Pour commencer, choisissez un milieu de croissance de nématodes ou une plaque NGM occupée par des larves de Caenorhabditis elegans au stade L1 affamées. À l’aide d’un millilitre d’eau stérile, lavez doucement les vers de la plaque. Aliquote environ 300 microlitres de la population de vers sur des plaques NGM ensemencées avec de l’OP50 concentré.
Laissez les plaques sécher à l’aide d’un séchoir à plaques ou d’un bec Bunsen, puis incubez à 20 degrés Celsius jusqu’à ce qu’une population importante devienne des adultes gravides. Pour recueillir les vers, lavez-les de la plaque avec jusqu’à 10 millilitres d’eau stérile et transférez un mélange d’eau tiède dans un tube conique de 15 millilitres. Laissez les vers se déposer par gravité au fond du tube pendant environ quatre minutes.
À l’aide d’une petite pointe de pipette, aspirez et jetez soigneusement le surnageant. Ajoutez ensuite jusqu’à 15 millilitres d’eau stérile. Après le lavage final, retirez le surnageant et ajoutez cinq millilitres d’une solution fraîchement préparée d’eau de Javel et d’hydroxyde de sodium.
Incuber les vers pendant cinq minutes à température ambiante tout en faisant un tourbillon toutes les minutes pendant au moins 10 secondes. Surveillez la progression à l’aide d’un microscope à dissection. Une fois que tous les adultes se sont ouverts ou dissous, ajoutez un tampon M9 pour neutraliser la réaction, ce qui porte le volume final à 15 millilitres.
Ensuite, centrifugez le tube pendant deux minutes à 1 300 g.Lavez les œufs deux fois de plus avec 13 millilitres de tampon M9 par centrifugation suivie d’un lavage unique avec 15 millilitres de tampon complet S. Ensuite, centrifugez les œufs pendant deux minutes à 1 300 G.Après centrifugation, aspirez le surnageant et ajoutez 10 millilitres de tampon complet S. Faites tourner doucement le tube à température ambiante pendant la nuit à l’aide d’un mutateur ou d’un appareil similaire.
À l’aide d’un microscope à dissection, évaluez si les vers ont éclos. Comptez les vers en gouttes de 10 microlitres de tampon S au microscope. Préparez un mélange liquide de vers avec 60 vers par millilitre dans un milieu complet S contenant de la carbénicline, de l’amphotéricine B et de l’OP50.
Ajoutez 120 microlitres de milieu avec des vers aux rangées A à G et aucun milieu sans vers à la rangée H. Scellez ensuite la plaque avec un scellant à ruban pour éviter la contamination et l’évaporation. Incuber les plaques scellées pendant environ 65 heures à 20 degrés Celsius jusqu’à ce que les animaux deviennent des vers L4. Ajouter 30 microlitres d’une solution mère de fluorodésoxyuridine de 0,6 millimolaire dans chaque puits pour stériliser les animaux au stade L4.
Refermez la plaque à l’aide de scelleuses à ruban et agitez-la pendant 20 minutes à 800 tr/min sur un agitateur de plaque de microtitration. Remettez les plaques dans l’incubateur à 20 degrés Celsius. Le lendemain, ajoutez le médicament d’intérêt à la culture du premier jour.
Refermez les plaques avec un scelleur à ruban adhésif et secouez pendant 20 minutes à 800 tr/min sur un agitateur de plaques. Ensuite, après avoir retiré le couvercle et le joint, mesurez l’OD600 dans un lecteur de plaques pour la mesure du premier jour. Refermez et remettez les plaques dans un incubateur à 20 degrés Celsius.
À l’aide d’un microscope inversé, de préférence avec un objectif deux fois, comptez la population de vers dans chaque puits et notez les chiffres dans une feuille de calcul. Après avoir compté, remettez les plaques dans l’incubateur à 20 degrés Celsius. La courbe dose-réponse d’un changement complet de l’apport alimentaire en fonction de la concentration de sérotonine a montré que la souche N2 peut trop manger de manière dose-dépendante.
Le mutant daf-16 mu86 présente une alimentation basale plus élevée que N2. Cependant, il ne peut pas répondre à la sérotonine de la même manière dose-dépendante que la souche N2. Une différence significative a été observée dans l’apport alimentaire des vers traités à la loxapine mais nourris avec des bactéries tuées par les rayons X, les rayons gamma ou le paraformaldéhyde. La comparaison de l’apport alimentaire d’une série de souches génétiques a montré que les mutants exc-4 et cgr-1 mangent moins tandis que les mutants srp-6 mangent plus.
