Isolement de cellules stromales à partir de tissu thymique murin pour générer des ensembles de données multiomiques unicellulaires de haute qualité

Pour commencer, placez la souris euthanasiée sur une plate-forme chirurgicale et ouvrez la cavité thoracique. À l’aide de ciseaux chirurgicaux, faites une incision transversale sous la cage thoracique et coupez les côtes de chaque côté de la souris jusqu’à la clavicule. Coupez ensuite le diaphragme pour libérer la paroi thoracique et soulevez les côtes avec une pince pour exposer la cavité thoracique.

Tenez le thymus avec une pince et coupez doucement le tissu conjonctif qui maintient le thymus en place. Pour effectuer la dissociation enzymatique du tissu thymique murin, placez le thymus nettoyé dans un capuchon de tube de 15 millilitres et utilisez des ciseaux chirurgicaux stériles pour hacher finement le tissu. Ajoutez deux millilitres de cocktail de dissociation murin dans le tube.

Fixez le capuchon contenant les morceaux de thymus et retournez le tube cinq fois pour remettre le tissu en suspension. Enveloppez le capuchon du tube dans un film de paraffine. Après l’incubation, placez le tube dans une grille et laissez le tissu se déposer.

Retirez le surnageant et passez-le sur une crépine de 70 micromètres dans un tube glacé de 50 millilitres. Ensuite, ajoutez 20 millilitres de M1 99 avec 2% de fluide FBS à la suspension cellulaire. Centrifugez le tube à 500 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius.

Après avoir jeté le surnageant, remettre la pastille en suspension dans un milieu M1 99 et 2 % FBS.