Commencez par préparer les phases mobiles pour la chromatographie liquide à haute performance, ou HPLC. Pour la phase A mobile, ou MPA, utilisez du formiate d’ammonium de cinq millimolaires dans de l’eau avec 0,05 % d’acide formique. Pour la phase B mobile, ou MPB, utilisez de l’acide formique à 0,05 % dans un mélange individuel de méthanol acétonitrile.
Pour commencer le développement de la méthode HPLC, ouvrez le logiciel de chromatographie liquide ou LC et créez un nouveau protocole. Ensuite, cliquez sur le bouton Modifier la méthode pour modifier le dégradé binaire. Sous l’onglet Gradient binaire, définissez les horodatages et les concentrations de MPA et MPB.
Réglez le temps d’arrêt sur 18 minutes, le débit sur 0,400 millilitre par minute et les limites de pression minimale et maximale sur zéro et 6 000 PSI respectivement. Pour initialiser la HPLC, insérez la colonne LC et les protections de colonne dans la section de la colonne HPLC. Respectez attentivement les pressions minimale et maximale de la colonne.
