goutte de sept microlitres de gel d’allumettes autour de l’organoïde.

Scellez la fenêtre à l’aide d’un parafilm et fixez-la à la coque avec un pansement adhésif. Incuber la greffe pour la différenciation des cames. Après cinq jours, retirez le pansement adhésif.

À l’aide de ciseaux et d’une pince à épiler fine, agrandissez la fenêtre pour faciliter la récolte des échantillons. Fixez-le avec du paraformaldéhyde à 4% pendant deux minutes et prélevez une section de 1,5 centimètre carré de la came contenant l’organoïde. Pour confirmer la réussite de la greffe, effectuez une coloration à l’hématoxiline et à l’éosine de tranches de tissu de 20 micromètres d’épaisseur avec organoïde.

La coloration à l’hématoxiline et à l’éosine du tissu greffé a indiqué que les organoïdes continuaient à mûrir à côté des vaisseaux de came sans aucun signe d’infiltration des vaisseaux sanguins.